專利名稱：具有抗凝集/抗血栓形成作用的硫酸化低聚糖類化合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及硫酸化低聚糖類化合物，并且具體涉及某些硫酸化低聚糖作為抗凝劑和/或抗血栓形成劑的用途。發明背景在過去的50年中，肝素業已作為抗凝劑廣泛用于預防術后血栓形成和治療急性靜脈血栓形成，它是由哺乳動物肥大細胞產生的糖胺聚糖。肝素的抗凝集活性主要表現為可促進蛋白酶抑制劑抗凝血酶III對凝集級聯中多種關鍵蛋白酶，特別是(凝血)因子Xa和凝血酶的滅活能力(1，2)。而凝血酶是在級聯中將可溶性血纖蛋白原轉化為不溶性血纖蛋白的末端(轉移)酶。事實上，人們已確定在肝素中有一種特殊的五聚糖類化合物，其結合抗凝血酶III的親和力極高，并由此造成抑制劑構象的改變(3)。該五聚糖足以使蛋白酶如凝血因子Xa被抗凝血酶III滅活。相反地，肝素需要將抗凝血酶III與凝血酶交聯，以促使凝血酶出現失活(3)。
盡管肝素已被作為抗凝劑廣泛應用于臨床，但肝素存在許多嚴重缺陷。首先，在結構上肝素十分多變，其分子量、單糖序列和硫酸化模式均可改變(4)。這種多樣性的結果是，在絕大多數制劑中，實際上只有50％以下的肝素分子含有與五聚糖相結合的抗凝血酶III(1-3)。因此，難以對不同批次的肝素進行質量控制。其次，肝素是動物的副產物，因而存在被動物病原體污染的危險，目前管理機關對此嚴密關注。第三，肝素因其分子量高而只能經靜脈給藥，其皮下注射時的生物利用度很低(5，6)。而且，高分子量的肝素(10-15KDa)妨礙了有效的口服給藥。第四，就臨床功效來說，肝素的劑量反應曲線很陡。因此必須持續監測患者血漿的凝集時間，以確保不發生藥物過量。患者肝素反應性的顯著差異也有礙于適當劑量肝素的給藥。上述困難造成了無法接受的出血現象，成為肝素治療的一個并發癥，這在長期用藥時尤為嚴重(5，6)。最后，大量患者在長時間與肝素接觸后可發展出現肝素誘發型血小板減少癥(HIT)(5，6)，對于這些患者個體這是一種妨礙進一步使用肝素的癥狀。
在克服某些肝素相關性難題的嘗試中，許多低分子量(LMW)(分子量400-6500)的肝素制劑已被開發出來并已獲得許可(5，6)。這些制劑保持了天然肝素的抗凝血因子Xa和抗血栓形成活性，但它們是低效抗凝劑。其結果是，LMW肝素類物質似乎較少在患者中誘發出血并發癥。而且，由于體積較小，其生物利用度得到提高并且可經皮下給藥。
另一種方法是采用有關的糖胺聚糖，硫酸皮膚素作為抗血栓形成劑(7)。有趣的是，硫酸皮膚素與肝素不同，它通過凝血酶的第二種天然抑制劑肝素協同因子II來催化對凝血酶的抑制作用(8)。雖然LMW肝素類化合物和硫酸皮膚素具有可實用性，但仍非常需要結構上很確定的非動物來源的抗凝劑和/或抗血栓形成藥，其可使患者產生重現性反應，可以經口服給藥，并且沒有誘發血小板減少癥的趨勢。
在先國際專利申請PCT/AU96/00238公開了一類硫酸化低聚糖類化合物制劑，以及這些硫酸化低聚糖作為人體血管生成、腫瘤轉移和炎癥的有效抑制劑的用途，所述硫酸化低聚糖是基于單糖單元經1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接并且由3-8個單糖單元組成的聚合物。
在本發明的研究中發現，這些硫酸化低聚糖類化合物可以用作抗凝劑/抗血栓形成藥，用于克服糖胺聚糖衍生的抗凝劑/抗血栓形成藥所造成的許多問題。具體而言，所述硫酸化五糖或六糖已表現出適宜的確定結構，較寬的治療范圍，重現性高的患者反應性，適當地減少了HIT樣綜合征的誘發機率，以及口服給藥的可行性。此外，這些硫酸化低聚糖并非通過抗凝血酶III起作用，而似乎是通過激活肝素協同因子II來抑制凝集作用。因此，活性硫酸化低聚糖的作用方式在一定程度上與硫酸化多糖硫酸皮膚素而不是肝素相似。這些低聚糖類化合物可兼用于預防和治療多種血栓形成和心血管疾病，特別是深靜脈血栓形成、肺栓塞、栓塞性中風、外周動脈栓塞、不穩定型心絞痛和心肌梗死。而且，這些硫酸化低聚糖類化合物可有效地口服給藥，因而它們能夠代替一種被廣泛用于口服給藥但副作用嚴重的抗凝劑華法林。發明概述一方面，本發明提供一種適用于需治療的人體或其他溫血動物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治療的方法，該方法包括給患者施用有效量的至少一種硫酸化低聚糖，其中所述低聚糖具有通式IR1-(RX)n-R2(I)其中R1和R2和各RX表示單糖單元，它們均可相同或不同，相鄰的單糖單元通過1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接；而n是1-6的整數，優選3或4。
優選所述硫酸化低聚糖類化合物具有通式IIR-(R)n-R(II)其中各R基表示相同的基團并且分別代表一個單糖單元，相鄰的單糖單元通過1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接，并且n是1-5的整數，優選3或4。
在此所用的術語“抗凝集和/或抗血栓形成治療”包括對需此治療的患者進行預防性或治療性的處理。發明詳述本發明所用的硫酸化低聚糖類化合物是基于單糖單元的聚合物，其單糖單元通過1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接并由3-8個單糖單元組成。優選的低聚糖由3-6個單糖單元組成(也就是n為1-4)，更優選由5-6個單糖單元組成(n為3-4)。所述聚合物可以包括僅含有一種類型單糖單元的均聚物，或含有兩種或多種不同類型單糖單元的雜聚物，但優選的是均聚物。
共同連接成低聚糖的單糖單元優選是己糖類化合物，可以是呋喃糖類化合物(如果糖)和吡喃糖類化合物(如葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔羅糖、半乳糖、艾杜糖或古洛糖)。特別優選的己糖類化合物是葡萄糖和甘露糖。所述己糖為D或L構型。
各單糖單元可以是己糖、己糖醛酸(hexuronic)、己糖胺或N-乙酰基己糖胺。
式I和II所示的低聚糖還包括單糖單元被衍生化的低聚糖，特別是其中單糖單元為單糖的磷酸酯、乙酸酯或其他酯類衍生物的低聚糖。
通常，可以利用本領域已知的方法通過將低聚糖類化合物硫酸化來制備本發明所述的硫酸化低聚糖，得到其相應的O-硫酸化衍生物。在國際專利中請PCT/AU96/00238中公開了適用的硫酸化方法，該文獻的內容在此引入作為參考。所述硫酸化低聚糖可以是天然產物，其中包括由天然多糖(例如直鏈淀粉、葡聚糖、纖維素、昆布多糖、果膠、殼多糖、脫乙酰殼多糖、甘露聚糖以及由Pichia Holstii畢赤酵母產生的磷酸甘露聚糖外多糖(phosphomannan exopolysaccharide))經酶促或化學降解得到的低聚糖。此外，所述低聚糖也可以根據國際專利申請PCT/AU96/00238中公開的方法合成制得。
如上所述，本發明范圍內的硫酸化低聚糖已表現出抗凝和/或抗血栓形成活性，由此，本發明的另一方面涉及了上述硫酸化低聚糖在治療溫血動物(包括人體)患者中作為抗凝劑和/或抗血栓形成藥的應用。
本發明也涉及至少一種上述硫酸化低聚糖在制造用于人體或其他溫血動物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治療的藥物中的應用。
而且，本發明還提供一種適用于抗凝和/或抗血栓形成治療的藥物或獸藥組合物，其中含有至少一種上述硫酸化低聚糖以及可藥用或可獸用的載體或稀釋劑。
所述活性組分是以治療有效量給藥。該治療有效量是指至少部分達到預期作用，或使被治療的具體癥狀延緩發作、抑制其發展或同時阻止其發作和發展所需要的用量。當然，這種用量取決于具體的被治療癥狀、病癥的嚴重程度和患者的個體指標包括年齡、身體條件、體形、體重以及并行治療。這些因素是該領域普通專業人員所熟知的，并且無需更多的常規試驗就可以得到。一般地，優選最大給藥劑量，也就是根據醫師診斷的最高安全劑量。但所屬領域普通專業人員應懂得，出于醫學、心理學或其他實際的原因可以以較低的劑量或耐受劑量進行給藥。
在本領域中技術人員對治療性組合物的制劑十分了解。適用的可藥用或可獸用載體和/或稀釋劑包括任何和所有的常規溶劑、分散體介質、填充劑、固體載體、含水溶液、包衣劑、抗細菌藥和抗真菌藥、等滲劑和吸收延遲劑等。這些介質和試劑在藥物和獸藥活性物質中的用途是該領域所熟知的，例如，見于Remington氏藥物科學，18版，Mack出版公司，賓西法尼亞，美國。除與活性成分不相容的常規介質和試劑之外，可以考慮在本發明所述的藥用和獸用組合物中使用適合混入藥物組合物中的補充活性成分。
為使給藥方便和劑量均勻，特別適宜將組合物以劑量單位形式配制。此處所用的劑量單位形式是指完全離散的單位，它們可用作被治療人體或動物對象的單位劑量；各單位中含有由產生預期治療作用計算出的預定量的活性成分以及所需的藥用或獸用載體和/或稀釋劑。本發明新的劑量單位形式的規格取決于并直接依賴于(a)活性成分獨特的特點和所要達到的治療作用，和(b)復合此類活性組分在現有技術中達到具體治療時的固有限度。
雖然從方便患者來說優選口服給藥，但也可采用不同的給藥途徑。顯然，所選擇的具體方式取決于被治療的具體癥狀和達到治療效果所需的劑量。一般來說，本發明所述方法可以利用任何醫學可接受的給藥方式實現，也就是說，任何能夠提供治療水平的本發明活性組分但不引起臨床副作用的方式。所述給藥方式包括口服、直腸、局部、經鼻、經皮或非腸道(例如皮下、肌肉內和靜脈內)途徑的給藥。口服給藥的制劑包括離散單位，如膠囊、片劑、錠劑等。其他給藥途徑包括鞘內給藥直接進入脊髓液，直接導入法如采用本領域熟知的多種導管和囊擴張血管成形術裝置，以及實質內注射到靶向區域內。
本發明的適于口服給藥的組合物可以以離散單位存在，例如膠囊、片劑或錠劑，其中各單位含有預定量的活性成分；也可存在于脂質體中或是處于含水液體或非水液體中的溶液或懸浮液，如糖漿劑、酏劑或乳劑。
適合非腸道給藥的組合物通常包括活性成分的滅菌含水制劑，它優選等滲于接受者的血液。根據已知方法并采用那些適當的分散劑或濕潤劑以及懸浮劑可以制得所述含水制劑。滅菌注射制劑也可以是處于無毒的非腸道用稀釋劑或溶劑中的滅菌注射溶液或混懸劑，如存在于聚乙二醇和乳酸中的溶液。在可接受的賦形劑和溶劑中可采用水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，通常將滅菌的非揮發油用作溶劑或懸浮介質。就此，任何溫和的非揮發油都可被采用，其中包括合成甘油單酯或甘油二酯。而且，注射制劑中還可以選用脂肪酸類化合物如油酸。
其它給藥體系包括了緩釋給藥體系。優選的緩釋給藥體系是那些可使本發明活性成分在緩釋丸劑或膠囊內得以釋放的體系。它們包括但不限于(a)浸滲體系，體系中的活性成分存在于基質內，和(b)擴散體系，該體系中的活性成分以可控速率滲透過聚合物。另外可應用泵式硬件給藥體系，其中的某些適用于植入法。
如上所述，在許多血栓形成和心血管疾病的治療中可以應用本發明的硫酸化低聚糖類化合物，尤其適用于深靜脈血栓、肺栓塞、血栓性中風、外周動脈血栓形成、不穩定性心絞痛和心肌梗塞。
在本申請說明書中，除非文中另有需要，否則術語“包括”或它的其它形式如“含有”或“包含”應被理解為暗示了所述事物或一組事物的整體，但不排除任何其它一種或一組事物。
本發明另外的特征是較全面地描述了下列實施例。但是，應懂得這種詳細描述只是出于例舉本發明的目的，從任何角度來看都不對本發明上述廣泛的描述構成限制。
在附圖中
圖1表示一系列基于麥芽糖但鏈長不同的硫酸化低聚糖的抗凝集活性分析圖，它是由活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)試驗來測定。用肝素(抗凝活性120U/mg)作比較。數據得自于由90名供血者采集的混合血漿，抑制劑不存在時的血漿凝集時間為30.8秒。結果代表四個獨立的試驗。
圖2比較了不同硫酸化五聚糖的抗凝活性，這是通過APTT試驗測得的，以肝素作比較。其它詳細內容如圖1所述。
圖3比較了肝素、LMW肝素(替地肝素(Fragmin))和硫酸化低聚糖甘露五糖(mannopentaose)磷酸硫酸酯(PI-88)對抗凝血酶III介導性抗凝血因子Xa活性的作用。用顯色劑(Helena)測定凝血因子Xa的活性，抗凝血因子Xa的分析試驗使用了Roche COBAS Fara生化分析儀。
實施例1硫酸化低聚糖的制備在本實施例中，后繼的硫酸化作用采用兩種來源的低聚糖類化合物。第一種原料是衍生自天然多糖類化合物的低聚糖。其常見制備方法包括將多糖類化合物經酶促或化學方式部分解聚并將所得低聚糖按大小分級。用于產生低聚糖的多糖的例子是直鏈淀粉、葡聚糖、纖維素、昆布多糖、果膠、殼多糖、脫乙酰殼多糖、甘露聚糖以及由Pichia holstii酵母產生的磷酸甘露聚糖外多糖。第二種原料是含己糖的全合成低聚糖，它是己糖單體經化學聚合制得。在先國際專利申請PCT/AU96/00238中公開了一種制造此類全合成低聚糖類化合物的方法。在同一專利申請中還描述了一種從Pichia Holstii酵母的外多糖中分離出結構為P-6-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→3)-Man-α-(1→2)Man的磷酸甘露五糖的方法。其他天然低聚糖購自Seikagaku，Tokyo，日本。最終，根據在先國際專利申請PCT/AU96/00238公開的方法將所有低聚糖硫酸化。
實施例2硫酸化低聚糖類化合物的抗凝集作用表1概括了19種硫酸化低聚糖類化合物的抗凝集活性，它們是通過活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)試驗測定的。由凝血酶時間試驗可得到相似的結果。開始時，顯然有11種被測硫酸化低聚糖表現出比肝素和替地肝素(LMW肝素)更顯著的抗凝集活性。鏈長、單糖組成和連接鍵似乎均是決定性因素。鏈的長度對于麥芽糖系列的影響特別明顯，其中，二-、三-和四聚糖活性較低，而麥芽五糖(maltopentaose)、麥芽六糖(maltohexaose)和麥芽七糖(maltoheptaose)的硫酸酯卻是相當有效的抗凝劑(表1，圖1)。此外，麥芽糖系列的一個意外特征是，從麥芽四糖到麥芽五糖，鏈長僅增加了一個殘基，但抗凝活性卻由此提高了19倍。單糖組成的重要性在硫酸脫乙酰殼多糖六聚物中十分突出，硫酸脫乙酰殼多糖六聚物是由β1-4連接的葡糖胺組成，與β1-4連接的葡萄六糖(glucohexaose)(纖維六糖，表1)相比其所顯示出的抗凝活性可忽略不計。單糖連接鍵對于葡萄糖系列的低聚糖的活性十分重要。所以，與α1-4、α1-6和β1-4連接的含葡萄糖的硫酸化低聚糖相比，硫酸化昆布多糖系列(β1-3連接的葡萄糖)所表現出的抗凝活性極低(表1)。單糖鍵對抗凝活性的其它作用更精細。通常，經α1-2、α1-3、α1-4和α1-6鍵連接的葡萄糖或甘露糖的硫酸化五糖和六糖具有類似的抗凝活性(表1)。硫酸異麥芽五聚糖是一個例外，它與硫酸化麥芽五糖和甘露五糖相比基本上是一種低效抗凝劑(表1，圖2)。這表明，抗凝活性是由較短鏈的α1-4葡萄糖聚合物而不是α1-6葡萄糖聚合物來表達。同樣地，甚至當葡萄糖經β1-4連接成較短鏈時，硫酸化低聚糖仍有活性，因而在這種情況下，四聚糖纖維四糖是有效抗凝劑(表1)。最后，兩種硫酸化程度略微不同的甘露五聚糖磷酸硫酸酯類化合物(PI-88類)基本上活性相等，這表示假如低聚糖類化合物的硫酸化＞50％時，其抗凝活性可得到保證。
顯然，基于表1的數據以及圖1和2，許多有活性的硫酸化低聚糖顯示出相似的抗凝活性，7種最具活性的低聚糖的劑量反應曲線的陡度比肝素平緩4.5-5.9倍。因此，這些低聚糖類的抗凝劑具有比肝素更寬的治療范圍，如果希望嚴密控制患者的抗凝態，這是一個理想的特征。
硫酸化低聚糖類抗凝劑的另一個特征是，其劑量反應曲線非常線性化，線性回歸線的相關系數在多數情況下＞0.99(表1)。反應中這種高度的線性在肝素中不曾觀測到。當用20名不同供血者的血漿對甘露五糖磷酸硫酸酯(PI-88)的抗凝活性進行試驗時，證實其反應性可重現。當肝素和PI-88使血漿的抗凝集達到類似程度時，PI-88始終具有一種重現性較高的凝集時間延遲作用，即PI-88為88.3±11.9秒，肝素為77.5±20.8秒(表2)。事實上，一名獻血者(#13)對肝素無反應，但出乎意料地對PI-88產生反應(表2)。
隨后對硫酸化低聚糖類化合物抑制凝集級聯的方式進行研究。初期試驗表明，PI-88無法提高抗凝血酶III抑制凝血酶的性能。事實上，兩種不同的顯色分析法揭示出PI-88對抗凝血酶III介導型抗凝血酶活性的提高要比肝素的低700-7000倍(未表示數據)。當對抗凝血酶III介導的凝血因子Xa抑制活性進行試驗時，發現PI-88的活性比肝素或LMW肝素(替地肝素)至少低100-1000倍(圖3)。這些結果顯示，PI-88以及可能的其他活性硫酸化低聚糖類化合物不是通過抗凝血酶III發揮其抗凝作用。然而，后繼的研究表示，所述的具有抗凝活性的硫酸化低聚糖可能是經肝素協同因子II起作用，因此，與硫酸皮膚素的抗凝性質相似。在無血漿體系中，向其中的凝血酶和顯色凝血酶底物加入純化的肝素協同因子II，從而發現PI-88提高了肝素協同因子II抑制凝血酶的能力，使其如同肝素和相似皮膚素一般有效(未表示數據)。
總之，這些數據表明，硫酸化低聚糖如PI-88與硫酸皮膚素相類似，并由此可能成為具有顯著功效的抗血栓形成藥。硫酸化低聚糖類化合物之一PI-88的某些附加生物性質也已被確定。已發現它是一種膠原和ADP誘發型血小板聚集作用的弱抑制劑(表3)，更突出的是硫酸化低聚糖類化合物作用于凝集體系的特異性。臨床經常使用魚精蛋白來逆轉肝素和替地肝素的抗凝作用。發現魚精蛋白也可以有效地使PI-88的抗凝活性失活(表4)，這表明可將魚精蛋白作為對抗具有抗凝特性的硫酸化低聚糖類化合物的體內解毒藥。最后，對PI-88在一定哺乳動物物種范圍中作為抗凝劑的性能進行試驗。所述化合物被認為是人、狨猴、羊、狗、大鼠和小鼠血漿的有效抗凝劑，但其對兔血漿的活性較弱(表5)。因此，不僅在人體中而且在廣大哺乳動物物種中，硫酸化低聚糖均可以用作抗凝劑/抗血栓形成藥。
表1由活化部分促凝血酶原激酶時間(APTT)試驗測定的不同硫酸化低聚糖類化合物的抗凝活性的比較化合物 單糖組成 連接鍵 硫酸化程度a凝集時間的增加 相關系數c(秒)/μg+b肝素 Glc，IdoA，GlcNAc β1-4，α1-4ND 29.69 0.977LMW肝素(替地肝素)Glc，IdoA，GlcNAc β1-4，α1-4ND 11.20 0.997麥芽糖SO4Glc α1-4 6/8(75％) 0.31 0.995麥芽三糖SO4Glc α1-4 9/11(82％) 0.25 0.892麥芽四糖SO4Glc α1-4 11/14(79％)0.28 0.992麥芽五糖SO4Glc α1-4 9/17(53％) 5.25 0.996麥芽六糖SO4Glc α1-4 16.6/20(83％) 5.85 0.999麥芽七糖SO4Glc α1-4 ND 5.9-異麥芽五糖SO4Glc α1-6 14/17(82％)1.85 0.999異麥芽六糖SO4Glc α1-6 12.8/20(64％) 6.56 0.999纖維四糖SO4Glc β1-4 ND 4.2-纖維五糖SO4Glc β1-4 ND 3.5纖維六糖SO4Glc β1-4 ND 4.8-昆布四糖SO4Glc β1-3 ND 2.9-昆布六糖SO4Glc β1-3 ND 0.9-昆布七糖SO4Glc β1-3 ND 0.5-脫乙酰殼多糖六聚物SO4GlcN β1-4 ND 0.4-甘露五糖SO4dMan α1-3，α1-611/7(65％) 5.32 0.985磷酸甘露五糖SO4(PI-88)eMan α1-3，α1-212.5/16(78％) 5.67 0.995磷酸甘露五糖SO4(PI-88)eMan α1-3，α1-214/16(88％)5.04 0.995蔗糖SO4Glc，Frc α1-2 8/8(100％) 0.39 0.994注腳(表1)a實際連接上的硫酸根數目/可以偶聯在各分子上的硫酸根的最大理論數目。括號內的數值是硫酸化百分率。在未測定硫酸化程度(ND)情況下，硫酸化低聚糖類化合物處于應產生最高硫酸化度的條件下。b用被測化合物濃度增加1μg/ml所致的凝集時間的增加(秒)表示數據。由凝集數據的線性回歸分析得到的數值。c由凝集數據的線性回歸分析法得到的相關系數。當沒有足夠的用于計算相關系數的數據點時，則無數值。d全合成的甘露五糖e由Pichia holstii酵母分離出的磷酸甘露五糖，其中在還原末端含有6-磷酸甘露糖。ND＝未測定表2對供血者在肝素和磷酸甘露五糖SO4(PI-88)抗凝活性中的變化的評估
a利用APTT試驗評估的凝集時間。在重復試驗中可得到相似的結果。試驗采用可將凝集時間延遲約2.5倍的肝素和甘露五糖磷酸硫酸酯(PI-88)濃度。粗斜體所示的供血者13是所述的對肝素無反應但對甘露五糖磷酸硫酸酯有反應的供血者。表3硫酸甘露五糖SO4(PI-88)對血小板聚集的抑制作用
a在PI-88存在或不存在的條件下，用血小板聚集儀測定的膠原(9μg/ml)或ADP(10μM)誘發性人血小板聚集作用以及血小板聚集作用的相對率。數據±SCD代表兩個供血者。表4硫酸魚精蛋白對肝素、替地肝素和PI-88的抗凝作用的逆轉
a經APTT試驗測定的凝集時間PI-88＝來源于Pichia holstii酵母的硫酸化甘露五糖磷酸酯表5肝素、替地肝素和PI-88對不同哺乳動物物種的血漿的抗凝作用<
a由APTT試驗測定的凝集時間。數據表示抗凝劑所誘發的凝集時間相對于未處理對照物的增加倍數。PI-88＝硫酸化的來源于Pichia holstii酵母的磷酸甘露五糖ND＝未測定參考文獻1.Bjrk，I.& Lindahl，U.(1982)，分子細胞生物化學(Mol.CellBiochem)48，161-1822.Bjrk，I.，Olson，S.T.& Shane，J.D.(1989)，“肝素化學和生物性質，臨床應用”(Lane，D.L.& Lindahl，U.編輯)，229-255頁，Edward Arnold Ltd.London3.Olsen，S.T.& Bjrk，I.(1994).”抗凝血酶和肝素對凝血酶活性的調控”，血栓形成和血液學研究(Sem.Thromb.Hem.)，20，373-409。4.Lindahl，U.(1989)，“肝素”，(Lane，D.A.& Lindahl，U.編輯)，159-189，CRC Press.5.Hirsch，J.& Levine，M.N.(1992)，低分子量肝素，血液學(Blood)，79，1-17。6.Beijering，R.j.R.，ten Cate，H.& ten Cate，J.W.(1996)，血液學紀事(Ann.Hematol.)72，177-183。7.Agnelli，G.，Cosmi，B.，Di Filippo，P.等人(1992)，血栓形成和止血(Thromb.Haemost.)67，203-208。8.Bourin.M.-C.& Lindahl，U.(1993)，生物化學雜志，289，313-330。
權利要求
1.一種用于需治療的人體或其他溫血動物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治療的方法，該方法包括給患者施用有效量的至少一種硫酸化低聚糖，其中所述低聚糖具有通式IR1-(RX)n-R2(I)其中R1和R2和各RX表示單糖單元，它們均可相同或不同，相鄰的單糖單元通過1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接；而n是1-6的整數。
2.權利要求1所述的方法，其中所述通式I的低聚糖中的n為3或4。
3.權利要求1或2所述的方法，其中在所述通式I的低聚糖中，單糖單元是選自果糖、葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔羅糖、半乳糖、艾杜糖和古洛糖的己糖。
4.權利要求1所述的方法，其中所述低聚糖具有通式IIR-(R)n-R(II)其中各R基表示相同的基團并且各自代表單糖單元，相鄰的單糖單元經1→2，1→3，1→4和/或1→6糖苷鍵連接，并且n是1-5的整數。
5.權利要求4所述的方法，其中在通式II的低聚糖中，n是3或4。
6.權利要求4或5所述的方法，其中在通式II的低聚糖類化合物中，R表示單糖單元，它是選自葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔羅糖、半乳糖、艾杜糖和古洛糖的己糖。
7.權利要求6所述的方法，其中在所述通式II的低聚糖中，R表示葡萄糖或甘露糖。
8.權利要求1所述的方法，其中所述低聚糖是由天然多糖經酶促或化學降解作用制得。
9.權利要求8所述的方法，其中所述低聚糖是直鏈淀粉-、葡聚糖-、纖維素-、昆布多糖-、果膠-、殼多糖-、脫乙酰殼多糖-、或甘露聚糖-低聚糖。
10.權利要求9所述的方法，其中所述低聚糖選自麥芽五糖、麥芽六糖、麥芽七糖、異麥芽五糖、異麥芽六糖、纖維四糖、纖維五糖、纖維六糖、昆布四糖和甘露五糖。
11.權利要求8所述的方法，其中所述低聚糖是來源于Pichiaholstii畢赤酵母的磷酸甘露五糖。
12.權利要求1-11任一項所述的方法，其中所述治療包括對血栓形成或心血管疾病的治療。
13.權利要求12所述的方法，其中所述治療包括對深靜脈血栓形成、肺栓塞、栓塞性中風、外周動脈栓塞、不穩定型心絞痛和心肌梗死的治療。
14.權利要求1所定義的硫酸化低聚糖在溫血動物(包括人體)患者的治療中作為抗凝劑和/或抗血栓形成劑的應用。
15.一種用于抗凝集和/或抗血栓形成治療的藥用或獸用組合物，其中含有至少一種如權利要求1所定義的硫酸化低聚糖以及可藥用或可獸用載體或稀釋劑。
16.權利要求1所述的至少一種硫酸化低聚糖在制備用于人體或其他溫血動物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治療的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種用于需治療的人體或其他溫血底物患者的抗凝集和/或抗血栓形成治療的方法,該方法包括給患者施用有效量的至少一種硫酸化低聚糖,其中所述低聚糖具有通式Ⅰ:R
文檔編號A61P7/00GK1251992SQ98803905
公開日2000年5月3日 申請日期1998年3月10日 優先權日1997年3月11日
發明者C·R·帕里施, W·B·考登 申請人:澳大利亞國立大學