新穎的、含有存在于大高良姜中的芳族化合物與萜類化合物的協同組合物的制作方法

專利名稱：新穎的、含有存在于大高良姜中的芳族化合物與萜類化合物的協同組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新穎的、含有芳族化合物與萜類化合物的組合物，這兩類化合物存在于、并且可以優選地得自植物大高良姜(姜科)(Alpiniagalanga(Zingiberaceae))，更具體地涉及含有這類組合物的藥物、化妝品或食物增補劑。本發明進而涉及該組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于超敏反應和與超敏反應有關的疾病的治療或預防。本發明也涉及由大高良姜制備該組合物的方法。
背景技術：
姜科植物大高良姜(Alpinia galanga(L.))通常也稱為大良姜(Greater Galangal)或爪哇良姜(Java Galangal)，在亞洲有培養和野生。該草藥是根莖狀的，高1.8-2.1米，葉為長圓形而光滑，花呈白綠色。果實是橙紅色蒴果。該植物也稱為Languas galanga(大高良姜)，尤其在泰國，當地稱之為Katuk karohinee。
至于本發明，術語“大高良姜”指在世界各地發現的任何品種的大高良姜或Languas galanga。
大高良姜的揮發油能夠通過根莖的蒸汽蒸餾法得到。它主要由萜類化合物組成，其中1,8-桉樹腦是含量最豐富的化合物。其他主要的萜類化合物是α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。
大高良姜中另一類重要的化學品是芳族化合物。該類中數量上占優勢的化合物是1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯。其他芳族成分是1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。
大高良姜的各組分中有數種已顯示可發揮藥理作用。Janssen和Scheffer發現，1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯是抗真菌劑(Janssen,A.M.和Scheffer,J.J.C.《植物藥學》(Planta Medica)pp.507-511,1985)。進而Watanabe等人發現，1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯抑制腹膜巨噬細胞的吞噬作用(Watanabe,N.等《生物科學、生物工程與生物化學》(Biosci.,Biotechnol.,Biochem.)vol.59(8),pp.1566-67,1995)。
以前尚未描述過含有萜類化合物與芳族化合物的協同組合物的大高良姜提取物或濃縮物。
超敏被定義為一種機體反應性改變的狀態，對物質(抗原)的免疫應答過強。超敏可以是由外源性或內源性抗原所導致的。
超敏反應是大量疾病的基礎。其中變應性和自體免疫狀態是更重要的。超敏疾病的分類是由Parveen Kumar和Michael Clark在《臨床醫學》(Clinical Medicine)教科書(第3版，1994,pp.147-150,Baillière Tindall,London)中給出的。
Ⅰ型超敏反應(IgE介導的變應性反應)是由變應原(特異性外源抗原)引起的，例如花粉、室內塵埃、動物皮屑、霉菌等。Ⅰ型反應扮演重要角色的變應性疾病包括哮喘、濕疹(特應性皮炎)、蕁麻疹、變應性鼻炎和過敏癥。
Ⅱ型超敏反應是由細胞表面或組織結合抗體(IgG和IgM)引起的，在重癥肌無力、古德帕斯徹氏綜合征和阿狄森氏惡性貧血的發病機理中扮演重要角色。
Ⅲ型超敏反應(免疫復征)是由自身抗原或外源性抗原引起的，例如某些細菌、真菌和寄生蟲。Ⅲ型超敏反應扮演重要角色的疾病包括紅斑狼瘡、類風濕性關節炎和腎小球性腎炎。
Ⅳ型超敏反應(遲發型)是由細胞或組織結合抗原引起的。這種類型的超敏在大量狀態中扮演重要角色，例如移植物抗宿主疾病、麻風、接觸性皮炎和由昆蟲叮咬引起的反應。
有多種藥物可用于超敏反應的治療。它們有些是全身給藥的，有些是局部用藥的。
皮質甾類是其中最廣泛用于超敏疾病治療的藥物。皮質甾類主要通過非選擇性抑制不同種類免疫細胞的功能和增殖來發揮它們的藥理作用。從而抑制超敏反應。不幸的是，皮質甾類與大量嚴重的副作用有關，例如免疫抑制、骨質疏松和皮膚萎縮(當局部用藥時)。
發明概述我們已經驚人地發現在可以從大高良姜得到的某些類化合物之間的協同性藥理作用。
我們已經發現在芳族化合物與萜類化合物之間的協同作用，芳族化合物選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇，萜類化合物選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。后者萜類化合物是大高良姜揮發油的主要組分。
這種協同作用在實施例1中有清楚的證明。
我們進而已經發現在數量上占優勢的芳族化合物1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯與其他芳族化合物之間的協同作用，后者選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。這種協同作用在實施例2中有清楚的證明。
我們已經發現，上述組合物顯著抑制超敏反應。與皮質甾類相比，上述組合物具有與任何嚴重副作用無關的優點。
以前從未描述過上述大高良姜組分之間的協同作用。而且，以前從未描述過含有這些化合物的協同組合物。
因此，本發明提供了一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的一種或多種化合物，選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。
本發明進而提供了一種優選為大高良姜提取物或濃縮物形式的組合物，含有a)2-99．5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的大高良姜香精油或其混合物。
本發明也提供了一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯；b)0.5-98％(w/w)的-種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。
由于它們的藥理作用，上述協同組合物可用于下列治療應用·免疫調節。
·超敏疾病的治療或預防。
·IgE介導的變應性反應和狀態的治療或預防。
·自體免疫病癥的治療或預防。
·疼痛的緩解。
因此，本發明提供了一種藥物、化妝品或食物增補劑，含有上述組合物和藥學上或化妝品學上可接受的載體。
更具體地，本發明提供了上述組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于免疫調節、用于諸如IgE介導的變應性反應和自體免疫反應這樣的超敏反應的抑制、和用于疼痛的緩解。
因此，按照本發明，上述組合物可以用在個體超敏疾病的治療或預防方法中，該方法包括將該組合物或含有它的藥物對所述個體給藥；本發明包括上述組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于超敏疾病的治療或預防。
而且，按照本發明，上述組合物可以用在個體自體免疫病癥的治療或預防方法中，該方法包括將該組合物或含有它的藥物對所述個體給藥；本發明包括上述組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于自體免疫病癥的治療或預防。
進而，按照本發明，上述組合物可以用在個體IgE介導的變應性反應或狀態的治療或預防方法中，該方法包括將該組合物或含有它的藥物對所述個體給藥；本發明包括上述組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于IgE介導的變應性反應和狀態的治療或預防。
而且，按照本發明，上述組合物可以用在個體疼痛的緩解方法中，該方法包括將該組合物或含有它的藥物對所述個體給藥；本發明包括上述組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于疼痛的緩解。
進而，本發明提供了制備上述組合物的方法，包括蒸餾和/或用包含一種有機溶劑的提取劑提取大高良姜或其部分、優選為根莖，如果必要的話，隨后除去提取劑，得到適合利用的提取物。
發明的詳細說明我們已經驚人地發現在芳族化合物與萜類化合物之間的協同性藥理作用，芳族化合物選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇，萜類化合物選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。后者萜類化合物是大高良姜揮發油的主要組分。
這種協同作用在實施例1中有清楚的證明，其中根據本發明的組合物顯示出遠遠優于其組分的藥理作用。
我們進而發現在數量上占優勢的大高良姜芳族化合物1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯與其他芳族化合物之間的協同作用，后者選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。
這種協同作用在實施例2中有清楚的證明，其中根據本發明的組合物顯示出遠遠優于其組分的藥理作用。
我們已經驚人地發現，這些協同組合物針對與超敏反應有關的狀態和疼痛的治療發揮藥理作用。
更具體地，上述組合物在對活的生物體給藥后提供下列藥理作用·免疫調節作用。
·超敏反應的抑制作用。
·IgE介導的變應性反應的抑制作用。
·自體免疫反應的抑制作用。
·疼痛的減輕作用。
因此，本發明提供了一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的一種或多種化合物，選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。
選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇的化合物在組合物中的百分率(w/w)通常為至少2.0％，例如至少2.5％、至少3.0％、至少4.0％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯的化合物在組合物中的百分率(w/w)通常為至少0.5％，例如至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
本發明進而提供了一種優選為大高良姜提取物或濃縮物形式的組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的大高良姜香精油或其混合物。
選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇的化合物在組合物中的百分率(w/w)通常為至少2.0％，例如至少2.5％、至少3.0％、至少4.0％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
大高良姜香精油在組合物中的百分率(w/w)通常為至少0.5％，例如至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
本發明也提供了一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯；b)0.5-98％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。
1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯在組合物中的百分率(w/w)通常為至少2.0％，例如至少2.5％、至少3.0％、至少4.0％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇的一種或多種化合物在組合物中的百分率(w/w)通常為至少0.5％，例如至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
根據本發明的協同組合物是新穎的，并且優于它們的各組分(當它們單獨使用時)，例如1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯(見實施例2)。
根據本發明的組合物的組分可以從大高良姜以外的其他植物得到。例如，用在組合物中的一些萜類化合物可以得自唇形科植物，例如來自Thymus vulgaris或Origanum cordifolium的α-萜品醇，和來自辣薄荷(Mentha piperita)的反式-β-法呢烯。萜類化合物也可以從其他科植物得到。具體來說，1,8-桉樹腦可以得自藍桉(Eucalyptusglobulus)、Achillea distans或Melaleuca alternifolia；α-蒎烯/β-蒎烯可以得自Achillea distans；α-萜品醇可以得自Melaleuca alternifolia。進而，用在組合物中的芳族化合物例如可以得自其他姜科植物，例如節鞭山姜(Alpinia conchigera)。同樣，其他科植物也可以用作芳族化合物的來源，例如1’-羥基佳味酚可以得自萎葉(Piper betel)。進而，用作本發明的組合物的組分的許多物質可以通過合成方法制備。
本發明進而提供了新穎的、具有特定化學組成的藥物、化妝品或食物增補劑。
“食物增補劑”是根據美國食品與藥品管理局在1994年的《Dietary Supplement Health and Education Act》(DSHEA)所定義的。DSHEA給出“食物增補劑”的下列正式定義“食物增補劑是這樣一種產品(不是煙草)，目的是補充飲食，它產生或含有一種或多種下列飲食成分維生素、礦物質、草藥或其他植物性藥材、氨基酸、人們通過增加每日總攝取量用來補充飲食的飲食物質、或濃縮物、代謝物、構成物、提取物、或這些物質的組合，它以丸劑、膠囊、片劑或液體形式被攝入。”類似的定義存在于世界的其他部分，例如歐洲；在本文中，該定義如上所述。關于“食物增補劑”，世界各地使用不同名稱，例如“食品增補劑”、“neutraceuticals”、“功能性食品”或簡稱為“食品”。在本文中，術語“食物增補劑”涵蓋所有這些名稱或定義。
因此，本發明提供了藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.9％(w/w)的任意上述本發明的組合物；b)0.1-99.99％(w/w)的藥學上或化妝品學上可接受的載體。
任意上述組合物在該藥物、化妝品或食物增補劑中的百分率(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％、至少0.05％、至少0.1％、至少0.25％、至少0.5％、至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％、至少35.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
本發明進而提供了藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.89％(w/w)的任意一種上述本發明的組合物；b)0.01-99.89％(w/w)的姜(Zingiber officinale)或其部分、提取物或組分；c)0.1-99.98％(w/w)的藥學上或化妝品學上可接受的載體。
任意上述組合物在該藥物、化妝品或食物增補劑中的百分率(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％、至少0.05％、至少0.1％、至少0.25％、至少0.5％、至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％、至少35.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
姜或其部分、提取物或組分在該組合物中的百分率(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％、至少0.05％、至少0.1％、至少0.25％、至少0.5％、至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％、至少35.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
本發明還提供了藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.89％(w/w)的任意一種上述本發明的組合物；b)0.01-99.89％(w/w)的γ-亞麻酸或二十碳五烯酸，最終是植物油或魚油的形式；c)0.1-99.98％(w/w)的藥學上可接受的載體。
任意上述組合物在該藥物、化妝品或食物增補劑中的百分率(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％、至少0.05％、至少0.1％、至少0.25％、至少0.5％、至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％、至少35.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
γ-亞麻酸或二十碳五烯酸，可選為植物油或魚油的形式，在該組合物中的百分率(w/w)通常為至少0.01％，例如至少0.025％、至少0.05％、至少0.1％、至少0.25％、至少0.5％、至少1.0％、至少2.5％、至少5.0％或至少7.5％，優選為至少10.0％，例如至少12.5％、至少15.0％或至少17.5％，更優選為至少20.0％，例如至少25.0％、至少30.0％、至少35.0％或至少40.0％，最優選為至少50.0％，例如至少75.0％。
上述作用為上述根據本發明的組合物的下列治療應用提供了部分基本原理·超敏疾病的治療或預防方法，以上述組合物的給藥為特征。治療作用可以針對所有已知與超敏反應有關的疾病。下文具體描述自體免疫病癥和IgE介導的變應性狀態。除了這些具體治療范圍以外，上述組合物的作用針對所有已知與超敏反應有關的狀態和疾病，例如感染(病毒、細菌、真菌、寄生蟲等感染)、感冒和流感、接觸性皮炎、昆蟲叮咬、變應性血管炎、術后反應、移植排斥反應(移植物抗宿主疾病)等，關于這一點，下列實例是非限制性的。
·自體免疫病癥的治療或預防方法，以上述組合物的給藥為特征。申請人提出這樣的假設，上述組合物是通過對超敏反應的免疫調節和抑制作用而達到治療作用的。治療作用可以針對所有已知的自體免疫病癥，例如自體免疫性肝炎、原發性膽汁性肝硬變、原發性硬化性膽管炎、自體免疫性溶血性貧血、格雷夫斯病、重癥肌無力、Ⅰ型糖尿病、炎性肌病、多發性硬化、Hashimoto氏甲狀腺炎、自體免疫性腎上腺炎、節段性回腸炎、潰瘍性結腸炎、腎小球性腎炎、進行性全身性硬化(硬皮病)、斯耶格倫病、紅斑狼瘡、原發性脈管炎、類風濕性關節炎、青少年關節炎(juvenile arthritis)、混合型結締組織病、牛皮癬、天皰瘡、類天皰瘡、皰疹樣皮炎等，關于這一點，下列實例是非限制性的。
·IgE介導的變應性反應和狀態的治療或預防方法，以上述組合物的給藥為特征。申請人提出這樣的假設，上述組合物是通過對超敏反應的抑制作用而達到治療作用的。治療作用可以針對所有已知的IgE介導的變應性反應和狀態，例如哮喘、濕疹(例如特應性皮炎)、蕁麻疹、變應性鼻炎、過敏癥等，關于這一點，下列實例是非限制性的。
·任意與疼痛有關的狀態的治療或預防方法，以上述組合物的給藥為特征。申請人提出這樣的假設，治療作用涉及免疫調節作用，可能涉及對超敏反應的抑制作用。
本發明的優選實施方式是大高良姜的提取物或濃縮物。根據本發明的提取物尤其可以通過新鮮或干燥大高良姜或其部分、優選為根莖的提取法或蒸餾法(例如水、蒸汽或真空蒸餾)得到。提取可以利用一些不同的有機溶劑進行，優選為水混溶性溶劑，和它們與水的混合物。提取可以在熱或冷的條件下，利用任意提取工藝進行，例如浸漬法、滲濾法或超臨界萃取法(例如用二氧化碳)。
優選的提取溶劑是丙酮、甲乙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、具有1-4個碳原子的低級鏈烷醇、戊烷、己烷、庚烷和它們的混合物。優選的提取溫度接近于所用溶劑的沸點，這是出于提取效率的考慮，但是較低的溫度也是可行的，不過有必要延長提取時間。
改變所用溶劑的組成，可以使提取對大高良姜的某些成分更具選擇性，從而增加或減少它們在最終提取物中的含量。
初步提取之后，可以進行第二步操作，例如液-液萃取、柱色譜或任意類型的蒸餾，目的是除去或濃縮和可能是分離提取物的任意成分。因此，大高良姜的任意成分可以避免出現或濃縮在最終提取物中，例如1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇、反式-β-法呢烯、1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇、3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇、良姜A、良姜B、良姜內酯(galanolactone)、賴百當-8(17)-12-二烯-15,16-二醛和8-17-環氧賴百當-12-烯-15,16-二醛。因此，可以使任何組分的含量標準化，以得到根據本發明的協同組合物。
按照本發明，上述組合物可以與任意其他的活性成分或植物提取物聯合，以加強治療作用。因此，我們提出將本發明的協同組合物與二十碳五烯酸(例如從魚油中得到)或γ-亞麻酸(例如從琉璃苣(Boragoofficihalis)中得到)聯合，用于任意上述治療應用。作為對比，我們提出將本發明組合物與姜(Zingeber officinale)或其部分或提取物或其組分聯合，用于相同的治療應用。
進而顯而易見的是，在根據本發明的用于制備藥物的用途中，上述組合物可以與添加劑混合，例如表面活性劑、溶劑、增稠劑、穩定劑、防腐劑、抗氧化劑、矯味劑等，得到所需的制劑產品。同樣，根據本發明的藥物組合物可以進一步含有這些添加劑。對制劑的給藥途徑或劑型沒有限制，關于這一點，下列實例是非限制性的片劑、膠囊、流體、顆粒、凝膠、軟膏、乳劑(例如乳油劑和洗劑)、噴霧劑(例如氣霧劑)、滴眼劑等。組合物還可以可選地含有表面活性劑，例如膽汁鹽、聚氧乙烯-脫水山梨醇-脂肪酸酯或多元醇的混合鏈長脂肪酸酯，用于提高組合物在消化液中的分散性、進而提高生物利用度，或者用于得到組合物的最終劑型。
實施例實施例1研究對象該項研究試驗了根據本發明的組合物在三種酶抑制測定中的抑制活性，這三種酶分別是白三烯C4合成酶、5-脂氧合酶和磷酸二酯酶-Ⅳ。包含得自大高良姜的萜類化合物濃縮物與芳族化合物濃縮物的1∶1混合物的組合物與它的這兩種組分進行比較，以確定可能的協同作用。
研究概況背景研究的目的是確立根據本發明的組合物在脂氧合酶途徑中以及作為磷酸二酯酶-Ⅳ(PDE-Ⅳ)抑制劑的活性。
白三烯C4(LTC4)合成酶和5-脂氧合酶是參與脂氧合酶途徑的酶。白三烯C4(LTC4)合成酶參與從LTA4生成LTC4。5-脂氧合酶催化花生四烯酸向5-羥基二十碳四烯酸(5-HETE)的氧化性代謝，初期反應導致白三烯的生成。因此，把這些測定法結合在一起，可以確立抑制白三烯生成的試劑的活性程度以及作用部位。
Ⅳ型磷酸二酯酶(PDE Ⅳ)催化cAMP或cGMP向它們各自的一磷酸酯形式的轉化。PDE Ⅳ對Ca2+/鈣調蛋白或cGMP調節是不敏感的，表現出cAMP底物依賴性，并且被特異性抑制劑RO 20-1724所抑制。由于環核苷酸在很多組織和器官的細胞中是重要的第二信使，治療學的發展都把選擇性地針對特異性PDE同種型作為重要的目標。PDE Ⅳ據信是支氣管舒張、變應性反應和炎癥中最重要的PDA同種型。PDE Ⅳ抑制劑因此在哮喘、變應性反應和炎性疾病的治療中被認為是有價值的試劑。
方法供試化合物通過對干燥的根莖粉末進行蒸汽蒸餾而制備大高良姜的萜類化合物濃縮物(以下稱之為化合物A)。用GC-MS法確認關鍵萜類化合物的存在。
通過用丙酮和己烷滲濾干燥根莖粉末，隨后在真空下蒸發除去提取溶劑，從大高良姜制備芳族化合物(以下稱之為化合物B)濃縮物。用快速色譜法除去揮發油的殘余物。
通過混合化合物A和B(按重量1∶1)，制備根據本發明的組合物(以下稱之為化合物C)。
白三烯C4合成酶測定使用作為粗制級分從豚鼠肺制備的LTC4合酶。將濃度為300μg/ml的供試化合物重復試驗兩次。將供試化合物和/或載體用12μg酶、0.3μg LTA4甲基酯、0.2％(w/w)白蛋白(用來穩定產物)和4.5mM絲氨酸硼酸酯(用來防止LTC4向LTD4的轉化)在37℃磷酸鹽緩沖液pH 7.8中培養30分鐘。加入冰冷的甲醇終止反應。用RIA(放射免疫測定)法定量測定LTC4的生成。
5-脂氧合酶測定使用來自大鼠嗜堿性白血病細胞(RBL-1)的粗5-脂氧合酶制劑。將濃度為9μg/ml的供試化合物重復試驗兩次。將供試化合物和/或載體用酶在室溫Tris緩沖液pH 7.2中預培養5分鐘。加入5μM花生四烯酸作為底物引發反應，繼續進行8分鐘，然后加入70mM檸檬酸終止反應。用RIA定量測定5-HETE的生成。
磷酸二酯酶-Ⅳ測定使用從人U937原球形血細胞(pronocytic cell)部分純化的PDE-Ⅳ。將濃度為30μg/ml的供試化合物重復試驗兩次。將供試化合物和/或載體用40μg酶和含有0.01μM[3H]cAMP的1μg cAMP在30℃ Tris緩沖液pH 7.5中培養20分鐘。沸騰2分鐘以終止反應，加入10mg/ml蛇毒核苷酸酶使所得AMP轉化為腺苷，進一步在30℃下培養10分鐘。沒有水解的cAMP結合到AGI-X2樹脂上，用閃爍計數法定量測定水相中的剩余[3H]腺苷。
發現結果列在表1中(與不含供試化合物的對照相比較的抑制百分率)。
表1
解釋在該項研究中，通過比較它的作用與化合物A和B的平均作用(計算的兩者的加合作用)，評價了組合物(化合物C)的協同作用。
在白三烯C4合成酶測定中，化合物C的抑制作用是32％，比計算的化合物A和B的加合作用(抑制作用為23％)高39％。這一點清楚地證明了根據本發明的協同作用。
在5-脂氧合酶測定中，化合物C的抑制作用是驚人的35％，因為計算的化合物A和B的加合作用是-37％抑制。這一點清楚地證明了根據本發明的協同作用。
在磷酸二酯酶-Ⅳ測定中，化合物C的抑制作用是56％，比計算的化合物A和B的加合作用(抑制作用為9％)高522％。這一點清楚地證明了根據本發明的協同作用。
實施例2研究對象該項研究試驗了根據本發明的組合物在兩種酶抑制測定中的抑制活性，這兩種酶分別是白三烯C4合成酶和磷酸二酯酶-Ⅳ。包含1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯與得自大高良姜的芳族化合物濃縮物的組合物和它的這兩種組分進行比較，以確定可能的協同作用。
研究概況背景研究的目的是確立根據本發明的組合物在脂氧合酶途徑中以及作為磷酸二酯酶-Ⅳ(PDE-Ⅳ)抑制劑的活性。
白三烯C4(LTC4)合成酶和5-脂氧合酶是參與脂氧合酶途徑的酶。白三烯C4(LTC4)合成酶參與從LTA4生成LTC4。5-脂氧合酶催化花生四烯酸向5-羥基二十碳四烯酸(5-HETE)的氧化性代謝，初期反應導致白三烯的生成。因此，把這些測定法結合在一起，可以確立抑制白三烯生成的試劑的活性程度以及作用部位。
Ⅳ型磷酸二酯酶(PDE Ⅳ)催化cAMP或cGMP向它們各自的一磷酸酯形式的轉化。PDE Ⅳ對Ca2+/鈣調蛋白或cGMP調節是不敏感的，表現出cAMP底物依賴性，并且被特異性抑制劑RO 20-1724所抑制。由于環核苷酸在很多組織和器官的細胞中是重要的第二信使，治療學的發展都把選擇性地針對特異性PDE同種型作為重要的目標。PDE Ⅳ據信是支氣管舒張、變應性反應和炎癥中最重要的PDA同種型。PDE Ⅳ抑制劑因此在哮喘、變應性反應和炎性疾病的治療中被認為是有價值的試劑。
方法供試化合物用制備型HPLC制備1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯(以下稱之為化合物A)。用GC-MS法確認化合物的純度。
通過用丙酮和己烷滲濾干燥根莖粉末，隨后在真空下蒸發除去提取溶劑，制備大高良姜的芳族化合物(以下稱之為化合物B)濃縮物。用快速色譜法除去揮發油的殘余物。
通過混合化合物A和B(按重量1∶1)，制備根據本發明的組合物(以下稱之為化合物C)。
白三烯C4合成酶測定使用作為粗制級分從豚鼠肺制備的LTC4合酶。將濃度為300μg/ml的供試化合物重復試驗兩次。將供試化合物和/或載體用12μg酶、0.3μg LTA4甲基酯、0.2％(w/w)白蛋白(用來穩定產物)和4.5mM絲氨酸硼酸酯(用來防止LTC4向LTD4的轉化)在37℃磷酸鹽緩沖液pH 7.8中培養30分鐘。加入冰冷的甲醇終止反應。用RIA(放射免疫測定)法定量測定LTC4的生成。
磷酸二酯酶-Ⅳ測定使用從人U937原球形血細胞部分純化的PDE-Ⅳ。將濃度為30μg/ml的供試化合物重復試驗兩次。將供試化合物和/或載體用40μg酶和含有0.01μM[3H]cAMP的1μg cAMP在30℃Tris緩沖液pH 7.5中培養20分鐘。沸騰2分鐘以終止反應，加入10mg/ml蛇毒核苷酸酶使所得AMP轉化為腺苷，進一步在30℃下培養10分鐘。沒有水解的cAMP結合到AGI-X2樹脂上，用閃爍計數法定量測定水相中的剩余[3H]腺苷。
發現結果列在表2中(與不含供試化合物的對照相比較的抑制百分率)。
表2
解釋在該項研究中，通過比較化合物C的作用與化合物A和B的平均作用(計算的兩者的加合作用)，評價了組合物(化合物C)的協同作用。
在白三烯C4合成酶測定中，化合物C的抑制作用是44％，比計算的化合物A和B的加合作用(抑制作用為22％)高100％。這一點清楚地證明了根據本發明的協同作用。
在磷酸二酯酶-Ⅳ測定中，化合物C的抑制作用是67％，比計算的化合物A和B的加合作用(抑制作用為31％)高116％。這一點清楚地證明了根據本發明的協同作用。
實施例3根據本發明的藥物組合物制備如下。
按照下列處方，將得自大高良姜的、根據本發明的組合物配制在用作滴鼻劑或鼻用噴霧劑的制劑中，所述組合物包含80％芳族化合物濃縮物和20％萜類化合物濃縮物制備100g鼻用噴霧劑，1mg/mla)芳族/萜類化合物組合物0.05gb)Cremophor RH 40,BASF2.00gc)乙二胺四乙酸，Fluka 0.05gd)苯扎氯銨，Sigma 0.01ge)氯化鈉，Merck0.89gf)Milli Q水，Millipore 97.00g操作在水浴上加熱至37℃時，將a)分散到b)中；添加c)、d)和e)。混合后，在劇烈攪拌下一點一點地添加f)。
按照上述處方制備的鼻用噴霧劑用4位志愿者進行試驗。報告該鼻用噴霧劑對變應性鼻炎有效。
實施例4
根據本發明的藥物組合物制備如下。
按照下列處方，將得自大高良姜的、根據本發明的組合物配制在軟膏基質中，所述組合物包含50％芳族化合物濃縮物和50％萜類化合物濃縮物制備30g軟膏，0.5％(w/w)a)芳族/萜類化合物0.3gb)Cremeol E-45,rhus Oliefabrik A/S19.5gc)揮發性硅氧烷VS72,Bionord A/S 9.0gd)Cremeol HF-52 SPC,rhus Oliefabrik A/S1.2g操作將d)在大約100℃下熔化；在連續加熱下和混合下添加b)。然后添加c)，將混合物冷卻至室溫。最后添加a)，將制劑混合。
按照上述處方制備的軟膏制劑用5位特應性濕疹志愿者進行試驗。報告該軟膏對特應性濕疹癥狀有效。
實施例5根據本發明的藥物組合物制備如下。
按照下列處方，將得自大高良姜的、根據本發明的組合物與姜的丙酮提取物混合，配制在植物油中，所述組合物包含85％芳族化合物濃縮物和15％萜類化合物濃縮物制備100g軟明膠膠囊填充物a)芳族/萜類化合物組合物 15.0gb)姜提取物 20.0gc)花生油，Aarhus Oliefabrik A/S65.0g操作將a)、b)和c)劇烈混合。
按照上述處方制備的、含有350mg填充物的明膠膠囊用5位骨關節炎志愿者進行試驗。給藥(每天兩粒膠囊)兩周后，全部志愿者均報告疼痛緩解。
權利要求
1.一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的一種或多種化合物，選自1,8-桉樹腦、α-蒎烯、β-蒎烯、苧烯、α-萜品醇、萜烯-4-醇和反式-β-法呢烯。
2.一種組合物，優選為大高良姜提取物或濃縮物的形式，含有a)2-99.5％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯、1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇；b)0.5-98％(w/w)的大高良姜香精油或其混合物。
3.一種組合物，含有a)2-99.5％(w/w)的1’-乙酰氧基佳味酚乙酸酯；b)0.5-98％(w/w)的一種或多種化合物，選自1’-乙酰氧基丁子香酚乙酸酯、反式-對-香豆基二乙酸酯、松柏基二乙酸酯、1’-羥基佳味酚乙酸酯、1’-羥基佳味酚、對-羥基-反式-肉桂醛、對-甲氧基-反式-肉桂醇和3,4-二甲氧基-反式-肉桂醇。
4.一種藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.9％(w/w)的根據權利要求1-3任意一項的組合物；b)0.1-99.99％(w/w)的藥學上可接受的載體。
5.一種藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.89％(w/w)的根據權利要求1-3任意一項的組合物；b)0.01-99.89％(w/w)的姜或其部分、提取物或組分；c)0.1-99.98％(w/w)的藥學上或化妝品學上可接受的載體。
6.一種藥物、化妝品或食物增補劑，包含a)0.01-99.89％(w/w)的根據權利要求1-3任意一項的組合物；b)0.01-99.89％(w/w)的γ-亞麻酸或二十碳五烯酸，可選為植物油或魚油的形式；c)0.1-99.98％(w/w)的藥學上可接受的載體。
7.根據權利要求1-3任意一項的組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于免疫調節。
8.根據權利要求1-3任意一項的組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于超敏反應的抑制。
9.根據權利要求7或8的用于制備藥物的用途，該藥物用于治療或預防IgE介導的變應性反應和狀態，例如哮喘、變應性鼻炎、特應性濕疹或過敏癥。
10.根據權利要求7或8的用于制備藥物的用途，該藥物用于治療或預防自體免疫病癥，例如節段性回腸炎、潰瘍性結腸炎、類風濕性關節炎或牛皮癬。
11.根據權利要求1-3任意一項的組合物用于制備藥物的用途，該藥物用于疼痛的緩解。
12.個體超敏疾病的治療或預防方法，包括將根據權利要求1-3任意一項的組合物或根據權利要求4-6任意一項的藥物對所述個體給藥。
13.個體自體免疫病癥的治療或預防方法，包括將根據權利要求1-3任意一項的組合物或根據權利要求4-6任意一項的藥物對所述個體給藥。
14.個體IgE介導的變應性反應或狀態的治療或預防方法，包括將根據權利要求1-3任意一項的組合物或根據權利要求4-6任意一項的藥物對所述個體給藥。
15.個體疼痛的緩解方法，包括將根據權利要求1-3任意一項的組合物或根據權利要求4-6任意一項的藥物對所述個體給藥。
16.制備根據權利要求1-3任意一項的組合物的方法，包括蒸餾新鮮或干燥的大高良姜或其部分、優選為根莖，和/或用包含一種有機溶劑或水或其混合物的提取劑提取所述的植物原料，如果必要的話，隨后除去提取劑。
17.根據權利要求16的方法，其中所述有機溶劑選自丙酮、甲乙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、具有1-4個碳原子的低級鏈烷醇、戊烷、己烷、庚烷和它們的混合物。
18.根據權利要求16或17的方法，其中提取物進一步進行液-液萃取或色譜，以除去或濃縮某些成分。
全文摘要
新穎的、含有芳族化合物與萜類化合物的組合物,這兩類化合物存在于、并且可以優選地得自植物大高良姜(姜科),該組合物關于免疫調節作用顯示出協同作用,它們顯著抑制超敏反應。因此,它們用于制備具備這些用途的藥物,更具體地用于治療或預防ⅠgE介導的變應性反應和狀態,例如哮喘、變應性鼻炎、特應性濕疹或過敏癥,還用于治療或預防自體免疫病癥,例如節段性回腸炎、潰瘍性結腸炎、類風濕性關節炎或牛皮癬,以及用于疼痛的緩解。它們例如可以配制成藥物、化妝品或食物增補劑。也描述了從大高良姜制備該組合物的方法。
文檔編號A61K31/22GK1303295SQ9980680
公開日2001年7月11日 申請日期1999年4月16日 優先權日1998年4月16日
發明者M·S·韋德納, M·J·彼得森, N·W·詹森 申請人:Ida發展有限公司