專利名稱：促進(jìn)紅細(xì)胞生成的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用下文定義的產(chǎn)品R促進(jìn)紅細(xì)胞生成的方法。
所有的哺乳動(dòng)物都有造血(血液形成)系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠補(bǔ)充在健康動(dòng)物中存在的各種類型的血液細(xì)胞，包括白細(xì)胞、形成凝血的細(xì)胞和紅細(xì)胞(erythrocytes)。在成年哺乳動(dòng)物中，主要的造血部位是骨髓。
如果把骨髓作為單個(gè)的組織來看，它是身體中最大的組織。成人骨髓的總重量平均為大約3公斤。骨髓充滿了幾乎全部骨骼的中心芯。骨髓有三類組織血管組織、脂肪組織和直接造血的組織或是形成血液的組織。血管組織是循環(huán)系統(tǒng)，其負(fù)責(zé)供應(yīng)營養(yǎng)和從活的生長細(xì)胞中排除廢物；造血組織負(fù)責(zé)紅細(xì)胞、血小板、粒細(xì)胞和單核細(xì)胞、以及淋巴細(xì)胞前體的形成；脂肪組織由脂肪細(xì)胞構(gòu)成，其對骨髓的功能沒有什么貢獻(xiàn)。
特化的亞型血液細(xì)胞的成熟和分化發(fā)生在胸腺、脾臟、淋巴結(jié)和腸道淋巴樣組織中。目前的科學(xué)研究認(rèn)為小量特定的造血生長因子使各種類型的造血細(xì)胞直接增生、分化和成熟，這些造血細(xì)胞來自于小種群的多潛能造血干細(xì)胞。各種生長因子在不同的時(shí)間作用于不同的細(xì)胞種群，最終形成了功能性的造血系統(tǒng)。
哺乳動(dòng)物造血系統(tǒng)的一個(gè)特殊和重要的作用是生成紅細(xì)胞，紅細(xì)胞給動(dòng)物體的各個(gè)組織輸送氧氣。生成紅細(xì)胞(紅細(xì)胞生成)的過程在動(dòng)物體的整個(gè)生命過程中連續(xù)不斷地進(jìn)行，從而使紅細(xì)胞的損毀得到補(bǔ)償。典型的紅細(xì)胞具有相對較短的生命周期，通常為100-120天。紅細(xì)胞生成是一個(gè)準(zhǔn)確控制的生理機(jī)制，因此需要生成足夠數(shù)量的紅細(xì)胞以便能夠給各組織充氧，但是其數(shù)量又不能多到妨礙循環(huán)的地步。
所有的外周血細(xì)胞起源于被稱作是多潛能造血干細(xì)胞的普通先祖細(xì)胞。干細(xì)胞的一個(gè)重要性質(zhì)是其自身的再生，該性質(zhì)能確保在動(dòng)物個(gè)體的整個(gè)生命期有連續(xù)不斷的供應(yīng)。在需要時(shí)，多潛能細(xì)胞可以開始分化，在連續(xù)分裂之后，所述的細(xì)胞失去了自身再生的能力且其后代變成負(fù)責(zé)形成發(fā)育的特殊細(xì)胞系。然后這些先祖細(xì)胞會(huì)生成具有功能特性的所有血液細(xì)胞。
在此過程的最后形成成熟的血液細(xì)胞，該過程包括來自各個(gè)譜系的特定形成的先祖細(xì)胞的增生和成熟。因此，來自各個(gè)譜系的多潛能細(xì)胞能夠生成由一些紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞組成的純系，其中還有它們的中間體先祖細(xì)胞。
在正常環(huán)境下，骨髓能夠?qū)π枰黾犹囟愋图?xì)胞的要求很快作出反應(yīng)。目前許多研究工作的目的就是研究這個(gè)過程是如何進(jìn)行的。已經(jīng)知道先祖細(xì)胞的增生和分化過程是在一些已知生長刺激物的控制之下進(jìn)行的，這些生長刺激物為造血激素，如促紅細(xì)胞生長素(EPO)和一些集落刺激因子。
紅細(xì)胞的生成包括一個(gè)這樣的過程，即開始于BFU-E(暴發(fā)形成單位—紅細(xì)胞類，最早的紅細(xì)胞前體)的早期形成階段，主要由白介素-3(IL-3)控制，接著由促紅細(xì)胞生長素(EPO)進(jìn)一步成熟為CFU-E(集落形成單位—紅細(xì)胞類)和晚幼紅細(xì)胞。晚幼紅細(xì)胞成熟為網(wǎng)織紅細(xì)胞，然后成為紅細(xì)胞，其是成熟的血液細(xì)胞。
現(xiàn)已知紅細(xì)胞生成主要是由EPO控制，EPO是一種酸性的糖蛋白。EPO刺激新的紅細(xì)胞生成以代替隨著年老而損失的紅細(xì)胞。此外，EPO的產(chǎn)生在低氧條件下受到刺激，此時(shí)盡管身體的各個(gè)組織被血液充滿，但對各組織的氧氣供應(yīng)則是減低到正常生理水平以下。低氧可能是由于出血、放射性引起的紅細(xì)胞損毀、各種貧血癥、高海拔或長期的不省人事引起的。做為對組織處于低氧狀態(tài)的反應(yīng)，EPO將通過促進(jìn)骨髓中的原生前體細(xì)胞向原紅細(xì)胞轉(zhuǎn)化而增加紅細(xì)胞的生成，其然后成熟，合成血紅蛋白，并做為紅細(xì)胞被釋放到循環(huán)系統(tǒng)中去。
某些疾病狀態(tài)涉及非正常的紅細(xì)胞生成。重組的人體EPO用于治療與晚期腎疾病有關(guān)的貧血癥。為了治療這種疾病進(jìn)行血液透析的患者是以患有嚴(yán)重的貧血癥為特征的，這是由于透析治療造成的紅細(xì)胞破裂和早熟死亡而引起的。EPO也用于治療其它類型的貧血癥，例如用EPO治療化療引起的貧血癥、與骨髓發(fā)育不良有關(guān)的貧血癥、與各種先天性疾病有關(guān)的貧血癥、與愛滋病有關(guān)的貧血癥以及與早熟有關(guān)的貧血癥。另外，在其它領(lǐng)域，EPO也起著重要的作用，例如幫助骨髓移植病人、準(zhǔn)備進(jìn)行自體輸血的病人和患有鐵過量疾病的病人更快的恢復(fù)正常的血細(xì)胞比容。
二十世紀(jì)三十年代的產(chǎn)品R(已知該藥劑的商標(biāo)為“Reticulose”，是Advanced Viral Research Corp.的商品名稱)是抗病毒產(chǎn)品。最初人們確信該產(chǎn)品是由蛋白胨、肽和核酸(下文將給出完整的定義)組成的，其確切的組成沒有被鑒定出來。然而，已經(jīng)證明產(chǎn)品R能夠快速抑制某些病毒疾病的病程。它們是無毒的、可與組織液和血漿相溶混的，并且無過敏原的性能。
據(jù)申請人所知，沒有人提出產(chǎn)品R具有與EPO類似的功能。已發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品R可用于促進(jìn)紅細(xì)胞的生成，因此可用于對嚴(yán)重的貧血癥的患者進(jìn)行治療，所述的貧血癥是由于慢性腎衰竭、放射性、化療或愛滋病引起的。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種促進(jìn)紅細(xì)胞生成的方法，該方法包括經(jīng)腸胃外施用產(chǎn)品R。
本發(fā)明的另一目的是提供一種對患有貧血癥的患者進(jìn)行治療的方法，所述的貧血癥是由慢性腎衰竭、放射性、化療或愛滋病引起的。
具體地說，以無菌注射劑型給患者經(jīng)腸胃外施用產(chǎn)品R的量是每天每公斤體重為大約5微升至大約40微升。
通過說明書下文的詳細(xì)描述，并結(jié)合附圖
，本發(fā)明的其它目的和特征將會(huì)變得更加清楚。但可以理解的是，該附圖僅僅是為了說明而設(shè)計(jì)的，不會(huì)限制本發(fā)明，為此，請參見本發(fā)明提交的權(quán)利要求書。
本文中所用的產(chǎn)品R是用下述任意一種方法制備的產(chǎn)品。
制備產(chǎn)品R的方法I在大約3-7℃，于適當(dāng)?shù)娜萜髦?，將大約35.0g酪蛋白、大約17.1g牛蛋白胨、大約22.0g核酸(RNA)和大約3.25g牛血清清蛋白懸浮于大約2.5升水中，制成注射用USP，緩慢攪拌，直到所有的組分被適當(dāng)?shù)貪駶櫋Ｔ跀嚢璧耐瑫r(shí)小心地加入大約16.5g氫氧化鈉(試劑級，ACS)，且繼續(xù)攪拌直到氫氧化鈉完全溶解。在大約9磅壓力的高壓滅菌器中，于200-230°F經(jīng)過一定時(shí)間直到RNA全部消化，例如經(jīng)過4小時(shí)。在這段時(shí)間結(jié)束后，停止高壓滅菌器的操作，使反應(yīng)瓶和內(nèi)容物緩慢冷卻至室溫。然后，在大約3-8℃冷卻至少6小時(shí)。用惰性氣體如氮?dú)饣驓鍤?，在低壓?1-6磅/英寸2)通過2微米和0.45微米的過濾器過濾得到的溶液。以類似的方式，通過0.2微米致熱原保留過濾器對溶液進(jìn)行再過濾。對得到的濾液進(jìn)行取樣和檢測總氮。然后，進(jìn)行計(jì)算以確定定量加入濾液的冷卻水的量，以得到稀釋的濾液用于注射，稀釋濾液中的氮含量在大約165-210mg/ml，最后體積為大約5升。然后，用濃鹽酸(試劑級，ACS)或1.0當(dāng)量的氫氧化鈉將pH調(diào)節(jié)至大約7.3-7.6的范圍內(nèi)。再在低壓下，惰性氣體中，通過0.2微米的過濾器過濾得到的稀釋溶液。然后，于惰性氣氛中將最后的濾液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的壓力下進(jìn)行最后的高壓滅菌，時(shí)間為大約30分鐘。在滅菌周期后，冷卻和洗滌裝有產(chǎn)品R的安瓿。
對pH值、體積和分析校正值，所有的定量數(shù)據(jù)可加或減變化2.5％。
制備產(chǎn)品R的方法II在大約3-7℃，于適當(dāng)?shù)娜萜髦校瑢⒋蠹s35.0g酪蛋白、大約17.1g牛蛋白胨、大約22.0g核酸(RNA)和大約3.25g牛血清清蛋白懸浮于大約2.5升水中，制成注射用USP，緩慢攪拌，直到所有的組分被適當(dāng)?shù)貪駶櫋Ｔ跀嚢璧耐瑫r(shí)緩慢加入大約11.75ml鹽酸(試劑級，ACS)，且繼續(xù)攪拌直到鹽酸完全溶解。在大約9磅壓力的高壓滅菌器中，于200-230°F經(jīng)過一定時(shí)間直到RNA全部消化，例如經(jīng)過4小時(shí)。在這段時(shí)間結(jié)束后，停止高壓滅菌器的操作，使反應(yīng)瓶和內(nèi)容物緩慢冷卻至室溫。然后，在大約3-8℃冷卻至少6小時(shí)。用惰性氣體如氮?dú)饣驓鍤?，在低壓?1-6磅/英寸2)通過2微米和0.45微米的過濾器過濾得到的溶液。以類似的方式，通過0.2微米致熱原保留過濾器對溶液進(jìn)行再過濾。對得到的濾液進(jìn)行取樣和檢測總氮。然后，進(jìn)行計(jì)算以定量確定加入濾液的冷卻水，以得到稀釋的濾液用于注射，稀釋濾液中的氮含量在大約165-210mg/ml，最后體積為大約5升。然后，用濃鹽酸(試劑級，ACS)或35％(w/v)的氫氧化鈉將pH調(diào)節(jié)至大約7.3-7.6的范圍內(nèi)。再在低壓下，惰性氣體中，通過0.2微米的過濾器過濾得到的稀釋溶液。然后，于惰性氣氛中將最后的濾液充入2ml玻璃安瓿，并密封。收集安瓿，并于240°F和20-30磅的壓力下進(jìn)行最后的高壓滅菌，時(shí)間為大約30分鐘。在滅菌周期后，冷卻和洗滌裝有產(chǎn)品R的安瓿。
對pH值、體積和分析校正值，所有的定量數(shù)據(jù)可加或減變化2.5％。
為了促進(jìn)紅細(xì)胞的生成，以便對由慢性腎衰竭、放射性治療、化療或愛滋病引起的貧血癥的患者進(jìn)行治療，施用產(chǎn)品R的適當(dāng)有效劑量為每天每公斤體重大約2.5微升至大約40微升，優(yōu)選每天每公斤體重大約5微升至大約25微升。最優(yōu)選產(chǎn)品R的施用量為每天每公斤體重大約15微升，施用大約二周，接著每天每公斤體重施用大約7.5微升。所需劑量可以適當(dāng)?shù)臅r(shí)間間隔，分成2次、3次或多次分劑量施用，通常在一天里采用相等的時(shí)間間隔。優(yōu)選一天的劑量一次施用。
產(chǎn)品R可以任何適當(dāng)?shù)淖⑸渫緩绞┯?，其非限制性包括為靜脈、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉、和皮內(nèi)注射等。優(yōu)選的用藥途徑是皮下注射?？梢岳斫獾氖?，優(yōu)選的用藥途徑可根據(jù)如受者的癥狀和年齡的變化而改變。
同時(shí)也可以將產(chǎn)品R作為藥物制劑的一部分使用，優(yōu)選單獨(dú)使用，雖然也可以在彼此獨(dú)立施用一種或多種其他藥物的大致相同的時(shí)間里施用產(chǎn)品R。如果把產(chǎn)品R作為藥物制劑的一部分使用，那么本發(fā)明的制劑包括至少一種上文定義的組分，以及其一種或多種可接受的載體，和選擇地包括其它的治療組分。一種或多種載體必須是“可接受的”，其意義是能夠與制劑中的其它組分相混溶，并且對其受者無害。
所述的制劑通常可以單位劑量或多劑量藥盒的形式存在，例如封裝的安瓿和藥瓶。
優(yōu)選的單位劑量形式是那些含有日劑量的，或含有每天的分劑量單位的，或給藥成分的適當(dāng)組分的劑量形式。
上述促進(jìn)紅細(xì)胞生成的方法可用于對各種形式的貧血癥，如慢性腎衰竭、放射性治療、化療或愛滋病引起的貧血癥患者進(jìn)行治療。
因此，在已經(jīng)說明、描述和指明了應(yīng)用于本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的本發(fā)明的基本新特征的同時(shí)，可以理解的是，對本領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員而言，各種形式上的省略、替代和變化，以及對所述裝置和操作的詳細(xì)說明都沒有背離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。例如，將所有這些要素和/或方法步驟的結(jié)合是顯而易見的，其是按照實(shí)質(zhì)上相同的方式，發(fā)揮實(shí)質(zhì)上相同的作用來達(dá)到相同的結(jié)果，這仍然是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。因此對本發(fā)明來說，其僅僅是被限制在本申請所附的權(quán)利要求書所指出的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.促進(jìn)紅細(xì)胞生成的方法，其包括以無菌注射劑型給所述的患者經(jīng)腸胃外施用有效治療量的產(chǎn)品R。
2.權(quán)利要求1的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約2.5微升至大約40微升。
3.權(quán)利要求3的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約5微升至大約25微升。
4.權(quán)利要求3的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥量為每天每公斤體重大約15微升，施用二周，接著以每天每公斤體重大約7.5微升施用。
5.對慢性腎衰竭引起的貧血癥患者進(jìn)行治療的方法，其包括以無菌注射劑型給所述的患者經(jīng)腸胃外施用有效治療量的產(chǎn)品R。
6.權(quán)利要求5的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約2.5微升至大約40微升。
7.權(quán)利要求5的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約5微升至大約25微升。
8.權(quán)利要求5的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥量為每天每公斤體重大約15微升，施用二周，接著以每天每公斤體重大約7.5微升施用。
9.對放射性治療引起的貧血癥患者進(jìn)行治療的方法，其包括以無菌注射劑型給所述的患者經(jīng)腸胃外施用有效治療量的產(chǎn)品R。
10.權(quán)利要求9的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約2.5微升至大約40微升。
11.權(quán)利要求9的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約5微升至大約25微升。
12.權(quán)利要求9的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥量為每天每公斤體重大約15微升，施用二周，接著以每天每公斤體重大約7.5微升施用。
13.對放射性治療引起的貧血癥患者進(jìn)行治療的方法，其包括以無菌注射劑型給所述的患者經(jīng)腸胃外施用有效治療量的產(chǎn)品R。
14.權(quán)利要求13的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約2.5微升至大約40微升。
15.權(quán)利要求13的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約5微升至大約25微升。
16.權(quán)利要求13的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥量為每天每公斤體重大約15微升，施用二周，接著以每天每公斤體重大約7.5微升施用。
17.對放射性治療引起的貧血癥患者進(jìn)行治療的方法，其包括以無菌注射劑型給所述的患者經(jīng)腸胃外施用有效治療量的產(chǎn)品R。
18.權(quán)利要求17的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約2.5微升至大約40微升。
19.權(quán)利要求17的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥范圍為每天每公斤體重施用大約5微升至大約25微升。
20.權(quán)利要求17的方法，其所述產(chǎn)品R的用藥量為每天每公斤體重大約15微升，施用二周，接著以每天每公斤體重大約7.5微升施用。
全文摘要
本發(fā)明公開了應(yīng)用產(chǎn)品R經(jīng)腸胃外給藥,通過促進(jìn)紅細(xì)胞生成治療貧血癥的方法,產(chǎn)品R是肽－核酸制劑。
文檔編號A61P43/00GK1252074SQ98804154
公開日2000年5月3日 申請日期1998年4月15日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月15日
發(fā)明者沙洛姆·Z·赫希曼 申請人:領(lǐng)先病毒研究公司