雄－5－烯－3β,17β－二醇的藥物組合物及其用途的制作方法

專利名稱：雄－5－烯－3β,17β－二醇的藥物組合物及其用途的制作方法
背景技術：
發明領域本發明涉及用于預防和治療類固醇的濃度減少或失衡以及對雄激素和/或雌激素活性的提高有很好反應的狀況的藥物組合物、藥盒和方法。本發明用雄-5-烯-3β,17β-二醇(下文表示為5-DIOL)或體內能轉化為5-DIOL的化合物。
相關技術的描述5-DIOL是由還原性的17β-羥類固醇脫氫酶(17β-HSD)作用，從DHEA生物合成的一種化合物，并且是一種弱雌激素。它對大鼠腦下垂體前葉腺胞質中的雌激素受體的親和力比17β-雌二醇(E2)低95倍(Simard和Labrie,J.SteroidBiochem.,26:539-546,1987)，進一步證實了從人子宮肌層和乳房癌組織中測到的相同參數的數據(Kreitmann和Bayard,J.Steroid Biochem.,11:1589-1595,1979；Adams等人，Cancer Res.,41:4720-4926,1981；Poulin和Labrie,Cancer Res.,46:4933-4937,1986)。
在成年女性中發現的血漿水平范圍內的濃度，5-DIOL能提高人乳房腫瘤ZR-75-1細胞(其缺少3β-羥類固醇脫氫酶/D5-D4異構酶活力)中的細胞增殖和黃體酮受體水平(Poulin和Labrie,Cancer Res.,46:4933-4937,1986)和增加MCF-7細胞中的52kDa糖蛋白的雌激素依賴性合成(Adams等人，Cancer Res.,41:4720-4926,1981)。
通常，據信DHEA和DHEA-S血清水平隨著年齡的增長減少，并相應地顯著減少周圍靶組織中雄激素和雌激素的形成，并顯著減少由性類固醇誘導的生化和細胞功能。因此，DHEA和DHEA-S被用于治療各種與性類固醇水平減少和/或失衡相關的病癥。最近，我們發現5-DIOL的血清水平隨著年齡的遞增顯著減少。
骨質疏松癥，一種影響男性和女性的病癥，是與雄激素和雌激素的減少相關的。已知雌激素減少骨降解的速率，而雄激素增加骨量。
更年期癥狀也是與雌激素的缺少相關的，并且通常用于更年期前和更年期婦女的低劑量雌激素可減輕血管舒縮癥狀、泌尿生殖道萎縮、易怒、失眠、沒有精神、骨質疏松和其它與更年期相關的癥狀。
另外，乳房癌、心血管病和胰島素抗性也與DHEA和DHEA-S的血清水平下降有關，已提出將DHEA和DHEA-S用來預防或治療這些病癥。也提出DHEA有益于治療和/或預防肥胖、糖尿病、動脈硬化、化學誘發的乳房、皮膚和結腸癌、自身免疫性疾病、阿耳茨海默病、記憶喪失、衰老，并能維持活力、肌肉量和長壽。在國際專利公開WO94/16709中公開了DHEA的用途和雄激素和雌激素治療的益處。
已提出DHEA和DHEA-S比標準雄激素和雌激素治療更有利于這些病癥的治療，因為DHEA和DHEA-S的作用靶向能將DHEA和DHEA-S轉化成特異性性類固醇的組織。然而，需要高劑量的DHEA以達到所需的雌激素和雄激素作用。最重要的是，DHEA的雄激素作用占主導，因此對一些需要較高比例雌激素或存在雄激素的副作用問題的病癥，特別是在女子，本發明能提供較好的雌激素與雄激素的作用比例。
發明概述本發明的目的是提供包括5-DIOL或在體內能轉化成5-DIOL的前體藥物的藥物組合物和藥盒的方法。在一些實施例中，藥物組合物基本上是由5-DIOL組成的。
本發明的另一目的是提高需要這種治療或預防患者體內的5-DIOL，提供治療或預防性類固醇激素(雄激素和/或雌激素)水平失衡或減少的方法。
本發明的另一目的是提供通過給予5-DIOL治療給予雌激素活性反應良好的病癥或減少其發病危險性的方法，這些病癥包括陰道萎縮、性腺功能減退、性欲減退、皮膚萎縮、尿失禁、脂肪和脂蛋白失衡、動脈粥樣硬化、心血管病和更年期癥狀(熱潮紅、失眠、阿耳茨海默病、帕金森病、精神疾病、抑郁、記憶喪失)。本發明的另一目的是提供通過給予5-DIOL預防和治療給予雄激素活性反應良好的病癥的方法，這些病癥包括乳房癌、卵巢癌、子宮內膜癌、性欲減退、皮膚萎縮、皮膚干燥、骨質疏松和更年期癥狀。許多受性類固醇影響的疾病(如骨質疏松)都對雄激素和雌激素有良好的反應。
需要治療上述疾病或減少其發病危險性的患者是被診斷出患有這些疾病或易于患這些疾病的人。
除了特別指出的或上下文明顯的以外，本文所用的劑量是指不受藥物賦形劑、稀釋劑、載體或其它組分影響的活性成分重量，雖然這些添加的組分也是希望包括的(如本文的實施例所示)。任何在制藥工業中通常用到的劑型(膠囊、片劑、注射劑等)都適于本發明，且術語“賦形劑”、“稀釋劑”或“載體”包括那些無活性的組分，典型地與活性組分一起包括在工業的劑型中。例如，典型地包括膠囊、片劑、腸溶衣、固態或液態稀釋劑或賦形劑、調味劑、防腐劑等本發明也包括將活性藥物用于藥物制造中，來治療本文所述的疾病(如對該藥物敏感)，或將一種組合物中的成分來制造用于治療疾病的藥物，其中治療還包括所要求的聯合治療的另一成分。
本發明的另一目的是提供新的避孕方法，包括給予5-DIOL。
5-DIOL是脫氫表雄酮(DHEA)的代謝產物。已發現5-DIOL在其雄激素和雌激素作用中有出乎意料的變化(與DHEA相比)。具體地說，5-DIOL的雌激素作用比DHEA強5倍，而其雄激素活性僅比DEHA高1-2倍，因此與DHEA相比，從5-DIOL能夠得到的雌激素與雄激素作用的比例約為3.0。另一方面，較高劑量時，5-DIOL產生的最大作用比DHEA的雄激素作用小。所以，與相應劑量的DHEA相比，給予5-DIOL產生的雌激素對雄激素作用偏向雌激素作用。因此，5-DIOL可用于治療和預防包括低性類固醇水平(其中特別是雌激素水平下降(即比雄激素水平下降的大))的病癥。事實上，本發明可用于希望雌激素作用程度比雄激素作用大的病癥。如下所述，5-DIOL可單獨給藥，或作為聯合治療的一部分與其它治療藥物組合，如抗雌激素、雄激素、孕激素、雌激素、DHEA、硫酸DHEA、LHRH促效劑或拮抗劑、17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、芳香酶的抑制劑、性腺性類固醇分泌的抑制劑。
在本發明的范圍中，可用任何5-DIOL的前體藥物來替代5-DIOL，包括5-DIOL脂肪酸，因為它們也增加血清中5-DIOL的水平。
本發明的其它特點和優點可從以下帶有附圖的本發明具體描述中得到。
附圖簡述

圖1是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠子宮重量的作用圖，這是一個對雌激素敏感的參數。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖2是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清促黃體激素(LH)濃度的作用圖，這是一個雌激素和/或雌激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖3是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清DHEA濃度的作用圖。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖4是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清5-DIOL濃度的作用圖。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖5是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清雄烯二酮(4-二酮)濃度的作用圖，這是一個雌激素和/或雌激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖6是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清睪丸酮濃度的作用圖。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖7是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠血清二氫睪丸酮(DHT)濃度的作用圖。完整動物作為輔助對照。將化合物溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，以0.1ml給藥于背部皮膚(2cm×2cm)。
圖8是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠腹側前列腺重量的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖9是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠精囊重量的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖10是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠的腹側前列腺中編碼前列腺結合蛋白的Cl組分(PBP-C1)的mRNA濃度的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖11是遞增劑量的DHEA或5-DIOL經皮給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠的腹側前列腺中編碼前列腺結合蛋白的C3組分(PBP-C3)的mRNA濃度的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖12是遞增劑量的DHEA或5-DIOL皮下給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠的子宮重量的作用圖，這是一種雌激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖13是遞增劑量的DHEA或5-DIOL皮下給藥(每天兩次，共7天)，對切除卵巢的大鼠的血清LH濃度的作用圖，這是一種雄激素和/或雌激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖14是遞增劑量的DHEA或5-DIOL皮下給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠的前列腺重量的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖15是遞增劑量的DHEA或5-DIOL皮下給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠的精囊重量的作用圖，這是一種雄激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖16是遞增劑量的DHEA或5-DIOL皮下給藥(每天兩次，共7天)，對切除睪丸的大鼠的血清LH濃度的作用圖，這是一種雄激素和/或雌激素作用的量度。完整動物作為輔助對照。
圖17是雄性大鼠在單劑量口服吸收雄-5-烯-3β,17β-二醇前體藥物(150μmol/大鼠)后血漿中DHEA濃度(ng/mL)(Y軸為時間(X軸)的函數)。在圖框中，是以下化合物誘導的DHEA 24小時的AUC。
EM-760 脫氫表雄酮EM-900 雄-5-烯-3β,17β-二醇EM-1304雄-5-烯-3β,17β-二醇3-乙酸酯EM-1305-CS 雄-5-烯-3β,17β-二醇雙乙酸酯EM-1397雄-5-烯-3β,17β-二醇乙酸酯17苯甲酸酯EM-1400雄-5-烯-3β,17β-二醇雙苯甲酸酯EM-1410雄-5-烯-3β,17β-二醇二丙酸酯
EM-1474-D 雄-5-烯-3β,17β-二醇雙半琥珀酸酯圖18是雄性大鼠在單劑量口服吸收雄-5-烯-3β,17β-二醇前體藥物(150μmol/大鼠)后血漿中雄-5-烯-3β,17β-二醇的濃度(ng/mL)(Y軸為時間(X軸)的函數)。在圖框中，是以下化合物誘導的雄-5-烯-3β,17β-二醇24小時的AUC。
EM-760 脫氫表雄酮EM-900 雄-5-烯-3β,17β-二醇EM-1304雄-5-烯-3β,17β-二醇3-乙酸酯EM-1305-CS 雄-5-烯-3β,17β-二醇雙乙酸酯EM-1397雄-5-烯-3β,17β-二醇乙酸酯17苯甲酸酯EM-1400雄-5-烯-3β,17β-二醇雙苯甲酸酯EM-1410雄-5-烯-3β,17β-二醇二丙酸酯EM-1474-D 雄-5-烯-3β,17β-二醇雙半琥珀酸酯體內測定雄-5-烯-3β,17β-二醇前體藥物的生物利用度。
1)原理通過單劑量口服給藥，測定雄性Sprague Dawley大鼠血漿中雄-5-烯-3β,17β-二醇前體藥物的濃度，測定雄-5-烯-3β,17β-二醇前體藥物的生物利用度。
2)動物和處理從Charles-River Canada Inc.得到重量為275-350g的雄性Sprague-Dawley大鼠(CH:CD(SB)Br)，在馴化階段將它們每籠關養兩只，研究階段單獨關養。將這些動物維持在12小時明亮，12小時黑暗的狀況中(08:00起明亮)。動物用合格的嚙齒動物食物(Lab Diet#5002，丸粒)喂養，任意飲自來水。在給藥的前夜開始使大鼠禁食(只給水)。
將每種測試的化合物(在0.4％甲基纖維素中的懸浮液)，通過口腔管飼法(150μmol/大鼠)給藥于三只動物。在管飼后的1、2、3、4和7小時，從用異氟烷誘導麻醉的大鼠頸靜脈收集～0.7ml的血樣。將血樣迅速轉移到冷凍的含有EDTA的0.75ml的微型儲器中(Microtainer)，并保持在冰水浴中，直到以3000rpm離心10分鐘。迅速進行血漿分離(在收集血樣后的50分鐘內)。然后將每份為0.25ml的血漿轉移到一硼硅玻璃試管(3×100)中，在干冰上迅速凍結。在-80℃保存血漿樣品，直到用GC-MS測定血漿性類固醇或性類固醇前體的濃度。
發明詳述本發明相信可將5-DIOL用于治療任何已知的用DHEA治療反應良好的疾病，由于其更有利的雌激素與雄激素的活性比及更低的最大雄激素活性(與DHEA相比)，具有其它益處。按本發明，直接給予5-DIOL，比給予DHEA具有許多的優點(如本文所述)。
申請者發現5-DIOL產生的雄激素和雌激素作用顯著區別于DHEA產生的。具體地說，就相同的雌激素作用，5-DIOL產生更少的潛在雄激素或男性化作用(與DHEA相比)。因此，5-DIOL特別有利于治療需要雌激素活性而又要求雄激素活性極小的病癥。事實上，絕經后，婦女同時缺少雄激素和雌激素，雖然雌激素/雄激素的比例比絕經前低。婦女需要一種雌激素-雄激素更有利的比例來補償卵巢雌激素分泌的缺少。DHEA不能補償這種卵巢雌激素缺少，僅替代由腎上腺降低的DHEA-S和DHEA分泌。
具體地說，通過給予DHEA(范圍為比用5-DIOL給藥得到的量增加劑量30-125％)產生活性雄激素DHT和其前體4-二酮。另-方面，用DHEA產生的睪丸酮比用5-DIOL給藥的多53％。4-二酮是一種類固醇，其本身是一種弱雄激素，但能特別有效地在細胞內轉化成較強的雄激素睪丸酮和DHT。數據顯示，在5-DIOL達到的最高水平的血清DHT水平，是用DHEA時達到的最高水平的一半不到，而且在相對低的劑量水平，5-DIOL的雄激素作用最大活性的坪(plateau)水平低于由DHEA產生的水平。
圖10和11證明與5-DIOL的活性相比，DHEA雄激素活性的水平相對較高。數據顯示，DHEA刺激前列腺結合蛋白Cl(PBP-C1)和前列腺結合蛋白C3(PBP-C3)的mRNA水平比5-DIOL強2-5倍(取決于劑量)。PBP-Cl和PBP-C3 mRNA的水平是雄激素作用的特別敏感的參數，而且編碼這些蛋白的mRNA的濃度是由雄激素調節的。測定PBP-Cl和PBP-C3 mRNA的水平能指示雄激素的活性，因為雄激素在轉錄水平作用，而增加編碼PBP亞單位組分的mRNA的穩態水平。
因為經皮給藥的DHEA和5-DIOL(給定劑量)對雌激素參數具有幾乎相同的作用，DHEA產生的雄激素活性比5-DIOL產生的大2-3倍(雌激素作用相同時)。
已發現，DHEA與5-DIOL的最大區別在于氧化性17β-HSD(s)，其在全身給予5-DIOL后，將5-DIOL轉化成特別低活性水平的DHEA(圖3,4)。另一方面，給予DHEA和5-DIOL后類似的血清5-DIOL水平，表明還原性17β-HSD具有相對高的活性水平。另外，由于沒有明顯數量可利用的DHEA被3β-HSD直接轉化成4-二酮，在給予5-DIOL后，必須從睪丸酮氧化衍生雄烯二酮。這與用5-DIOL處理后血清4-二酮(一種高度有效的雄激素前體)的水平比用DHEA處理后低許多的事實相符。
不希望束縛于理論，據信DHEA產生與5-DIOL(相同劑量)不同的雄激素反應的一個原因是，DHEA和5-DIOL代謝不同。5-DIOL代謝(比DHEA代謝更是這樣)導致一些類固醇(如睪丸酮和DHT)在它們產生雄激素活性之前較少形成和/或較多失活。因此，與相同劑量的DHEA(其中氧化的類固醇主要作為形成活性雄激素的儲庫)相比，5-DIOL導致較低的暴露于這些強雄激素。
另外如圖14和15所示，這兩種化合物通過皮下途徑給藥以評估最大生物利用度，由5-DIOL刺激的對雄激素敏感的參數達到穩定水平的劑量低于DHEA。因此可見，經皮給予DHEA和5-DIOL后(圖8、9、10和11)觀察到的這兩種化合物最大雄激素活性的區別不是因為皮膚吸收率的不同造成的。
通常，顯示出最大生物利用度狀況下的5-DIOL的雌激素活性比相同劑量的DHEA大。事實上，皮下給藥后，5-DIOL刺激子宮生長比DHEA強5倍。因此，如上所述，在雌激素作用相同時的劑量，由5-DIOL產生的雄激素作用明顯低于由DHEA產生的作用。另外，5-DIOL的雄激素作用達到的最大作用坪水平顯著低于由DHEA產生的最大刺激作用。
如下文所述，可給予5-DIOL來治療或預防性類固醇(雄激素和/或雌激素)濃度水平不夠或失衡患者的病癥。具體地說，據信5-DIOL可用于治療和減少發生病癥的危險性，這些病癥對雌激素活性有良好的反應，并且希望雄激素活性比DHEA產生的低。因為5-DIOL能與DHEA一樣被代謝成相同的性類固醇，5-DIOL可用于任何對DHEA反應良好的目的，并且比用DHEA能得到更有利的雄激素對雌激素作用。當期望的雌激素/雄激素比例處在DHEA和5-DIOL所產生的比例之間時，可用DHEA和5-DIOL的混合物以提供所希望的比例。
將從用5-DIOL治療獲益的個體是所有那些患有可用DHEA治療病癥的，包括那些5-DIOL、雌激素或雄激素水平異常低的個體。也可減少患這些病癥的危險性，且推薦的5-DIOL劑量和靶血清水平與本文所述的用5-DIOL治療相同。可通過測定血清中5-DIOL、DHEA、性類固醇的水平和它們的代謝物(對雄激素，可用雄甾酮葡糖苷酸和雄甾烷-3α,17β-二醇葡糖苷酸；對雌激素，可用硫酸雌酮和硫酸雌二醇)，如Belanger等人在類固醇形成、降解和對周圍、正常和腫瘤組織的作用(H.Bradlow,L.Castagnetta,S.d′Aquino,L.Gogliotti,eds)Ann.N.Y.Acad.Sci.586:93-100,1990中所述，來確定將獲益于本發明的個體。血清IGF-1水平的測定如(Furlanetto等人,J.Clin.Invest.60:648,1977)所述。
按本發明的觀點，一旦發現不足或失衡，給予5-DIOL所用的劑量最好足以提高和維持血清5-DIOL濃度比年輕成年人的正常范圍高3倍以內。較佳地，對女性，血清5-DIOL濃度在4.0nM到10nM之間，對男性為10nM到20nM之間，如對女性為7.0nM，對男性為15nM。當然，主治醫生也可按患者的反應減少或增加劑量，這種變化可能非常大。間歇或連續給予孕激素(如醋酸甲羥孕酮，5-10mg/天，口服)可減輕用5-DIOL治療絕經前婦女時，對子宮內膜產生的不良副作用。
在一些實施例中，血清濃度對女性和男性分別為4.0-7.0,7.0-15nM。然而，出于避孕或預防卵巢或子宮癌的目的，較佳地對女性用的濃度為15nM以內(如在10-13之間)。對于避孕，可加入雌激素(如雌二醇，血清雌二醇水平在每升50-200毫微克之間)，也可加入孕激素。適當時可增加本文所述的優選劑量，以實現理想的血清濃度，如由主治醫生監測每個患者反應的變化。
當5-DIOL是通過經皮或透粘膜技術給藥時，可用已知的方法增加或減少送遞的劑量，即通過改變涂用洗劑、軟膏、乳膏、凝膠或貼片(patch)的部位，通過改變敷藥表面積的大小，通過改變活性成分的濃度，或通過改變載體或運載體。例如，如果活性成分濃度保持恒定，增加表面積通常將增加送遞的活性成分的劑量。同樣的方法，在送遞的基質中，增加活性成分的濃度將增加送遞的劑量，減少濃度將減少送遞的劑量。用已知方法改變透皮滲透系統敷用于配方的體表區域，也可使送遞到血流中的劑量發生變化。用已知方法改變載體或運載體也將改變送遞的劑量。
較佳地，在治療開始前，測定血清5-DIOL的濃度，選定一個劑量以迅速將血清5-DIOL濃度上升到優選的靶范圍(女性，4.0-10nM之間，男性，10-20nM之間)。隨后，通過監測癥狀和循環的5-DIOL或性類固醇代謝物濃度，以確證已達到理想血清濃度和癥狀緩解。然后將循環中的5-DIOL維持在恒定濃度。例如，對于典型的更年期后的患者，劑量為涂敷400mg 5-DIOL，作為用50％乙醇-50％丙二醇配制的10％組合物，每50kg體重涂用200cm2腹部或腿部，每天兩次。如果選擇口服，應每50kg體重，服用500mg(每天兩次)。
如本發明所用的，口服用的5-DIOL可有或無輔助的載體或稀釋劑，但當經皮或透粘膜途徑給藥時必須帶有輔助的載體或稀釋劑。在口服給藥的藥物組合物中，5-DIOL存在的濃度宜在5-99％(組合物總重)，較佳的是在50-99％之間，更佳的是在80-99％之間。
當制備用于經皮給藥的組合物時，5-DIOL優選為2-20％(組合物總重)濃度，較佳的是在5-15％之間，更佳的是在5-10％之間。
可從Steraloids Inc.(P.O.Box 310,Wilton,N.H.,03086,USA)得到5-DIOL活性成分。優選的5-DIOL前體藥物為以下列出的可從Steraloids Inc.購得的兩種化合物。 5-DIOL可單獨給藥或與其它活性成分組合給藥，這些活性成分如抗雌激素、孕激素、雄激素、雌激素、DHEA或DHEA-S、17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、芳香酶的抑制劑、LHRH促效劑或拮抗劑、和其它性腺類固醇分泌的抑制劑。DHEA和5-DIOL都被代謝成雄激素和雌激素，但比例不同。另外，5-DIOL具有弱的內在雌激素活性。由于DHEA或5-DIOL對雄激素或雌激素受體具有的不同的內在作用，據信產生了5-DIOL對DHEA給出不同比例的雄激素/雌激素活性。無需僅利用DHEA的雄激素/雌激素比例或僅用5-DIOL的雄激素/雌激素比例。可將DHEA和5-DIOL一起使用以得到最佳有效的雄激素/雌激素反應比例，其在DHEA得到的比例和5-DIOL得到的比例之間。DHEA對5-DIOL的相對量可變，取決于預期的雄激素/雌激素反應比例是接近于DHEA或是5-DIOL。
對于治療乳房癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮內膜異位和其它需要阻滯雌激素形成和/或作用的對雌激素敏感的疾病，可與至少一種以下物質組合使用5-DIOL抗雌激素、芳香酶抑制劑、雄激素化合物、孕激素、LHRH促效劑或拮抗劑、或其它性腺性類固醇分泌的抑制劑、17β-羥類固醇脫氫酶活性抑制劑。單用5-DIOL或與DHEA一起使用，能得到所需的雄激素功能以刺激對雄激素敏感的功能，特別是骨骼形成和抑制對雄激素敏感的癌(如乳房和子宮內膜癌)生長。5-DIOL可單獨使用，也可和上述的任何成分組合用于組合物中。在一些情況中，可用無5-DIOL的DHEA與上述的任何組分組合使用。
在另一實施例中，5-DIOL與抗雌激素組合，其較佳的是EM-800((+)-7-新戊酰氧基-3-(4’-新戊酰氧基苯基)-4-甲基-2(4-2(2-哌啶子基乙氧基)苯基)-2H-苯并吡喃)，ICI 182,780(7α-[9-4(4,4,5,5,5-五氟-戊基亞磺酰)壬基]雌-1,3,5(10)-三烯-3,17β-二醇)或任何其它的抗雌激素，來治療乳房癌、子宮內膜癌、卵巢癌、心血管病、動脈粥樣硬化和其它對雌激素敏感的疾病。非類固醇抗雌激素，如EM-800傾向于在乳房組織作為雌激素受體拮抗劑的選擇性雌激素受體調節劑，也對膽固醇、脂肪和動脈粥樣硬化提供雌激素樣有益作用。
可改變5-DIOL的劑量。5-DIOL和其它性類固醇和它們的代謝物的血漿水平表明考慮計吸收、代謝和反應敏感的個體差異的劑量。較佳地，主治醫生，尤其在治療初期，應監測各患者的總反應和血清5-DIOL水平(與上述優選的血清濃度相比)，并監測患者對治療的總反應，當患者對治療的代謝或反應不規則時，必要時調節劑量。對于組合治療，治療以單用5-DIOL治療開始，僅在需要時輔助以其它化合物。對于治療乳房癌、子宮內膜癌、卵巢癌和子宮內膜異位，可同時用抗雌激素+5-DIOL或抗雌激素+5-DIOL+DHEA或抗雌激素+DHEA開始治療。如果加入DHEA、雄激素、孕激素或雌激素，類似地監測總血清水平，最好在治療的早期階段監控活性組分和雄激素或雌激素代謝物，據認為對醫生評價在后期也是有用的。
根據本發明的治療適合于無限期的延續。通常期望5-DIOL治療將該天然類固醇的血清濃度分別簡單地維持在4-10nM(女性)和10-20nM(男性)的范圍中。預計5-DIOL的持續治療產生的不良副作用是最小的或不存在的。可通過本領域已知的方法避免持續使用雌激素產生的不良副作用，例如通過間歇(或在-些實施例中連續)給予孕激素(如醋酸甲羥孕酮)，每天口服2-10mg。采用本發明的方法可使雄激素的副作用最小化，因為5-DIOL的相對低的雄激素作用以及在大部分患者中已很低的DHEA水平(圖18)。
為了便于本發明的聯合治療，對于本文所述的任何適應癥，本發明考慮了藥物組合物，其在單個組合物中包括5-DIOL和另一種或后續活性化合物用于同時給藥。該組合物適合用于任何常規形式的給藥包括，但并不限制于，口服給藥、經皮給藥或透粘膜給藥。在其它實施例中，提供一種藥盒，其中藥盒包括5-DIOL和在另一分開的容器中的第二種化合物。也可包括本文所述的其它活性化合物。除其它形式的給藥外，這第二種化合物和5-DIOL也可透皮給藥(如本文以下所述)。因此，該藥盒可包括適合的物質用于透皮給藥，如軟膏、洗劑、凝膠、乳膏、持續釋放的貼片等。相同的策略也可用于孕激素、抗雌激素、雄激素、雌激素DHEA、DHEA-S、17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、芳香酶抑制劑或性腺性類固醇分泌抑制劑(可口服給藥)(或注射LHRH促效劑或拮抗劑)。
雖然預計在一些情況中要通過注射給予5-DIOL，但該方法是不佳的。因為用5-DIOL治療通常要長期和無限期的持續，通過注射來反復給藥是不方便的。
據信優選的治療性給予5-DIOL的方法是經皮、透粘膜或口服給藥，因為要避免注射5-DIOL給藥的不適和不便。
可用許多本領域公認的透皮滲透系統送遞5-DIOL。例如，可將5-DIOL制成用于擦在患者皮膚或粘膜上的軟膏、洗劑、凝膠或乳膏的一部分。該活性組分優選地存在約5％-20％(藥物組合物總重)，較佳的為在約5-12％(重量)之間。另外，該活性組分也可置于具有本領域已知結構的透皮貼片中，例如，歐洲專利No.0279982中所公開的結構。
當制成軟膏、洗劑、凝膠、乳膏等時，活性組分與適合的載體混合，這些載體與人皮膚或粘膜相容而且能提高化合物穿透皮膚或粘膜的透皮或透粘膜的滲透率。適合的載體是本領域已知的，包括但并不限制于Klueel HF和Glaxal基質(可從Glaxal Canada Limited Company購得)。其它適合的載體可見Koller和Buri，S.T.P.Pharma 3(2),115-124,1987。適合的載體是能在環境溫度在所用的活性組分的濃度下溶解活性組分的載體。適合的載體應具有足夠的粘度以使前體維持在涂用組合物的皮膚或粘膜區域上，而在一段時間內不會流掉或蒸發，足以使前體充分滲透皮膚或粘膜上涂藥的區域，并進入血流產生和如所需的增加血清5-DIOL濃度。載體通常為若干化合物的混合物，如藥學上可接受的溶劑和增稠劑。有機和無機溶劑的混合物能輔助親水性和親脂性的溶解性，例如水和醇(如乙醇)。
預計，如果有一種載體，制成10％5-DIOL和90％載體(重量)，每天兩次以100mg 5-DIOL涂敷于腹部區域，將提高患者血清5-DIOL濃度至少每50kg體重1.0nM(與治療前相比)，并且此后維持相對穩定的血清5-DIOL水平。
載體可包括各種通常添加到軟膏、洗劑、凝膠和乳膏和化妝品和藥物領域熟知的載體。例如，可存在香料、抗氧劑、芳香劑、膠凝劑、增稠劑(如羧甲基纖維素)、表面活性劑、穩定劑、潤膚劑、著色劑等。當用于治療全身疾病時，皮膚上涂藥的位點較佳地應周期性地變化，以避免潛在的局部類固醇過量和可能由5-DIOL雄激素代謝物對皮膚和皮脂腺的過度刺激。
也可通過口服給予5-DIOL或衍生物，并可與常規的藥物賦形劑一起配制，如將噴霧干燥的乳糖和硬脂酸鎂加入到片劑或膠囊中，或口服給藥易提供劑量范圍為0.050-2.5克每天每50kg體重。
通過與固體、粉狀載體物質(如檸檬酸鈉、碳酸鈣或磷酸二鈣)，粘合劑(如聚乙烯吡咯烷酮、明膠或纖維素衍生物)可將該活性物質配制入片劑或糖衣芯中，也可加入潤滑劑(如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、"Carbowax"或聚乙二醇)。當然，如果是口服給藥的形式也可加入調味劑。該活性物質也可以在適合載體中的固態分散體給藥。這些載體可選自聚乙二醇(分子量為1000-20000)和聚乙烯吡咯烷酮(可從American Chemicals Ltd.,Montreal,Canada購得聚維酮(povidone))。
其它劑型，可用插入式膠囊如硬明膠，和含有軟化劑或增塑劑(如甘油)的封閉的軟明膠膠囊。插入式膠囊含有的活性物質較佳是顆粒的形式，如與填充劑的混合物，填充劑如乳糖、蔗糖、甘露醇、淀粉(如馬鈴薯淀粉或支鏈淀粉)、纖維素衍生物或高度分散的硅酸。在軟明膠膠囊中，該活性物質較佳地是溶解或分散在適合的液體中，如植物油或液態聚乙二醇。
在軟膏、乳膏、凝膠或洗劑中活性組分的濃度通常為約2-20％，較佳地為5-15％，更佳的是5-10％(洗劑、乳膏、凝膠或軟膏的總重)。在優選的范圍中，較高的濃度與較低的濃度相比，當將洗劑、軟膏、凝膠或乳膏涂用到較小的皮膚表面上時更能得到適合的劑量，而且允許更自由地選擇涂用軟膏或洗劑的身體部位。例如，如本領域所熟知的，在身體的某些部位比其它部位通常能更有效地滲透化合物(能經皮滲透的)。例如，前臂的滲透是高效的，而手掌的滲透相對較差。
洗劑、軟膏、凝膠或乳膏應徹底地擦入皮膚從而沒有清晰可見的過量物質，而且不能沖洗該區域的皮膚直到完成了大部分的經皮滲透，較佳地為至少15分鐘，更佳的是30分鐘(涂藥后)。
按已知的技術，可用透皮貼片送遞5-DIOL。其通常是用于較長的時間，如0.5-4天，通常將活性組分與較小的表面區域接觸，使得活性組分緩慢持續的遞送。
已開發并投入使用的大量透皮藥物送遞系統，適合送遞本發明的活性組分。通常由骨架擴散或將活性組分透過控制膜控制釋放速率。
透皮裝置的機械方面是本領域熟知的，并可由如美國專利No4,162,037、5,154,922、5,135,480、4,666,441、4,624,665、3,742,951、3,797,444、4,568,343、4,064,654、5,071,644、5,071,657解釋，上述專利本文全部引用作為參考。歐洲專利0279982和英國專利申請2185187提供其它背景資料。
該裝置可是任何本領域已知的通常類型，包括粘合劑骨架和儲庫類型的透皮裝置。該裝置可包括含有藥物的骨架，其混有能吸收活性組分和/或載體的纖維。在儲庫類型裝置中，儲庫為一不能透過載體和活性組分的聚合物膜。
透皮裝置，其本身維持活性組分與所需的皮膚表面接觸。在這種裝置中，活性組分的載體粘度的重要性比乳膏或凝膠少。透皮裝置的溶劑系統可包括，例如油酸、線性醇乳酸酯和二丙二醇或其它本領域已知的溶劑系統。活性組分可溶解或懸浮在載體中。
為了粘附在皮膚上，可將透皮貼片置于在中間穿有一孔的外科用橡皮膏上。較佳地，在使用前用一可剝離襯底覆蓋以保護粘合劑。通常適合于剝離的材料包括聚乙烯和涂聚乙烯的紙，較佳地是涂聚硅氧烷的紙以便于剝離。在用該裝置時，可輕易地將剝離層剝離，將粘合劑粘結到患者的皮膚上。Bannon等人的美國專利No.4,135,480(本文全部納入作為參考)公開了一種不帶粘合劑的裝置將該裝置固定到皮膚上。
除了上述較高劑量的適應癥(如避孕)，靶血清5-DIOL濃度是類似的，無論5-DIOL是用作治療絕經的聯合治療的一部分，或是(單獨或與抗雌激素、雄激素、孕激素、雌激素和17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、芳香酶的抑制劑、性腺性類固醇形成的抑制劑、LHRH的促效劑或拮抗劑、DHEA和/或DHEA-S組合使用)用于治療心血管病、骨質疏松、皮膚萎縮、絕經、陰道萎縮、尿失禁、子宮癌、卵巢癌、骨質疏松、子宮內膜異位、性腺功能衰退或性欲減退，或用于治療任何與性類固醇(特別是5-DIOL和其代謝物)水平減少或失衡相關的病癥。
5-DIOL特別可用于治療希望雄激素作用極小的病癥，因為5-DIOL的雄激素作用低于DHEA(雌激素作用相同時)產生的雄激素作用，而且5-DIOL產生的最大雄激素作用低于DHEA產生的最大雄激素作用。5-DIOL特別優選地用于治療婦女對雌激素治療(或用雌激素前體如DHEA的治療)有反應的病癥，因為5-DIOL的雄激素作用比DHEA的低，因此在提供所需的雌激素活性時，減少了潛在的雄激素或男性化作用。另外，通常更年期前的女性需要的雌激素/雄激素比例比DHEA所能提供的大。
因為5-DIOL是雌激素和雄激素的天然來源，該化合物的分泌隨著年齡的遞增顯著減少(圖17)，它的替代應有最小的不良副作用。其內在的雌激素活性應能補償絕經后卵巢雌激素分泌的缺少，這種效果是DHEA不能實現的。本發明可用于許多雌激素受體激活具有有益效果的疾病，具體地說為骨質疏松和更年期病癥，包括陰道萎縮、失眠、易怒、心血管病、尿失禁和性欲減退。另外，本發明可用于治療和預防對雌激素受體激活有反應的疾病，如骨質損失、肥胖、乳房癌、子宮內膜癌、卵巢癌、尿失禁、性腺功能衰退、性欲減退、肌肉量減少、活力減少、胰島素抗性和其它衰老狀況。另外，5-DIOL可用于治療或預防任何對循環的性類固醇(即雌激素和雄激素)總的平衡的改善反應良好的病癥。
可用常規方法診斷出預期對本文所述的這種治療有反應的疾病。例如，通常乳房癌的表象可自檢乳房、由醫生作的臨床乳房檢查和/或乳房X線照相術檢查出。另一方面，子宮內膜癌通常可由子宮內膜活組織檢查診斷。可由本領域技術人員熟知的標準體格檢查方法診斷和估計癌癥，如骨掃描、胸部X線檢查、骨骼檢查、肝超聲波檢查和肝掃描(如果需要)、CAT掃描、MRI和體格檢查。
更年期的發病通常是由熱潮紅首先診斷出的。可用已知的方法確定更年期的其它特征。例如，參見《絕經》(Herbert J.Buchsbaurm,ed),Springer Verlag NewYork(1983)，第222頁。陰道萎縮通常可由性交不快和陰道感染顯示。陰道萎縮、性腺功能減退、性欲減退、失眠、易怒、抑郁和尿失禁可由熟知的方法鑒定。對上述疾病可參見，例如Korenman,Stanley G,Williams Textbook of Endocrinology中的“性功能紊亂”，Jean D.Wilson和Daniel W.Foster,eds,WB Saunders Co.,Philadelphia，第1033-1048頁，1992。
另一方面，骨密度可由本領域技術人員熟知的標準方法測定，如QDR(定量數字放射照相術)、雙光子吸收測量術和計算機體層攝影術。血漿和尿鈣和磷酸鹽水平、血漿堿性磷酸酶、骨鈣素、降鈣素和甲狀旁腺激素濃度、以及尿羥基脯氨酸、脫氧吡咯烷和鈣/肌酸酐比例是有用的骨形成和吸收參數。
皮膚中骨膠原和結締組織的丟失常常伴隨著衰老，尤其是50歲以上的人。這可由皮膚上的皺紋和/或彈性變差顯示。皮膚的狀況可由肉眼觀察、觸摸估計，更仔細的，則可由穿刺活檢和標準的組織學檢查確定。
本領域技術人員熟知體重的正常范圍，而膽固醇和脂蛋白可由標準方法常規檢查(Nestler等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.66:57-61,1988作為參考)。
另外，5-DIOL可作為女性的避孕藥。本領域從前的女性避孕藥通常包括雌激素給藥，它在循環水平增加時減少下丘腦的LHRH分泌，從而減少垂體的LH分泌。LH分泌的減少將減少卵巢功能，尤其是排卵。加入孕激素可控制子宮內膜生長、改變陰道和子宮頸的分泌形成不利于精子獲能和受精的環境。
在本發明中，5-DIOL提供用于避孕的雌激素，其同時和理想地提供雄激素水平的最小上升，這也有利于避孕，因為雄激素也抑制LHRHI和LH的分泌。這些雄激素能夠，尤其是對更年期前的女性(以及不再需避孕的更年期后的女性)提供許多所需的骨形成的刺激和抵抗骨損失。除了其本身是一種弱雌激素外，5-DIOL給藥產生的雌激素也可減少骨損失。如本文所述的其它用途，可用5-DIOL替代性類固醇(這里指雌激素)來避免外部給予相對高劑量的雌激素和避免使雌激素廣泛地接觸所有組織，因為許多組織是不需要雌激素的。通過用5-DIOL替代，在需要雌激素和/或雄激素的組織中不再由天然途徑產生雌激素和/或雄激素，而將5-DIOL轉化為雌激素和/或雄激素。在每個組織中雌激素和雄激素的相對比例也基本上保持在天然的水平。
因為本文所述的避孕方法減少了卵巢的功能，卵巢將減少雌激素和黃體酮的產生。因此，當需要大劑量的5-DIOL時，孕激素(如醋酸甲羥孕酮、醋酸甲地孕酮、異炔諾酮、炔諾孕酮)可作為避孕方法的一個部分給藥，以防止子宮內膜過度生長。孕激素可用包括5-DIOL的藥物組合物給藥，也可分別給藥。在一些實施例中，可間歇給予孕激素，每月12-14天或每幾個月(如每2-5個月)12-14天或連續給藥，取決于所用的5-DIOL劑量對子宮內膜沒有刺激作用(在生理學劑量時)。孕激素劑量的范圍可在先前的技術所用的范圍中，但因為下述的原因優選的是較低的劑量。
因為在許多組織中5-DIOL被轉化為雌激素，在避孕治療中未必需要添加雌激素以補充卵巢雌激素分泌的減少。然而，如果必需可給極小的劑量。當用于避孕方法時，優選添加的雌激素的劑量為能達到每升50-300毫微克雌二醇或相當的有效劑量。優選添加的雌激素與5-DIOL的比例(w/w)為100∶1-10,000∶1，較佳的是200∶1-5,000∶1，更佳的是300∶1-3000∶1。當加入孕激素時，加入的雌激素可作為包括5-DIOL(或5-DIOL的前體藥物)的藥物組合物的一部分給藥，或分開給藥。
在一些實施例中，5-DIOL、孕激素和雌激素一起給藥或分開給藥，作為聯合治療的一部分。聯合治療的結果是任何時候療法都同時提高血漿每種活性物質的水平。這僅要求充分及時給予活性藥物以同時提高這些物質的血漿水平。
用含有雌激素和孕激素的避孕組合物沒有表現出可減少乳房癌的危險性(Romiev等人，1990,Cancer 66:2253-2263)。這些數據與已知的雌激素和孕激素對乳腺細胞上皮增殖的促有絲分裂作用相一致，因此解釋了黃體中期細胞增殖的高峰(Masters等人，J.Natl.CancerInst.1977,58:1263-1265；Anderson等人，1982,Brit.J.Cancer 46:376-382)。事實上，用避孕藥的更年期前的女性中總乳腺細胞增殖的速率與未處理的周期(cycling)女性的情況沒有區別(Potter等人，1988；Brit.J.Cancer 58:163-170；Going等人，1988；Am.J.Pathol.130:193-204)。5-DIOL中的雄激素作用將減少雌激素和孕激素的這種潛在的有害作用。
成骨細胞(骨形成細胞)含有將5-DIOL轉化為雌激素和雄激素的酶。因此，可用5-DIOL代替(或補充)雄激素、雌激素或DHEA用于治療或預防骨質疏松。在骨骼中產生(通過轉化給予的5-DIOL)足夠量的雄激素，刺激骨形成和減少骨損失。另外，5-DIOL的低雌激素活性和給予5-DIOL產生的雌激素也有利于減少骨損失。
由于已表明特別低的雄激素劑量刺激骨質密度，比DHEA雄激素/雌激素活性比例低的5-DIOL，在雄激素過多癥危險性最小的劑量，對骨有最大的有益作用。
另外，由于5-DIOL(如果需要，或其前體藥物)在組織中僅通過天然機制被轉化成雄激素和雌激素，這些組織的這種轉化是按它們的局部需要進行的，就大大減少或消除了副作用，而先前該領域中由外部給予的活性性類固醇會進入許多不產生也不需要所給的雄激素和雌激素的組織。從而在本發明中這些組織中的性類固醇生理平衡不受干擾，這不同于先前該領域中所有的激素補充治療。5-DIOL產生的雄激素和雌激素的相對比例也基本上是正常的比例，而不是直接外來給予活性性類固醇時發生的某一類型性類固醇異常升高的比例，并因此使所有的組織暴露，包括那些不需要這種治療的組織。
在優選更年期癥狀的治療中，本發明探索了同時維持血漿5-DIOL、雄激素和雌激素的水平于正常的更年期前參數。不希望束縛于理論，據信維持適合的前體水平能較好地使天然酶(如17β-羥類固醇脫氫酶、3β-羥類固醇氫化酶、芳香酶和α-5還原酶)調節雄激素和雌激素的產生，并以某種方式將它們維持在更類似于更年期前普遍存在的絕對和相對水平。因此，本發明期望不但將雌激素而且還將雄激素保持較好的平衡。事實上，靶組織具備按局部需要合成雄激素和/或雌激素以及使它們失活所需的酶機制(Labrie,Mol.Cell.Endocrinol.78,C113-C118,1991)。
如上所述，可將5-DIOL和雌激素一起給藥。然而，由于與DHEA相比，5-DIOL產生的雌激素比例比雄激素高，且其自身也是一種弱雌激素，可能達到所需的雌激素水平而無需加入雌激素，并且不產生伴隨高水平DHEA(一種雄激素活性較大的化合物)的不良的雄激素副作用。類似地，因為5-DIOL是一種弱雌激素，可能無需孕激素治療。
然而，如果確定需要添加雌激素，雌激素和5-DIOL可同時給藥或分別給藥。另外，僅需以某種方式給予5-DIOL和雌激素，而其劑量應足以使血清中兩者的濃度分別達到所需的水平。按本發明的聯合治療，在5-DIOL的濃度維持于所需參數的同時，維持雌激素的濃度在所需的參數。當用雌二醇時，血清雌二醇的水平通常維持在50和200毫微克/L之間，較佳的是100-175毫微克/L，更佳的是125和175毫微克/L之間。當用另一種雌激素時，可用已知的方法變化血清濃度，考慮到已知的相對于雌二醇的雌激素活性差異并達到正常的更年期前的雌激素水平。例如，如果用美雌醇(Mestranol)時，需要較小的濃度。也可通過更年期癥狀的消失評估適當的血清雌激素水平。通常血清5-DIOL濃度維持在4-10nM之間(女性)和10-20nM之間(男性)，或在一些實施例中為4.0-7.0nM之間(女性)或7.0-15nM之間(男性)。
如果5-DIOL和雌激素合用，優選的是雌二醇，但也可是硫酸雌酮或其它直接或適當轉化后可作為雌激素受體促效劑的化合物。當分開給藥時，可用購得的雌激素補充劑，如可從Ayerst(St.Laurent,Quebec,Canada)購得的結合雌激素(PREMARIN)。對普通的患者，達到所需血清濃度的雌激素適合劑量為0.3-2.5毫克結合雌激素/天/50kg體重(口服給藥)。在本發明的一些實施例中，雌激素可以是在貼片中的17β-雌二醇(可從CIBA購得，商品名為ESTRADERM)，經皮給藥，每天劑量為0.05-0.2毫克/天/50kg體重。對于普通的患者，達到所需的血清前體濃度的適合的性類固醇前體5-DIOL的劑量為0.10和2.5克/天/50kg體重之間(口服給藥)。給予的其它前體藥物的劑量取決于它們在體內轉化成5-DIOL的速率。也可透皮或透粘膜給予5-DIOL，如本文以上所述，其量應足以達到靶血清濃度。
在其它實施例中，如上所述用5-DIOL治療更年期，并聯合定期的給予孕激素如醋酸甲羥孕酮(如Provera)，后者較佳的是間歇給藥，如以2-10mg/天的劑量連續給藥12天，每12天之間間隔20天到5個月。用5-DIOL的聯合治療中也可能用雌激素和孕激素，較佳的劑量如本文中每種化合物所述。
除了避孕和預防卵巢和子宮內膜癌(優選的5-DIOL血清水平約為15nM)外，所有適應癥用的5-DIOL的劑量都是相同的。
對于其它需要雄激素和/或雌激素的所有適應癥，可用上述的通常劑量。類似地，當與抗雌激素組合用于治療或預防乳房癌、子宮內膜異位及其它對雌激素敏感的疾病時，可用相同劑量的5-DIOL。在一些情況中，當用芳香酶抑制劑、17β-羥類固醇脫氫酶抑制劑、雄激素、孕激素、性腺類固醇形成的抑制劑、LHRH促效劑或拮抗劑時，推薦使用相同劑量的5-DIOL。
以下實施例證明5-DIOL的雄激素和雌激素作用，并提供5-DIOL和DHEA相對活性的比較。如上所述，顯示出與DHEA相比5-DIOL相對于雄激素活性有較大的雌激素活性。
材料和方法動物從Charles River Canada Inc.(St-Constant,Quebec)得到的，重量分別為225-250g和175-200g的雄性和雌性Sprague-Dawley大鼠(Crl:CD(SD)Br)，每兩只以14小時明亮/天(07:15明亮)的條件關養一籠。動物以Purina大鼠食物喂養，任意飲水。按“Guidelinefor Care and Use of Experimental Animals”研究動物。
處理將動物隨機分組(每組8和10只大鼠，分別用于皮下和局部給藥)。乙醚麻醉下，將適當的組的動物由兩側切除卵巢(OVX)或切除睪丸(ORCH)，而其它大鼠作為完整的對照。將從Steraloid(Wilton,NH,USA)得到的DHEA和5-DIOL溶解在50％乙醇-50％丙二醇中，并每天兩次(0.5ml)涂到背部皮膚(2cm×2cm)上，共7天(從OVX或ORCH當天起)。對于皮下給藥，將DHEA和5-DIOL溶解在0.5ml 10％乙醇-1％明膠-0.9％NaCl中，每天兩次注射到背部區域，共7天(也從OVX或ORCH當天起)。
開始治療后七天或最后一次類固醇給藥后的約12小時，通過斷頭處死動物。分別收集血樣，并將血清在-20℃凍結直到分析。迅速取出子宮、卵巢、腹側前列腺、背側前列腺和精囊，清除結締組織和脂肪組織，稱重，在液氮中凍結，并在-80℃保存直到分析。各處理組的三只大鼠用聚甲醛灌注用于原位雜交。
類固醇分析萃取類固醇。在1ml血清中加入乙醇(5ml)，2000×g離心15分鐘。得到的沉淀進一步用2ml乙醇萃取，2000×g再次離心15分鐘，將兩次的上清液混合。如上述將懸浮液離心，傾析出上清液，與先前得到的乙醇提取物混合。然后在氮氣下蒸發有機溶劑，將殘留物溶解在1ml水∶甲醇(95∶5,v/v)中。連續用10ml甲醇、10ml水和10ml甲醇/水(95∶5,v/v)通過而調節C-18柱(Bound-Elut,Amersham,Bucks,U.K.)。然后將溶解在甲醇/水(5∶95,v/v)中的提取物加到C-18柱上。用2ml水∶甲醇(95∶5,v/v)和5ml甲醇∶水(50∶50,v/v)洗滌柱后，加入5ml甲醇∶水(85∶15,v/v)以洗脫未結合的類固醇。
在LH-20柱上的層析和放射免疫測定如Belanger等人，1988所描述的進行在SEPHADEX LH-20柱(Pharmacia,Uppsala,Sweden)上的層析。簡單地說，將類固醇溶解在1ml異辛烷/甲苯/甲醇(90∶5∶5,v/v/v)中，加到LH-20柱上。收集組分，蒸發掉有機溶劑后，用放射免疫測定法(如Belanger等人，1980；Belanger等人，1988；Belanger等人，1990所述)確定各種類固醇的濃度。
制備cDNA探針由Dr.Malcolm G.Parker(Imperial Cancer Research Fund,London,UnitedKingdom)提供含有互補于編碼PBP-C1的mRNA的DNA片段的質粒。在5％(wt/vol)聚丙烯酰胺凝膠上電泳后，電洗脫(Bio-Rad電洗脫裝置，model 422,Bio-Rad,Richmond,CA)純化PBP-Cl cDNA的434個堿基對的Pst-I限制性內切片段。純化的片段用隨機引物方法(Feinberg和Vogelstein,1983)，以[α-35S]dCTPaS(Amersham,Oakville,Ontario,Canada)放射標記以得到高比活性(109dpm/μg)。
原位雜交測定PBP-C1 mRNA水平如Pelletier等人，1988所述用PBP-C1探針進行前列腺切片的原位雜交。簡單地說，用以0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)配制的含4％多聚甲醛的固定緩沖液灌注大鼠。清除腹側前列腺的脂肪和結締組織，在固定緩沖液中預固定(post-fixed)2小時(4℃)，然后浸泡在含有15％(wt/vol)蔗糖的0.05M PBS中。此后，在液氮中迅速將腹側前列腺凍結在冷卻的異戊烷中。將多個(6-8個)10μM組織切片(取自每個腹側前列腺)置于涂有明膠的載玻片上。預雜交緩沖液含有50％甲酰胺、5×SSPE(1×SSPE=0.18M NaCl,10mM NaH2PO4，和1mM EDTA,pH7.4)、0.1％十二烷基硫酸鈉、0.1％BSA、0.1％菲可(水溶性聚蔗糖Ficoll)、0.1％聚乙烯吡咯烷酮、0.2mg/ml酵母tRNA、0.2mg/ml變性鮭魚睪丸DNA、0.2g/ml聚(A)。載玻片在另含有4％硫酸葡聚糖和飽和濃度(1.0-1.5×107cpm/ml)的PBP-C1cDNA探針的預雜交緩沖液中雜交48小時(37℃)。然后在2×SSC(1×SSC=0.15M NaCl和0.015M檸檬酸鈉，pH7.0)中洗滌該切片30分鐘共2次，脫水、然后曝光進行放射自顯影。為了測定非特異性的背景雜交量，在用PBP-C1探針預雜交大鼠腦、垂體、腎和肝的切片之前，在室溫用胰酶制劑核糖核酸酶-A(20μg/ml)處理每一處理組的前列腺切片1小時。未能觀察到特異性雜交(沒有顯示數據)。
LH放射免疫測定用大鼠激素(LH-I-6用于碘化作用；LH-RP-2作為標準)和兔抗血清抗r-LH-S-8(由National Pituitary Program,Baltimore,USA慷慨提供)作雙抗體放射免疫分析測定血清LH。
統計分析用Rodbard和Lewald(Rodbard,1974)模型Ⅱ為基礎的程序來分析放射免疫測定數據。用每個樣品雙份測定的平均值±SEM顯示血漿類固醇水平。如下得到原位雜交的數據用Image Research Analysis System(Amersham,Arlington Heights,IL)分析每個前列腺組織切片的20個隨機選取的0.25mm2的測定區域(除了腺泡腔)，并計算每個切片的光密度值的平均值。顯示的數據為6-8個前列腺切片(從背側前列腺得到的)20個讀數的平均值±SEM。用Duncan-Kramer(Kramer,1956)的多量程測試測定統計顯著性。
如圖1所示，DHEA和5-DIOL對子宮重量(一種雌激素活性的指標)產生類似的刺激作用。具體地說，當給藥10mg和30mg劑量的DHEA和5-DIOL時，對切除卵巢的大鼠子宮重量產生類似的刺激，而1和3mg劑量則沒有明顯的作用。然而，當劑量為100mg(所用的最高劑量)時，5-DIOL產生了較大的刺激作用(最大逆轉了卵巢切除術抑制作用的52％)，而DHEA最大只能逆轉42％。
圖2顯示了DHEA和5-DIOL對血清LH的作用。已知血清LH是雄激素和雌激素活性的敏感指標，因為在雄性以及雌性動物性腺切除手術后，發現由于性類固醇的顯著反饋抑制作用的消除，血清LH迅速增加(Ferland等人，In:Labrie,F.,Meites,J.,和Pelletier,G(eds)，下丘腦和內分泌的功能，第199-209頁，New York；Plenum Press,1976)。在10mg的劑量，5-DIOL產生較大的作用并完全逆轉了切除卵巢手術的強刺激作用至0.86±0.17ng/ml，而相應劑量的DHEA只產生了61％(p＜0.01)抑制作用。然而，在更高的劑量時，發現DHEA和5-DIOL產生類似的作用，在30mg和100mg分別抑制血清LH水平約35％和70％，低于在完整對照動物中發現的。
圖3-圖7顯示了給予5-DIOL和DHEA產生的對主要類固醇和前體循環水平的作用。具體地說，如圖3所示，在分別給予3、10、30和100mg劑量的DHEA后，血清DHEA從對照的切除卵巢動物的不能檢出的水平增加到1.74±0.30nM(p＜0.01)、3.67±0.59nM(p＜0.01)、12.9±3.69nM(p＜0.01)和39.2±6.5nM(p＜0.01)。另-方面，用相同劑量的5-DIOL產生相對穩定的但較低的血清DHEA水平。
圖4顯示給予5-DIOL和DHEA后產生的血清5-DIOL水平。當在較低劑量時，1和3mg 5-DIOL產生較高的5-DIOL水平，而在較高的劑量，5-DIOL和DHEA產生的5-DIOL水平沒有顯著的差異。
圖5-7顯示了給予DHEA和5-DIOL后，產生的血清4-二酮、睪丸酮和二氫睪丸酮(DHT)的濃度。由DHEA產生的血清4-二酮(一種雄激素指標)的水平(范圍取決于所用的劑量)高于由5-DIOL產生的水平30-125％。
從血清DHT和睪丸酮(都是雄激素活性的指標)得到一致的結果。具體地說，DHEA比5-DIOL(相同劑量)產生高30％-125％的血清DHT水平，而DHEA比5-DIOL(相同劑量)產生高53％對睪丸酮的刺激作用。另外，5-DIOL產生的血清DHT的水平基本穩定并在整個劑量范圍中相對較低。
圖8-圖11顯示了DHEA和5-DIOL對切除睪丸大鼠的各種易識別的對雄激素敏感的參數的作用。圖8顯示了對腹側前列腺重量的作用，當為10mg劑量時，DHEA能夠逆轉約75％的睪丸切除的抑制作用，而150％劑量(15mg)的5-DIOL，只能產生50％的逆轉去勢的作用。另外，如圖9所示，在增加精囊重量上DHEA強1倍。
另外，如圖10和11所示，DHEA產生的對編碼前列腺結合蛋白(PBP)C1和C3組分的mRNA(如上所述，-種雄激素活性的精確指標)濃度的作用是5-DIOL產生的2-5倍。另外，最高劑量的5-DIOL產生的Cl和C3 PBP mRNA的最大水平僅是用DHEA得到的水平的17％-37％。
圖12-圖16顯示了皮下給予DHEA和5-DIOL對上述參數的作用。由于這兩種類固醇是皮下注射的，這些結果提供了更直接的對DHEA和5-DIOL的相對雌激素和雄激素活性的量度(在最佳生物利用度條件下)。具體地說，如圖12所示，在所用的最低劑量(0.3mg)，5-DIOL逆轉了切除卵巢(1周)對子宮重量的作用(為對雌激素敏感的參數)的90％，而相同劑量的DHEA則沒有明顯的作用。然而，在較高的劑量，這兩種類固醇產生的最大刺激作用是類似的(2.8-2.9倍刺激)。另外，根據計算得到的對子宮重量半最大刺激的劑量(DHEA為～2.5mg,5-DIOL為0.5mg),5-DIOL的子宮營養作用(uterotrophic)約比DHEA高5.0倍(在皮下給藥后)。另外，如圖13所示，發現對由去勢提高的血清LH水平的抑制，5-DIOL比DHEA強5-7倍。
如圖14所示，用5-DIOL得到的對前列腺和精囊重量(對雄激素敏感的參數)的最大刺激作用約是用DHEA得到的值的70％。然而，按計算得到的對睪丸切除術作用的半最大逆轉劑量(ED50)，DHEA和5-DIOL的強度基本相同(即ED50值為lmg)。另一方面，DHEA和5-DIOL的最大作用的ED50值分別為2.5mg和1.2mg,5-DIOL與DHEA相比估計要強2倍。類似地，如圖15所示，對于精囊的重量，5-DIOL的最大刺激作用約是DHEA的70％睪丸切除術作用的半最大逆轉劑量，估計DHEA為2.5mg,5-DIOL為1.2mg，估計DHEA的活性為5-DIOL的2倍。對于前列腺中C1和C3 PBP mRNA濃度，5-DIOL約為DHEA2倍強度。圖16顯示了5-DIOL對血清LH濃度的作用比DHEA強約10倍。
綜上所述，可見在每個濃度，DHEA產生的雌激素對雄激素作用的比例比5-DIOL產生的更傾向于雄激素作用。
雖然本發明已用本文的具體實施例表述，但許多其它的改變、改進和用途對本領域技術人員而言都是顯然的。
權利要求
1．一種藥物組合物，其特征在于，包括藥學上可接受的稀釋劑或載體、和治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物。
2．如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有治療有效劑量的雌激素。
3．如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有治療有效劑量的孕激素。
4．如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有治療有效劑量的孕激素。
5．如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有選自脫氫表雄酮和硫酸脫氫表雄酮的化合物。
6．如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有藥學上可接受的稀釋劑或載體用于經皮或透粘膜給藥，所述的雄-5-烯-3β，17β-二醇或其前體藥物的濃度約為藥物組合物總重的2-30重量百分比。
7．一種藥盒，其特征在于，包括一個容器中含有所述的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物；和至少另一容器，其含有至少一種活性組分，選自孕激素、雌激素、脫氫表雄酮和硫酸脫氫表雄酮。
8．一種治療方法，其特征在于，用于治療性類固醇濃度的減少或失衡或減少性類固醇濃度減少或失衡的可能性，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
9．如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括給予至少一種輔助藥物，選自DHEA和DHEA-S，作為聯合治療的一部分。
10．一種方法，其特征在于，用于治療絕經期癥狀或減少絕經期癥狀的可能性，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
11．一種方法，其特征在于，用于治療陰道萎縮或減少陰道萎縮的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
12．一種方法，其特征在于，用于治療性腺功能減退或減少性腺功能減退的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
13．一種方法，其特征在于，用于治療骨質疏松或減少骨質疏松的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
14．一種方法，其特征在于，用于治療性欲減退或減少性欲減退的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
15．一種方法，其特征在于，用于治療皮膚萎縮或減少皮膚萎縮的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
16．一種方法，其特征在于，用于治療尿失禁或減少尿失禁的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
17．一種方法，其特征在于，用于減少卵巢癌發生的可能性，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
18．一種方法，其特征在于，用于治療子宮癌或減少子宮癌的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
19．一種方法，其特征在于，用于治療皮膚干燥或減少皮膚干燥的發生，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
20．一種避孕方法，其特征在于，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者。
21．如權利要求20所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括給予治療有效劑量的雌激素。
22．如權利要求20所述的方法，其特征在于，所述的方法還包括給予治療有效劑量的孕激素。
23．一種方法，其特征在于，該方法用于治療乳房癌、子宮癌、卵巢癌或子宮內膜異位，包括將治療有效劑量的雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物給予需要這種治療的患者，并結合至少一種以下的化合物抗雌激素、雄激素、DHEA、芳香酶的抑制劑、17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、LHRH促效劑或拮抗劑。
24．一種方法，其特征在于，該方法用于治療乳房癌、子宮癌、卵巢癌或子宮內膜異位，包括將治療有效劑量的脫氫表雄酮(DHEA)給予需要這種治療的患者，并結合至少一種以下的化合物抗雌激素、雄激素、芳香酶的抑制劑、17β-羥類固醇脫氫酶的抑制劑、LHRH促效劑或拮抗劑。
25．一種方法，其特征在于，該方法用于治療肥胖、心血管病、動脈粥樣硬化、胰島素抗性、肌肉量喪失、活力缺失或疲勞、記憶喪失、阿耳茨海默病或減少上述疾病的發生，包括給予治療有效劑量的權利要求1所述的藥物組合物。
26．一種經皮貼片，其特征在于，所述的貼片連續地送遞雄-5-烯-3β,17β-二醇或其前體藥物，所述的貼片具有粘附于皮膚的裝置，儲存所述的化合物的儲庫和引導所述的化合物與皮膚接觸的裝置。
27．如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還含有藥學上可接受的稀釋劑或載體用以口服給藥，所述的雄-5-烯-3β,17β-二醇或雄-5-烯-3β,17β-二醇的前體藥物約占藥物組合物總重的5-99重量百分比。
全文摘要
用雄－5－烯－3β,17β－二醇治療或減少患以下疾病的可能:骨質疏松或更年期癥狀、或其它受雌激素受體活性影響的疾病和對DHEA治療反應良好但需要雌激素對雄激素作用有較高比例的病癥。包括聯合治療,如藥盒和藥物組合物,以提供權利要求所述方法的活性組分和組合。
文檔編號A61P5/24GK1311682SQ99808637
公開日2001年9月5日 申請日期1999年6月10日 優先權日1998年6月11日
發明者F·拉布里 申請人:內部研究股份有限公司