一種傳染性支氣管炎病卵黃抗體口服液及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于禽類用生物制品技術領域，涉及一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液 及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 雞傳染性支氣管炎是傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性呼吸 道傳染病，屬冠狀病毒科冠狀病毒屬。本病毒對環境抵抗力不強，對普通消毒藥過敏，對低 溫有一定的抵抗力。傳染性支氣管炎病毒具有很強的變異性，目前世界上已分離出30多個 血清型。這些毒株中多數能使氣管產生特異性病變，有些毒株能引起腎臟病變和生殖道病 變。主要通過空氣傳播，也可以通過飼料、飲水、墊料等傳播。臨診特征是呼吸困難、發出羅 音、咳嗽、張口呼吸、打噴嚏。本病廣泛流行于世界各地，是養雞業的重要疫病。
[0003] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相當于哺乳動物IgG，但結構 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構象。卵黃抗體具有很多優越性。（1)由于鳥 類與哺乳類動物種系發生學的差距，鳥類更適于生產抗哺乳動物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會激發補體系統，不與抗哺乳動物抗原的抗體發生反應，不與哺乳動物和細菌的Fc 受體結合，這在免疫診斷中具有重要意義。（2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白，在貯存、生產、加工、攝食及消化過程中保證其穩定性是非常關鍵的。多項試驗表明，IgY 具有較好的穩定性，耐酸、耐堿、耐熱。卵黃抗體較易保存，4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個月對抗體活性無明顯影響。（3)卵黃抗體量大，成本低，便于規模化生產。卵黃 中抗體濃度能長期維持在相當于甚至超過血清抗體濃度的水平上。總的來講，卵黃抗體對 動物沒有毒副作用，用卵黃抗體治療動物疾病不但避免了血清價格昂貴、產量低的缺點，可 以避免血清在治療過程中引起的副作用。因此，卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預防的應 用越來越多。目前卵黃抗體的制備及生產工藝已經成熟，可以保質保量的生產。
【發明內容】
[0004] 本發明提供一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液及其制備方法，解決注射用的傳 染性支氣管炎卵黃抗體使用不方便的問題。
[0005] 本發明的目的是通過以下形式實現的： 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體 的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單 位/暈升口服液的青鏈霉素。
[0006] 制備步驟是： 1) 采用雞傳染性支氣管炎滅活疫苗對雞只進行強化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-28°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞 的體積比為（95-105) : (0.2-0. 3) : (0.2-0. 3) : (0.01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000單位/暈升口服液； 6) 分裝，保存。
[0007] 步驟4)過濾時依次通過1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
[0008] 本發明通過對高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理后得到澄清卵黃抗體口 服液。本發明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中，可以直接在臨床上進行口服使用，蛋清中含 有大量的各類蛋白質，可充分利用高免蛋的價值，提高動物機體的免疫力和應激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影響的優點。
【具體實施方式】
[0009] 實施例1 : 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的配方包括以下原料：由含卵黃抗體的全蛋水溶 液95L、辛酸0.2L、甲醛0.3L、硫柳汞0.02L，以及1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。 [0010] 其制備方法包括以下步驟： 1)采用市售的雞傳染性支氣管炎滅活疫苗（H120株)進行強化免疫，每只雞每次疫苗用 量為2ml，每次間隔10天，進行三次免疫程序，當抗體效價達到1 :256時，開始收集高免蛋。
[0011] 2)將收集高免蛋整理，0. 2%新潔爾滅消毒，備用。
[0012] 3)水稀釋法酸化處理：將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內進行充分乳化，乳化時 間7min，然后將乳化后的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍，混勻，放置4°C環境中18小時靜置沉淀，取上清液；其中，鹽酸酸化 水是在水中加入鹽酸使其PH值達到4. 2。
[0013] 4)辛酸處理；將步驟3)的上清液，即含卵黃抗體的全蛋水溶液進行稱量，升溫到 25°C，加入辛酸，充分混勻lh，然后靜置10h;其中，按體積比，上層清液：辛酸=95 :0. 2 ; 5) 對步驟4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過濾，留取濾液； 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素；按體積比，含卵黃抗體的全蛋全蛋 水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈霉素在該口服液中的含量為1000單 位/毫升； 7) 分裝，保存。
[0014] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期，做了以下試驗：將本品保存在 37°C培養箱中，保存24個月，分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用瓊脂擴散(AGP)法，測定每個時間點取樣品的卵黃抗體效價變化，結果見表1。
[0015] 表1.常溫放置口服液不同時間段效價的變化
【主權項】
1. 一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液，其特征在于：包括以下按照體積比計算的原 料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還 包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
2. -種如權利要求1所述傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于具 體步驟是： 1) 采用雞傳染性支氣管炎滅活疫苗對雞只進行強化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當抗體效價達到1 : (128-256)時，進行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對高免蛋進行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進行乳化，乳化時間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍，混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-28°C，加入辛酸，攪拌l_2h，靜置10-12h，過濾；其中 辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
3. 根據權利要求2所述的傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于： 步驟4)過濾時依次通過1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進行過濾。
【專利摘要】本發明公開了一種傳染性支氣管炎卵黃抗體口服液及其制備方法。其配方在于，包括以下按照體積比計算的原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。制備時采用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法制備的卵黃抗體口服液不僅使生產過程中損失少、免疫活性物質強多、生物活性高、無臨床副作用，同時，含有蛋清中大量的各種蛋白質，可以減少口服時對抗體的不良影響。
【IPC分類】A61P31-14, A61K9-00, A61K39-42, A61P37-04
【公開號】CN104524569
【申請號】CN201410762568
【發明人】徐進, 李建正, 郭俊清
【申請人】鄭州后羿制藥有限公司
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月14日