9-順-視黃酸及其鹽和酯的藥物用途的制作方法

專利名稱：9-順-視黃酸及其鹽和酯的藥物用途的制作方法
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本發明有關于含有9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的，可水解的酯類的藥物組成物。進一步，本發明有關于用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的，可水解的酯類作為一種藥物。另一方面，本發明也有關于把9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的，可水解的酯類用來制造一種用于下面指定的藥物適用癥的藥物。
德國專利DE3827467描述了視黃酸與嘧啶衍生物組合用于誘導和刺激頭發生長并減少其脫落。
按照本發明，已經發現9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類具有與上皮損傷，抗增殖，抗轉化(變態)，抗腫瘤性的腫瘤預防以及治療腫瘤有關的性質，而只呈現有限的毒性或別的與類視黃素類化合物相連系的不利效應。現已發現涉及上述性質的病理癥狀的治療可通過系統地或局部地施用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的，可水解的酯類而得到有效的治療。
按照本發明的一個具體實例，當給患有癌前期上皮損傷，即癌變前損傷的哺乳動物服用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或藥物上可接受的可水解的酯類時，阻止了損傷的進展。這種化合物控制住了細胞增生并分化了這些惡化前或癌變前的損傷，從而導致細胞的修復，以這種方式防止了這些損傷發展成為上皮癌。
在治療惡化前或癌變前的上皮損傷，防止這些損傷發展或為癌時，可以給患有這些疾病的病人口服或局部施用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類，所用劑量應能有效阻止這些損傷的進一步發展。劑量應依賴于損傷的數量和大小以及患者的需要。
9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類在治療乳房、皮膚、結腸、膀胱、食管、胃、喉、肺或口腔中的上皮性的惡化前或癌變前損傷方面是特別有效的，按照本發明的一個優選的實例，這種化合物可用來治療惡化前或癌變前損傷諸如各種粘膜白斑病，特別是口腔和舌頭部位的，以及乳房部位的癌變前或惡化前損傷。
按照本發明的進一步的實例，9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類可被用來治療上皮起端的癌或腫瘤，阻止這些腫瘤的發展。按照這種化合物的抗癌或抗腫瘤性質，用這種化合物來治療腫瘤可使這些腫瘤的大小和數量兩方面都產生消退。在應用這種化合物作為一種抗腫瘤劑時，這種化合物在阻止乳房、皮膚、結腸、膀胱、食管、胃、喉部、肺或口腔中的腫瘤發展方面是特別有效的，可以把9-順-視黃酸以上述與治療患有惡化前或癌變前損傷的病人有關的方式給患者服藥。
在上面敘述的治療中，9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類可以一種含有9-順-視黃酸和一種藥物上可接受的與所說化合物相容的載體所組成的組成物系統地或局部地給患者施藥。在制備這種組成物時，可用任意通常藥物上可接受的載體。當藥物是供口服時，一般是每隔一定時間服藥，方便地是在用餐時，或者每天服一次。已經確定這種化合物當局部施藥或當口服時是相對無毒性的。
能有效地用9-順-視黃酸治療的涉及惡化前和癌變前的上皮損傷或腫瘤的疾病實例有光照性角質化，砷中毒性角質化，著色性干皮病，鮑恩氏癥(癌前皮炎)，粘膜白斑病，組織轉化，發育異常和粘液膜上的乳頭狀瘤例如口、舌、咽、喉部位的這類瘤，支氣管粘液膜的癌變前期變化諸如組織轉化和發育異常(特別是常見于抽煙抽得很厲害的人和與石棉和/或鈾接觸的人)，子宮預的發育異常和粘膜白斑病，外陰部的營養障礙，膀胱的癌變前期變化，例如組織轉化和發育異常，膀胱的乳漿狀瘤和腸道的息肉。可有效地用9-順-視黃酸治療的上皮起端的半惡性或惡性腫瘤或癌的實例有乳腺瘤，皮膚瘤，例如莖底細胞癌，膀胱瘤例如淺源膀胱癌，結腸瘤，食管瘤，胃瘤，喉瘤和肺瘤。
上皮性質的癌變前損傷和惡性腫瘤的治療可單獨使用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽或它的藥物上可接受的可水解的酯來進行，也可以和別的治療方法諸如外科手術，放射療法，荷爾蒙療法或用標準的化學治療法(抑制細胞生長劑和細胞毒劑)或生物反應變更因子(干擾素，白細胞素或別的細胞分裂素)等療法結合在一起進行治療。
進一步，按照本發明，已經發現把9-順-視黃酸和它的藥物上可接受的鹽類及可水解的酯類局部施用于患者皮膚時，可逆轉與光照性損傷有關的疾病。因此，通過對由于陽光曝曬而受到損傷的患者皮膚局部施用9-順-視黃酸化合物，可以逆轉皺紋，彈性組織變性和早衰等曝曬造成的影響而使皮膚外觀得到改善。
通過局部施用9-順-視黃酸化合物和藥物上可接受的鹽類和可水解的酯類，加速了皮膚損傷的修復，從而賦予皮膚以更光滑和更年青的外觀。
按照本發明，也已發現當給患者口服或局部服用9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類時，皮脂的分泌即減少。因此，通過服用這種化合物來減少皮脂分泌和痤瘡損傷，從而提供了一種治療痤瘡，油脂性頭發和油脂性頭皮的方法。在這種治療方法中，服用這種化合物可被用作由于過量的皮脂分泌而引起的疾病諸如痤瘡，或油脂性頭皮和頭發的一種預防方法，也可用于這些疾病的治療。
已經知道抑制皮脂的產生和/或分泌在治療和/或預防像痤瘡這類疾病中是有效的，增加皮脂分泌則可導致像皮脂溢性皮炎包括(頭)皮屑，油脂性皮膚，油脂性頭發，粟粒疹和黑頭粉刺等這類皮膚病。
按照本發明，局部施用或口服9-順-視黃酸化合物，它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的可水解的酯類，在治療所有形式的痤瘡諸如炎性和非炎性的痤瘡時都是有效的。
本發明還有另一方面的內容，即已經發現把9-順-視黃酸，它的藥物上可接受的鹽類或它的藥物上可接受的可水解的酯類給患有牛皮癬的病人口服或局部用藥時，它對于治療牛皮癬是有效的。服藥減輕了牛皮癬病癥對皮膚的影響。
藥物上，接受的鹽類包括任何化學上允許的9-順-視黃酸的鹽，并在藥物上可接受的制劑中可供人類患者服用。任何這樣的通常在藥物上可接受的鹽都可以使用。在這類可以使用的普通鹽類中包括堿鹽，例如堿金屬鹽如鈉鹽或鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽或鎂鹽，以及銨鹽或烷基銨鹽。
按照本發明，9-順-視黃酸可以它的藥物上可接受的可水解的酯類的形式服用，任何藥物上可接受的可水解的酯類都可用于本發明的組成物和方法中，在這些酯類化合物中有芳香酯類諸如芐基酯(OB2l)或取代有低級烷基，鹵素，硝基的芐基酯；或低級烷基酯類，例如叔丁基酯；或環戊基酯，環己基酯，環庚基酯；或9-芴甲基酯。
按照本發明，可以藥物上可接受的供口服或局部用藥的組成物的形式提供9-順-視黃酸或它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的可水解的酯類。這些本發明的藥物組成物含有所說的9-順-視黃酸或它的藥物上可接受的鹽類和它的藥物上可接受的可水解的酯類，以及一種與之相容的藥物上可接受的載體物質。可應用任何一種通常的載體物質。載體物質可以是一種適合于口服的有機或無機的惰性載體物質。適當的載體包括水，明膠，阿拉伯膠，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，滑石，植物油，聚亞烷基-乙二醇，凡士林等。進一步，藥物制劑還可包含其它的藥物活性劑，與接受的藥物化合物的實踐經驗一致，還可以加入別的添加劑諸如香味劑，保存劑，穩定劑，乳化劑，緩沖劑等。
藥物制劑可以做成任何通常的形式，包括(a)供口服的固體形式的制劑諸如片劑，膠囊，丸劑，粉劑，粒劑等；(b)供局部施藥的制劑諸如溶液，懸浮液，軟膏，乳膏，凝膠，降低顆粒體積至5微米以下的細粉劑，煙霧劑等。藥物制劑可被消毒和/或含有輔劑，諸如保存劑，穩定劑，潤濕劑，乳化劑，以及為改變滲透壓的鹽類和/或緩沖劑。
為向皮膚上局部施藥，上述化合物最好是被制成軟膏，酊劑，乳膏，凝膠，溶液，洗劑，噴霧劑，懸浮劑，洗發劑，洗發用肥皂，香水等。事實上，按照本發明，可以使用任何一種通常用于頭皮或皮膚上的組成物。經優選的施用含有本發明試劑的組成物的方法中，是以凝膠，洗劑和乳膏劑的形式來施藥。為向皮膚上局部施藥用的藥物制劑，可通過把上述活性組份按通常用于這類制劑中的方法與非毒性的，治療上是惰性的固體或液體載體相混合來制備。這些制劑應含有基于組成物的總重量計算至少大約0.01重量百分數的活性組份。因為活性組份9-順-視黃酸是相對非毒性和非刺激性的，它在局部用藥的組成物中的含量可超過0.15％重量百分數。最好是這些制劑包含基于組成物的總重量計算大約0.01至0.15％重量百分數的活性組份。并且最好是每天往皮膚上施用這些制劑一或兩次。這些制劑可按患者的需要來施藥。在實施本發明時，活性組份可通過水溶液或醇溶液諸如乙醇溶液來施藥。
在制備上述局部用的制劑過程中，可使用通常用于局部制劑的藥物化合物領域中的上述添加劑，諸如保存劑，增稠劑，香料等。此外，也可往含有上述活性試劑的局部用藥物制劑中摻入通常的抗氧劑或通常的抗氧劑的混合物。可用于這些制劑中的通常的抗氧劑包括N-甲基-α-生育胺，生育酚，丁基化的羥基苯甲醚，丁基化的羥基甲苯，乙氧喹等。用于本發明中的含有活性藥劑的乳膏基藥物配方，是由包含一種脂肪酸醇，半固體的石油烴，1.2-乙二醇和一種乳化劑的水溶液孔化液所組成的。
按照本發明的含有活性藥劑的軟膏配方，包含半固體石油烴與一種活性物質在一種溶劑中形成的分散體系的混合物。包含用于本發明的活性成份的乳膏組成物最好是包含由致濕物、一種粘度穩定劑和水組成的水相，由脂肪酸醇、一種半固體石油烴和乳化劑組成的油相，以及含有分散在一種水溶液穩定劑—緩沖溶液中的活性藥劑的相所形成的乳狀液。穩定劑可被加到局部用的制劑中。按照本發明可應用任何一種通常的穩定劑。在油相中，脂肪酸醇組份起著穩定劑的作用。這些脂肪酸醇組份是由至少包含大約14個碳原子的長鏈飽和脂肪酸還原而衍生出來的。按照本發明，也可使用一般用于頭發上的局部用制劑中的普通香水和洗劑。進一步，如果需要，還可在本發明的局部用制劑中使用通常的乳化劑。
一種經優選的口服劑型包括片劑，由硬或軟的明膠，甲基纖維素或其它容易在消化道溶解的適當材料組成的膠囊。按照本發明，經仔細考慮的口服劑量將按照具體患者的需要而變化，這可由處方的醫生來決定。不過，一般說來每日的劑量在大約每公斤體重O.01毫克至大約3毫克之間，最好是在每公斤患者體重約0.025毫克至大約1.5毫克之間。這一劑量可按照患者的需要，按醫生決定的任何劑量安排來服用。
以任何所需的量摻入這里列舉的治療活性物質到用于口服劑型中經腸道施藥，同樣是在本發明的權限范圍之內。但最好是以這樣的方式來配制含有本發明活性物質的制劑，即每種劑型中包含大約1毫克至大約50毫克活性物質以及合適的治療上是惰性的填充劑和稀釋劑。特別優選的作法是把這樣的劑量摻入軟的明膠膠囊和片劑中。
按照本發明，使用9-順-視黃酸的效果可用下述試驗模型來證實。
A. 9-順-視黃酸對于人類腫瘤細胞系和對于實驗腫瘤的抗腫瘤效果對人類變態的上皮細胞系生長和增殖的抑制效應把9-順-視黃酸對人類腫瘤細胞系SCC 15(舌部的鱗狀細胞癌)和A431(外陰部的鱗狀細胞癌)進行試驗。增殖作用是由能存活的細胞通過線粒體酶活性對MTT染料[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2.5-二苯基四唑溴化鎓鹽]的還原作用來測量的(參見Mosmann T.Rapid關于細胞生長和生存的比色試驗應用于增殖和細胞毒性試驗的論文，發表于J.Jmmunol.Methods 6555-63，1983年)。
試驗結果對人類鱗狀細胞癌SCC 15(舌部)增育7天后相對于對照組存活癌細胞的％對照組(DMSO)100±11.49-順-視黃酸(1.10-7M) 54±7.5 P＜0.0025干擾素α(IFNα)(1000單位/毫升) 60±8.3 P＜0.0059-順-視黃酸+IFNα20±2.5 P＜0.001可見9-順-視黃酸的濃度為3.10-7M時可抑制增殖達46％，與IFNα結合使用時甚至可達80％。
對人類鱗狀細胞癌A 431(外陰部)培育7天后相對于對照組存活癌細胞的％對照組(DMSO) 100±8.79-順-視黃酸(3.10-7M) 36±1.8 P＜0.001IFNα(1000單位/毫升) 42±0.9 P＜0.00059-順-視黃酸+IFNα 23±0.4 P＜0.001可見9-順-視黃酸的濃度為3.10-7M時可抑制增殖達64％，與IFNα結合使用時甚至可達77％。
9-順-視黃酸對兩種試驗的人類上皮癌細胞系均有顯著的抑制生長的效應。
進一步還研究了9-順-視黃酸對于其它變態細胞系的效果，在兩組各重覆四次的試驗中，進行了含有細胞系SKv-11，即一種包含在人類乳頭癌病毒中的變態角質化細胞系被9-順-視黃酸抑制增殖的情況方面的試驗。把細胞按5-104細胞/孔的濃度植入Eagle氏介質中并把癌細胞培育2天。在用10-4M濃度的類視黃素培育前和培育后，用血細胞計數器直接進行細胞計數，并計數相應的在DMSO對照組中培育的細胞數目。生長抑制情況用相對于對照組的％來表示。
試驗結果9-順-視黃酸的濃度為10-6M時，可明顯地抑制人類變態的角質化細胞SKv-11的增殖達32.4％(P＜0.001)。
B. 9-順-視黃酸對于腫瘤細胞誘導的血管生成的效果。
現已確定，腫瘤的不受限制的生長是依賴于血管生成。腫瘤細胞數目增加之前必定先有會聚在腫瘤上的新的毛細血管的增加。因此，抑制了血管的生成，也就抑制了腫瘤的生長。(參見Folkman J.論文在正常組織和腫瘤組織中血管生長是怎樣調節的？在G.N.A.Clowed紀念獎的演講，發表于Cancer Res.46467-473，1986年；以及Sidky Y.A和Bordem E.C的論文血管生成被干擾素所抑制對于腫瘤誘導的和淋巴細胞誘導的血管增生的影響，發表于CancerRes.47.5155-5161，1987年)。
血管生長方面的試驗以前曾被描述過(參看Sidky Y.A和Auerbach R.論文淋巴細胞誘導的血管生成移植物對宿主反應的一種定量的和靈敏的試驗；發表于J.exp.Med.，1411084-1100，1975年，Majewski S等人的論文通過系統地服用魚精蛋白硫酸鹽來抑制腫瘤誘導的血管生成。發表于Int.J Cancer 33831-833，1984年)。在試驗9-順-視黃酸時應用了兩種試驗方法。在第一種試驗中，類視黃素是在把細胞系注射到老鼠體內前在活體外加入到細胞系中的，在第二種試驗中，老鼠是在真皮內注射腫瘤細胞之前把類視黃素經腹膜內在活體內進行注射的。
試驗方法兩種致癌細胞系SKv-e2和HeLa.的細胞和一種非致癌性的細胞系SKv-e1有活體外預先用10-7M濃度的9-順視黃酸培育48小時，然后進行細胞計數并在TC 199介質中洗滌。把細胞濃度調節到每0.1毫升介質中有2.105個存活的細胞，并經真皮內注射到經過X-光照射，但未用類視黃素處理過的Balc/c老鼠體內，對照組注射預先用DMSO培育的腫瘤細胞。按前面參考文獻中的方法測定血管生成效應。
試驗結果a)在活體外事先用9-順-視黃酸培育過的細胞系SKv-e2(致癌的)，HeLa(致癌的)和SKv-el(非致癌的)，注射到Balc/c老鼠體內時對血管生成能力的影響平均血管數目SKv-e2 HeLa Skv-e1對照組34.7±3.7 32.5±2.7 26.3±1.59-順-視黃酸 23.6±4.2 23.8±2.9 25.6±2.2(P＜0.001) (P＜0.001) (P＜0.1)可見，與9-順-視黃酸對兩種致癌細胞系誘導的新血管生成具有抑制效應相反，9-順-視黃酸對于非致癌性細胞子系誘導的血管生成并沒有抑制作用。
b)Balc/c老鼠在活體內用9-視黃酸預處理時，對于細胞誘導的血管生成的抑制效果平均血管數目對照組 9-順-視黃酸HeLa(致癌性的) 28.3±0.8 16.3±1.8 P＜0.001SKv-12(致癌性的)30.3±2.6 15.3±1.0 P＜0.001SKv-e2(致癌性的)31.3±2.7 19.7±0.6 P＜0.001SKv-e1(非致癌性的) 19.7±3.7 24.3±5.6 P＞0.1可見，經9-順-視黃酸處理過的老鼠當被注射三種致癌性的細胞系時顯示出對于新血管生成的抑制效果，當注射的是非致癌性的細胞系時，則不顯示這種抗血管生成的效果。
9-順-視黃酸在活體外和活體內都能抑制經腫瘤細胞誘導的新血管的生成。因為形成新血管是腫瘤生長的先決條件，所以9-順-視黃酸不僅通過抑制增殖和/或分化的誘導直接起到抗腫瘤的作用，還通過抗血管生成的效應，間接地起著抑制腫瘤生長的作用。
c. 9-順-視黃酸對老鼠的由化學誘導產生的皮膚乳頭狀瘤的效果已經很好地確定，類視黃素對于皮膚，呼吸道，消化道和泌尿系統的由化學誘導產生的腫瘤具有預防和治療的效果(參見Bollag W.和Hartmann H.R的論文在動物和人類身上用類視黃類預防素預防和治療癌。發表于Cancer Surveys 2293-314，1983年)。9-順-視黃酸對老鼠身上已被確認的皮膚乳頭狀瘤具有顯著的治療效果，能導致這些上皮腫瘤的消退。乳頭狀瘤試驗是篩選類視黃素類化合物抗腫瘤活性的標準試驗。
試驗結果劑量每只老鼠乳頭狀瘤直徑的平均和的變化百分數毫克/公斤體重，腹膜內注射對照組 +23.5±2.19-順-視黃酸400 -43.3±2.4P＜0.0005200 -24.8±4.5P＜0.0005可見，9-順-視黃酸對于老鼠身上已被確認的化學誘導產生的皮膚乳頭狀瘤具有重要的治療性的抗腫瘤效果，使這種上皮腫瘤消退。
D. 9-順-視黃酸抗牛皮癬活性的效應抗牛皮癬活性可以用C節中所引證的試驗模型，通過使老鼠身上的由化學誘導產生的皮膚乳頭狀瘤產生消退的能力來測定。乳頭狀瘤試驗是類視黃素抗牛皮癬效應的標準試驗(參看Teelmann K，Bollag W.的論文用老鼠乳頭狀瘤試驗作為類視黃素對人類牛皮瘤治療活性的預測試驗的關聰，發表于Dermatologica 18030-35，1990年)。
像由C節中所給出的數據可以看出的那樣，9-順-視黃酸在這個預測對于人類的抗牛皮癬活性的模型試驗中顯示出明顯的治療效果。
E. 9-視黃酸抑制痤瘡和皮脂的活性痤瘡的病因學是多因素的，皮脂過量分泌，角化過度，細菌移生在它的病理學中起著關鍵性的作用。
下面的兩種模型被用來量度抗痤瘡的活性1.人類皮脂細胞抗增殖試驗已經顯示出與臨床實驗對于治療人類痤瘡活性的化合物有很強的相互關系(參看Doran T.I和Shapiro S.S的論文“類視黃素對皮脂細胞增殖的影響”。發表于“類視黃素，B部分細胞分化和臨床應用”，酶學中的方法(Methods inEnzymology)第190卷，Ed.L.Packer，Academic Press，pp 334-338，1990年)。
2.Rhino老鼠的抗角質化試驗也被用來作為抗痤瘡活性的量度(參看Mezick J.A，Bhatia M.C和Capetola R.J發表的論文“類視黃素對rhino老鼠身上充滿角質的小囊大小的局部和全身的效應，一種量度類視黃素‘抗角質化’效果的模型”，發表于J.Invest.Dermatol，83，110-113，1984年，以及Mezick J.A.，Bhatia M.C.，Shea L.M.，Thorne E.G.，和Capetola R.J等的論文“類視黃素在rhino老鼠身上的抗痤瘡活性”發表于“皮膚病學中的模型”(Modelsof Dermatology)，Maibach and Lowe(eds)，Karger(Basel)volume2.p.p.59-63，1985年)。
1.皮脂細胞增殖I.方法皮脂細胞是由整容外科手術中切除的面部皮膚衍生的成年人的皮脂腺中析離的，并在一層老鼠3T3纖維細胞中培育(參看DoranT.I.，Baff.R.，Jacob P.，和Pacia E.的論文“活體外人類皮脂細胞的特性”，發表于J.Invest.Dermatol.96，341-348，1991年)。細胞被植入不含試驗化合物的介質中，然后在最初植入細胞的24-48小時后換成含有試驗化合物的新鮮介質。以后每48小時把培養基換成含有試驗化合物的新鮮介質。在試驗完成的當天，培養基用0.03％EDTA在PBS中的溶液清洗，只除掉3T3纖維細胞，然后在0.05％胰蛋白酶/0.03％EDTA溶液中培育。細胞被懸浮并劇烈混合以制備單一細胞的懸浮液，并用血液細胞計數器計數。測定的結果表示成與僅用稀釋劑處理的對照組培養基比較，為使得皮脂細胞增殖的抑制率達50％時所必需的化合物的μM量(IC50值)。
II.試驗結果9-順-視黃酸在活體外具有抑制人類皮脂細胞增殖的活性，其IC50值為0.1μM。
2.Rhino鼠小囊的減少，抗角質化試驗I.方法用從Jackson Laboratories得到的鼠齡為6至8周的雌性rhimo鼠(hrhrhrhr，每組用6只動物。通過把化合物溶于丙酮制得試驗化合物的溶液。用微量移液管把試驗化合物溶液施用到老鼠的背部。連續3周，每周5天，每天往老鼠背部施用100微升試驗化合物的溶液。通過吸入CO2將老鼠窒息致死。由它的背部切下一片皮膚留作組織學檢驗。由真皮分離出的表皮被放置在絲網狀的組織學暗盒中并在每個階段在70％，80％，90％，100％的乙醇和二甲苯中脫水2小時。皮膚試樣由二甲苯溶中取出后放在玻璃的顯微鏡載片上。用Ultimage系統作影像分析以測定小囊的平均面積，每只老鼠要分析大約150個小囊。
II.試驗結果9-順-視黃酸……在局部施用3周后對于減少萊茵鼠小囊大小方面的效果化合物 劑量小囊大小％變化(％溶液)(毫克/公斤體重)(平方微米)平均值±標準偏差9-順-視黃酸 0.001％0.042593±559-520.01％ 0.4 1425±167-740.1％ 4.0 1210±76 -78對照組賦形劑5420±42…將經過化合物處理的試樣與只用賦形劑處理的試樣比較所有的P值都＜0.001。為統計性測定還進行了學生t-統計量值的計算。
在這種抗角質化和抗痤瘡試驗中，9-順-視黃酸是有活性的。
F.用9-順-視黃酸治療患痤瘡的普通患者的臨床數據。
8位年齡在15-48歲，平均年齡27歲的患者，其中2位男性，6位女性，用9-順-視黃酸治療1至3個月。在8位患者中，2位治療一個月，2位治療兩個月，4位治療三個月。5位患者有粉刺，7位有丘疹，6位有膿皰，1位有小結。7位患者損傷只限于面部，1位患者的損傷在面部和背部。按下面的配方施以9-順-視黃酸0.01％活性化合物在乙醇-丙二醇(50/50)中的溶液。把溶液每天晚上給患者的有痤瘡損傷部位施用。
損傷(粉刺，丘疹，膿皰，小結)分別在開始時和在經過1，2和3個月的治療后進行計數。測定每位患者從開始計數時總損傷數降低的百分數，并計算出平均值。結果如下經一個月治療后總損傷數(8位患者)降低了平均48％，兩個月治療后(6位患者)降低72％，三個月治療后(4位患者)降低77％。應特別注意對皮膚的刺激作用，其中兩位患者在治療開始時觀察到輕微的紅斑和輕微紅斑和輕微的鱗屑，但這是暫時性的，雖然繼續進行治療，它們也會在一至二周內消失。患者很難注意到這些副作用。
與用全反式或13-順-視黃酸所取得的成果比較，用9-順-視黃酸治療痤瘡產生了非常好的結果。為成功進行局部治療所需的藥液濃度為0.01％，明顯地低于全反式視黃酸或13-順-視黃酸，用它們治療為得到相同的治療結果所必需的濃度0.05％。進一步，9-順-視黃酸在治療上有效的濃度下所引起的副作用也明顯地小于全反式或13-順式視黃酸。
G. 9-順-視黃酸在光照性損傷治療中的活性I.方法無毛的老鼠被用紫外線照射，然后局部用9-順-視黃酸治療使皮膚損傷得到修復。
經照射的皮膚和治療后的部位用組織學方法評價修復的程度。修復通過由表皮往下延伸至壓縮的彈性蛋白的正常皮膚的外觀來定義。修復的程度即反映在這一區域的寬度上。
這一方法被描述于Bryce G.F.，Bogdan N.J.，和Brown C.C的論文“視黃酸促進經紫外線照射的無毛老鼠皮膚損傷的修復和皺紋的消除”，發表于J.Invest.Dermatol.91，175-180，1988年。
II.試驗結果治療修復面積皺紋消除以平方毫米×103計 標度0-4ED50ED50對照組 0.21±0.12 3.1±0.39-順-視黃酸10μg 0.57±0.48 2.6±0.730μg 0.87±0.34 1.8±0.3**100μg 7.37±2.04**0.3±0.1***200μg 6.46±1.57**0*****P＜0.01***P＜0.001相對于對照組H.急性毒性急性毒性試驗是用感染了白化病的Füillnsdorf老鼠來測定的。把9-順-視黃酸懸浮于菜子油中，經腹膜內一次性劑量給藥，在此一次性劑量給藥的24小時，10天和20天以后，記錄老鼠10％，50％和90％的致死劑量(LD)。每組同10只老鼠。
試驗結果(以毫克服用的化合物/公斤體重計)24小時10天20天LD 10％＞400012001200LD 50％＞400014001400LD 90％＞400018001800下面的實例解釋了本發明提供的含有9-順-視黃酸的藥物制劑，化合物9-順-視黃酸也可以被命名為(E，Z，E，E)-3.7-二甲基-9-[2.6.6-三甲基-1-環己烯-1基]-2，4，6，8-壬四烯酸。
實例1洗劑(溶液)優選量9-順-視黃酸 0.02-0.30克丙二醇 5.00-20.00克10.00克可可酸PEG-甘油酯*0.00-20.00克10.00克dl-α-生育酚0.001-0.50克0.02克軟脂酸抗壞血酯酯0.01-0.20克 0.10克棓酸丙酯 0.001-0.02克 0.002克無水檸檬酸**0.00-0.20克0.01克異丙醇***40.00-90.00克 50.00克水 加 100.00克 100.00克(相應于毫升)*或別的表面活性劑**或別的絡合劑例如EDTA***或別的醇例如乙醇實例2優選量9-順-視黃酸0.02-0.30克丙二醇 5.00-20.00克 10.00克可可酸PEG-甘油酯*0.00-20.00克 10.00克dl-α-生育酚 0.001-0.50克 0.02克軟脂酸維生素C酯0.01-0.20克 0.10克酸丙酯 0.001-0.02克 0.002克無水檸檬酸**0.00-0.20克 0.01克異丙醇***40.00-90.00克 50.00克HPMC****0.50-5.00克 3.00克保存劑*****適量 適量水 加100.00克 100.00克*或別的表面活性劑**或別的絡合劑例如EDTA
***或別的醇例如乙醇****羥丙基甲基纖維素或別的聚合物，例如中性的Carbomer，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉鹽。
*****保存劑例如Paraben酯類(甲酯，乙酯，丙酯，丁酯)，山梨酸，苯甲酸。
實例3乳膏劑 優選量9-順-視黃酸 0.02-0.30克甘油 0.00-10.00克5.00克Na2EDTA 0.001-0.50克0.03克甘油酯*5.00-20.00克10.00克鯨蠟醇0.50-5.00克 1.00克硬脂醇0.50-5.00克 1.00克甘油-硬脂酸酯 1.00-8.00克 4.00克Cetaereth**0.50-5.00克 2.00克dl-α-生育酚 0.001-0.50克0.02克保存劑***適量適量水 加100.00克100.00克*例如辛酸/癸酸/三甘油酯，辛酸/癸酸/亞油酸三甘油酯，天然的甘油酯和例如丙二醇的二辛酸酯/二癸酸酯以及蠟，諸如硬脂酸的硬脂醇酯，油酸的油醇酯，肉豆蔻酸丙酯。
**Ceteareth 5-30或別的乳化劑諸如聚山梨酸酯20-80，脂肪酸脫水山梨醇酯，PEG的脂肪酸酯。
***保存劑諸如Paraben酯(甲基，乙基，丙基，丁基酯)，山梨酸，苯甲酸。
實例4軟明膠膠囊的填充物9-順-視黃酸 5.00-50.00毫克油*1-3份蠟混合物**1-5份填充體積 1-6量滴*天然的植物油例如豆油，花生油和人造的甘油酯**天然和人造蠟的組成物或部分水合的油脂。
實例51.含有20毫克活性物質的硬明膠膠囊組成一個膠囊包含9-順-視黃酸 20.0毫克明膠Bloom 3070.0毫克麥芽糖糊精MD05 108.0毫克dl-α-生育酚2.0毫克抗壞血酸鈉 10.0毫克微晶纖維素 48.0毫克硬脂酸鎂2.0毫克
(膠囊內容物重量) 260.0毫克把活性物質在明膠，麥芽糖糊精，dl-α-生育酚和抗壞血酸鈉的溶液中進行濕磨。
把經過濕磨的懸浮液進行噴霧干燥。
把經過噴霧干燥的粉末與微晶纖維素和硬脂酸鎂一起混合。
把每260毫克這種混合物填充到適當大小和顏色的硬明膠膠囊中。
實例62.含有20毫克活性物質的片劑片核9-順-視黃酸20.0毫克無水乳糖 130.5毫克微晶纖維素 80.0毫克dl-α-生育酚 2.0毫克抗壞血酸鈉 10.0毫克聚乙烯基吡咯烷酮K 30 5.0毫克硬脂酸鎂 2.5毫克(片核重量) 250.0毫克包膜9-羥丙基甲基纖維素 3.5毫克聚乙二醇6000 0.8毫克滑石 1.3毫克氧化鐵，黃色 0.8毫克二氧化鈦 0.8毫克(膜的重量) 7.4毫克操作程序把9-順-視黃酸與無水乳糖和微晶纖維素混合在一起。
混合物在水中與聚乙烯基吡咯烷酮，dl-α-生育酚以及抗壞血酸鈉的溶液/分散液一起造粒。
粒狀物與硬脂酸鎂混合，然后壓成250毫克重的片核。
片核用具有上面所述組成的溶液/懸浮液包膜。
實例7含有50毫克活性物質的香囊組成9-順-視黃酸 50.0毫克細粉狀乳糖 990.0毫克微晶纖維素 1400.0毫克羧甲基纖維素鈉 14.0毫克dl-α-生育酚 5.0毫克抗壞血酸鈉 20.0毫克聚乙烯基吡咯烷酮K 30 10.0毫克硬脂酸鎂 10.0毫克香味劑 1.0毫克(香囊填充物重量) 2500.0毫克操作步驟
把9-順-視黃酸與乳糖，微晶纖維素以及羧甲基纖維素鈉混合在一起。
混合物在水中與聚乙烯基吡咯烷酮，dl-α-生育酚以及抗壞血酸鈉的溶液/分散液一起造粒。
粒狀物與硬脂酸鎂以及香味劑混合在一起。
把它們填充到適當大小的香囊中。
權利要求
1. 9-順-視黃酸及其可藥用的鹽類和可藥用的可水解的酯類在制造治療與光照性皮膚損傷有關病癥的藥物中的用途。
2. 9-順-視黃酸及其可藥用的鹽類和可藥用的可水解的酯類在制造減少皮脂分泌的藥物中的用途。
3. 9-順-視黃酸及其可藥用的鹽類和可藥用的可水解的酯類在制造治療牛皮癬的藥物中的用途。
4.權利要求1-3中任一權利要求的用途，其中所說的藥物適合于口服給藥。
5.權利要求4的用途，其中所說藥物的一個劑量單位含有1至50毫克的活性成份。
6.權利要求1-3中任一權利要求的用途，其中所說的藥物適合于局部給藥。
7.權利要求6的用途，其中所說的藥物含有0.01％至0.15％重量百分數的活性成份。
8.按照權利要求6的用途，其中所說的藥物含有0.02％至0.05％重量百分數的活性成份。
全文摘要
9－順—視黃酸,它的鹽和酯類可用來治療惡性腫瘤和癌前期的損傷,光照性皮膚損傷,由于皮脂增生引起的疾病以及牛皮癬。
文檔編號A61P35/00GK1256916SQ99126469
公開日2000年6月21日 申請日期1999年12月15日 優先權日1992年1月22日
發明者W·波拉格, J·F·格里波, A·萊文 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司