一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種藥物原料的提取制備方法，具體涉及水紅花子果皮總黃酮提取物 的制備新方法。本發明所述的方法是指水紅花子果皮經乙醇溶液加熱回流提取，合并醇提 液，過濾，濃縮，濃縮液用大孔樹脂吸附，水洗柱后用不同濃度的乙醇溶液依次洗脫，洗脫液 回收溶劑，干燥，即得水紅花子果皮總黃酮提取物。
【背景技術】
[0002] 水紅花子為寥科植物紅寥（Polygonumorien2taleL?)的干燥成熟果實，呈 棕黑色扁圓形，有光澤，雙面微凹，中部略有縱向隆起.水紅花子歸肝、胃經，具有散血消 徽、消積止痛的功效，善消氣血水互結之癥瘕積聚。主要含有槲皮素、花旗松素及三羥基二 氫黃酮等，主要存在于水紅花子的果皮中。黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，作為一種功 能成分，其主要作用有：抗腫瘤，延緩衰老，增強心血管功能，治療慢性前列腺炎，增強免疫 力，調解內分泌系統，護肝，抗炎，抗過敏，抑菌，抗病毒等.所以黃酮類化合物的研宄日益 引起了人們的重視。其中水紅花子果皮中黃酮類成分槲皮素具有較強的抗癌活性，對惡性 腫瘤生長和轉移具有良好的抑制作用，特別是作為化學預防劑能全面地作用于癌發生的始 發、促癌和演進3個階段，兼有抗致癌、抗促癌和誘導分化的作用。花旗松素具有較強的抗 氧化，抗影射作用。具有再生，解毒和抗體逆流的作用。能抑制過酸氧化脂化合物及細胞膜 的病變。阻滯自由基的破壞作用，阻礙細胞老化及各種疾病的發展過程。臨床上主要用于 抗菌消炎、保護肝臟性能治療和預防心腦血管疾病、呼吸系統疾病糖尿病的預防和治療等。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的，是提供一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法。用本方法提 取的總黃酮提取物的純度高，方法簡便實用，價廉，安全，適合工業化生產。
[0004] 采用的技術方案是： 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，包括下述工藝步驟： 1、取干燥的水紅花子果實，經脫谷機脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加醇 8-10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇6-8倍量提取1. 5小時，濾過；第三次加醇5-6倍 量提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用。
[0005] 2、將步驟1制得的濃縮液，進一步經大孔樹脂純化。
[0006] 大孔吸附樹脂包括D101、AB-8、HP-20樹脂或其它類型的吸附樹脂吸附2-4小時， 用水洗脫至無色，再進行梯度洗脫，洗脫液濃度為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇，依次洗 脫，收集乙醇洗脫液。
[0007] 3、將步驟2所得的乙醇洗脫液濃縮(常規或減壓)，50°C下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物。上述百分比為質量百分比。
[0008] 上述干燥可采用真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥。
[0009] 應用本方法得到的水紅花子果皮總黃酮提取物的收率為5. 0%以上，總黃酮的含 量不低于40%。
[0010] 本提取物可單獨或與其它藥物組合作為原料藥應用于各種相關疾病治療的藥劑 中。
[0011] 本發明選用的水紅花子果皮原料為寥科植物紅寥（Polygonumorien2taleL.) 的干燥成熟果皮。
[0012] 本發明工藝簡單，收率高，適合于工業化生產。
【具體實施方式】
[0013] 實施例一 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，其特征是包括下述工藝步驟： 1、取干燥的水紅花子果實，經脫谷機脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加醇 10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次加醇6倍量，提 取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用。
[0014] 2、將步驟1制得的濃縮液，進一步經大孔樹脂純化。
[0015] 3、步驟2的方法是大孔吸附樹脂采用D101、AB-8或HP-20的吸附樹脂吸附2-4小 時，用水洗脫至無色，再用不同濃度（30%、40%、50%、60%、70%)的乙醇依次洗脫，收集乙醇洗 脫液。
[0016] 4、將步驟3所得的乙醇洗脫液濃縮(常規或減壓)，50°C下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物，總黃酮大于40%。
[0017] 實施例二 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，取水紅花子果皮500g，用70%乙醇提取3 次，第一次加醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次 加醇6倍量，提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮液用D101大孔樹 脂吸附，水洗至無色，依次用30%、40%、50%、60%、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙 醇，減壓濃縮，50°C以下真空干燥，得水紅花子果皮總黃酮提取物28克(收率5. 6%)，總黃酮 含量為42. 5%。
[0018] 實驗實施例一 1、水紅花子果皮總黃酮提取物對小鼠肝腫瘤H22的體內抗癌活性研宄。
[0019] 1. 1H22腫瘤細胞的培養與傳代 H22細胞接種前與DMEM+10%小牛血清培養液中37°C、5%C02傳代培養至狀態良好，制 成2X107個/ml的細胞懸液，接種于健康昆明種小鼠腹腔，腹水傳代。
[0020] 1. 2建立H22肝癌小鼠實體瘤模型 無菌條件下用注射器抽取接種7-9天的H22小鼠腹水，以滅菌生理鹽水稀釋調整細胞 量為1X107個/ml，接種到30只小鼠腋下，每只0. 2ml，觀察小鼠生長情況，制作實體瘤 模型。
[0021] 1.3動物分組與給藥 24h后隨機分成3組，每組10只：①陰性對照組，每天上午生理鹽水0. 2ml灌胃。② 陽性對照組，每天上午環磷酰胺（20mg/kg)灌胃0.2mL;③給藥組，依據人的給藥劑量折 合每天上午水紅花子總黃酮提取物（4. 5mg/kg)，各組連續灌胃10d，每天觀察實體瘤的生 長情況。
[0022] 1. 4抑瘤率檢測 小鼠經實驗處理后，于第11d脫頸椎處死，鑷子鑷住小鼠右腋腫瘤生長部位皮膚后，用 手術剪子剪開皮膚，暴露腫瘤，手術剪鈍性剝離腫瘤，用天平稱瘤重，計算抑制率。以抑瘤率 來判斷抑瘤作用。
[0023] 腫瘤抑制率（％ ) = [1_(平均實驗組瘤重/平均對照組瘤重）]X100% 1.5統計學處理 實驗數據采用SPSS11. 5統計軟件中Dnuent單因素方差分析進行統計學處理若P< 0. 01表明組間有顯著性差異，結果如下表。
[0024] 表1水紅花子總黃酮提取物對H22小鼠的瘤重的影響（X土s，n=10)
【主權項】
1. 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，其特征是包括下述工藝步驟： (1) 取干燥的水紅花子果實，經脫谷機脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加 醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次加醇6倍量， 提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用； (2) 將步驟（1)制得的濃縮液，進一步經大孔樹脂純化； 大孔吸附樹脂包括D101、AB-8、HP-20 ;吸附樹脂吸附2-4小時，用水洗脫至無色，再用 濃度為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇依次洗脫，收集乙醇洗脫液； (3) 將步驟（2)所得的乙醇洗脫液經常規或減壓濃縮，50°C以下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物。
【專利摘要】一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，是取水紅花子果皮500g，用70%乙醇提取3次，第一次加醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1.5小時，濾過；第三次加醇6倍量，提取1.5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮液用D101大孔樹脂吸附，水洗至無色，依次用30%、40%、50%、60%、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮，50℃以下真空干燥，得水紅花子果皮總黃酮提取物28克（收率5.6%），總黃酮含量為42.5%。本發明工藝簡單，收率高，適合于工業化生產。
【IPC分類】A61K131-00, A61P35-00, A61K36-70
【公開號】CN104523851
【申請號】CN201410721423
【發明人】翟延君, 初正云, 孟憲生, 張慧, 王添敏, 英錫相, 李本俊
【申請人】遼寧中醫藥大學
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月3日