SAMHD1-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
【背景技術】
[0002] CRL4泛素連接酶作為Cullin泛素系統中重要的成員之一，在個體發育與體內穩 態調節中起到關鍵作用。CRL4蛋白復合體主要由支架蛋白Cullin4A/4B、連接蛋白DDBl和 識別體蛋白 DCAFs 蛋白家族組成。DCAFs (DDBl_CUL4associated factor proteins)是一類 含有保守的WD40功能域的蛋白，通過與DDBl結合，將所識別的靶蛋白傳遞給泛素系統進行 修飾調控。
[0003] 近年的研究熱點SAMHDl蛋白被鑒定為一種在人體髓系細胞和⑶4+T細胞中能夠 特異性抑制艾滋病病毒HIV-I復制的天然抗病毒因子，SAMHDl通過自身的脫氧核苷酸水解 酶活性降低了處于靜息期的髓系細胞內dNTPs的濃度抑制了病毒DNA的合成。然而，HIV-2 和一些SIV所編碼的輔助蛋白Vpx能夠通過篡奪宿主泛素化系統CRL4 (DCAFl) E3連接酶誘 導SAMHDl蛋白泛素化后被體內蛋白酶體所降解，從而破壞了宿主天然免疫防線，促進病毒 在髓系細胞中的感染能力。
[0004] 除了作為一個天然的抗病毒因子，SAMHDl還被證明在人體內調控中具有重要的作 用：SAMHDl是目前為止唯一被發現的哺乳動物脫氧核糖核酸水解酶，對于細胞內dNTPs濃 度的精準調控起到了重要作用；SAMHDl體細胞突變已被證實與罕見自身免疫遺傳疾病AGS 和慢性淋巴細胞白血病的發生有關；同時科學家們已經發現SAMHDl對于細胞基因組的完 整性具有重要的穩定作用。
[0005] 國際上對SAMHDl的關注于主要集中Vpx-CRL4 (DCAFl) E3連接酶誘導SAMHDl泛素 化降解機制等研究上。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
[0007] 本發明的技術方案概述如下：
[0008] SAMHDl-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
[0009] 本發明的優點：
[0010] 實驗證明，SAMHD1-PLNCX2表達的SAMHDl蛋白能夠對腫瘤細胞系具有明顯的抑制 增長作用。
【附圖說明】
[0011] 圖1為細胞內過量表達SAMHDl基因后細胞的增值動力學曲線。
【具體實施方式】
[0012] 下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0013] 實施例1
[0014] SAMHDl基因的表達載體SAMHDl-pLNCX2的構建：
[0015] SAMHDl基因的表達載體通過提取人胚胎腎細胞HEK293T (2010年購自 ATCC:http://www. atcc. org/Products/All/CRL-3216· aspx)的 RNA 進行反轉錄，得到 cDNA，利用PCR擴增目的基因 SAMHDl構建進入逆轉錄病毒表達載體pLNCX2(Retr〇-X? system，Clontech)中，得到 SAMHDl_pLNCX2。
[0016] SAMHDl的基因序列用SEQ ID NO. 1所示。
[0017] 實施例2
[0018] SAMHDl-pLNCX2對人組織細胞淋巴瘤細胞系的抑制作用：
[0019] 將表達載體SAMHDl-pLNCX2、包裝質粒pVPack-GP和包裝質粒pVPack-VSVG利用 脂質法轉染至人胚胎腎細胞HEK293T中；將表達載體pLNCX2、包裝質粒pVPack-GP和包裝 質粒pVPack-VSVG利用脂質法轉染至人胚胎腎細胞HEK293T中為陰性對照；48小時后，分 別收取病毒上清，分別感染人組織細胞淋巴瘤細胞系U937 (2010年購自ATCC:httD://Ww. atcc. org/Products/All/CRL-1593. 2. aspx),感染 48 小時后，用 G418 (lmg/mL)進行篩選，7 天后得到U937-SAMHDl-pLNCX2細胞系以及U937-pLNCX2細胞系。
[0020] 對構建好的U937-pLNCX2細胞系以及U937-SAMHDl-pLNCX2細胞系在0小時，24小 時，48小時，72小時和96小時分別進行活細胞計數，并統計計數結果，對細胞的增值能力進 行分析，結果顯示，穩定表達SAMHDl蛋白的U937細胞系相比對照細胞增長情況呈抑制細胞 增長的趨勢（見圖1)。
【主權項】
I. SAMHD1-PLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。
【專利摘要】本發明公開了SAMHD1-pLNCX2制備抗腫瘤藥物的用途。實驗證明，SAMHD1-pLNCX2表達的SAMHD1蛋白能夠對腫瘤細胞系具有明顯的抑制增長作用。
【IPC分類】A61P35-00, A61K48-00
【公開號】CN104587491
【申請號】CN201410848583
【發明人】郭浩然, 于曉方, 魏偉
【申請人】天津大學
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2014年12月30日