專利名稱：恢復和促進皮膚屏障功能的組合物及其評價方法
技術領域：
本發明涉及恢復和促進皮膚屏障功能的組合物及其評價方法，尤其關于其有效成分的改進。
近年來，由于芳香治療(aromatherapy)易于使用以及相對較少的副作用，其作為一種治療方法已經引起了人們的興趣。具體地說，已經注意到它作為一種有效的方法，用于治療未查明的臨床綜合癥、自主神經機能失調和其它由于緊張引起的身心失調病癥。已知有許多香料可作為減輕各種綜合癥的芳香治療試劑。其中有一些香料被認為能夠有效地增進皮膚功能。
然而，在很大程度上，由于評價試驗的原因，它們的作用是不清楚的。已知只有很少的香料具有明顯的特定藥理學作用。特別地，它們還沒有作為用于恢復或促進皮膚屏障功能非常有效的試劑或藥物。
而且，關于香料生理學作用的研究在較經常進行的同時，對于通過吸入香料的氣味增進皮膚功能的研究卻幾乎沒有進行，同時也沒有評價其有效性的客觀方法。因此，很難發現香料可作為用于恢復或促進皮膚屏障功能的有效試劑。
本發明的目的是解決上面提到的現有技術中存在的問題，提供一種恢復和促進皮膚屏障功能的含香料組合物和一種評價其有效性的簡單方法。
本發明提供了一種恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量比的至少一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，該試劑選自醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)一種可用于化妝品或藥物的載體。
本發明還提供了一種恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量比的至少一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，選自纈草香料、紫羅蘭香料和薔薇香料；和(ii)一種可用于化妝品或藥物的載體。
本發明還提供一種用來評價測試香料恢復皮膚屏障功能效果的方法，包括在沒有香料的系統中，在試驗動物上施加預定量的緊張，以降低動物皮膚的屏障功能，測定皮膚屏障功能降低后的恢復程度，得到的數據作為評價的指標，在應用香料的系統中，測定皮膚屏障功能恢復程度的數據，根據這兩個系統中皮膚屏障功能恢復程度數據的差別評價其效果。
從下面對附圖的描述中可以更好的理解本發明，其中
圖1表示施加由陌生環境引起的緊張對皮膚屏障功能恢復的作用。
圖2表示香料(單個化合物)對降低的皮膚屏障功能的恢復結果和對恢復能力的促進結果。
圖3表示香料(組合物)對降低的皮膚屏障功能的恢復結果和對恢復能力的促進結果。
圖4表示人工芳香紫羅蘭香料的氣相色譜圖。
圖5表示當不施加緊張時，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑的效果。
圖6表示不施加緊張時，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑對緊張程度的作用。
圖7表示當施加緊張時，本發明的皮膚功能恢復和促進試劑的效果。
圖8表示當施加緊張時，本發明的皮膚功能恢復和促進試劑對緊張程度的作用。
為了達到上面目的，本發明的發明人進行了認真的研究，結果發現當對試驗動物施加一定的緊張時，導致皮膚屏障功能的降低，不吸入香料的對照組動物和吸入香料的實驗組動物相比，皮膚屏障功能恢復的能力有顯著性差異。同時發現作為恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，有一些特別的香料是非常好的。在此所用的術語“動物”是指除人之外的動物，典型地包括例如，小鼠、大鼠、荷蘭豬等。
也就是說，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物重量至少0.01％重量比、優選0.5-100％重量比的醋酸萜品酯。
或者，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優選0.5-100％重量比的苯乙醇。
或者，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優選0.5-100％重量比的二甲氧基甲基苯。
或者，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優選0.5-100％重量比的纈草香料。
或者，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優選0.5-100％重量比的芳香紫羅蘭香料。
或者，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的組合物含有基于組合物總重量至少0.01％重量比、優選2.5-100％重量比的薔薇香料。
而且，根據本發明，用于評價香料恢復和促進皮膚屏障功能效果的方法所含的步驟有在沒有測試香料的系統中，對試驗動物施加預定量的緊張，然后引起皮膚屏障功能的降低，再應用該皮膚屏障功能恢復程度的數據作為指標，然后評價其與應用測試香料的系統中皮膚屏障功能恢復程度的數據的差別。
并且，根據本發明，用于評價香料恢復和促進皮膚屏障功能效果的方法優選地包括步驟(A)對小鼠、大鼠或荷蘭豬施加緊張，施加緊張的大小應該能是皮膚屏障功能恢復的延遲程度能顯著識別，因此對于受到緊張的動物，引起定量的皮膚屏障功能的降低；步驟(B)在皮膚屏障功能降低的部位，以固定的時間測定透過表皮的水損失(TEWL)；步驟(C)比較不用測試香料的動物(對照)和應用測試香料的動物在步驟(B)中得到的數據，評價其差別作為測試香料恢復皮膚屏障功能的效果。
另外，根據本發明，在香料恢復皮膚屏障功能效果的評價方法中，優選的方法是通過吸入法應用測試香料。
另外，根據本發明，恢復和促進皮膚屏障功能的試劑含有經上述方法評價認為有效的香料作為活性成分。
本發明的實施方案現在將進行詳細說明。本發明提供一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑及其評價方法。因此，說明將分為恢復和促進皮膚屏障功能的試劑和它的評價方法兩部分。
恢復和促進皮膚屏障功能的試劑本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑含有一種對皮膚屏障功能恢復和促進有效的特別香料，因此通過吸入能刺激味覺感受器的有效量或通過呼吸道吸入體內時，該試劑可以減輕由于皮膚屏障功能引起的不良皮膚狀況。作為特定香料，醋酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯的單個化合物可作為例子。它們可以單獨應用或者一起應用，還可以與其它香料聯合應用作為多成分香料組合物。
另外，作為多成分香料組合物，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇香料可作為例子。在本發明中，以天然組合物的形式或者基于分析結果模擬的人工組合物形式，這些物質具有恢復或促進皮膚屏障功能的作用。
對于本發明的纈草香料，有可能應用通過已知方法如水蒸氣蒸餾或溶劑提取從植物根或莖中得到的精油，其中的植物為纈草或與它密切相關的植物寬葉纈草(Valeriana officinalis L.Var latifolia Miq.)(V.Japonilca Makino)，蜘蛛七(valeriana fauriei foram yezoensis)和蜘蛛香(Valeriana wallichii D.C.)等。而且，從纈草和與它密切相關的植物中提取的精油可從市場上買到，供應形式為纈草油和kesso root oil(日本纈草油)。這些物質均可以應用無論它們是產自日本、中國、歐洲或其它地方。
另外，日本未審查專利出版物(公開)號1-254628公開了從天然組合物中真空蒸餾得到的纈草油組份，該組份也可用作本發明的纈草香料另外，通過除去帶來不良氣味的脂肪酸和其它酸性組份得到改性的纈草油(下面將要說明)，它們也可用作本發明的纈草香料。
可以通過堿處理從纈草油中除去酸性組份包括脂肪酸得到改性的纈草油。通常地，天然纈草油含有至少一種類型往往為多種類型的脂肪酸。具體地說，它包括乙酸和異戊酸。
改性纈草油的生產方法首先是把含有脂肪酸的纈草油溶于有機溶劑優選乙醚中，然后加入堿的水溶液，再進行提取操作以提取和回收含有脂肪酸的酸性成分。對于堿的水溶液，有可能應用平常提取操作中通常所用的堿水溶液，可以是有機堿或無機堿的水溶液，但優選碳酸氫鈉水溶液或氫氧化鈉水溶液。具體地說，優選用碳酸氫鈉水溶液進行提取，然后用氫氧化鈉水溶液進行再提取。這樣得到的有機溶劑層用無水硫酸鎂等物質干燥，然后真空蒸餾除去有機溶劑得到不含脂肪酸的改性纈草油。
根據本發明，改性纈草油對皮膚屏障功能的恢復和促進作用并不因堿處理而受到損害，而且其作用比堿處理前的纈草油還強。因此，根據本方法，有可能更進一步地增強纈草油對皮膚屏障功能的恢復和促進作用。另外，根據該生產方法，可能容易地并且廉價地生產這樣一種改性纈草油，還可能提供一種非常有用能恢復和促進皮膚屏障功能的試劑。
另外，對于本發明中的芳香紫羅蘭香料，可能應用通過已知方法例如水蒸氣蒸餾或溶劑提取得到的精油，原料來源為香堇菜(Viola odorata L.)的花或葉或者該植物花或葉的頂端收集物。并且，可以應用芳香紫羅蘭，不管其產自法國、日本或其它地方。另外，本發明中，可能應用人工模擬的芳香紫羅蘭香料，該香料基于的成分是對天然來源的芳香紫羅蘭精油或其新鮮花或葉頂端收集物進行分析得到的成分。
另外，對于本發明的薔薇香料，可能應用已知的精油，也就是說，本發明標準的商品級。另外，可能應用通過蒸餾、提取或其它方法從天然薔薇科植物得到的精油。另外，有可能應用人工模擬的薔薇香料，該組合物基于的成分是對天然薔薇植物花中得到的精油進行分析得到的成分。
包括上面特別香料的恢復和促進皮膚屏障功能的試劑可以通過加入載體、稀釋劑或其它常用于香料產品的活性成分制成一種產品。它可以制成香料產品例如香水、科隆香水、房間清新劑和化妝品如水劑、膏霜、肥皂、牙膏、氣霧劑產品或任意一種其它通用形式和其它通常藥物如香料。另外，它還可用于吸入劑。在恢復和促進皮膚屏障功能的試劑中，特別香料的含量應該是通過吸入能對恢復和促進皮膚屏障功能起足夠作用的量。該含量可以變化，依據應用形式和藥物(香料)而定。通常地，必須含有至少0.01％重量比。如果低于該含量，有時則達不到對皮膚屏障功能的恢復和促進作用。
根據本發明，基于同樣的理由，含有這樣香料的組合物適合治療皮膚屏障功能的降低和治療皮膚病等。另外，應用本發明中促進和恢復皮膚屏障功能的試劑不存在副作用問題。
根據本發明，該恢復和促進皮膚屏障功能的組合物可以含有任意能用于化妝品或藥物的載體(例如，醇類如苯甲醇、二甲基亞砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF))和任選的常規添加劑如濕潤劑、表面活性劑、紫外吸光劑、抗氧化劑、防腐劑、抗真菌劑、著色顏料和體質顏料等。
通過下列方法可以評價本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑的效果。
評價方法本發明中能應用的試驗動物是那些除人之外在各種試驗中通常所用的試驗動物。符合本發明目的的所有動物均可應用，但通常應用的動物有大鼠、荷蘭豬和兔等。
施加至這些動物的緊張是指本領域有效方式的緊張，包括約束引起的緊張、擁擠引起的緊張和新環境引起的緊張。施加約束緊張的方法可基于例如Pare，W.P.，Glavin，G.B.，(1986)，Neurosci.Biobehav-Rev.10，p339-370記載的方法。總結該用于大鼠的方法，可以通過把各個動物完全包裹在柔線網中和使它們在定量的一段時間維持固定不動來施加緊張，同時注意不能對皮膚造成損害。
另一方面，對于擁擠引起的緊張，如果所用動物為小鼠，一個籠(17×28cm2)中通常飼養5只小鼠。可以通過增加同一個籠中飼養動物的數目使動物緊張，具體地說，每個籠中飼養10只動物。
另外，對于新環境引起的緊張，可以通過把動物從其平常的環境轉移至陌生的環境使動物緊張，例如對小鼠來說，把一個籠(17×28cm2)中與其它四只小鼠一起飼養的小鼠轉移到每籠一只小鼠的環境中。
施加緊張的持續時間應該足以導致動物的緊張狀態。然而，如果施加的緊張不足，應該注意在有些時候是不能與對照組動物的皮膚屏障的恢復功能明顯區別開。
以這種方式承受緊張的動物是在達到緊張狀態(即能看出緊張作用的狀態)后皮膚屏障功能降低的手段。這種手段可以是任何能有效降低皮膚屏障功能的方法。這些手段的形式并不重要。為了引起這種皮膚屏障功能的降低，方便的做法是通過膠帶條除去表皮的角膜層或者用表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉(SDS))或有機溶劑如丙酮除去角膜層。至于處理時間，如果所用動物為大鼠，當應用緊張結束后約12小時的時間是優選的，這樣能確保試驗動物達到足夠的緊張狀態。
由上面引起皮膚屏障功能降低所在部位的皮膚屏障功能恢復程度經持續檢測或經確定量的時間間隔后檢測。降低的部位可以是試驗動物的任何部位，只要能夠進行皮膚屏障功能程度的檢測即可，但通常優選耳廓即耳朵突出的外部。
檢測方法可以是測定經表皮的水分損失，或經表皮的不顯汗(此后稱“TEWL”)——通常認為是皮膚屏障功能的一個指標，但還可以應用能作為指標的其它因素。可以通過市場上可買到的設備以通常的應用來檢測TEWL。可以提到的典型設備有蒸發計(Evaporimeter)、Tevameter和Micomoisture檢測器等。
根據本發明，在沒有受到緊張的試驗動物中重復上述操作，這樣類似地得到的TEWL值和上面受到緊張的試驗動物中得到的TEWL值進行比較。注意，例如當用大鼠作試驗動物時，受到緊張的試驗動物和沒有受到緊張的試驗動物相比，在皮膚屏障功能降低以前，TEWL和表皮溫度沒有觀測到顯著差異。另外，試驗動物的TEWL值不能觀測到性別差異。
也就是說，試驗動物的TEWL值與緊張沒有相關。特別地，根據本發明，受到緊張的試驗動物與對照組動物相比，TEWL值的恢復程度明顯延遲。因此，根據本發明，基于恢復程度延遲的現象，有可能評價皮膚屏障功能的恢復能力。
另外，根據本發明，有可能應用香料并結合上述評價方法，通過評價香料對皮膚屏障功能的恢復程度可以評價香料是如何有助于增強和恢復皮膚屏障功能。把試驗香料用于小鼠的方法可以吸入足夠的量從而能夠在足夠時間內起作用，但特別地，如對于由陌生環境引起的緊張來說，香料滴加到佩特里盤上的濾紙上，然后用線網覆蓋該佩特里盤，將其置于鼠籠中。在轉移至陌生環境前或轉移后，使該鼠吸入香料24小時。注意，如果必要，優選加入更多的香料。根據本評價方法，有可能評價某種特定的香料是否對緊張引起的皮膚屏障功能有恢復作用或者是否能增強皮膚屏障功能，還可能評價可有用地改善皮膚狀況的香料。
實施例通過下列實施例將進一步闡明本發明，但本發明決不限于下列實施例。下面先說明本發明恢復和促進皮膚屏障功能的試劑的評價方法。
實施例1施加由新環境引起的緊張5只裸鼠在一只籠(17×28cm2)中飼養10天。在第9天早晨，把浸滲有香料的濾紙置于該籠中，并用不銹鋼網覆蓋。次日早晨，每只小鼠被分開轉移至同樣大小的新籠子中。以同樣方式在新籠子中預先放入相同的香料。
實施例2皮膚屏障的降低和恢復速率轉移至新籠子一天后，應用蒸發計EP-1(ServoMed Co.)測定麻醉后小鼠側腹(或耳廓)的TEWL值(即此時測定的值定義為“A”)。然后，通過膠條剝脫降低皮膚屏障功能。即把粘性膠帶條粘附于動物的側腹(或耳廓)(當粘附于耳朵時面積為1×1cm2，粘至側腹(或軀干)時面積為2×3cm2)。在不損害表皮的情況下小心地剝脫膠帶條(即膠帶剝脫)引起皮膚屏障功能的降低。此時再次測量TEWL值(此時測出的值定義為“B”)。3天后，測量TEWL值，將該值定義為“C”。然后，用下式計算屏障恢復的速率屏障恢復速率(％)＝[(B-C)/(B-A)]×100A剛剛在皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)以前的TEWL值B剛剛在皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)后的TEWL值C皮膚屏障功能降低的處理(膠帶剝脫)一段時間后的TEWL值然后，根據上面實施例1和2的方法，檢測陌生環境引起的緊張對皮膚屏障功能恢復程度的作用。對每籠繼續飼養1只的動物(即對照組動物)、每籠繼續飼養5只的動物(對照組)和從每籠飼養5只轉移到每籠飼養1只(受到緊張組)的動物進行處理以降低它們的皮膚屏障功能。圖1表示處理3小時后的轉換的屏障恢復速率。注意，該試驗是在沒有香料的系統中進行的。
從圖1可以看出，受到緊張動物組的皮膚屏障功能恢復程度明顯比對照組動物的恢復程度明顯慢。
實施例3香料對皮膚屏障功能恢復程度的作用在有測試香料的存在下，把實施例1中的緊張施加至裸鼠后，通過實施例2中皮膚屏障恢復速率來評價香料對皮膚屏障功能恢復和促進所起的作用。
然后，按照上面所述方法測定膠帶剝脫3小時后屏障恢復的速率以檢查其效果。
注意，在對照組試驗中，應用不含香料的系統，沒有受到緊張繼續每籠飼養5只的正常小鼠和雖然受到緊張但沒有吸入香料的未處理小鼠以相同的方式測定屏障恢復速率。
然后，下面再說明經上述評價方法確定有效的的香料作為活性成分的恢復和促進皮膚屏障功能的試劑。
單一化合物(單一化學成分)通過實施例3的評價方法得到的單一化合物的皮膚屏障恢復速率如圖2所示。其結果如表1所示。注意，在對照試驗中，對茉莉香料的主要成分葉綠醇進行相同的步驟。通過在佩特里盤中的濾紙上包覆200μl的各單一化合物使小鼠吸入的香料量基本一致。
表1香料(單一化合物) 皮膚屏障功能的恢復和促進作用乙酸萜品酯 有苯乙醇 有二甲氧基甲基苯 有葉綠醇 無圖2明顯表明，與未處理的小鼠相比，用乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯進行處理對皮膚屏障功能的恢復和促進有作用。另外，用茉莉香料主要成分即葉綠醇進行處理對皮膚屏障功能的恢復沒有作用。
因此，現在認識到，乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯作為恢復和促進皮膚屏障功能的試劑是有效的。
香料組合物(多種香料化合物)然后，圖3表示通過實施例3的評價方法得到基于多成分的組合物的皮膚屏障恢復速率。結果如表2所示。注意，通過在佩特里盤中的濾紙上包覆200μl的各個單種物質使小鼠吸入的香料組合物基本一致。在對照試驗中，應用以葉綠醇作為主要成分(14-15％)的茉莉，進行相同的操作。
表2香料(組合物) 皮膚屏障恢復和促進作用天然纈草 有改性纈草 有天然芳香紫羅蘭 有人工芳香紫羅蘭 有天然薔薇 有人工薔薇 有天然茉莉 無上表中，對于纈草香料，應用天然精油和上面說明的改性纈草另外，所用的天然芳香紫羅蘭香料是來源于天然芳香紫羅蘭花中的精油。所用的人工芳香紫羅蘭香料是在對天然芳香紫羅蘭精油進行氣質聯用(GC-MS)分析的基礎上，模擬天然芳香紫羅蘭精油，組合其所含有的單種化合物得到的組合物。圖4是該模擬香料組合物的氣相色譜圖。表3顯示得到的組合物結果。注意，GC-MS的測定條件如下GC-MS分析條件型號G1800A GCD(Hewlett-Packard有限公司制造)柱HP-INNOWAX(60m×0.25mm)(Hewlett-Packard有限公司制造)柱溫70→245℃(4℃/分鐘的升溫速率)載氣氦(1.0毫升/分鐘)表3化合物名稱 GC含量(％)檸檬烯 0.16反-2-己烯醛 0.18乙酸1-己烷基酯 0.23乙酸順-3-己烯基酯 3.09乙酸反-2-己烯基酯 0.111-己醇 0.28對異丙基苯甲烷 0.16順-3-己烯醇 0.781-辛烯-3-醇 4.362-乙基己醇0.34里那醇 0.21順，反-2，6-nonadyl 0.211，4-二甲氧基苯23.01橙花基丙酮0.12二氫-β-紫羅蘭酮 0.87α-紫羅蘭酮 13.292-苯乙醇 0.67β-紫羅蘭酮 22.23順-茉莉酮 3.73茉莉酮酸甲酯2.09苯甲酸芐酯4.56總量 80.70
另外，所用的天然薔薇香料是天然的、一般可從市場上買到的薔薇精油。所用的人工薔薇香料是含有二甲氧基甲基苯和苯乙醇的香料組合物，其中的二甲基甲苯和苯乙醇被認為對皮膚屏障功能有恢復和促進作用。人工薔薇香料包括下列組合物。注意，其中的含量是指重量份數。
表4人工薔薇香料 重量份數二甲氧基甲苯 5苯乙醇200順-3-己烯醇 1乙酸順-3-己烯基酯 2苯甲醇 15香茅醇100橙花醇 25香葉醇600醋酸香葉酯 20醋酸香茅酯 4檸檬醛 3丁子香酚5法呢醇 40總量1020從圖3中明顯看出，與沒有吸入香料的未處理小鼠相比，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇的香料組合物對皮膚屏障功能的恢復速率較高。另外，對于芳香紫羅蘭和薔薇香料的結果，不管對皮膚屏障功能恢復起作用的香料組合物是天然的或人工的，均對皮膚屏障功能有恢復作用。另外，對于纈草，改性纈草的皮膚屏障功能恢復速率可以達到與正常小鼠同樣高，并發現其為非常好的香料。注意，茉莉雖然在芳香治療中對皮膚疾病的治療有效，但沒有顯示皮膚屏障功能的恢復作用。
因此，已經知道，纈草、芳香紫羅蘭和薔薇的香料組合物作為皮膚屏障功能的恢復和促進試劑是非常好的。另外，已經知道，不管香料是天然的還是人工的，正如芳香紫羅蘭和薔薇香料所示，都是有效的。另一方面，對于茉莉，已經知道，雖然其在芳香治療中顯示對皮膚病的治療有效，但并沒有顯示對皮膚屏障功能的恢復有作用。
其后，本發明的發明人還研究了這些恢復和促進度膚屏障功能的試劑對人的作用。分三種情況進行了該研究不加入其它香料的正常狀態下、加入另外一種香料的正常狀態下和加入另外一種香料并且在皮膚屏障恢復速率降低的情況下。
沒有加入其它香料的正常狀態(不施加緊張)的情況測試對象為6例男性(非吸煙者)。測定時，將測試對象分成“香料組”和“無香料組”，每組3人。當第一次測定所有樣品后，將“香料組”和“無香料組”測試對象進行交換，再進行同樣的測定。香料的應用方法是把含有80μl下列樣品1的溶液的棉條粘在鼻下方。對于“無皮膚屏障功能恢復和促進試劑”的情況，僅僅粘上棉條即可。
樣品1二甲氧基甲基苯(DMMB)2.0重量份乙醇(二甲氧基馬錢子堿改性的95％乙醇)98.0重量份總量100.0測定步驟“香料”組的測定步驟從香料的應用開始，在22℃溫度和50％濕度的環境下1小時后，通過膠帶剝脫破壞皮膚屏障，根據實施例2在1.5小時后和3小時后測定皮膚屏障恢復速率。持續應用香料并保持上述環境直至最后。
“無香料組”的測定步驟是按照測定“香料組”的測定步驟在不應用香料的情況下測定皮膚屏障恢復速率。
結果如下表所示。
表5組名 0小時后1.5小時后 3小時后平均值 標準偏差平均值 標準偏差(n＝6)無香料組 0％ 50.8％ 8.00％ 61.3％ 11.09％香料組 0％ 63.1％ 8.63％ 74.5％ 8.78％
從上表結果可以看出，皮膚屏障破壞1.5小時和3小時后，DMMB香料組的皮膚屏障恢復速率均較高。因此，很明顯DMMB對皮膚屏障功能有恢復和促進作用。
加入其它香料的正常狀況(不施加緊張)測試對象為10例健康女性，年齡20-22歲(非吸煙者，月經周期正常)，測試時，把她們分成“香料組”和“非香料組”兩組，每組5人。在第一次測定整個樣品后，“香料組”和“非香料組”測試對象相互交換，然后進行相同的測定。香料的使用方法是把含有80μl下列樣品2的溶液的棉條粘在鼻下方。對于不用香料的情況，僅僅粘上棉條即可。
樣品2香茅醇 5.0重量份里那醇 4.0乙酸里那酯 4.0二甲氧苯甲苯2.0乙酸香葉酯 1.0茉莉酮酸二羥基甲基酯35.0花香劑香料 49.0總計100.0測定步驟“香料”組的測定步驟從香料的應用開始，在22℃溫度和50％濕度的環境下1小時后，通過膠帶剝脫破壞皮膚屏障，根據實施例2在1.5小時后和3小時后測定皮膚屏障恢復速率。持續應用香料并保持上述環境直至最后。
“無香料組”的測定步驟是按照測定“香料組”的測定步驟在不應用香料的情況下測定皮膚屏障恢復速率。
結果如表6和圖5所示。
表6組名 0小時后1.5小時后 3小時后平均值 標準偏差平均值 標準偏差(n＝10)無香料組0％ 58.1％ 14.6％ 67.4％ 14.7％香料組 0％ 63.1％ 10.9％ 78.3％ 11.2％從表6和圖5可以看出，與“非香料組”相比，提供含有DMMB的香料組合物的“香料組”顯示增加的皮膚屏障功能恢復速率。
然后，通過自我感覺的緊張程度(一般活動對照表(General activitycheck list))研究含有DMMB的香料組合物對緊張程度的作用。
結果如圖6所示。從圖6可以看出，與“非香料組”相比，按照分數，“香料組”的緊張一點也不減少。因此，恢復和促進皮膚屏障功能的試劑對自我感覺的緊張沒有影響。
皮膚屏障功能降低的情況(施加緊張)測試對象為8例20-22歲的健康女性(非吸煙者，月經周期正常)。測試時分成(A)對照組、(B)緊張組和(C)香料+緊張組，如表7所示。當整個樣品測定一次后，各組測試對象相互交換，最后測試對象進行所有(A)、(B)和(C)的測定。
表7組名 緊張 香料(A)對照組 無無(B)緊張組 有無(C)香料+緊張組 有有(樣品22％的DMMB)與上面“加入其它香料的正常狀況”相同的方式應用香料。注意所有測試在22℃溫度和50％濕度下進行。
測定步驟(A)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”。
(B)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”，但從膠帶剝脫引起皮膚屏障破壞1.5小時后的皮膚屏障功能恢復速率的測定之前1小時開始，進行1小時Stroop試驗以施加緊張，然后測定皮膚屏障的恢復速率。
(C)組的測定步驟是基于上述“加入其它香料的正常狀況”的“無香料組”，但從膠帶剝脫引起皮膚屏障破壞1.5小時后的皮膚屏障功能恢復速率的測定之前1小時開始，進行1小時Stroop試驗以施加緊張，然后測定皮膚屏障的恢復速率。
結果如表8和圖7所示。
表8組名 0小時后 1.5小時后 3小時后平均值 標準偏差 平均值 標準偏差(n＝8)(n＝8)(A)對照組 0％ 73.6％ 8.89％ 81.6％8.80％(B)緊張組 0％ 60.2％ 17.05％ 70.9％11.55％(C)香料+緊張組 0％ 678.2％ 15.95％ 88.5％14.28％從表8和圖7可以看出，與“(B)緊張組”相比，受到緊張并提供含有DMMB的香料組合物“(C)香料+緊張組”顯示增加的皮膚屏障恢復速率。另外，即使與不受到緊張的“(A)對照組”相比，“(C)香料+緊張組”也顯示較高的皮膚屏障恢復速率。因此，可以理解，本發明中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑是非常好的。
然后，通過自我感覺緊張(subjective stress)(一般活動對照表)的程度研究含有DMMB的香料組合物對緊張程度的作用。
結果如圖8所示，從圖8可以看出，與“(B)緊張組”相比，按照分數，“(C)香料+緊張組”沒有顯示緊張程度的降低。因此，可以看出，恢復和促進皮膚屏障功能的試劑對自我感覺的緊張基本上不起作用。
如上所述，本發明的恢復和促進皮膚屏障功能的試劑對皮膚屏障功能的恢復和促進有非常好的作用，這是因為它含有特別香料的結果。
另外，根據本發明的評價方法，提供一種客觀的和簡單的評價方法用于評價香料對皮膚屏障的作用。該評價方法可以用于改善增進皮膚狀況的香料。
另外，對于經本評價方法驗證有效的香料，可以作為有效的恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，并能治療由皮膚屏障功能降低引起的皮膚疾病。
權利要求
1.一種恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量的、至少一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，它選自乙酸萜品酯、苯乙醇和二甲氧基甲基苯；和(ii)可用于化妝品上或藥品的載體。
2.如權利要求1所述的恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，其中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑的含量為0.5-100％重量比。
3.一種恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，包括(i)基于組合物總重量至少0.01％重量的、至少一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，它選自纈草香料、紫羅蘭香料和薔薇香料；和(ii)可用于化妝品或藥品的載體。
4.如權利要求3所述的恢復和促進皮膚屏障功能的組合物，其中恢復和促進皮膚屏障功能的試劑的含量為0.5-100％重量比。
5.一種評價測試香料恢復皮膚屏障功能的效果的方法，包括在一個不應用香料的系統中，對試驗動物施加預定量的緊張，以降低該動物的皮膚屏障功能，測定皮膚屏障功能降低后的恢復程度，得到的數據作為評價的指標，和在一個應用香料的系統中，測定皮膚屏障功能的恢復程度的數據，根據這兩個系統中皮膚屏障功能恢復程度數據的差別評價效果。
6.如權利要求5所述的方法，其中進行評價效果的步驟是(A)對小鼠、大鼠或荷蘭豬施加緊張，緊張的程度應該可以明顯識別皮膚屏障功能恢復的延遲，從而使受到緊張的動物產生預定量的皮膚屏障功能降低；(B)以恒定的時間在屏障功能降低的部位測定經表皮的水分損失(TEWL)；(C)比較不用測試香料的對照動物組和應用測試香料的動物組在步驟(B)中得到的數據；和(D)評價其差別，作為測試香料對皮扶屏障功能恢復能力的效果。
7.如權利要求6所述的方法，其中香料的應用方法是吸入法。
8.一種恢復和促進皮膚屏障功能的試劑，含有權利要求5所述方法評價的香料作為活性成分。
全文摘要
皮膚屏障恢復和促進的組合物,含有有效的香料作為活性成分,其中香料的效果評價方法是:在一個不應用香料的系統中,對試驗動物施加預定量的緊張,從而使該動物的皮膚屏障功能降低,應用皮膚屏障功能恢復程度的數據作為指標;再在一個應用香料的系統中,測定皮膚屏障功能恢復的數據,通過上述兩個數據的差別評價該香料的效果。
文檔編號A61K8/33GK1255367SQ9912241
公開日2000年6月7日 申請日期1999年9月24日 優先權日1998年9月25日
發明者傅田光洋, 土屋徹, 谷田正弘, 莊司健 申請人:株式會社資生堂