專利名稱：：用于治療微生物感染的哺乳動物肽的制作方法
技術領域：
：本發明涉及治療哺乳動物(包括人類及其它靈長類)的微生物感染的方法；殺死細菌和真菌的方法；以及用抗微生物有效量的血紅蛋白、或此分子的α或β鏈(不含血紅素)、或經溴化氰裂解α和β鏈而得的多肽片段或其合成片段處理被微生物污染的物質的方法。本發明還涉及包含這類蛋白質、多肽或片段的組合物。
背景技術：
：天然來源的抗細菌肽已有較長歷史。1939年Dubos證實某種土壤芽孢桿菌(后鑒別為短芽孢桿菌)產生能阻止小鼠肺炎球菌感染的物質。隨后，Hotchkiss＆Dubos純化出由氨基酸組成的兩種物質，其中之一的短桿菌肽成為有實用價值的治療劑。此后對抗微生物肽的研究鑒別出很多活性試劑(1)。(本申請中很多文獻以括號中的阿拉伯數字提及。引用這些參考文獻的完整說明按順序列于本說明書的最后。所有這些參考文獻及本申請引用的任何其它參考文獻均全文引入作為參考。)很多細菌產生抗微生物肽(細菌素)和蛋白質；革蘭氏陰性細菌釋放的抗微生物肽比較有效而且作用范圍較廣(2)。防衛素(defensin)是在嗜中性粒細胞、非人類巨噬細胞和Paneth細胞中發現的小分子抗微生物肽(3)。兩棲類的皮膚含有豐富的抗微生物肽，其中分離自滑爪蟾的爪蟾抗菌肽目前已進入臨床試驗階段(4，5)。植物形成多種基因編碼型抗微生物肽，包括植物抗毒素、PR蛋白和AMP(6，7)。昆蟲也顯示能合成殺菌肽和殺菌蛋白，如塞各洛比蛾的殺菌肽(8，9，10)和麻蠅類棕尾別麻蠅的幼蟲產生的麻蠅毒素(11)。馬蹄形鱟的血細胞含有快速修復素(tachyplesin)，而具有抗微生物活性的氨基類固醇物質角鯊胺(squalamine)可從白斑角鯊中分離得到(12)。因此，很多抗微生物物質屬于“天然”抗生素家族，如殺菌肽、爪蟾抗菌肽、防衛素、serprocidin等等。這些物質在自然界廣泛存在，并在從昆蟲到兩棲類到哺乳動物的各物種中提供抗感染的先天性防御機制。這些物質一般貯存于細胞內，當動物受到微生物攻擊時可以誘導并分泌在體內。它們大都通過選擇性破壞細菌細胞膜而發揮作用；若不經隔絕，它們中不少對宿主細胞也有毒性(13)。這些化合物有很多已被推薦用作抗微生物制劑(14，15)。血紅蛋白(分子量為64，500)由四條多肽鏈及四個血紅素輔基(其中的鐵原子為亞鐵狀態)組成。血紅素是由中心含有鐵原子的卟啉結構組成的一種金屬復合物。被稱為球蛋白的蛋白質由兩條α鏈和兩條β鏈組成。人球蛋白有兩條各含141個氨基酸殘基的α鏈和兩條各含146個殘基的β鏈。人血紅蛋白的α和β鏈氨基酸序列如下α鏈11516303145VLSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPH466061757690FDLSHGSAQVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMPNALSALSDLHAHK91105106120121135LRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHLPAEFTPAVHASLDKFLASVSTV136141LTSKYRβ鏈11516303145VHLTPEEKSAVTALWGKVNVDEVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESF466061757690GDLSTPDAVMGNPKVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSE91105106120121135LHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHFGKEFTPPVQAAYQKVVA136146GVANALAHKYH(SEQIDNO:1)血紅素(亞鐵原卟啉Ⅸ)的結構已眾所周知。通過鐵原子與組氨酸殘基的R基團之間的配位鍵使每條多肽鏈結合一個血紅素基團。鐵原子的第六個配位鍵可與氧結合。此外，血紅蛋白還能轉運H+、CO2和NO。具有血紅蛋白的所有動物其血紅素的結構都相同，但球蛋白鏈的序列差異較大。如果不考慮這些差異，各物種之間此四聚體的構型十分相似。血紅蛋白與氧和二氧化碳的相互作用取決于血紅素以及圍繞在其周圍的殘基的狀態，并受到異養型配體包括H+、Cl-、CO2、HCO3-和2，3，二磷酸甘油酸的調節。這些配體可調節高親和力狀態(松弛狀態或R結構)與低親和力緊張狀態(或T結構)之間的平衡。已有人對血紅蛋白的立體化學進行了全面回顧(16，17)。基于血紅蛋白的組合物已經開發為血液替代品(18，19)。它們包括含有正確輸送氧氣所必需之氧合血紅素基團的化學修飾型血紅蛋白。盡管這類基于修飾型血紅蛋白的化合物已作為血液替代品施用，但此前尚無人報道為了同樣的目的或其它治療目的而施用未經修飾的血紅蛋白、不含血紅素的亞基或片段或其相應合成肽。事實上，不含血紅素的α和β亞基不能作為血液替代品使用，因為它們不能結合氧。發明簡述本發明提供一種殺死細菌或真菌的方法，該方法包括使細菌或真菌與抗微生物有效量的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段接觸，它們選自下組完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDNO6的氨基酸序列、上述蛋白質或其多肽片段的片段，以及它們的組合形式。本發明還提供治療細菌或真菌感染者的方法，包括施用抗微生物有效量的上述蛋白質、多肽和／或片段組合物；處理受細菌或真菌污染的物質的方法，包括將這樣的物質加入或混合抗微生物有效量的上述組合物)；還涉及上述組合物在細菌或真菌的抗微生物治療中的應用。本發明另提供藥物劑型，該劑型包含抗微生物有效量之上述蛋白、多肽和／或片段組合物及藥學可接受載體，還提供SEQIDNO5氨基酸序列、SEQIDNO6氨基酸序列以及這些序列的片段的多肽。圖2血紅蛋白在三種不同pH的抗糞鏈球菌活性。圖3血紅蛋白在三種不同pH的抗銅綠假單胞茵活性。圖4血紅蛋白在pH5．5的抗白假絲酵母活性。圖5血紅蛋白在pH5．5的抗大腸桿菌活性。圖6血紅蛋白在pH7．4的抗大腸桿菌活性。圖7α鏈在pH5．5的抗白假絲酵母活性。圖8α鏈在pH5．5和pH7．4的抗大腸桿菌活性。圖9α鏈在pH5．5和pH7．4的抗大腸桿菌活性。圖10α鏈在pH5．5的抗銅綠假單胞菌活性。圖11β鏈在pH5．5的抗銅綠假單胞菌活性。圖12β鏈在pH5．5的抗銅綠假單胞菌活性。圖13β鏈在pH5．5的抗金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌活性。圖14β鏈在pH5．5的抗白假絲酵母活性。圖15β鏈在pH5．5和pH7．4的抗大腸桿菌活性。圖16對人血紅蛋白鏈的C4-反相HPLC分析，顯示一個早期峰(代表血紅素)和隨后較寬的峰(分別代表β和α鏈)。圖17人血紅蛋白的tris-tricine-SDS-PAGE分析，顯示α和β鏈在14．5kDa處的考馬斯亮蘭染色。圖18人血紅蛋白α鏈(A)和β鏈(B)的溴化氰裂解片段的HPLC分離。圖19人血紅蛋白α鏈(A)和β鏈(B)的溴化氰裂解片段的MALDI-TOF質譜分析。發明詳述本發明的主題是哺乳動物血紅蛋白、其不含血紅素的α和β鏈、其特選片段、其合成肽以及包含這類肽和片段的組合物的抗微生物活性。這些物質在治療上的應用包括作為廣譜的局部或全身性抗細菌及抗真菌制劑、及與常規抗生素有協同作用的制劑。本發明還提供物質組合物和治療微生物感染的方法。更具體的說，本發明的組合物包含血紅蛋白或者其α或β鏈，后者無血紅素，它們來自人的紅細胞或哺乳動物的紅細胞。此外，這些組合物還包含經溴化氰(CNBr)或其它肽酶裂解而成的血紅蛋白α或β鏈的多肽片段和相應合成肽。這些組合物的殺菌活性所針對的細菌包括革蘭氏陰性細菌。這樣的革蘭氏陰性細茵實例有大腸桿菌和銅綠假單胞菌。這些組合物還可作用于革蘭氏陽性細菌。這樣的革蘭氏陽性細菌實例有金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌。此外，組合物可作為抵抗包括酵母在內的真菌的抗微生物制劑使用。在本發明的一個實施方案中，酵母為白假絲酵母。人血紅蛋白對真菌如白假絲酵母、革蘭氏陰性細菌如大腸桿菌和銅綠假單胞菌以及革蘭氏陽性細菌如金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌具有抗微生物活性(圖1-6)。抗微生物活性受pH影響，pH5．5時比pH7．4時作用更強。不含血紅素的血紅蛋白α和β鏈有類似的抗微生物活性(圖7-10為無血紅素的α鏈；圖11-15為無血紅素的β鏈。)。如完整的血紅蛋白一樣，無血紅素的血紅蛋白α和β鏈的抗微生物活性受pH影響，pH5．5時比pH7．4時作用更強。此外，血紅蛋白或單獨的α和β鏈經CNBr裂解后產生的α和β鏈片段已證實具有抗微生物活性。CNBr處理使α鏈產生三個片段，β鏈產生兩個片段。α-1115163031VLSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMα-233454660617576FLSFPTTTKTYFPHFDLSHGSAQVKGHGKKVADALTNAVAHVDDMα-3779091105106120PNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHLPAEFTPA121135136141VHASLDKFLASVSTVLTSKYRβ-111516303145VHLTPEEKSAVTALWGKVNVDEVGGAELGRLLVVYPWTQRFFESF4655GDLSTPDAVMβ-2566061757690GNPKVKAHGKKVLGAFSDGLAHLDNLKGTFATLSE91105106120121135LHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLAHHFGKEFTPPVQAAYQKVVA136146GVANALAHKYH(SEQIDNO:2)α-3CNBr裂解片段經鑒別為1PNALSALSDLHAHKLRVDPV2141NFKLLSHCLLVTLAAHLPAEF4264TPAVHASLDKFLASVSTVLTSKYR(SEQ.IDNO:3)β-2CNBr裂解片段經鑒別為1KAHGKKVLGAFSDGLAHLDN21LKGTFATLSELHCDKLHVDP41ENFRLLGNVLVCVLAHHHFGK61EFTPPVQAAYQKVVAGVANA8186LAHKYH(SEQ.IDNO:4)對人血紅蛋白及其兩個亞基的抗微生物活性的發現提示可分析生物活性的最低要求，從而可設計具有類似活性的模型化合物。如上述，經CNBr裂解產生了5個片段α鏈3個、β鏈2個。β2片段具有較高的抗大腸桿菌及抗白假絲酵母活性。β2的三級結構顯示該片段的兩個末端均為螺旋。合成由β2的末端衍生的兩個肽并檢驗其抗生素活性。肽ⅠGNPKVKAHGKKVLGAFS(SEQIDNo．5)肽ⅡHHFGKEFTPPVQAAYQKVVAGVANALAHKYH(SEQIDNo．6)每條合成肽均顯示抗微生物活性(參見表3，實施例9和10)。雖然不必受限于為解釋這些肽的作用所提出的任何機制，但很可能抗微生物活性是由于肽的螺旋結構在微生物的細胞膜內形成孔。既然來自各種哺乳動物的血紅蛋白在結構和構型上均相似，那么很可能非人類來源的血紅蛋白、其α和β鏈及其片段也有顯著的抗微生物活性。本發明因此還包括來自其它哺乳動物的血紅蛋白四聚體以及它們的無血紅素單體組分。本發明的組合物可用于治療，作為防腐劑或消毒劑。本發明因此還包含細菌或真菌的抗微生物處理方法。該方法包括按本文所述任一種技術，使本文所述的一種組合物以抗微生物有效量與細菌或真菌進行接觸。實施該方法時，組合物通常溶于適當緩沖液中。適當緩沖液的實例為領域內已知，包括適當pH值的磷酸鹽緩沖液(用于真菌)或磷酸鹽緩沖鹽溶液。本發明還提供可用于通過局部或全身性給藥而治療人類或其它哺乳動物的細菌性或真菌性感染的藥物組合物。該藥物組合物包含抗微生物有效量的本發明一種組合物以及藥學可接受載體。用于局部、口服或全身給藥的適當藥學可接受載體為領域內已知，并已公開在美國藥典，TheNationalFormularyandPharmaceuticalScience(第8版，第83、84和89章)。根據具體應用要求，由本發明提供的藥物組合物可配制成溶液、懸浮液、胃腸外制劑、油膏、乳膏、洗劑、噴霧劑、粉末、片劑或膠囊，并分別配成適當的服用型、外用型或混合型。胃腸外制劑可包括載體，諸如經特殊蒸餾的不含熱原質的水、磷酸鹽緩沖液或生理鹽水。油膏、乳膏、洗劑和噴霧劑可包括載體如植物油或礦物油、白蠟或高分子醇即超過12個碳原子的醇。片劑或膠囊可包括稀釋劑如乳糖、粘合劑、潤滑劑如硬脂酸、以及助分解物質如玉米粉。本發明的每種組合物可聯合其它抗生素或抗微生物試劑、抗原生動物試劑、傷口愈合劑等等使用，以增強它們的活性或擴大它們的作用范圍。本發明還提供對已感染細菌或真菌的人或其它哺乳動物進行治療的方法，該方法包括使受試者接受抗微生物有效量的本發明一種藥物組合物。組合物可通過如靜脈注射、腹膜內注射、口服或氣溶膠型噴霧組合物施用于受試者。包含本發明肽的脂質載體或脂質乳劑制劑也可用于組合物給藥。具體給藥形式取決于所要針對的病原菌。應由臨床醫生根據其已知方法調整或確定所選具體給藥途徑及給藥方案，以便獲得最佳臨床反應。給藥量應是抗微生物有效的量。給藥劑量還取決于受試者的體質特征，如受試的特定哺乳動物、年齡、體重、健康狀況、同時進行的治療形式(若有的話)、治療頻率及治療比率。在治療人類患者時，抗微生物有效量通常為約0．5-50mg／kg體重、且每劑約0．5-5．0mg／ml。本發明還提供應用這樣的肽防止微生物對食物污染(即作為防腐劑)或用于除去潛在病原菌的方法。例如，貝類、肉類和家禽產品常常有腸道病原菌的生長。這些病原菌可用本發明之肽組合物以抗微生物有效量處理而除去。糧食作物如水果和蔬菜也可經處理消除收獲后發生的腐敗。肽可局部施用，或可通過本發明之重組肽的轉基因表達而應用。當將需要防腐的物質與本發明之組合物混合時，只需將所選肽以抗微生物有效量直接混合加入即可。抗微生物有效量通常為約1500μg-50mg／kg待處理物質。當局部應用組合物時，抗微生物有效量通常為約0．1-1．0mg／cm2。此外，本發明之肽可作為消毒劑用于產品的滅菌或維持無菌狀態。這些產品可包括嬰幼兒用抹布、尿片、繃帶、毛巾、化妝品、洗眼藥水以及隱形眼鏡溶液。本發明之組合物可以以適當緩沖液或脂質體組合物形式對這類產品局部用藥。施用的抗微生物有效量通常為約1500μg-50mg／kg待處理物質。以下實施例旨在舉例說明本發明，并非限制。每項試驗除了特別指明外均進行3輪。用本發明之純化或半純化組合物進行的輻射擴散試驗可信度好，結果穩定。試驗方法按Lee等(23)的模式進行。表1抗微生物活性輻射擴散試驗人血紅蛋白及無血紅素的α和β亞基，最小抑茵濃度(MIC)(μg／ml)<tablesid="table1"num="001"><table>血紅素實施例1α鏈實施例3β鏈實施例4pH5．57．45．57．45．57．4微生物白假絲酵母大腸桿菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌糞鏈球菌50-701-54-65200-1000NT35-100-50-71-2300503*NT-NTNTNT＞501．5-51040-6020NT10-30NTNTNT</table></tables>(-)為無作用NT為未檢驗*為單次實驗表2抗微生物活性輻射擴散試驗人血紅蛋白不含血紅素α和β鏈的CNBr裂解產物最小抑菌濃度(MIC)(μg／ml)<tablesid="table2"num="002"><table>微生物α-1實施例6α-2實施例7α-3實施例8β-1實施例9β-2實施例10大腸桿菌＞100＞1005-8＞1005白假絲酵母NTNT10-502525糞鏈球菌＞100NT7＞508</table></tables>NT=未檢測實施例11和12在Columbia大學HowardHughesMedicalInstitute的ProteinChemistryCoreFacility按常規方法合成合成肽Ⅰ和Ⅱ(分別為SEQIDNO5和6)。合成肽Ⅰ(SEQIDNO5)和Ⅱ(SEQIDNO6)的抗微生物活性分別示于表3、實施例11和12中。表3輻射擴散試驗兩種合成肽的分析結果，最小抑茵濃度(MIC)(μg／ml)<tablesid="table3"num="003"><table>微生物合成肽Ⅰ實施例11合成肽Ⅱ實施例12大腸桿菌151．5白假絲酵母1040</table></tables>前述各實施例證實了本發明人設計及執行本發明時所進行的試驗以及設想。這些實施例包括對可用于證實本發明之實踐及應用的技術的公開內容。本領域內技術人員應理解，對在此例舉的實施方案和技術作各種改動而不脫離本發明范圍。參考文獻1)MobergCL，CohnZA(編)1990．進入抗生素時代。個人新發現及主要抗生素的應用。Rockefeller大學出版社，紐約。2)SahlH-G．1994．細菌產生的基因編碼抗生素，《抗微生物肽》，Wiley，Chichester，第27-53頁。3)GanzT．1994．防衛素及其它抗微生物肽的生物合成，《抗微生物肽》，Wiley，Chichester，第63-37頁。4)ZasloffM．1987．爪蟾抗菌肽，爪蟾皮膚上的一類抗微生物肽兩種活性形式以及前體的部分cDNA序列的分離、鑒定。美國國家科學院學報845449-5453。5)GiovanniMG，PoulterL，GibsonBW，WilliamsDH．1987．滑爪蟾激素原衍生肽的生物合成及降解。生物化學雜志243113-120。6)DizonRA，DeyPM，LambCJ．1983．植物抗毒素酶學和分子生物學。分子生物學相關領域的酶學進展(AdvEnzymolRelatAreasofMolBiol)551-135。7)StintzA，HertzT，PradadV等。1993．植物的致病相關蛋白及其防御病原菌的作用。生物化學75687-706。8)HultmarkD，SteinerH，RasmulsonT，BomanHC．1980．昆蟲免疫來自Hylorphoracecropia致敏蛹的血淋巴的三種誘導型殺菌蛋白的純化及特點。歐洲生物化學雜志1067-16。9)HultmarkD．1993．果蠅及其它昆蟲體內的免疫反應；一種先天性免疫的模型。TrendsGenet9178-183。10)SteinerH，HultmarkD，EngstromA，BennichH，BomanHG．1981．昆蟲免疫中涉及的兩種抗菌蛋白的序列和特異性。自然292245-248。11)NatoriS．1990．昆蟲免疫蛋白在防御和發育中的雙重功能。免疫學研究141938-939。12)MooreKS，WohrliS，RogerH等．1993．角鯊胺鯊魚的一種氨基類固醇抗生素。美國國家科學院學報901354-1358。13)KreilG．1994．兩棲類皮膚來源的抗微生物肽回顧，在《抗微生物肽》中，CibaFoundationsSymposium186，第77-90頁。JohnWiley＆Sons，Chichester，N．Y．14)JacobL，ZasloffM．1994．爪蟾抗菌肽及其它動物來源的抗微生物制劑的潛在治療用途，《抗微生物肽》，JohnWiley＆Sons，Chichester，NY。15)NicolasP，MorA．1995．作為脊椎動物化學防御系統中抗微生物武器的肽。微生物年鑒49277-304。16)PerutzMF．1990．人血紅蛋白與氧和一氧化碳的反應的調節機制。生理學年鑒521-25，1990。17)Perut2MF．1979．血紅蛋白氧親和力的調節球蛋白結構對血紅素的影響。生物化學年鑒48327-386。18)Ritter，S．K．1998．PassingaBoodTest．科學／技術，C＆EN1998年5月18日37-44。19)Winslow，R．M．1995．血液替代品療效的生理基礎第1章中的“血液替代品1995年的文獻”，編輯Winslow，R．M．等，Birkhauser，Boston。20)ChristensenSM，MedinaP，WinslowRW，SnellSM，ZegnaA，MariniMA．1988．可作為血液替代品使用的人血紅蛋白Ao的制備。生物化學和生物物理學方法雜志17143-154。21)MasalaB，MancaL．1994．球蛋白鏈的反相高壓液相層析檢測。酶學方法23121-44。22)SchaggerH，yonJagowG．1987．Tricine-十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳對1-100kDa的蛋白質的分離。分析生物化學(AnalBiochem)166368-376。23)LeeIH，ChoY，LehrerRI．1997．pH和鹽度對Clavanin的抗微生物特性的影響。傳染與免疫652898-2903。權利要求1．一種殺死細菌或真菌的方法，該方法包括使細菌或真菌與抗微生物有效量的選自下組的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段進行接觸完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDNO6的氨基酸序列、所述蛋白質或其多肽片段的片段和它們的組合形式。2．權利要求1的方法，其中所述血紅蛋白、血紅蛋白片段或多肽片段均來自人類。3．權利要求1的方法，其中細菌為革蘭氏陰性細菌。4．權利要求3的方法，其中革蘭氏陰性細菌選自由大腸桿菌和銅綠假單胞菌組成之組。5．權利要求1的方法，其中細菌為革蘭氏陽性細菌。6．權利要求5的方法，其中革蘭氏陽性細茵選自由金黃色鏈球菌和糞鏈球菌組成之組。7．權利要求1的方法，其中真菌為白假絲酵母。8．一種治療細菌或真菌感染者的方法，包括給予感染者抗微生物有效量的選自下組的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDNO6的氨基酸序列、所述蛋白質或其多肽片段的片段和它們的組合形式。9．權利要求8的方法，其中所述血紅蛋白、血紅蛋白片段或多肽片段均來自人類。10．權利要求8的方法，其中細菌為革蘭氏陰性細菌。11．權利要求10的方法，其中革蘭氏陰性細菌選自由大腸桿菌和銅綠假單胞菌組成之組。12．權利要求8的方法，其中細菌為革蘭氏陽性細菌。13．權利要求12的方法，其中革蘭氏陽性細菌選自由金色鏈球菌和糞鏈球菌組成之組。14．權利要求8的方法，其中真菌為白假絲酵母。15．處理受細菌或真菌污染的物質的方法，包括將抗微生物有效量的選自下組的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段應用于所述物質上或與其混合完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDNO6的氨基酸序列、所述蛋白質或其多肽片段的片段和它們的組合形式。16．權利要求15的方法，其中所述血紅蛋白、血紅蛋白片段或多肽片段均來自人類。17．權利要求15的方法，其中細菌為革蘭氏陰性細菌。18．權利要求17的方法，其中革蘭氏陰性細菌選自由大腸桿菌和銅綠假單胞菌組成之組。19．權利要求15的方法，其中細菌為革蘭氏陽性細菌。20．權利要求19的方法，其中革蘭氏陽性細菌選自由金色鏈球菌和糞鏈球菌組成之組。21．權利要求15的方法，其中真菌為白假絲酵母。22．一種藥物劑型，其中包括抗微生物有效量的選自下組的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDN06的氨基酸序列、所述蛋白質或其多肽片段的片段和它們的組合形式，還含有一種藥學可接受的載體。23．權利要求22的藥物劑型，其中所述血紅蛋白、血紅蛋白片段或多肽片段均來自人類。24．選自由SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列以及這些序列的片段組成之組的多肽。25．選自下組的哺乳動物血紅蛋白、血紅蛋白片段或其多肽片段在抗細菌或抗真菌治療中的用途完整血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α鏈、不含血紅素的血紅蛋白β鏈、血紅蛋白α-3片段、血紅蛋白β-2片段、SEQIDNO3的氨基酸序列、SEQIDNO4的氨基酸序列、SEQIDNO5的氨基酸序列、SEQIDNO6的氨基酸序列、所述蛋白質或其多肽片段的片段和它們的組合形式。全文摘要本發明提供可作為抗微生物制劑應用的組合物,其中包括哺乳動物血紅蛋白、不含血紅素的血紅蛋白α和β鏈、α和β鏈經CNBr裂解所產生的片段以及相應的合成肽。組合物對細菌和真菌均有抗微生物活性,這種活性與人嗜中性粒細胞中的已知抗微生物肽－組織蛋白酶G和azurocidin相當。敏感的微生物包括革蘭氏陰性細菌如大腸桿菌和銅綠假單胞菌、革蘭氏陽性細菌如金黃色葡萄球菌和糞鏈球菌、以及真菌類白假絲酵母。本發明還提供制備這些組合物的方法。文檔編號A61L12/14GK1280497SQ98811810公開日2001年1月17日申請日期1998年8月10日優先權日1997年10月8日發明者B·F·哈弗曼,B·杜比尼克申請人:塞拉格姆公司