專利名稱：取代的2－(2,6－二氧－3－氟哌啶－3－基)－異二氫吲哚及其降低腫瘤壞死因子α水平 ...的制作方法
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發(fā)明的背景腫瘤壞死因子α(TNF α)是主要由單核巨噬細(xì)胞對各種免疫刺激劑的應(yīng)答而釋放的細(xì)胞因子。它是一種炎癥級聯(lián)反應(yīng)中關(guān)鍵的原炎性細(xì)胞因子，導(dǎo)致產(chǎn)生和／或釋放其他細(xì)胞因子和物質(zhì)。將其施加于動物和人時，可引起炎癥、發(fā)熱、心血管影響、出血、凝血及類似于急性感染和休克狀態(tài)所見的急性反應(yīng)。因此，在很多疾病狀態(tài)均可伴有TNF α產(chǎn)生過量或失控。這些疾病包括內(nèi)毒素血癥和／或中毒性休克綜合征{Tracey等，Nature 330，662-664(1987)和Hinshaw等，Circ．Shock30,279-292(1990)}；惡病質(zhì){Dezube等，Lancet，335(8690)，662(1990)}和成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)，其中從ARDS患者肺部抽吸物中檢出TNF α的濃度超出12，000 pg／mL{Millar等，Lancet 2(8665)，712-714(1989)}。重組TNTα全身輸注也導(dǎo)致ARDS中所見的改變{Ferrai-Baliviera等，Arch．Surg．124(12)，1400-1405(1989)}。
TNF α似乎涉及骨吸收疾病，包括關(guān)節(jié)炎。當(dāng)發(fā)作時，白細(xì)胞會產(chǎn)生骨吸收，資料提示TNF α與其發(fā)作有關(guān){Bertolini等，Nature 319，516-518(1986)和Johnson等，Endocrinology 124(3)，1424-1427(1989)．}在體內(nèi)、外試驗中還證明，TNF α通過刺激破骨細(xì)胞形成和激活，同時抑制成骨細(xì)胞的功能，從而刺激骨吸收和抑制骨生成。盡管TNF α可能涉及很多骨吸收性疾病，包括關(guān)節(jié)炎，但最令人非相信不可的與疾病的聯(lián)系是腫瘤或宿主組織TNF α的產(chǎn)生與伴有高鈣血癥的惡性程度之間的關(guān)聯(lián){Calci．Tissue Int．(US)46(Suppl．)，S3-10(1990)}。急性同種異型骨髓移植后，在移植物對宿主反應(yīng)中，主要并發(fā)癥伴有血清TNF α水平的提高{Holler等，Blood，75(4)，1011-1016(1990)}。
腦瘧疾是伴有TNF α高血濃度的致死性超急性神經(jīng)綜合征，是瘧疾患者中出現(xiàn)的最嚴(yán)重的并發(fā)癥。血清TNF α水平與瘧疾急性發(fā)作患者疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后直接相關(guān){Grau等N．Engl．J．Med．320(24)，1586-1591(1989)}。
已知巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)的血管生成由TNF α介導(dǎo)。Leibovich等{Nature，329，630-632(1987)}在大鼠角膜和發(fā)育中的小雞絨毛尿囊膜上證明，很低劑量的TNFα即引起體內(nèi)毛細(xì)血管的形成，提示TNF α在炎癥、傷口修復(fù)和腫瘤生長上是誘導(dǎo)血管生成的因素。TNF α的產(chǎn)生還與癌性疾病、特別是誘發(fā)腫瘤相關(guān)聯(lián){Ching等，Brit．J．Cancer，(1955)72，339-343和Koch，Progress in Medicinal Chemistry，22，166-242(1985)}。
TNF α還在慢性肺部炎癥性疾病方面起作用。硅石顆粒的沉積導(dǎo)致矽肺，一種纖維變性反應(yīng)引起的進(jìn)行性呼吸衰竭疾病?？筎NF α抗體完全阻斷硅石引起的小鼠肺纖維變性{Pignet等，Nature，344∶245-247(1990)}。在硅石和石棉沉著病導(dǎo)致纖維變性的動物模型上證明，血清和分離出的巨噬細(xì)胞中有高水平TNF α的產(chǎn)生{Bissonnette等，Inflammation 13(3)，329-339(1989)}。還有人發(fā)現(xiàn)，從肺類肉瘤病患者取出的肺泡巨噬細(xì)胞與從正常供體而來的巨噬細(xì)胞相比，該疾病自發(fā)性釋放大量TNF α{Baughman等，J．Lab．Clin．Med．115(1)，36-42(1990)}。
TNF α還與再灌注(稱作再灌注損傷)后的炎癥反應(yīng)有關(guān)，是缺血流后組織損傷的主要原因{Vedder等，PNAS 87，2643-2646(1990)}。TNF α還能改變內(nèi)皮細(xì)胞的性質(zhì)，具有各種促凝血活性，如產(chǎn)生組織因子促凝血活性提高和抗凝血蛋白C途徑的抑制，以及下調(diào)凝血調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá){Sherry等，J．Cell Biol．107，1269-1277(1988)}。TNF α具有促炎癥活性，該活性與TNF α的早期產(chǎn)生(在炎癥初期)使其更象是幾種重要疾病(包括但不限于心肌梗塞、卒中和循環(huán)休克)中組織損傷的介質(zhì)。特別重要的可以是TNF α誘導(dǎo)的粘合分子如細(xì)胞間粘合分子(ICAM)或內(nèi)皮白細(xì)胞粘合分子(ELAM)在內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá){Munro等，Am．J．Path．135(1)，121-132(1989)}。
用抗TNF α單克隆抗體封閉TNF α已被證明對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有益{Elliot等，Int．J．Pharmac．1995 17(2)，141-145}。高水平的TNFα與Crohn′s病相關(guān){vonDullemen等，Gastroenterology，1995 109(1)，129-135}，而且用TNFα抗體治療已獲得臨床效果。
此外，現(xiàn)已知道，TNF α是逆轉(zhuǎn)錄病毒復(fù)制(包括HIV-1激活)的強力激活劑{Duh等，Proc．Nat．Acad．Sci．86，5974-5978(1989)；Poll等，Proc．Nat．Acad．Sci．87，782-785(1990)；Monto等，Blood 79，2670(1990)；Clouse等，J．Immunol．142，431-438(1989)；Poll等，AIDS Res．Hum．Retrovims，191-197(1992)}。AIDS由人免疫缺陷病毒(HIV)感染T淋巴細(xì)胞而引起。至少有三種類型或三株HIV已被鑒定出來，即HIV-1，HIV-2和HIV-3。作為HIV感染的結(jié)果，T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫受損，受感染的個體出現(xiàn)嚴(yán)重的機會感染和／或異常新生物。HIV進(jìn)入T淋巴細(xì)胞需要激活T淋巴細(xì)胞。其他病毒(如HIV-1和HIV-2)在T細(xì)胞激活后感染T淋巴細(xì)胞，這些病毒蛋白的表達(dá)和／或復(fù)制由這種T細(xì)胞激活所介導(dǎo)或維持。一旦被激活的T淋巴細(xì)胞感染了HIV，該T淋巴細(xì)胞必須繼續(xù)維持激活狀態(tài)，以使HIV基因表達(dá)和／或HIV復(fù)制。細(xì)胞因子，特別是TNF α，通過在維持T淋巴細(xì)胞活化上起作用而參與活化T細(xì)胞介導(dǎo)的HIV蛋白表達(dá)和／或病毒復(fù)制。因此，在HIV感染的個體上，諸如通過阻止或抑制細(xì)胞因子(值得注意的是TNF α)的產(chǎn)生來干擾細(xì)胞因子的活性，有助于限制HIV感染引起的淋巴細(xì)胞的維持。
單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和相關(guān)的細(xì)胞(如枯否氏細(xì)胞和膠質(zhì)細(xì)胞)也參與HIV感染的維持。這些細(xì)胞象T細(xì)胞一樣，是病毒復(fù)制的靶細(xì)胞，病毒復(fù)制的水平依賴于細(xì)胞的激活狀態(tài)，{Rosenberg等，The Immunopathogenesis of HIV Infection，Advances in Immunology，57(1989)}。細(xì)胞因子(如TNF α)已被證明在單核細(xì)胞和／或巨噬細(xì)胞中激活HIV復(fù)制{Poli等，Proc．Natl．Acad．Sci．，87，782-784(1990)}，因此，阻止或抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生或其活性有助于限制HIV侵入T細(xì)胞。另外的研究將TNF α鑒定為體外HIV激活的共同因子，并提供了通過細(xì)胞的胞質(zhì)中已發(fā)現(xiàn)的核調(diào)節(jié)蛋白起作用的明確的作用機制(Osborn等，PNAS 86 2336-2340)。該證據(jù)揭示，TNF α合成的減少通過降低轉(zhuǎn)錄從而減少病毒產(chǎn)生，可在HIV感染中具有抗病毒效應(yīng)。
潛伏在T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞株內(nèi)的HIV的AIDS病毒復(fù)制可被TNF α誘導(dǎo){Folks等，PNAS 86，2365-2368(1989)}。有人提出，該病毒誘導(dǎo)活性的分子機理系通過TNF α激活在細(xì)胞胞質(zhì)中所發(fā)現(xiàn)的基因調(diào)節(jié)蛋白(NFκB)的能力，該基因調(diào)節(jié)蛋白通過結(jié)合于病毒調(diào)節(jié)基因序列(LTR)而促進(jìn)HIV的復(fù)制{Osborn等，PNAS 86∶2336-2340(1989)}。有人提出，伴有惡病質(zhì)的AIDS中的TNF α系血清TNF α的提高及患者外周血液單核細(xì)胞中高水平自發(fā)性TNF α產(chǎn)生所致{Wright等，J．Immunol．141(1)．99-104(1988)}。如上面提到的類似的理由，TNF α參與其他病毒感染{如細(xì)胞肥大包涵體病毒(CMV)、流感病毒、腺病毒和皰疹病毒族)的各種作用。
核因子κB(NFκB)是多效轉(zhuǎn)錄激活劑(Lenardo等，Cell 1989，58，227-29)。NFκB作為轉(zhuǎn)錄激活劑參與各種疾病和炎癥狀態(tài)，被認(rèn)為能調(diào)節(jié)細(xì)胞因子(包括但不限于TNF α)的水平，并且也是HIV轉(zhuǎn)錄的激活劑{Dbaibo等，J．Biol．Chem．1993，17762-66；Duh等，Proc，．Natl．Acad．Sci．1989，86，5974-78；Bachelerie等，Nature1991，350，709-12；Boswas等，J．Acquired Immune Deficiency Syndrome 1993，6，778-786；Suzuki等，Biochem．And Biophys．Res．Comm．1993．193．277-83；SuZuki等，Biochem．And Biophys．Res Comm．1992．189，1709-15；Suzuki等，Biochem．Mol．Bio．Int．1993，31(4)，693-700；Shakhov等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1990，171，35-47；和Staal等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 1990，87，9943-47)。因此，抑制NFκB結(jié)合可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄，通過這一調(diào)節(jié)和其他機制，用于抑制眾多疾病。本說明書中描述的化合物可抑制核內(nèi)NFκB的作用，從而用于治療各種疾病，包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、其他關(guān)節(jié)炎、膿毒性休克、膿毒癥、內(nèi)毒素性體克、移植物抗宿主疾病、消耗性疾病、克羅恩氏病、炎性腸疾病、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、全身性紅斑狼瘡、麻風(fēng)中的ENL、HIV、AIDS及AIDS中的機會感染。TNF α和NTκB水平受相互反饋環(huán)的影響。如上所述，本發(fā)明的化合物對TNF α和NFκ5的水平均有影響。
很多細(xì)胞功能由3’，5’-環(huán)-磷酸腺苷(cAMP)水平介導(dǎo)。這些細(xì)胞功能可造成炎性狀態(tài)和包括哮喘、炎癥和其他病狀的疾病{Lowe和Cheng，Drugs of the Future，17(9)，799-807，1992)?，F(xiàn)已證明，炎性白細(xì)胞中cAMP的升高抑制這些細(xì)胞的活性和炎性介質(zhì)(包括TNF α和NFκB)的隨后釋放。cAMP水平的升高還導(dǎo)致呼吸道平滑肌的松馳。磷酸二酯酶通過水解反應(yīng)控制cAMP的水平，而且已表明，磷酸二酯酶的抑制劑可提高cAMP的水平。
因此，降低TNF α水平和／或提高cAMP水平構(gòu)成治療很多炎癥、感染性、免疫學(xué)或惡性疾病的有價值的治療戰(zhàn)略。這些疾病包括但不限于膿毒性休克、膿毒癥、內(nèi)毒素性休克、血液動力學(xué)休克和膿毒綜合征、梗塞后再灌注損傷、瘧疾、分支桿菌感染、腦脊膜炎、牛皮癬、充血性心力衰竭、纖維化疾病、惡病質(zhì)、移植物排斥、癌癥、自身免疫性疾病、AIDS的機會性感染、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊椎炎、骨關(guān)節(jié)炎、其他關(guān)節(jié)炎病癥、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、多發(fā)性硬化、全身紅斑狼瘡、麻風(fēng)中的ENL、放射損傷和高氧性肺泡損傷。關(guān)于抑制TNFα效應(yīng)的以往的努力涉及從利用地塞米松和強的松龍之類甾體藥物到使用多克隆和單克隆抗體{Beutler等，Science 234，470-474(1985)；WO 92／11383}。
詳細(xì)描述本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即本說明書更詳細(xì)描述的某些種類的非多肽類化合物可降低TNF α的水平，提高cAMP的水平，并抑制磷酸二酯酶。因此，本發(fā)明涉及2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，通過服用這類衍生物來降低哺乳動物體內(nèi)腫瘤壞死因子α和其他炎性細(xì)胞因子水平的方法，以及含所述衍生物的藥物組合物。
具體地，本發(fā)明涉及(a)以下通式I所示的2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚 式中，Y是氧或H2，以及R1、R2、R3和R4各自獨立地為氫、鹵原子、1-4個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基，或氨基，和(b)含有可被質(zhì)子化的氮原子的，該2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚的酸加成鹽。
除非另外說明，術(shù)語“烷基”指含有1-8個碳原子的直鏈或支鏈一價飽和烴鏈。這樣的烷基的代表為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。烷氧基指通過醚氧原子鍵合到分子其余部分的烷基。這樣的烷氧基的代表為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
在有資格的專門醫(yī)師指導(dǎo)下，式Ⅰ化合物被用來抑制TNF α和其他炎性細(xì)胞因子(包括IL-1、IL-6和IL-12)的不良作用。這些化合物可單獨地或與其它治療劑(包括抗生素、甾類化合物等)合用，給需要治療的哺乳動物口服給藥、直腸給藥或胃腸外給藥。
本發(fā)明的化合物還可局部用于由過量TNF α的產(chǎn)生分別介導(dǎo)或加劇的局部病癥的治療或預(yù)防，例如病毒感染(如由皰疹病毒引起的感染)或病毒性結(jié)膜炎、牛皮癬、特應(yīng)性皮炎等。
這些化合物還可用于需要阻止或抑制TNF α產(chǎn)生的人以外的哺乳動物的獸醫(yī)治療。在動物上處理(治療或預(yù)防)的TNF α介導(dǎo)的疾病包括上面所述的那些病癥，但特別是病毒感染。其例子包括貓免疫缺陷病毒、馬感染性貧血病毒、羊關(guān)節(jié)炎病毒、綿羊脫髓鞘性腦白質(zhì)炎病毒和梅迪(maedi)病毒，以及其它慢病毒(lentiviruses)。
式Ⅰ化合物可方便地通過多種途徑制備。在第一個實例中，式Ⅱ的2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚被一常規(guī)的氨基保護(hù)基團(tuán)所保護(hù)，從而形成式Ⅲ的被保護(hù)的2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚。然后被氟化以形成式Ⅳ的受保護(hù)的2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，隨后去除保護(hù)基團(tuán)得到式Ⅴ化合物 在上述反應(yīng)中，各R1、R2、R3、R4和Y如上所定義，而X是氨基保護(hù)基團(tuán)。當(dāng)R1、R2、R3、R4中任一基團(tuán)是氨基時，也應(yīng)在氟化步驟之前加以保護(hù)。
式Ⅳ的中間體可以在去除保護(hù)基團(tuán)X之前加以分離和純化，或者可以被直接在原位轉(zhuǎn)化為式Ⅴ的最終化合物。
可用作中間體的某些式Ⅱ化合物是已知的，例如，1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚和1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚。參見例如Jonsson，Acta Pharma．Succica，9,521-542(1972)。其他的化合物描述于共同未審定的申請No．08／701，494(該申請的公開內(nèi)容在此引用作為參考)，或者可用類似的方法制備。
氟化反應(yīng)可用各種不同試劑例如N-氟苯磺酰亞胺(N-fluorobenzenesulfonimide)、高氯酰氟、N-氟苯二磺酰亞胺(N-fluorobenzenedisulfonimide)等，在強堿(如正丁基鋰、氫化鈉、二異丙基氨化鋰、二(三甲基甲硅烷基)氨化鋰等)存在下而實現(xiàn)。
在第二種方法中，合適取代的式Ⅵ的谷氨酸二酯被氟化，產(chǎn)生相應(yīng)的式Ⅶ氟代谷氨酸二酯。然后將其轉(zhuǎn)變?yōu)槭舰姆劝彼崴狒脔０坊瘡亩a(chǎn)生式Ⅴ化合物 在上述反應(yīng)中，各R1、R2、R3、R4和Y如上所定義，而Z和Z′是低級烷基。同樣，當(dāng)R1、R2、R3、R4中任一基團(tuán)是氨基時，也應(yīng)在氟化步驟之前加以保護(hù)。
此處所用的保護(hù)基指這樣的基團(tuán)它是在最終的治療化合物中一般不存在但在合成的某個階段為了保護(hù)化學(xué)操作過程中可能改變的基團(tuán)而有意引入的基團(tuán)。在合成的較后階段除去這種保護(hù)基，帶有這種保護(hù)基的化合物基本上作為化學(xué)中間體有其重要性(盡管有些衍生物也顯示生物活性)。因此，保護(hù)基的確切結(jié)構(gòu)并不嚴(yán)格要求。在大量標(biāo)準(zhǔn)著作中，描述了用于形成和除去保護(hù)基的種種反應(yīng)，這些著作包括例如“Protective Groups in Organic Chemistry”，Plemun Press，London and New York，1973；Greene，Th．W．＂Protective Groups in OrganicSynthesis＂，Wiley，New York，1981；＂The Peptides＂，Vol．I，Schroder and Lubke，Academic Press，London and New York，1965；”Methoden der OrganischenChemie＂，Houben-Weyl，4th Edition，Vol．15／I，Georg Thieme Verlag，Stuttgart1974，這些文獻(xiàn)揭示的內(nèi)容結(jié)合于此作為參考。
在上述反應(yīng)中，可以采用硝基化合物并將硝基通過催化氫化作用而轉(zhuǎn)變?yōu)榘被；蛘?，可以將受保護(hù)的氨基裂解，以產(chǎn)生相應(yīng)的氨基化合物。氨基可利用酰基以酰胺的形式保護(hù)起來，該酰基可在溫和條件下選擇性地除去，特別是芐氧基羰基、甲?；蛟隰驶?-位或α-位上有支鏈的低級烷酰基，特別是叔烷?；?，如三甲基乙酰基，在羰基的α位上被取代的低級烷酰基，如三氟乙?；?。
在式Ⅰ化合物中，與所述氟原子鍵合的碳原子構(gòu)成了手性中心，從而產(chǎn)生了光學(xué)異構(gòu)體 這些異構(gòu)體的外消旋體及其各自的異構(gòu)體，以及非對映異構(gòu)體(當(dāng)具有2個手性中心時)均在本發(fā)明的范圍內(nèi)。外消旋體可直接使用，或可用物理方法，如通過使用手性吸附劑的色譜法將其分離成各個異構(gòu)體?；蛘?，可以手性形式制備各個異構(gòu)體，或用化學(xué)方法，通過與手性酸或堿成鹽從混合物中分離各個異構(gòu)體，例如，10-樟腦磺酸、樟腦酸、α-溴代樟腦酸、甲氧基乙酸、酒石酸、二乙?；剖?、蘋果酸、吡咯烷酮-5-羧酸等的各個對映體，然后將拆分開的一個堿或兩個堿均游離出來，可任意地重復(fù)此過程，以獲得基本上沒有另一個的任何一個或兩個各自的異體構(gòu)，即光學(xué)純度＞95％的形式。
本發(fā)明還涉及通式Ⅰ化合物(它含有可質(zhì)子化的基團(tuán)如氨基)的生理學(xué)上可接受的無毒酸加成鹽。這樣的鹽包括從有機和無機酸生成的鹽，例如(但不限于)，鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、乙酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、馬來酸、山梨酸、阿康酸、水楊酸、苯二甲酸、雙羥萘酸、庚酸等。
特別優(yōu)選的化合物包括1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、和1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚。當(dāng)然，1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚和1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚是特別優(yōu)選的。
口服劑型包括片劑、膠囊劑、糖錠劑(dragees)，及類似形狀的壓制的藥物劑型，每單位劑量包含1-100mg藥物。可用含20-100mg／ml的等滲鹽水溶液作為非胃腸道給藥，包括肌內(nèi)、鞘內(nèi)、靜脈內(nèi)和動脈內(nèi)途徑給藥。使用從常規(guī)載體如可可脂制成的栓劑可進(jìn)行直腸給藥。
藥物組合物包括一種或幾種式Ⅰ的化合物，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在制備這些組合物時，通常將活性成分與賦形劑混合，或用賦形劑稀釋，或包在可以膠囊或藥囊形式存在的載體中。當(dāng)賦形劑起稀釋劑作用時，它可以是固體、半固體或液體材料作為賦形劑、載體或活性成分的介質(zhì)。因此，組合物可以是片劑、丸劑、粉劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、軟和硬明膠膠囊、栓劑、滅菌可注射溶液和滅菌包裝粉劑。合適的賦形劑的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素，制劑還可包括潤滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油)，濕潤劑，乳化劑和懸浮劑，防腐劑(如羥基苯甲酸甲酯和丙酯)，甜味劑或矯味劑。
組合物以制成單位劑量形式為宜，即適合作為單一劑量的物理學(xué)上分開的單位，或準(zhǔn)備以一次或多次劑量方案對人和其他哺乳動物投藥的單一劑量的預(yù)定部分，每一單位包含為產(chǎn)生所期望的治療效應(yīng)而計算出預(yù)定量的活性物質(zhì)，以及合適的藥劑學(xué)賦形劑。采用本領(lǐng)域熟知的方法，可將組合物制成給患者投藥后能立即、持續(xù)或緩慢釋放活性成分的制劑。
TNFα的酶聯(lián)免疫吸附測定按常規(guī)方式進(jìn)行。用Ficoll-Hypaque密度離心法從正常供體中獲得PBMC。將細(xì)胞在補加10％AB+血清、2mM L-谷氨酰胺、100U／mL青霉素和100mg／mL鏈霉素的RPMI中培養(yǎng)。將藥物溶解在二甲亞砜(SigmaChemical)中，然后用補加型RPMI進(jìn)行稀釋。在PBMC懸液中，在有或沒有藥物存在時的二甲亞砜最終濃度均為0．25％(重量)。以起始濃度為50mg／mL的半對數(shù)稀釋液來測定藥物。在加入LPS前一小時，將藥物加入96孔板的PBMC(106細(xì)胞／mL)中。用1mg／mL來自明尼蘇達(dá)沙門氏菌(Salmonella minnesota)R595(List BiologicalLabs，Campbell，CA)的LPS處理來刺激有或沒有藥物存在的PBMC(106細(xì)胞／mL)。然后將細(xì)胞在37℃下培育18-20小時。收獲上清液，立即測定TNFα水平或保藏在-70℃(不超過4天)下直至測定。用人TNFα ELISA試劑盒(ENDOGEN，Boston，MA)，根據(jù)生產(chǎn)商的說明測定上清中的TNFα濃度。
下面的實施例將進(jìn)一步作為本發(fā)明實質(zhì)的典型，但不應(yīng)看作對其范圍的限制，該范圍只能由所附的權(quán)利要求來限定。
實施例1在室溫下，將二甲基氨基吡啶(1．00毫克)加至1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚(2．0g，7．75mmol)和二-叔丁基焦碳酸酯(di-tert-butyldicarbonate)(1．86g，8．52mmol)的1，4-二噁烷(3．0毫升)的攪拌懸浮液中。溶液在室溫下攪拌18小時，然后溶劑被真空去除。殘留物與乙醚(30毫升)一起攪拌30分鐘，過濾，用乙醚洗滌，從而得到1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚。
典型的一次操作產(chǎn)生2．5克(90％產(chǎn)率)1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚，熔點(mp)274．0-275．0℃；1H NMR(DMSO-d6)；δ1．47(s，9H，CH3)，2．08-2．15(m，1H，CHH)，2．50-2．70(m，1H，CHH)，2．69-2．82(m，1H，CHH)，3．02-3．17(m，1H，CHH)，5．42(dd，J=5．4，12．9Hz，1H，NCH)，7．90-7．94(m，4H，Ar)；13C NMR(DMSO-d6)6 21．11，27．03，30．69，48．77，86．01，123．52，131．16，134．99，148．28，166．99，167．55，169．99；C18H18N2O6的分析計算值C，60．33；H，5．06；N，7．82；測量值C，60．01；H，5．21；N，7．47。
實施例2與實施例1的程序類似，由1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4,5,6,7-四氟異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚和1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚，分別制得化合物1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚和1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚。
類似地采用等量1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚和1-氧-2-(2，6-二氧哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚，當(dāng)在實施例1的程序中采用3．72克二-叔丁基焦碳酸酯，從而分別獲得1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-(1-叔丁氧基羰基氨基)異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-(1-叔丁氧基羰基氨基)異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6二氧哌啶-3-基)-5-(1-叔丁氧基羰基氨基)異二氫吲哚和1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-(1-叔丁氧基羰基氨基)異二氫吲哚。
實施例3在-78℃，向1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚(1．0克，2．8mmol)在四氫呋喃(10毫升)中的攪拌溶液中，加入正丁基鋰(1．2毫升，3．0mmol，2．5M)。20分鐘后，將N-氟苯磺酰亞胺(0．8克，3．2mmol)加至混合物中。讓混合物升至室溫，然后真空去除溶劑。殘留物與乙酸乙酯(10毫升)和1N鹽酸(10毫升)一起攪拌1小時。有機層被分離并真空去除溶劑，得到1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，它可進(jìn)一步通過色譜法加以純化。
用類似的方式，在-40℃，將二(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(24毫升，24毫摩爾，1．0M)加至1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-異二氫吲哚(7．16克，20mmol)在四氫呋喃(250毫升)中的攪拌溶液。1小時后，向混合物中加入N-氟苯磺酰亞胺(7．6克，24mmol)。讓混合物升至室溫并保持過夜。使該溶液與乙酸乙酯(200)毫升)、氯化銨水溶液(100毫升，飽和)和水(100毫升)一起攪拌。水層被分離并用乙酸乙酯(200毫升)萃取。合并后的有機層用水(100毫升)、鹽水(100毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑。殘留物用色譜法(硅膠)純化，得到中間體1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚。
典型的一次操作，產(chǎn)生700毫克(10％產(chǎn)率)1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，熔點(mp)156．0-157．0℃；1H NMR(CDCl3)；δ 1．62(s，9H，CH3)，2．41-2．72(m，2H，CH2)，2．87-3．03(m，1H，CHH)，3．52-3．65(m，1H，CHH)，7．81-7．97(m，4H，Ar)；13C NMR(CDCl3)δ 26．80(2JC-F=27Hz)，27．39，28．98(3JC- F=7．5Hz)，67．15，93．50(JC-F=218Hz)，124．31，130．84，135．29，147．17，161．80(2JC- F=28Hz)，165．93，167．57；C18H17N2O6F的分析計算值C，57．45；H，4．55；N，7．44；F，5．05；測量值C，57．78；H，4．62；N，7．23；F，4．94。
通過在室溫下攪拌1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚(620毫克，1．64毫摩爾)和氯化氫在1，4-二噁烷(15毫升，4M，60毫摩爾)的溶液3天，可將中間體1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚轉(zhuǎn)變成1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚。溶劑被真空去除，殘留物與乙醚(10毫升)一起攪拌1小時，然后過濾，得到1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚。一次典型操作產(chǎn)生350mg(77％產(chǎn)率)1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚，熔點(mp)228．0-230．0℃；1H NMR(DMSO-d6)；δ2．44-2．61(m，2H，CH2)，2．84-2．99(m，1H，CHH)，3．24-3．31(m，1H，CHH)，7．93(brs，4H，Ar)，11．49(s，1H，NH)；13C NMR(DMSO-d6)δ 26．91(2JC-F=27Hz)，28．41(3JC-F=8Hz)，93．57(JC-F=211Hz)，123．75，130．91，135．29，164．29(3JC-F=6Hz)，164．70(3Jc-F=6Hz)，166．21(4JC-F=1Hz)，171．58(3JC-F=6Hz)，C13H9N2O4F+0．2H2O的分析計算值C，55．80；H，3．39；N，10．01；F，6．79；測量值C，55．74；H，3．30；N，9．86；F，7．18。
實施例4按照實施例3的程序，然而用0．76克N-氟苯二磺酰亞胺代替0．8克N-氟苯磺酰亞胺。從而獲得1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚，它可通過柱色譜法進(jìn)一步純化。
實施例5將二異丙基氨化鋰(1．5毫升，3．0毫摩爾，2M)加至1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚(1．0g，2．8mmol)在四氫呋喃(10毫升)中的攪拌溶液中。30分鐘后，將高氯酰氟(5毫摩爾)吹泡(bubble)入混合物。讓混合物升至室溫，然后真空去除溶劑。殘留物與乙酸乙酯(10毫升)和1N鹽酸(10毫升)一起攪拌1小時。有機層被分離，然后真空去除溶劑，從而獲得1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，它可以通過色譜法進(jìn)一步純化。
實施例6在室溫下，將氫化鈉(112毫克，2．8毫摩爾，60％)加至1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚(1．0g，2．8mmol)在二甲基甲酰胺(10毫升)中的攪拌溶液中。30分鐘后，將高氯酰氟(5毫摩爾)吹泡(bubble)入混合物?；旌衔锱c二氯甲烷(10毫升)和1N鹽酸(10毫升)一起攪拌1小時。有機層被分離，然后真空去除溶劑，從而獲得1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，它可以通過色譜法進(jìn)一步純化。
實施例7在-78℃，將正丁基鋰(1．2毫升，3．0毫摩爾，2．5M)加至1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基．2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚(1．0g，2．8mmol)和四甲基乙二胺(0．5克，4．3毫摩爾)在四氫呋喃(10mL)的攪拌溶液中。30分鐘后，將N-氟苯磺酰亞胺(0．8克，3．2毫摩爾)加入混合物。讓混合物升至室溫，然后真空去除溶劑。殘留物與乙酸乙酯(10毫升)和1N鹽酸(10毫升)一起攪拌1小時。有機層被分離，然后真空去除溶劑，從而獲得1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，它可以通過柱色譜法進(jìn)一步純化。
實施例8以1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-(1-叔丁氧基羰基氨基)-異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-(1-叔丁氧基羰基氨基)-異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-(1-叔丁氧基羰基氨基)-異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-(1-叔丁氧基羰基氨基)-異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2,6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚和1-氧-2-(1-叔丁氧基羰基-2，6-二氧哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧異二氫吲哚為起始原料，按照實施例3、4、5、6或7的程序，分別獲得化合物1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-甲基異二氫吲哚、1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-甲基異二氫吲哚、和1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚。
實施例9A部分將L-谷氨酸二甲酯(2．6克，14．8毫摩爾)、亞硝酸異戊酯(2．13毫升，15．9毫摩爾)和乙酸(0．22毫升)在苯(150mL)中的溶液回流加熱1小時。溶液用1N硫酸水溶液、水、飽和的碳酸氫鈉溶液、水和鹽水(每次50毫升)洗滌。溶劑被真空去除，得到2-重氮基戊烷-1，5-二酸二甲酯，它可通過柱色譜而進(jìn)一步純化。
B部分在0℃，向5毫升70％氟化氫在吡啶中的溶液和1．2克(6．7毫摩爾)N-溴琥珀酰亞胺在10毫升乙醚中的冷溶液，加入2-重氮基戊烷-1，5-二酸二甲酯(1．1克，5．9毫摩爾)的乙醚(10毫升)溶液?；衔镌?℃攪拌30分鐘。溶液用水(20毫升)、鹽水(20毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到2-溴-2-氟戊烷-1，5-二酸二甲酯，它可通過柱色譜進(jìn)一步純化。
C部分2-溴-2-氟戊烷-1，5-二酸二甲酯(1．0克，3．8毫摩爾)和鄰苯二甲酰亞胺鉀(0．79克，4．3毫摩爾)在二甲基甲酰胺(10毫升)中的混合物，在80℃加熱3小時。溶劑被真空去除，殘留物與乙酸乙酯(50毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用水和鹽水(每次20毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-2-氟戊烷-1，5-二酸二甲酯，它可通過柱色譜進(jìn)一步純化。
D部分將2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-2-氟戊烷-1，5-二酸二甲酯(1．3克，4．0毫摩爾)、甲醇(10毫升)和4N鹽酸(10毫升)的混合物，在80℃加熱1小時。真空去除溶劑，得到2-氟-2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-丙烷-1，3-二羧酸。將其溶解于乙酸酐(20毫升)中，然后回流加熱溶液30分鐘。真空去除溶劑，得到2-氟-2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-丙烷-1，3-二羧酸酐。將其與氨的甲醇溶液(35毫升，2M)混合，然后在室溫下攪拌18小時。真空去除溶劑，殘留物與二氯甲烷(50毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用水和鹽水(每次40毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，然后將殘留物與碳酰二咪唑(carbonyl diimidazole)(0．65克，4毫摩爾)和二甲基氨基吡啶(50毫克)的四氫呋喃(50毫升)溶液一起回流加熱18小時。1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚通過用乙酸乙酯萃取而分離，并進(jìn)一步通過色譜法而純化。
實施例10將L-谷氨酸二甲酯(2．0克，11．4毫摩爾)和鄰苯二甲酸酐(1．7克，11．4毫摩爾)在乙酸(30毫升)中的攪拌混合物回流加熱1小時。真空去除溶劑，得到2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-戊烷-1，5-二酸二甲酯，它可通過柱色譜而進(jìn)一步純化。
在-79℃，向2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-戊烷-1，5-二酸二甲酯(1．0克，3．3mmol)和四甲基乙二胺(0．5克，4．3毫摩爾)在四氫呋喃(10毫升)中的攪拌溶液中，加入2．5M正丁基鋰(1．6毫升，4mmol)。30分鐘后，將N-氟苯磺酰亞胺(1克，3．2mmol)加至混合物中，然后讓混合物升至室溫。真空去除溶劑。殘留物與二氯甲烷(100毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用水和鹽水(每次30毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-2-氟戊烷-1，5-二酸二甲酯，它可通過色譜法進(jìn)一步純化，并按上面實施例9部分D所述的那樣轉(zhuǎn)化為1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚。
實施例11將溴代氟代乙酸乙酯(1．0克，5．4毫摩爾)和苯并呋喃酮鉀(potassiumphthalide)(1．0克，5．4毫摩爾)在二甲基甲酰胺(10毫升)中的攪拌混合物在80℃加熱3小時?；旌衔锱c乙醚(50毫升)和水(50毫升)一起攪拌，有機層用水和鹽水(每次30毫升)，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-2-氟乙酸乙酯，它可通過柱色譜而進(jìn)一步純化。
在-78℃，向2-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-2-氟乙酸乙酯(0．8克，3．2mmol)在四氫呋喃(30毫升)中的攪拌溶液中，加入二異丙基氨化鋰(1．7毫升，3．4mmol，2M)。30分鐘后，向混合物中加入丙烯酸叔丁酯(0．42克，3．2毫摩爾)，然后讓混合物升至室溫。真空去除溶劑，殘留物與二氯甲烷(50毫升)和水(30毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用鹽水(30mL)洗滌，用硫酸鈉干燥。被真空去除，得到4-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-4-氟-4-乙氧基羰基丁酸叔丁酯，它可通過柱色譜進(jìn)一步純化。
將4-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-4-氟-4-乙氧基羰基丁酸叔丁酯(1．1克，3毫摩爾)和三氟乙酸(5毫升)的二氯甲烷(5毫升)溶液攪拌18小時，然后與二氯甲烷(50毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用水和鹽水(每次30毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到4-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-4-(乙氧基羰基)-4-氟丁酸，它可通過色譜進(jìn)一步純化，或者不經(jīng)進(jìn)一步純化而用于下一步驟。
4-(1，3-二氧異二氫吲哚-2-基)-4-(乙氧基羰基)-4-氟丁酸(0．9克，2．8毫摩爾)、碳酰二咪唑(carbonyl diimidazole)(0．46克，2．8毫摩爾)和二甲基氨基嘧啶(0．68克，2．8毫摩爾)在四氫呋喃(30毫升)中的混合物，被回流加熱18小時。溶劑被真空去除，殘留物與二氯甲烷(50毫升)一起攪拌10分鐘。有機層用水和鹽水(每次40毫升)洗滌，用硫酸鈉干燥。真空去除溶劑，得到1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚，它可通過柱色譜進(jìn)一步純化。
實施例12按照以下步驟能夠獲得每片含50mg 1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚的片劑。
組成(1000片)1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚 50．0g乳糖50．7g麥淀粉 7．5g聚乙二醇6000 5．0g滑石粉 5．0g硬脂酸鎂 1．8g軟化水 q．s·首先，使固體組分過孔徑為0．6mm的篩子，然后混合活性組分、乳糖、滑石粉、硬脂酸鎂和一半量的淀粉，另一半淀粉被懸浮在40mL水中，再將該懸浮液加入100mL沸騰的聚乙二醇水溶液中，接著，將所得的糊狀物加入到粉末狀物質(zhì)中，并將混合物制成顆粒狀，如有必要，還可添加水。然后在35℃的溫度下徹夜干燥顆粒物，再過孔徑為1．2mm的篩子整粒，最后壓片，獲得直徑為6mm、且兩邊內(nèi)凹的片劑。
實施例13按照以下步驟能夠獲得每片含100mg 1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚的片劑。
組成(1000片)1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚 100．0g乳糖100．0g麥淀粉 47．0g硬脂酸鎂 3．0g首先，使所有固體組分過孔徑為0．6mm的篩子，然后混合活性組分、乳糖、硬脂酸鎂和一半量的淀粉，另一半淀粉被懸浮在40mL水中，再將該懸浮液加入100mL沸騰的水中，接著，將所得的糊狀物加入到粉末狀物質(zhì)中，并將混合物制為顆粒狀，如有必要，還可添加水。然后在35℃(的溫度下徹夜干燥顆粒物，再通過孔徑為1．2mm的篩子整粒，最后壓片，獲得直徑為6mm、且兩邊內(nèi)凹的片劑。
實施例14按照以下步驟能夠獲得每片含有75mg 1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚的咀嚼片劑。
組成(1000片)1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚75．0g甘露糖醇 230．0g乳糖 150．0g滑石粉21．0g甘氨酸12．5g硬脂酸10．0g糖精 1．5g5％明膠溶液q．s．首先，使所有固體組分過孔徑為0．25mm的篩子，然后混合甘露糖醇和乳糖，并在其中加入明膠溶液，造粒，再通過孔徑為2mm的篩子，并在50℃的溫度下干燥，然后再通過孔徑為1．7mm的篩子。接著，小心地混合1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)異二氫吲哚、甘氨酸和糖精，再添加甘露糖醇、乳糖顆粒、硬脂酸和滑石粉，然后充分混合，壓成直徑為10mm、兩邊凹陷、上面有一個斷裂槽的片劑。
實施例15按照以下步驟能夠獲得每片含10mg 1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚的片劑。
組成(1000片)1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二 10．0g氫吲哚乳糖 328．5g玉米淀粉 17．5g聚乙二醇6000 5．0g滑石粉25．0g硬脂酸鎂 4．0g軟化水 q．s．首先，使所有固體組分通過孔徑為0．6mm的篩子，然后充分混合酰亞胺活性組分、乳糖、滑石粉、硬脂酸鎂和一半量的淀粉，另一半淀粉被懸浮在65mL水中，再將該懸浮液加入260mL沸騰的聚乙二醇水溶液中，接著，將所得的糊狀物加入到粉末狀物質(zhì)中，并將混合物制成顆粒，如有必要，還可添加水。然后在35℃的溫度下徹夜干燥顆粒物，再通過孔徑為1．2mm的篩子，最后壓片，獲得直徑為10mm、兩邊內(nèi)凹、且上面有一個斷裂槽的片劑。
實施例16按照以下步驟能夠獲得每個膠囊含100mg 1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚的明膠干填膠囊劑。
組成(1000粒膠囊)1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚 100．0g微晶纖維素 30．0g十二烷基硫酸鈉 2．0g硬脂酸鎂8．0g
首先，使十二烷基硫酸鈉通過孔徑為0．2mm的篩子而添加入1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚中，充分混合10分鐘后，再使微晶纖維素通過孔徑為0．9mm的篩子而添加入上述混合物中，然后充分混合10分鐘。接著，使硬脂酸鎂通過孔徑為0．8mm的篩子而添加入混合物中，再混合3分鐘，最后將上述混合物(每個膠囊裝入140mg)裝入型號為0(拉長型)的明膠干填膠囊中。
實施例17按照以下步驟能夠獲得0．2％注射劑或輸液。
1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5氨基-異二 5．0g氫吲哚鹽酸鹽氯化鈉 22．5gpH7．4的磷酸緩沖液 300．0g軟化水加到2500．0mL首先將1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基-異二氫吲哚鹽酸鹽溶于1000mL水中，用微孔濾膜過濾后，添加緩沖液，然后加水使總?cè)萘窟_(dá)到2500mL。為了制成單位劑型，將上述溶液裝入玻璃安瓿(每個瓶裝入1．0或2．5mL溶液，即分別含2．0或5．0mg酰亞胺)中。
權(quán)利要求
1．一種化合物，其特征在于，它選自下組(a)以下通式Ⅰ所示的2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚 式中，Y是氧或H2，以及R1、R2、R3和R4各自獨立地為氫、鹵原子、1-4個碳原子的烷基、1-4個碳原子的烷氧基，或氨基，和(b)含有可被質(zhì)子化的氮原子的所述2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚的酸加成鹽。
2．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R1、R2、R3和R4為氫。
3．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R1、R2、R3和R4是相同的，且各是氯、氟、甲基或甲氧基。
4．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R3是氨基，而R1、R2和R4為氫。
5．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R4是氨基，而R1、R2和R3氫。
6．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R3甲基，而R1、R2和R4為氫。
7．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，R4是甲基，而R1、R2和R3氫。
8．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚。
9．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚。
10．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚。
11．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚。
12．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚。
13．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚。
14．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1，3-二氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚。
15．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-5-氨基異二氫吲哚。
16．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-異二氫吲哚。
17．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4-氨基異二氫吲哚。
18．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氟異二氫吲哚。
19．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四氯異二氫吲哚。
20．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲基異二氫吲哚。
21．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，它是1-氧-2-(2，6-二氧-3-氟哌啶-3-基)-4，5，6，7-四甲氧基異二氫吲哚。
22．一種降低哺乳動物中不利的炎性細(xì)胞因子水平的方法，其特征在于，對其施用有效量的權(quán)利要求1所述的化合物。
23．一種藥物組合物，其特征在于，它包含其量按單次或多次劑量方案給藥后足以降低哺乳動物中炎性細(xì)胞因子水平的權(quán)利要求1所述的化合物，以及載體。
全文摘要
1－氧－2－(2,6－二氧－3－氟哌啶－3－基)異二氫吲哚和1,3－二氧－2－(2,6－二氧－3－氟哌啶－3－基)異二氫吲哚類化合物可降低哺乳動物中炎性細(xì)胞因子如TNFα的水平。一種典型的例子是1,3－二氧－2－(2,6－二氧－3－氟哌啶－3－基)異二氫吲哚。
文檔編號A61P43/00GK1282330SQ98812419
公開日2001年1月31日 申請日期1998年11月17日 優(yōu)先權(quán)日1998年3月13日
發(fā)明者G·W·穆勒, D·I·斯特林, R·S·C·陳, H·W·曼 申請人:賽爾金有限公司