含血漿蛋白的藥物組合物的制作方法

專利名稱：含血漿蛋白的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及供釋放水溶性不良、與血漿蛋白有牢固的結合親和力的治療活性化合物的新方法、產品和制劑，本發明也涉及這類產品和制劑的制備方法。
更具體的是，本發明的第一個對象是固體或液體形式的、主要供非胃腸道給藥的產品和藥物制劑，它包括或由下列物質組成a)水溶性低、與血漿蛋白有牢固的結合親和力的治療活性物質(在下文中為“活性物質”)b)處于控制聚集狀態的血漿蛋白組分其中所述的活性物質和所述的蛋白組分通過非共價鍵彼此結合，和c)進一步任選的藥學上可接受的、主要是可用于制劑添加劑，如水，穩定劑，蛋白聚集控制劑。
由所述蛋白和所述物質構成的本發明均相固體狀態產品是水溶性的，它們的水溶液可非胃腸道給藥，或可用來制備非胃腸道給藥的藥品。
本技術領域公知的是，一些生物活性化合物具有潛在的治療活性，但從不顯示出其益處，因為它們在水介質中溶解度很差。對它們中的一些從沒有進行配制，而一些沒有達到臨床開發“第一期”狀態。它們中的一些由于用于配制的材料引起的相對毒性高的“幾乎沒有生物相容性的”制劑。一個典型的例子由紫杉酮(taxones)組代表，特別是紫杉醇(paclitaxel)為強的細胞生長抑制劑，但其使用減少，這是由于在Klucel里已知的配方的毒性吐溫80或Klucel的和稀釋劑12，11 Cremaphor EL乙醇的混合物。[癌癥化療和藥理學(Cancer Chemotherapyand Pharmacology)(1994)34465-471；國家癌癥機構雜志(1990)1247-1259]。Cremaphor EL(聚氧乙烷化的蓖麻油)具有內在毒性，會導致血管擴張、無生氣、低血壓等。為了降低溶劑和輔劑的毒性副作用，提議使用一系列特殊的方法在較長時間里使用極少劑量，在治療前進行藥物預處理等。(USP 5665761；USP5621001；USP 5670537等)。進一步的建議是使活性物質與包含于蛋白壁的殼里的分散劑結合(USP 5 560 933)，所述的蛋白壁的殼通過使蛋白質與諸如豆油的油反應而形成—這類制劑可用于紫杉醇和兩性霉素。但即使最近的文獻中也警告注意如紫杉醇的使用療程(參見，如“實用指南(Gudiance for Industry”，美國人類健康服務部(CDER)頒布，1997，9，OGD-L-8)，其中—由于反應的過度敏感性—所有用紫杉醇治療的病人應當用皮質類固醇、苯海拉明和H2拮抗劑預治療。
進一步提議通過使其溶于有機溶劑或有機溶劑與水的混合物里，向所述的溶液里加入水性的HSP溶液，以使不溶的活性物質析出的結晶最少來制備特定的水不溶的二氫吡啶的非胃腸道給藥制劑(匈牙利專利No.198381；DE申請3702105)。但是，所得的液體仍然不是澄清的溶液。
進一步已知的是，一些水不溶活性物質與蛋白質或血清蛋白具有相當大的親和力。一些文獻提及了對紫杉醇的結合[Cancer Chem. and Pharm.(1994)34465-471]；對雙氯苯咪唑、fluconazole、兩性霉素B的結合[感染(Infection)，23(5)292-297(1995)9月]；對氨甲酰氮的結合(J.Chromatogr.B Biomed.Appl.669(2)281-288(1995，7，21)]；硫唑嘌呤的結合[Ann.N.Y.Acad.Sci，685(1993)175-192]，對普魯泊福的結合[J.Chromatogr.Sci(1992)164-166]。根據新文獻[柳葉刀，第352卷(1998)540-542]，藥物Taxol使紅細胞發生卷軸，作為所述藥物溶劑的聚環氧乙烷蓖麻油也是這樣。一些水不溶藥物(環孢素，鬼臼噻吩甙，紫杉醇，兩性霉素B)用毒性的Cremaphor配制。根據我們的了解，對于，如ritonavit，氨甲酰氮，喜樹堿，硫唑嘌呤，雙氯苯咪唑，氟康唑等，目前市場上尚沒有活性高但水不溶的藥物供非胃腸道、靜脈內給藥形式。
因此，需要解決存在的問題，從而使有治療價值的水不溶物質可以水溶形式，優選的是非胃腸道對需要以所述活性組分治療的病人進行給藥。
本發明的目的是滿足實踐上具有對血漿蛋白有牢固結合親和力的水不溶活性組分的需要。
本發明基于這樣的認知在給藥前活性物質與帶有非共價鍵的合適的蛋白結合呈現了一種新穎的和高度有效的釋放系統，供水溶性差的活性組分給藥。根據本發明，產生均相的固體產品，然后溶于水，從而得到生物相容的、澄清的水溶液，它適合非胃腸道給藥。因此本發明提出了不需引入毒性元素給予所需水不溶活性組分的手段，在某些情況下，它比以前更為有效。
本申請所用的定義如下，不再重復R1代表叔丁基-氧基羧酸酰胺或苯甲酰胺；
R2代表氫或酰基，優選的是乙酰基；低水溶解度表示，室溫下水中的溶解度＜1.10-4M)；與血漿蛋白質牢固的結合親和力表示在室溫、自發平衡下，水介質中＞90％物質與蛋白質結合；HSA人體血清白蛋白，WFI注射用水。
本發明的一個目的是主要供非胃腸道給藥、含水溶解度低、與控制聚集狀態下的人體血漿蛋白組分牢固結合親和力的水溶性人體藥物制劑。
本發明的另一個目的是主要供非胃腸道給藥、含水溶解度低、與控制聚集狀態下的動物血漿蛋白組分牢固結合親和力的水溶性獸藥制劑。
可在本發明產品和藥物制劑中存在的，因此能用于制備產品和組合物的人體或動物血漿可為任何天然形成的蛋白質或血漿組分，如血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素以及它們的重組類似物。可使用人體和動物蛋白。在旨在治療人體的化合物和組合物中，優選的是使用天然的人體血清和重組人體血清蛋白。
本發明實踐上水不溶的活性組分包括很大范圍的化合物，唯一的限制是它們必須對所選擇的血漿蛋白有牢固的親和力。這類活性組分的例子包括下列治療劑諸如紫杉類藥物(taxonoide)的細胞生長抑制劑，抗生素，維生素，抗炎劑，止痛藥，抗驚厥藥，免疫抑制劑，抗癲癇藥，抗焦慮藥，催眠藥，抗真菌藥，抗凝血藥，脂質體過氧化酶抑制劑，冠狀動脈擴張劑，抗心率失常藥，強心藥，促尿酸尿藥，抗血栓形成藥，類固醇激素(孕激素，雄激素，睪丸酮)和/或光敏劑。在仔細考慮治療劑量和對必須滿足這類改變的所選擇的蛋白的結合親和力后，幾個活性組分可同時給藥。
本發明的一個實施方案提供了含至少一種下列物質的上述產品和藥物制劑兩性霉素B、阿霉素類似物、炎爽痛、硫唑嘌呤、溴吡二氮、喜樹堿、氨甲酰氮、氯硝安定、環孢素A、安定、雙香豆素、洋地黃毒甙、潘生丁、雙異丙吡胺、氟硝安定、二甲苯氧庚酸、ketochlorin、酮康唑、雙氯苯咪唑、氮氟滅酸、去甲羥基安定、苯巴比妥、苯妥英、孕酮、普魯泊福、ritonavir、苯磺唑酮、噻丙吩(suprofene)、tacrolimus、三苯氧胺、紫杉類藥物、睪丸酮、tirilazad、三甲補骨脂內酯、丙戊酸和/或華法令。
本發明優選的實施方案由含通式I的紫杉類藥物的上述產品或制劑構成。
本發明另一個優選的實施方案包含或由紫杉醇(paclitaxel)和人體血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素或一些其它的人體血清蛋白組分構成。
本發明特別重要的代表方案是均相的、固體、水溶產品，所述的產品由至少一種選自兩性霉素B、阿霉素類似物、炎爽痛、硫唑嘌呤、溴吡二氮、喜樹堿、氨甲酰氮、氯硝安定、環孢素A、安定、雙香豆素、洋地黃毒甙、潘生丁、雙異丙吡胺、氟硝安定、二甲苯氧庚酸、ketochlorin、酮康唑、雙氯苯咪唑、氮氟滅酸、去甲羥基安定、苯巴比妥、苯妥英、孕酮、普魯泊福(propofol)、ritonavir、苯磺唑酮、噻丙吩(suprofene)、tacrolimus、三苯氧胺、紫杉類藥物、睪丸酮、tirilazad、三甲補骨脂內酯、丙戊酸和/或華法令的至少一種活性物質構成，也由至少一種選自人體血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分構成，其中所述的活性物質和蛋白組分通過非共價鍵彼此連接，其中所述活性物質與所述蛋白組分的摩爾比范圍是1∶0.05到1∶100，優選的是1∶0.1到1∶50。
上述優選的代表是下列均相的、固體、水溶產品，由下列一對活性物質和蛋白質構成通式I的紫杉類藥物—式I中，R1代表叔丁基-氧基-羧酸酰胺或苯甲酰胺，R2代表氫或任何酰基，優選的是乙酰基-和血漿蛋白組分；紫杉醇和人體血清白蛋白，重組人體血漿蛋白和/或γ-球蛋白；兩性霉素B和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白；喜樹堿和人體血清白蛋白、重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白；氨甲酰氮和人體血清白蛋白、重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白；環孢素A和人體血清白蛋白、重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白；普魯泊福和人體血清白蛋白、重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白。
從上述解釋可清楚地了解到，本發明覆蓋了上述固體狀態和水溶液形式的藥物制劑。
由于它涉及其天然結構，更具體地說，涉及它們的化學組合物，蛋白質分子趨于通過它們特異性的結合位點進行聚集。聚集程度根據蛋白質存在其中的溶液參數而定(溫度、組成、組分的相對和絕對濃度、pH、離子強度)。
用于本發明的血漿蛋白優選的為穩定或控制的聚集狀態。其目的是避免抑制蛋白質與所用的活性組分作最佳結合的蛋白質聚集。通過存在的其它分子使能占據參與聚集的大分子上的一些或全部的結合位點，以避免多個蛋白質—蛋白質聯合來控制蛋白質不需要的聚集。一些市售的蛋白質為控制的聚集狀態含穩定劑以避免聚集。但該狀態不總是本發明里進入與活性物質結合的最佳狀態。
根據本發明，術語“控制的聚集狀態”指蛋白質能與活性物質以所需的方式結合時的最佳結合狀態。當活性物質分子最大量結合于蛋白質時不需要該狀態，但當需要最高結合比例時則需要該狀態。
這表示，在一些情況下我們必須從，如市售的血清白蛋白組分里除去其它賦形劑，如穩定劑、離子組分等。當實施本發明方法時這可能是必須的起始步驟。建立合適聚集狀態的所需條件嚴格地根據真實的活性物質和相關的蛋白質組分而定。
下面提供的例子(如紫杉醇和環孢素A)顯示，沒有其它賦形劑(如穩定劑、離子組分、鹽等)存在下，它們與血漿蛋白組分的結合較高。但是，其它的活性物質(如兩性霉素B和普魯泊福)對在蛋白質穩定劑存在下的結合沒有任何干擾。
因此，對本發明使用的每個和每對活性物質/蛋白質必須建立蛋白質合適的特定聚集狀態。
當使用紫杉醇和HSA對時重要的是消除市售HSA中所有的穩定劑如N-乙酰基-D，L-色氨酸，堿性辛酸鹽(在60℃下進行巴斯德殺菌期間用于穩定蛋白質)。兩性霉素B或普魯泊福也可在這些穩定劑存在下與HSA結合。在某些場合下，當所需的聚集狀態可通過水達到時，必須經如下列實施例之一的方法除去其它組分。
必須考慮下列因素以使本發明的特定物質與特定血漿蛋白組分的結合最佳a)物質在蛋白質上占據的結合位點的特性；b)會占據相同結合位點，甚至競爭結合的存在于溶液里可能的其它組分；c)證實真正結合位點和結合順序的理化條件；d)已知的治療方向，如i)在有單位(unic)運送特性的HSA上的紫杉醇；ii)在有已證實的載體治療活性的白介素上的紫杉醇；iii)在有已證實的載體治療活性的γ-免疫球蛋白上的環孢素A；iv)在有已證實的載體治療活性的γ-免疫球蛋白上的ritonavir；制劑的穩定性。
最簡單的聚集控制劑之一是水。用適當量的水可抑制不需要的聚集，使供本發明備用的蛋白質—它呈“控制的聚集形式”。
根據本發明的一個實施方案，化合物和組合物可含蛋白質聚集控制劑或穩定劑和/或溶液穩定的輔助添加劑。這類添加劑的例子如下水，氯化鈉，緩沖劑，多元醇(如甘油)，水溶性糖衍生物(優選的是甘露醇，山梨醇和/或半乳糖醇和其它物質)。
本發明的進一步目的包括制備本發明的新的產品和藥物制劑的方法。該方法包括下列步驟a)使水溶解度低并與血漿蛋白有牢固結合親和力的治療活性化合物(“活性物質”)溶于可與水混和的藥學上可接受的有機溶劑，b)使所述的溶液與處于聚集狀態的血漿蛋白組分的水溶液混合，任選的是c)另外的藥學上可接受的輔助添加劑—如蛋白質聚集控制劑和/或穩定劑—從而得到含所述活性物質和通過非共價鍵結合的血漿蛋白組分的的真實溶液；d)優選地將溶液或其濃縮物進行超濾、滲析、二次過濾和/或凍干法，或組合處理來除去有機溶劑從而得到含活性物質和血漿蛋白組分的均勻的、水溶性液體或固體產品或藥物制劑；e)任選地用水溶解或稀釋固體或液體，從而得到適合于治療給藥的澄清、液體組合物，和f)任選地將產品制成非胃腸道給藥制劑(劑型)供直接使用。
當按本發明制備由活性物質和通過非共價鍵與蛋白質連接的蛋白質構成的均相固體產品時，優選的是使用包括下列步驟的方法a)將治療活性化合物溶于可與水混和的、藥學上可接受的有機溶劑，b)使所述的溶液與處于控制聚集狀態的選定的血漿蛋白組分的水溶液混合，從而得到含所述活性物質和通過非共價鍵與蛋白質組分結合在一起的所述蛋白組分的真溶液；c)除去有機溶劑，凍干該溶液或它的濃縮物。
消除有機溶劑的合適方法依據于所涉及的活性物質和蛋白質。它遵從于活性產物的性質(包括活性物質和蛋白質的配對物)，以使施加方法的條件保證溫和。凍干得到了均相、固體狀態的水溶性產物，它能再溶于水，并可腹腔內給藥。有利地使上述步驟進行組合，如首先制備活性物質/蛋白質配對物，然后使所述濃縮物凍干可使該方法更為經濟。一些活性物質/蛋白質配對物(如兩性霉素B/血清白蛋白對)可通過超濾或滲析成功地進行濃縮。其它配對物(如紫杉醇/HSA)優選地通過凍干處理。一些配對物可應當首先進行超濾，所得的濃縮物然后進行凍干。
本技術領域人員很清楚，在用水制備非胃腸道藥物稀釋的進程中包括用另外的含諸如氯化鈉的非胃腸道上可接受的添加劑的這類水溶液進行稀釋。
本發明在上述步驟a)中用來溶解活性組分的合適溶劑應當具有下列性質●它與水的混合物應當能完全溶解活性組分，●其水含量＞50％的混合物應當不會使所用的蛋白質變性。
在開始用活性組分和蛋白質實施例本發明方法前，必須根據上述基礎選擇合適的溶劑。適用的溶劑中，混合物含＞50％水仍能溶解活性組分。
可用于上述方法步驟a)的優選溶劑是，如選自脂族C(2-4)一元醇或多元醇，70-100％乙醇，二甲基甲酰胺，甲基甲酰胺。
制備含蛋白質的溶液時，可存在一種聚集控制劑和/或溶液穩定劑。這類添加劑包括進一步或優選量的水。它們也包括一些試劑它們能部分占據一些蛋白質結合位點，以避免下列試劑引起的聚集氯化鈉，緩沖劑，諸如甘油的多元醇和/或優選的是甘露醇，山梨醇，半乳糖醇的水溶性糖衍生物。
當對于任何活性組分選擇最佳條件時，應通過初級測量來測定最佳結合親和力和相應的聚集性質。在下列實施例中，我們揭示了這類測定的完整的方法。
根據本發明的一個優選技術方案，用于步驟a)的化合物是紫杉醇和天然血漿組分，如血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素，或所述物質的重組體。本發明另一個實施例方案包括使用了水不溶的細胞生長抑制劑，(如紫杉類藥物)、抗生素、維生素、抗炎劑、止痛劑、抗充血劑、免疫抑制劑、抗癲癇藥、抗焦慮藥、催眠藥、抗真菌劑、抗凝血劑、脂質體過氧化酶抑制劑、冠狀動脈擴張劑、抗心率失常藥、強心藥、促尿酸尿藥、抗血栓形成藥類固醇激素(孕激素、雄性激素、睪丸酮)和/或光敏劑。可用于本發明方法的優選的活性物質包括下列兩性霉素B、阿霉素類似物、炎爽痛、硫唑嘌呤、溴吡二氮、喜樹堿、氨甲酰氮、氯硝安定、環孢素A、安定、雙香豆素、洋地黃毒甙、潘生丁、雙異丙吡胺、氟硝安定、二甲苯氧庚酸、ketochlorin、酮康唑、雙氯苯咪唑、氮氟滅酸、去甲羥基安定、苯巴比妥、苯妥英、孕酮、普魯泊福、ritonavir、苯磺唑酮、噻丙吩(suprofene)、tacrolimus、三苯氧胺、紫杉類藥物、睪丸酮、tirilazad、三甲補骨脂內酯、丙戊酸和/或華法令。
本發明優選的實施方案由制備均相、固體、水溶產品構成，所述產品由紫杉醇和人體血清白蛋白構成，其中活性組分和血漿蛋白組分為非共價結合。本發明再一個優選的實施方案包括制備由通式I的紫杉類藥物e和血漿蛋白組分構成的均相固體、水溶的產物的方法，其中活性組分和血漿蛋白組分為非共價結合。
從上述解釋可以清楚地知道，本發明不限于上述列出的任何活性物質，也不限于上述列出的蛋白質。
本發明的再一個目的包括使用本發明產品和制劑來治療人類或獸類的患者人。該方法包括對需要這類治療的病人給予活性成分治療有效量的本發明組合物或根據本發明方法制備的組合物。給藥劑量根據所用的活性組分和蛋白質而定。當特定的已知活性通過其它給藥途徑給藥時，給藥劑量應能保證至少有相同的有效血藥濃度。
用對血漿蛋白有牢固結合親和力的水不溶性治療活性物質以非胃腸道途徑治療人類或獸類患者的優選方法是用有效劑量的下列產物，優選的是用下列劑量范圍(以活性物質為基計算)的活性物質對需要治療的病人非胃腸道給藥紫杉醇/白蛋白70-280毫克/治療；普魯泊福/白蛋白6-10毫克/kg/小時；喜樹堿/白蛋白，二甲苯氧庚酸/白蛋白，環孢素A/白蛋白3-5毫克/kg/天；兩性霉素B/白蛋白，最多為1.5毫克/kg/天，從而相同的劑量范圍用于含各自重組蛋白的化合物。
本發明的化合物、組合物和方法的優點如下●可以避免使用生物上不相容的賦形劑，以消除或總的避免劑量限制的副作用，涉及這類組分的是如毒性溶劑、表面活性劑、乳化劑等。
●使用血漿蛋白組分作為藥物賦形劑沒有另外的毒性作用，相反的是它們改進了病人的耐受力，如在化療情況下。
●在需要情況下，與市售的藥物相比本發明藥物可增加使用劑量，因此可以改進治療的全面成果。
本發明在下列非限定性實施例中作更詳細的闡述
實施例I.制備方法，分析下列方法用于測定特定活性組分(物質)與蛋白質的結合a)超濾使含控制聚集狀態的蛋白質的水溶液和活性組分在合適溶劑里的溶液混合形成的澄清溶液1毫升樣品經超濾膜(截留限定＞30000Da)過濾，測定超濾濾液組分里的活性組分。測定未過濾溶液里的活性組分濃度時，總量(＞90％)以未改變形式得到回收。
b)凍干使1毫升上述溶液凍干。凍干后使固體殘留物溶于約1.00毫升蒸餾水，得到澄清溶液。測定該溶液的活性組分濃度，在水相沒有發現活性組分，但從蛋白組分里可回收100％。
c)分析活性組分通過HPLC分析測定活性組分，用UV光譜檢測。
如在Waters Millennium(Waters，美國馬里蘭)HPLC系統上進行HPLC分析。它的組成是Waters 616泵；Waters 600S控制器；Waters717+自動樣品注射器，溫度穩定設置在+5℃；Waters 996二極管排列UV/VIS檢測器。啟動該系統，通過在Digital P486/166(Digital Equipments，英國)個人電腦上運行的WatersMillnnium v.2.02.0來獲取數據。對每個化合物進行個體最優化條件，下面例舉一些化合物。
d)證實化學結構LC/MS方法用來證明從連接組分里回收的物質的化學結構不變。LC/MS分析在用ES或APCI+離子化模式的Finnigan Navigator(Finnigan，英國曼徹斯特)single quandrupole LC/MS質譜儀上進行，它帶有MassLab V.2.0數據獲取系統的Digital Venturis FX/166(Digital Equipments，英國)個人電腦。根據參考文獻，應用條件對于每個特定的物質必須個體最優化—下列實施例給出了一些例子。
e)樣品的制備下面是典型的樣品制備方法，通過HPLC和/或LC/MS分析從樣品中測定總濃度/物質含量。
凍干瓶子的固體組分用水重新組成，該溶液與無水乙醇以1∶1(體積)比混合，沉淀去血漿蛋白，同時物質溶解。迅速離心后，溶液適合進行HPLC或LC/MS分析。在LC/MS里，通過直接樣品導入或經HPLC通過組分彼此分離后進行分析。兩種方法得到了母體化合物和/或可能降解產物的化學結構的有價值的信息，下面給出了一些產物的更詳細的方法。
來自HPLC和LC/MS研究的光譜數據和質譜數據可證實用作起始物質的已知生物活性物質和根據本發明，與蛋白組分連接后回收的化合物之間的化學等價性。
f)所用的物質所用的活性物質為USP XXIII質量。
下列血漿蛋白組分用于實驗 (*＝歐洲藥典質量)人體白蛋白20％溶液* 人類RT.公司，匈牙利RecombuminTM25％ DELTA Biot.Ltd，英國諾丁漢人體白蛋白20％ Biotest Ph.，德國Albumeon USPCenteon Bio-Services，美國人體白蛋白20％Behring* Centeon Ph.GmbH，澳地利人體γ球蛋白16％* 人類RT.公司，匈牙利II.制備和化學或物理分析在下列實施例中，血漿蛋白基底結合比的平均范圍為1∶0.1-100。物質HSA結合比根據HSA分子量＝＝66500，人體γ球蛋白分子量＝＝150000的推斷來計算。[參見11 Science，244.P.1195-1198，1989；Vox Sang，70203-209頁，1996]。
實施例II.1使20％(3.08×10-3M)控制聚集狀態下的人體血清白蛋白溶液和1mg/ml(1.17×10-3M)紫杉醇在無水乙醇里的溶液以4∶1比率混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量水中以保證得到濃度為20％人體血清白蛋白的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99％紫杉醇與人體血清白蛋白結合。這代表人體血清白蛋白∶紫杉醇為1∶0.1。
實施例II.2使4.44％(6.67×10-4M)處于控制的聚集狀態的人體血清白蛋白溶液和2.0mg/ml(2.34×10-3M)紫杉醇(分子量853.92)在無水乙醇里的溶液以9∶1的比率混合，攪拌直到得到澄清溶液。如實施例II.1所述進-步處理溶液。
對來自超濾濾液和保留組分進行結合測定，顯示紫杉醇與人體血清白蛋白結合達99％。這代表人體血清白蛋白∶紫杉醇比為1∶0.39。
實施例II.3使4.44％(6.67×10-4M)處于控制的聚集狀態的重組人體血清白蛋白溶液和2.0mg/ml(1.40×10-3M)紫杉醇在無水乙醇里的溶液以9∶1的比率混合，攪拌直到得到澄清溶液。凍干溶液；使固體殘留物再溶于足量水中以保證得到濃度為20％重組人體血清白蛋白的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99％紫杉醇與人體血清白蛋白結合。這代表重組人體血清白蛋白∶紫杉醇為1∶0.24。
實施例II.4使2.25％(1.5×10-4M)處于控制的聚集狀態的人體γ球蛋白溶液和0.1mg/ml(1.171×10-4M)紫杉醇在無水乙醇里的溶液以9∶1的比率混合，攪拌直到得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量水中以保證得到濃度為16％人體γ球蛋白的澄清溶液。
從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％紫杉醇與人體血清白蛋白結合。這代表人體γ球蛋白∶紫杉醇之比為1∶0.71。
在上述實施例II.1到II.3中，用下列方法通過HPLC對紫杉醇定量柱MN Nucleosil C185微米250×2毫米流動相乙腈∶水＝73∶27流速 0.30ml/分鐘溫度 室溫檢測 273納米下典型的保留時間 5.9分鐘 k’＝2.93用LC/MS測定物質并發現沒有改變[參見質譜分析里的快速信息(RapidCommunications in Mass Spectrometry)第11卷1025-1032頁，1997，和第9卷495-502頁，1995]。圖6顯示了對比結果圖6A顯示標準質譜，圖6B顯示再溶解樣品的曲線。圖6C顯示紫杉醇的碎片。
LC/MS參數離子化APCI+界面；氮氣流速300升/小時；溶劑乙腈∶緩沖液＝60∶40，其中緩沖液是10mM甲酸銨，用10％甲酸調節到pH5。0；流速0.300毫升/分鐘。
紫杉醇含量測定C-18反相HPLC方法用來定量測定來自實施例II.1到II.27的不同溶液的紫杉醇。將樣品注入HPLC系統，樣品在≥50％乙醇溶液里，以防止物質沉淀。
結合在8±2℃下平衡15分鐘后測定物質與血漿蛋白的結合。
在經合適膜(其截留必須大于蛋白質分子量)超濾后可測量物質的分布，測定超濾濾液組分(代表未結合的組分)里和超濾前溶液里的物質濃度，蛋白質變性時釋放了結合部分(代表總量)。為了使蛋白質變性并釋放已結合的組分，以1∶1的比率使用預冷至8+2℃的無水乙醇。根據稀釋的倍數計算真正的濃度值和含量。
實施例II.5到II.21濃度范圍為20％(3.08×10-3M)到0.02％(3.08×10-6M)與濃度范圍為20毫克/毫升(2.34×10-2M)到0.01mg/ml(1.17×10-5M)的紫杉醇在無水乙醇中的溶液混合，得到總是澄清的溶液。詳細情況如表I所示。所有的測量進行三次，對計算結果進行平均。
表I

圖例[T]T 加入人體血清白蛋白后總的紫杉醇濃度[HSA] 人體血清白蛋白濃度n(TB)/n(HSA) 每摩爾人體血清白蛋白結合的紫杉醇摩爾數n(TB)/n/TT/×100％結合的紫杉醇百分數圖7顯示了紫杉醇濃度變化(具有0.08％HSA，10％乙醇，0.002mg/ml紫杉醇)；圖8顯示了白蛋白濃度變化(具有0.004-16.0％HSA，20％乙醇，0.2mg/ml紫杉醇)。圖9顯示了與HSA結合的紫杉醇的變化(帶有0.8％HSA，10％乙醇，0.1-2.0mg/ml紫杉醇)在pH4.0到8.5時對pH的函數。圖中的符號相應于下列實施例
實施例II.18-◆-◆-實施例II.19-○-○-實施例II.20-×-×-實施例II.15-◇-◇-實施例II.21-▲-▲-實施例II.22對于動物血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和白介素用實施例II.2到實施例.21的相似方法。
實施例II.23處理市售的人體血清白蛋白或重組人體血清白蛋白(在白蛋白后)以得到控制聚集狀態，具有最好的分子結合條件，包括除去穩定劑，如辛酸鈉、N-乙酰基-D，L-色氨酸和其它離子組分和鹽。
a)超濾方法用鹽酸調節含10％白蛋白的溶液pH至3.0，用重蒸水稀釋到5％蛋白含量。用超濾(膜截留限度為30000kD)濃縮溶液，使蛋白質含量為10％。
用1.0mM鹽酸再將溶液稀釋到5％蛋白質含量。用超濾(膜截留限度30000kD)濃縮溶液到10％蛋白質含量。
重復過程12×，然后用2.0M氫氧化鈉水溶液調節pH到6.9，用重蒸水稀釋溶液到5％濃度蛋白質含量。再用超濾(膜截留限度為30000kD)使溶液濃縮到10％蛋白質含量。
用重蒸水將溶液再稀釋回5％蛋白質含量。用超濾(膜截留限度為30000kD)使溶液濃縮到10％蛋白質含量、重復過程10×，得到純凈的蛋白質組分，足以除去其它賦形劑。此時，超濾液的導電性接近于用于稀釋的重蒸水的傳導電性。該蛋白質適合用于與諸，如紫杉醇或環孢素結合。
b)不使用超濾而用滲析得到相似的結果。處理需要約48小時。
實施例II.24使0.8％(1.203×10-4M)HSA溶液和4.0mg/ml(4.33×10-3M)兩性霉素B溶液(分子量＝924.09)在DMF里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量水中以保證得到濃度為20％HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99.7％兩性霉素B與HSA結合。這代表HSA∶兩性霉素B之比為1∶4。
實施例II.25使0.8％(1.203×10-4M)重組人體血清白蛋白溶液和40.0mg/ml(4.33×10-2M)兩性霉素B溶液在DMF+HCl里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量水中以保證得到濃度為20％重組HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99.5％兩性霉素B與HSA結合。這代表HSA∶兩性霉素B之比為1∶40。
兩性霉素B遵照下列方法的HPLC進行測量柱 MN Nucleosil C185微米250×2mm流動相 乙腈∶緩沖劑＝1∶1(緩沖劑用三乙胺調節到pH4.0的0.2％甲酸)流動速率0.30ml/分鐘溫度 室溫檢測在365納米下典型的保留時間 5.3分鐘，k’＝1.41用LC/MS測定物質，發現沒有改變，圖2顯示了對比的結果圖2A顯示了標準的質譜，圖2B顯示了再溶解樣品的曲線。圖2C顯示了兩性霉素B片段。
LC/MS參數離子化ESI+界面；氮氣流動速率300升/小時；溶劑20mM甲酸銨，用10％甲酸調節為pH4.0；流動速率0.300ml/分鐘。
實施例II.26使0.4％(6.015×10-5M)處于控制聚集狀態的HSA溶液和0.14mg/ml(4.02×10-4M)喜樹堿(分子量＝348.36)在無水乙醇里的溶液以4∶1混合，攪拌得到澄清溶液。凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％喜樹堿與HSA結合。這代表HSA∶喜樹堿為1∶5.34。
實施例II.27使0.4％(6.015×10-5M)處于控制聚集狀態的重組HSA溶液和0.14mg/ml(4.02×10-4M)喜樹堿在無水乙醇里的溶液以4∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％重組HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％喜樹堿與HSA結合。這代表重組HSA∶喜樹堿為1∶5.34。
我們按下列條件的HPLC測定喜樹堿柱 MN Nucleosil C185微米250×2mm流動相 乙腈∶緩沖劑＝33∶67流動速率 0.33ml/分鐘溫度 室溫檢測 在356納米下典型的保留時間 6.9分鐘，k’＝2.45用LC/MS測定物質，發現沒有改變[癌癥研究，第56卷3689-3694頁，1996]。
實施例II.29使0.4％(6.015×10-4M)處于控制聚集狀態的HSA溶液和8.0mg/ml(3.39×10-2M)氨甲酰氮(分子量236.27)在無水乙醇里的溶液以19∶1混合，攪拌得到澄清溶液。凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％氨甲酰氮與HSA結合。這代表HSA∶氨甲酰氮為1∶2.8。
我們按下列條件的HPLC測定氨甲酰氮柱 MN Nucleosil C185微米250×2mm流動相 乙腈∶緩沖劑＝1∶1(緩沖液用三乙胺將pH調節到7的0.2％甲酸)流動速率 0.25ml/分鐘溫度 室溫檢測 在285納米下典型的保留時間 5.3分鐘，k’＝1.12用LC/MS測定物質，發現沒有改變[Eur.J.Clin.Chem Clin.Biochem，第35卷(10)755-759頁，1997]。圖3顯示了比較結果圖3A顯示標準質譜，圖3B顯示再溶解樣品曲線，圖3C顯示氨甲酰氮的片段。
LC/MS參數離子化ESI+界面；氮氣流速300升/小時；溶劑2mM甲酸銨；流速0.250ml/分鐘。
實施例II.30使4.0％(6.015×10-4M)處于控制聚集狀態的HSA溶液和1.0mg/ml(8.33×10-4M)環孢素A(分子量1202.63)在無水乙醇里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示97％環孢素A與HSA結合。這代表HSA∶環孢素A為1∶0.14。
實施例II.31使2.0％(3.008×10-4M)處于控制聚集狀態的重組HSA溶液和1.0mg/ml(8.33×10-4M)環孢素A在無水乙醇里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％重組HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％環孢素A與重組HSA結合。這代表重組HSA∶環孢素A為1∶0.29。
實施例II.32使2.25％(1.50×10-4M)處于控制聚集狀態的人體γ球蛋白溶液和1.0mg/ml(8.33×10-4M)環孢素A在無水乙醇里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為16％人體γ球蛋白的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示98％環孢素A與人體γ球蛋白結合。這代表人體γ球蛋白∶環孢素A為1∶0.56。
我們按下列條件的HPLC測定環孢素A柱 MN Nucleosil C185微米250×2mm流動相 乙腈∶水∶甲醇∶磷酸＝700∶260∶40∶0.05流動速率 0.350ml/分鐘溫度 80℃熱穩定檢測 在205納米下典型的保留時間 7.5分鐘，k’＝2.95如結果顯示，用LC/MS測定物質，發現沒有改變[1]。圖4顯示了比較結果圖4A顯示標準質譜，圖4B顯示再溶解樣品曲線，圖4C顯示環孢素A的片段。
LC/MS參數離子化ESI+界面，氮氣流速300升/小時；溶劑∶乙腈/水＝60/40；溶劑流速0.350ml/分鐘。
實施例II.33使0.4％(6.015×10-5M)HSA溶液和2.0mg/ml(1.12×10-2M)普魯泊福(分子量178.27)在無水乙醇里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99％普魯泊福與HSA結合。這代表HSA∶普魯泊福為1∶18.3。
實施例II.34使0.4％(6.015×10-5M)重組HSA溶液和2.0mg/ml(1.12×10-2M)普魯泊福在無水乙醇里的溶液以9∶1混合，攪拌得到澄清溶液。
凍干該溶液；使固體殘留物再溶于足量的水，以保證得到濃度為20％重組HSA的澄清溶液。從超濾濾液和保留組分中測定結合，顯示99％普魯泊福與HSA結合。這代表重組HSA∶普魯泊福為1∶18.3。
我們按下列條件的HPLC測定普魯泊福柱 MN Nucleosil C185微米250×2mm流動相 乙腈∶水＝73∶27流動速率 0.30ml/分鐘溫度 室溫檢測 在273納米下典型的保留時間 6.1分鐘，k’＝1.77如結果顯示，用LC/MS測定物質，發現沒有改變[J.of Chromatography B，669358-365頁，1995]。圖5顯示了比較結果圖5A顯示標準質譜，圖5B顯示再溶解樣品曲線，圖5C顯示普魯泊福的片段。
LC/MS參數離子化APCI+界面，氮氣流速300升/小時；溶劑乙腈/水＝73/23；溶劑流速0.300ml/分鐘。
實施例II.35使9.0毫升0.8％(1.213×10-4M)HSA溶液和1.0毫升4.0mg/ml(4.33×10-3M)兩性霉素B在二甲基甲酰胺里的溶液混合得到澄清溶液。在4℃下使該溶液對2.0升水(WFI)避光滲析達20小時。
用實施例II.24的測定方法測得，結合為99.6％，代表HSA∶兩性霉素B的比為1∶3.5。
滲析過程重復5次，使溶液中的DMF濃度降低到檢測限度(2×10-9M)下。
III.劑型實施例III.1到III.6按照如上所述的凍干制備方法得到合適的藥物劑型。將固體再溶于適量體積的注射用水以使溶液中HSA濃度為20％，下表綜述了一些活性物質在適合治療使用的該溶液中的濃度

上述劑型可進一步裝入安瓿供注射和輸液用。IV.生物實施例對生物等價的研究使本發明新制劑與已知用于治療的含水溶解度差的相同活性物質的制劑進行比較，測定生物等價。這類已知的制劑制備于聚環氧乙烷化的蓖麻油(CremophorEL)和無水乙醇里。
使用的物質溶于聚環氧乙烷化的蓖麻油(Cremophor EL)∶無水乙醇＝1∶1混合物的紫杉醇與本發明實施例II.2制備的紫杉醇/HSA水溶液進行比較。
實施例IV.1體外研究體外進行比較研究以測定對人體腫瘤細胞系的抗增殖和細胞毒性活性。在K562人體骨髓白血病、MCF-7和MDA-231乳腺和OVCAR-5卵巢癌細胞系上比較紫杉醇的Cremophor EL/無水乙醇制劑和紫杉醇/HSA制劑[抗癌研究，第16卷2469-2478，1996]。
方法菌落生長抑制分析用兩個上述制劑里的8個不同濃度的藥物加上在DMSO/鹽水溶液里的作為參照處理細胞系單層培養物。使培養物培養24、48、72、96和120小時。菌落用結晶紫染色，按由未處理細胞形成的菌落以百分數來計算被處理細胞的存活率。表IIA到IVB顯示不同細胞系得到的結果。在每個研究中顯示了被處理細胞的存活率，按未處理細胞形成的菌落以百分數來計算。所有的數值是三個實驗的平均值。
表IIA細胞系MCF7乳腺癌制劑紫杉醇/Cremophor EL和無水乙醇

<p>表IIB細胞系MCF7乳腺癌制劑紫杉醇/HSA<

>表IIIA細胞系MDA-231乳腺癌制劑紫杉醇/Cremophor EL和無水乙醇<

<p>表IIIB細胞系MDA-231乳腺癌制劑紫杉醇/HSA

表IVA細胞系K562人體骨髓白血病制劑紫杉醇/Cremophor EL和無水乙醇

表IVB細胞系K562人體骨髓白血病樣品紫杉醇/HSA

實施例IV.2體內藥代動力學試驗從治療角度來看，可考慮生物等價，顯示出相等的藥代動力學特征，如AUC(曲線下面積)、消除常數、對相同樣品給予相同劑量后血漿半衰期。在大鼠上對如實施例IV.1所述的兩個制劑進行這類實驗(Semin Oncol，第21卷(5增補8)53-62頁，1994)。
AUC表示血漿濃度對時間曲線下的面積。在不同時間點處測量給予的化合物的血藥濃度。
在大鼠上的藥代動力學研究方法以2.5mg/kg紫杉醇劑量對CR.(Wi)BR大鼠(體重為380-420克)進行1.0毫升靜脈注射成藥團，如下面指出的時間點處從三個動物里取出10毫升血樣，放入肝素化的試管里

通過5℃下快速離心分離血漿組分，在-70℃下冷凍到進行分析測量為止。
樣品制備使冷凍血漿樣品溫熱到+8℃，在5000轉/分鐘下離心5分鐘。取出0.300-0.500ml澄清血漿溶液，放置在Oasis HLB 1 cc SPE(固相)萃取柱上。在血漿樣品負載到柱體上前，柱用1毫升甲醇，然后用1毫升水進行淋洗來預適應環境。紫杉醇吸附在SPE柱上，而樣品組分的剩余部分則用1毫升水和1毫升30％乙腈/水溶液淋洗下來。柱用空氣吹干。用1毫升無水乙醇從SPE柱上洗脫紫杉醇。用氮氣蒸干樣品，在(-20℃)下放置供分析。殘留物溶于0.200毫升無水乙醇，注入供HPLC分析。
HPLC條件與同一物質鑒定使用的條件相同。
結果得到的點是從三個個體動物的三次測量中得到的平均值。結果，從等劑量的兩個不同制劑的藥代動力學研究得到的兩個曲線之間的差別在個體樣品的差異范圍內。相同的曲線由所有的單個數據繪制得到，表明兩種之間的藥物動力學特征沒有差異或有很小的差異。
實施例IV.3抗增殖和細胞毒性活性研究的體內評估顯示，新制劑對裸鼠里的人體腫瘤異種移植物CH1和CH1tax有陽性作用。
實施例IV.4超敏性試驗用紫杉醇治療的約45％病人有超敏反應。據證明，這些副作用與制劑的一種賦形劑，Cremophor EL有關，這在含相同組分的其它藥物中也可觀察到。當過敏性毒性通過Cremophor EL誘導組胺釋放來表達時決定了該超敏反應。
我們的研究在體重為130-150克[14]的CRL(WI)BR雄性大鼠上進行。給藥劑量對于紫杉醇是約7.0mg/kg，靜脈注射，其總體積為1毫升。每個時間點和劑量的組包含5個動物。在處理后2分鐘、5分鐘和10分鐘時血樣被收集到含肝素的試管里。通過快速離心分離血漿。在-70℃下貯存樣品。
通過特定的組胺-N-甲基-轉移酶使樣品中的組胺組分C14-甲基化。測量樣品中C14放射性來測定血漿樣品里的組胺水平。
得到的數據表明，Cremophor EL和含該組分的制劑會明顯誘導組胺釋放，而HSA、含HSA的制劑和紫杉醇本身沒有這類作用。
實施例IV.5用來自人體血樣的體外人體實驗，根據對血液淋巴細胞的染色體活化的定量分析可發現與實施例IV.4相同的現象[方法分析和定量細胞學和組織學，第8卷第1頁，1986]。
權利要求
1.一種固體或液體形式的、主要供非胃腸道給藥的水溶的產品或藥物制劑，含有a)水溶性低、與血漿蛋白有牢固的結合親合力的治療活性物質(在下文中為“活性物質”)b)處于控制聚集狀態的血漿蛋白組分其中所述的活性物質和所述的蛋白組分通過非共價鍵彼此結合，和c)進一步任選的藥學上可接受的、主要是非胃腸道可接受的制劑添加劑，如水，穩定劑，蛋白聚集控制劑。
2.根據權利要求1所述的水溶性產品或人用藥物制劑，它主要供非胃腸道給藥，含水溶性低的治療活性物質和處于控制聚集狀態的人體血漿蛋白組分。
3.根據權利要求1所述的水溶性產品或獸用藥物制劑，主要供非胃腸道給藥，含水溶性低的治療活性物質和處于控制聚集狀態的動物血漿蛋白組分。
4.根據權利要求1-3任一權利要求所述的產品或藥物制劑，它含天然—人體或動物體—血漿，如血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素，或所述血漿組分的重組體。
5.根據權利要求1-4任一所述的產品或藥物制劑，它供人體給藥，主要供非胃腸道給藥，它含天然—人體血漿，如血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素，或所述血漿組分的重組體。
6.根據權利要求1-3任一所述的產品或藥物制劑，它含水不溶的活性物質，諸如紫杉類藥物的細胞生長抑制劑，抗生素，維生素，抗炎劑，止痛藥，抗病毒藥、抗驚厥藥，免疫抑制劑，抗癲癇藥，抗焦慮藥，催眠藥，抗真菌藥，抗凝血藥，脂質體過氧化酶抑制劑，冠狀動脈擴張劑，抗心率失常藥，強心藥，促尿酸尿藥，抗血栓形成藥，類固醇激素(孕激素，雄激素，睪丸酮)和/或光敏劑。
7.根據權利要求1-6任一所述的產品或藥物制劑，它含至少一種下列活性物質兩性霉素B、阿霉素類似物、炎爽痛、硫唑嘌呤、溴吡二氮、喜樹堿、氨甲酰氮、氯硝安定、環孢素A、安定、雙香豆素、洋地黃毒甙、潘生丁、雙異丙吡胺、氟硝安定、二甲苯氧庚酸、ketochlorin、酮康唑、雙氯苯咪唑、氮氟滅酸、去甲羥基安定、苯巴比妥、苯妥英、孕酮、普魯泊福、ritonavir、苯磺唑酮、噻丙吩(suprofene)、tacrolimus、三苯氧胺、紫杉類藥物、睪丸酮、tirilazad、三甲補骨脂內酯、丙戊酸和/或華法令。
8.根據權利要求1-7任一所述的產品或藥物制劑，它含通式I的紫杉類藥物—式中R1代表叔丁基-氧基羧酸酰胺或苯甲酰胺；R2代表氫或酰基，優選的是乙酰基。
9.根據權利要求1-7任一所述的產品或藥物制劑，含紫杉醇和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
10.根據權利要求1-9任一所述的產品或藥物制劑，它含硫唑嘌呤和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
11.根據權利要求1-8任一所述的制劑，它含喜樹堿和和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
12.根據權利要求1-8任意所述的制劑，它含二甲苯氧庚酸和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
13.根據權利要求1-8任一所述的產品或藥物制劑，它含雙氯苯咪唑和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
14.根據權利要求1-8任一所述的產品或藥物制劑，它含普魯泊福和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
15.根據權利要求1-8任一所述的產品或藥物制劑，它含三苯氧胺和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
16.根據權利要求1-8任一所述的產品或藥物制劑，它含retonavir和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
17.根據權利要求1-8任一所述的藥物制劑，它含tacrolimus和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
18.根據權利要求1-8任一所述的藥物制劑，它含tirilazad和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
19.根據權利要求1-8任一所述的藥物制劑，它含三甲補骨脂內酯和人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
20.根據權利要求1-19任一所述的藥物制劑，它具有固體狀態，或水溶液形式。
21.根據權利要求1-20任一所述的藥物制劑，它含添加劑以穩定溶液和/或蛋白質。
22.根據權利要求21所述的藥物制劑，它含的溶液和/或蛋白質穩定劑是任何下述物質氯化鈉、緩沖劑、如甘油的醇類和/或水溶性糖衍生物，優選的是甘露醇、山梨醇、半乳糖醇。
23.制備如權利要求1-22所述的產品或藥物制劑或權利要求30-37所述的新產品的方法，其特征在于，a)使水溶解度低并與血漿蛋白有牢固結合親合力的治療活性化合物(“活性物質”)溶于可與水溶混的藥學上可接受的有機溶劑，b)使所述的溶液與處于控制聚集狀態的血漿蛋白質組分的水溶液混合，和任選的c)另一種藥學上可接受的輔助添加劑—如蛋白質聚集控制劑和/或穩定劑—混合，從而得到含所述活性物質和所述血漿蛋白組分通過非共價鍵結合的真實溶液d)優選地通過使溶液或其濃縮物進行超濾、滲析、二次過濾(diafiltrating)和/或凍干法，或通過使這些處理組合來除去有機溶劑從而得到含活性物質和血漿蛋白組分的均相的水溶性液體或固體的藥物制劑；e)任選地用水溶解固體產品或用水稀釋液體產品，從而得到適合于治療給藥的澄清的液體組合物，和f)任選地將產品制成非胃腸道給藥制劑(劑型)供直接使用。
25.制備如權利要求1-24所述的產品或藥物制劑或權利要求30-37所述的新產品的方法，其特征在于，a)使治療活性化合物溶于可與水溶混的藥學上可接受的有機溶劑，b)使所述的溶液與處于控制聚集狀態的選定的血漿蛋白組分的水溶液混合，所述的溶液任選地含c)另一種的藥學上可接受的輔助添加劑—如蛋白質聚集控制劑和/或穩定劑從而得到含所述活性物質和所述血漿蛋白組分通過非共價鍵結合的真實溶液；d)除去有機溶劑，將溶液或它的濃縮物進行凍干。
26.根據權利要求23-25任一所述的方法的步驟a)，其特征在于用來溶解活性物質的溶劑有下列性質a)在與水的混合物里能完全溶解活性物質，和b)它與＜50％的水的混合物不會使所用的蛋白質變性。
27.根據權利要求26所述的方法，其特征在于，使用選自脂族C(2-4)一元醇或多元醇，70-100％乙醇，二甲基甲酰胺，甲基甲酰胺的溶劑。
28.根據權利要求23-27所述的方法，其中步驟a)的特征在于，所用蛋白聚集控制劑或穩定劑和/或溶液穩定輔助添加劑選自任何下述物質水，氯化鈉，緩沖劑，諸如甘油的多元醇和/或水溶性糖衍生物，優選的是甘露醇、山梨糖醇和/或半乳糖醇。
29.根據權利要求23-28所述的方法，其中步驟a)的特征在于，使用紫杉醇和天然血漿組分，如血清白蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、干擾素和/或白介素或這些組分的重組體。
30.一種均相、固體、水溶產品，有至少一種選自兩性霉素B、阿霉素類似物、炎爽痛、硫唑嘌呤、溴吡二氮、喜樹堿、氨甲酰氮、氯硝安定、環孢素A、安定、雙香豆素、洋地黃毒甙、潘生丁、雙異丙吡胺、氟硝安定、二甲苯氧庚酸、ketochlorin、酮康唑、雙氯苯咪唑、氮氟滅酸、去甲羥基安定、苯巴比妥、苯妥英、孕酮、普魯泊福、ritonavir、苯磺唑酮、噻丙吩(suprofene)、tacrolimus、三苯氧胺、紫杉類藥物、睪丸酮、tirilazad、三甲補骨脂內酯、丙戊酸和/或華法令的至少一種活性物質，和至少一種選自人體血清白蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，干擾素和/或白介素，或一些其它天然或重組的人體血漿蛋白組分構成，其中所述的活性物質和所述的蛋白組分彼此通過非共價鍵結合連接，其摩爾比為1∶0.05-1∶100，優選的摩爾比是1∶0.1到1∶50。
31.根據權利要求30所述的均相、固體、水溶的產品，它由通式I的紫杉類藥物和血漿蛋白組分構成—式I中，R1代表叔丁基-氧基-羧酸酰胺或苯甲酰胺，R2代表氫或任何酰基，優選的是乙酰基。
32.根據權利要求30所述的均相、固體、水溶的產品，它由紫杉醇和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
33.根據權利要求30所述的均相、固體、水溶的產品，它由兩性霉素B和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
34.根據權利要求30所述的均相、固體、水溶的產品，它由喜樹堿和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
35.根據權利要求28所述的均相、固體、水溶的產品，它由氨甲酰氮和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
36.根據權利要求28所述的均相、固體、水溶的產品，它由環孢素和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
37.根據權利要求30所述的均相、固體、水溶的產品，它由普魯泊福和人體血清白蛋白，重組人體血漿白蛋白和/或γ-球蛋白構成。
38.一種用與血漿蛋白有牢固結合親合力的水不溶的治療活性物質治療人類或獸類患者的方法，其特征在于對需要這類治療的患者給予活性物質有效量的如權利要求1-37任一所述的或制得的產品或藥物制劑。
39.一種用與血漿蛋白有牢固結合親合力的水不溶的治療活性物質非胃腸途徑治療人類或獸類患者的方法，其特征在于對需要這類治療的患者非胃腸道給予下列劑量范圍的產品(根據活性物質計算)紫杉醇/白蛋白70-280mg/治療；普魯泊福/白蛋白6-10mg/kg/小時；喜樹堿/白蛋白，三苯氧胺/白蛋白，環孢素A/白蛋白3-5mg/kg/天；兩性霉素B/白蛋白，最多達1.5mg/kg/天，從而對含重組蛋白的化合物用相同的劑量。
40.對水溶性差、與血漿蛋白有牢固結合親和力的藥物活性組分治療時采用非胃腸道釋放的方法，其特征在于，對需要這類治療的病人給予所述活性物質有效量的如權利要求1-19所述或制備的組合物。
41.一種產品或方法，它基本上如實施例任一所述。
全文摘要
本發明涉及主要供非胃腸道使用的固體或液體形式的水溶產品和藥物制劑。它們包括治療活性物質(水溶解度低,與血漿蛋白有牢固結合親和力)和處于控制聚焦狀態的血漿蛋白組分,或由它們構成,從而所述的活性物質和所述蛋白組分通過非共價結合彼此連接。本發明也覆蓋了制備產品和藥物制劑的方法。
文檔編號A61K38/00GK1270529SQ9880925
公開日2000年10月18日 申請日期1998年9月17日 優先權日1997年9月18日
發明者L·赫格迪什, K·克倫普爾, K·帕爾, G·佩西赫 申請人:人類Rt·公司