專利名稱：復方α干擾素含片及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥生物工程技術領域，尤其是復方α干擾素含片及其制備方法。
作為干擾素之一的α干擾素是一組天然存在的蛋白質，具有抗病毒、抗腫瘤以及免疫調節作用等廣泛的生物學活性。α干擾素的廣譜抗病毒作用不是直接殺傷病毒，而是誘導宿主細胞產生多種酶來干擾從病毒吸附到成熟病毒釋放整個病毒復制過程的各個環節。另外α干擾素還能通過增強NK細胞、巨噬細胞、CTL細胞的活性來殺傷被病毒感染的靶細胞。α干擾素還具有免疫調節作用可誘導MHCⅠ類分子的表達，增強NK細胞和CTL細胞的活性。此外，α干擾素還具有明顯的抗腫瘤作用，其機制有3個方面，①直接抑制腫瘤細胞的生長增殖，其機制可能與下調c-myc、c-fos等原癌基因轉錄水平，下調生長因子受體表達，使細胞停留在G0/G1期有關，②增強機體抗腫瘤免疫應答，包括免疫活性細胞識別腫瘤、被激活增殖和發生應答全過程，③改變宿主和腫瘤間的相互關系，如抑制腫瘤血管生長，分解腫瘤細胞代謝必要的色氨酸等。
白細胞介素2(IL-2)作為一種具有廣泛的免疫調節作用，尤其是特異性細胞免疫作用的細胞因子。人白細胞介素2能顯著地增強T細胞、B細胞、巨噬細胞、NK細胞的免疫功能，提高人體對病毒、細菌、真菌、原蟲等感染的免疫應答，誘導、NK、LAK細胞和腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)增殖，并使其殺傷活性增強，進而清除體內腫瘤細胞和病毒感染細胞等。還可以增加抗體和干擾素等細胞因子的分泌，在機體的免疫應答中具有非常重要的作用，是一種免疫增強劑。此外，白細胞介素2還與其他多種細胞因子之間有協同增強免疫功能的作用。利用其免疫增強功能和與其他多種細胞因子之間有協同增強免疫功能的作用治療腫瘤和病毒，例如腎細癌、白血病、腫瘤肝轉移、乙肝病毒和HIV病毒等都獲得了良好的效果。近來的研究還發現，IL-2經PEG化后，其血清半衰期延長了20倍，抗腫瘤作用大大提高。
但是，臨床上一般傳統應用干擾素或白細胞介素2的施藥手段是通過肌肉注射和靜脈注射兩種方式，雖然大劑量肌肉或靜脈注射的療效是肯定的，但存在以下幾個主要缺點一是不方便，增加病人痛苦，病人往往不能堅持治療；二是副作用較大，如神經系統毒性，抑制造血功能以及過敏反應等，當注射劑量達到300萬至500百萬國際單位時，嚴重的不良反應也隨之產生，因為人體對注射干擾素和白細胞介素2的耐受性低，所以很多患者因大劑量注射產生了嚴重的不良反應，而被迫停止使用注射型的干擾素或白細胞介素2。而且，注射型干擾素或白細胞介素2價格昂貴，應用一個療程三到六個月，僅藥品一項的藥費就高達上萬元，就中國現有經濟水平來看，個人實在難以承擔如此高額的治療支出，嚴重的不良反應和沉重的治療費用，導致許多患者中途放棄治療，貽誤病情。
鑒于上述缺點，人們開始嘗試其他低劑量長期給藥途徑，如鼻腔、舌下、肺吸入等。現經研究證明，低劑量的α干擾素可通過口服途徑給藥而進入淋巴系統，直接激活人免疫系統，發生系列免疫調節作用，并使之達到頂點，該過程的最終的結果是抑制病毒復制及進而消除病毒。例如，1987年，《柳葉刀》報道了口服干擾素對艾滋病癥狀的控制和緩解作用；Bocci V.《臨床藥代動力學》(Clin Pharmacokinet.)1991；21(6):411-417、Paulesu L.等，《世界藥學雜志》(Int J Pharm.)1988；46:199-202報道了經口使用低劑量天然α干擾素對乙型肝炎具有明顯療效；澳大利亞用Namawa細胞經仙臺病毒誘導制備天然α干擾素含片，有十幾種亞型，以淋巴瘤細胞為來源；以及涉及口服干擾素的中國專利申請95111433.6和95101216.9，其中均涉及以α干擾素為主要成份之一的干擾素含片及制備方法。
低劑量口服干擾素(α干擾素含片)雖然對乙肝、丙肝具有一定的治療效果，但是其作用有一定的限制，對乙肝、丙肝的有效率只有30-50％。目前，國外尚無白細胞介素2口服應用的報道，因為白細胞介素2雖然可以通過口腔粘膜吸收并增強機體的免疫應答，但是在單用時對抗腫瘤效果并沒有顯著的改善。
因此，人們需要新的干擾素口服劑型，在保留劑量低、病人耐受性高、服藥方便、價格低廉等優點的同時，進一步提高其治療效率。
因此，本發明的目的就在于提供一種新的復方α干擾素含片，滿足人們長期以來的這一需要。具體地說，它充分利用了有效成份各自的藥理活性和協同作用，顯著提高了抗病毒、抗腫瘤的效率。而且，進一步加強了劑量低、療效好、病人耐受性高、服藥方便、價格低廉等優點。
本發明的目的還在于提供制備所述復方α干擾素含片的方法。使得α干擾素素和白細胞介素2在制備過程中失活少，并且在進入口腔后能夠緩慢釋放。
為了達到以上目的，本發明提供了一種復方α干擾素含片，其中包含作為有效成份的天然α干擾素和白細胞介素2，以及藥學上認可的輔料，所述天然α干擾素的含量為每片100-500IU，白細胞介素2的含量為每片1000-10000IU；更好的是，天然α干擾素的含量為每片200-300IU，白細胞介素2的含量為每片2000-3000IU。
用于本發明的天然α干擾素可以用人脾臟細胞經新城雞瘟病毒誘導產生，含有30多種亞型，是天然α干擾素混合物。也可以是購買的天然α干擾素商品。例如上海生物制品研究所的商品天然α干擾素。
用于本發明的白細胞介素2可以是由外周血淋巴細胞、脾臟細胞、扁桃體細胞等制備的天然人白細胞介素2，或者是通過DNA重組技術獲得的重組人白細胞介素2。例如上海華新生物高技術公司的商品白細胞介素2。
本發明使用的藥學上認可的輔料是藥學上認可的常用穩定劑和賦形劑等。其中包括牛血清白蛋白、人血清白蛋白，甘露醇、聚乙二醇、乳糖、葡萄、淀粉、糊精、硬脂酸鎂等。
本發明采用的劑型為舌下含片。
本發明還提供了一種制備天然α干擾素白細胞介素2復方含片的方法。它包括取無菌天然α干擾素和白細胞介素2，與藥學上認可的輔料混合，冷凍干燥成凍干粉；將藥學上認可的輔料制備濕軟材，將濕軟材過篩，干燥，制備成空白顆粒；將α干擾素與白細胞介素2凍干粉與等量空白顆粒充分混合，混合物再與剩余空白顆粒充分混合；在低溫至常溫條件下直接壓片。
由于白細胞介素2也可以通過口腔粘膜吸收，從而激活全身免疫系統，發揮抗腫瘤、抗感染和免疫調節作用。因此，本發明在口服α干擾素的基礎上再加上能刺激機體免疫系統活性的另外一種細胞因子白細胞介素2，利用它們的協同作用大大加強了療效，而毒副作用沒有進一步增加，初步治療乙肝病人，有效率達90％以上。所以，本發明的含片適用于乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性感染及腫瘤的治療，而且具有療效好、病人耐受性高、服藥方便、價格低廉等優點。
由于本發明選用了白蛋白、甘露醇、聚乙二醇等穩定劑，以及淀粉、硬脂酸鎂和糊精等賦形劑，并且采用低溫至常溫的工藝條件，使得本發明的天然α干擾素和白細胞介素2復方含片還具有制備過程中失活少，穩定性好，能夠在口腔內緩慢釋放等優點。
以下將結合實施例進一步詳細說明本發明。本發明的優點和有益效果也將由此變得顯而易見。
實施例1為制備10,000片復方α干擾素含片，取無菌天然α干擾素(上海生物制品研究所)240萬IU和3600萬IU白細胞介素2(上海華新生物高技術公司)(壓片后α干擾素和白細胞介素2的活性損失率為20％)，與100g無菌甘露醇(上海長征制藥廠)(20％的溶液(適量))和20g人血白蛋白(上海生物制品研究所)混合，置于無菌不銹鋼盤中，用冷凍干燥機(Virtis公司)凍成于粉。
取硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)100g、糊精(上海藥用輔料廠)180g混合均勻，再與淀粉400g混合均勻，制備軟材，將濕軟材過20目篩制備顆粒，將此顆粒于60℃的烘箱(Hereaus公司)內干燥，至含水量為5-10％。
將α干擾素與白細胞介素2凍干粉與等量空白顆粒充分混合，混合物再與剩余空白顆粒充分混合，以保證混合物中α干擾素和白細胞介素2含量均勻。
壓片機(德國克利安公司)預先調節溫度為-4至20℃，并保證操作溫度不超過20℃，將混合物直接壓片成10,000片。
實施例2根據權利要求1所述的方法，按照以下配方制備本發明的α干擾素和白細胞介素2復方含片，共1,000片。
組成 含量天然α干擾素(上海生物制品研究所) 10萬IU白細胞介素2(上海華新生物高技術公司) 100萬IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 4g甘露醇(上海長征制藥廠) 5g淀粉(上海亞東藥業公司) 45g硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠) 10g糊精(上海藥用輔料廠) 16g實施例3根據權利要求1所述的方法，按照以下配方制備本發明的α干擾素和白細胞介素2復方含片，共1,000片。
組成 含量天然α干擾素(上海生物制品研究所) 50萬IU白細胞介素2(上海華新生物高技術公司)1000萬IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 1g甘露醇(上海長征制藥廠) 15g淀粉(上海亞東藥業公司) 40g硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠)5g糊精(上海藥用輔料廠)19g實施例4根據權利要求1所述的方法，按照以下配方制備本發明的α干擾素和白細胞介素2復方含片，共1,000片。
組成 含量天然α干擾素(上海生物制品研究所) 20萬IU白細胞介素2(上海華新生物高技術公司)250萬IU人血白蛋白(上海生物制品研究所) 2g甘露醇(上海長征制藥廠) 10g淀粉(上海亞東藥業公司) 40g硬脂酸鎂(上海藥用輔料廠) 10g糊精(上海藥用輔料廠) 18g測試實驗測試1以健康昆明種小鼠(由第二軍醫大學實驗動物中心提供)進行急性毒性實驗，用最大濃度、最大容積0.5ml，對20只小鼠經灌胃給予本發明的復發天然α干擾素含片。連續觀察7天，未發現任何毒副作用。實驗結果表明，本發明復發天然α干擾素含片的最大耐受量是人用劑量，即250IU/日的50000倍。試驗同時設置單用同劑量α干擾素的對照，結果表明與單用α干擾素制成的含片比較，毒性沒有增加。
測試2取一片實施例6制備的本發明含片粉碎，加入5-10ml的RPMI-1640培養基中混合攪拌，然后于4℃放置過夜。然后用50um的濾膜(Whattman公司)過濾，收集濾液。用常規方法，即WISH法測定其中有效成份的含量。經測定，其中α干擾素和白細胞介素2的含量為標示量的100±10％。
將本發明含片在4至10℃環境下放置2年，經WISH法測定，活性無明顯變化。
比較實施例臨床測試6例乙型肝炎患者，平均病史為6.8年，平均年齡為33.2歲；雙盲法分為3組。分別為治療組服用本發明實施例6所述的復方天然α干擾素和白細胞介素2含片，對照1組含服安慰劑，對照2組含服α干擾素含片(200IU/片)，各組的患者每晨起取一片含片，于舌下含服10-30分鐘。通過為期一年的療效觀察，主要測試結果如下
動物實驗裸鼠40只，隨機分為4組，A組口服生理鹽水作為對照，B組口服α干擾素10IU/kg,C組口服白細胞介素2 200IU/kg,D組服用α干擾素和白細胞介素2復方含片(α干擾素10IU/kg，白細胞介素2 200IU/kg)，連續服藥一周，檢測裸鼠脾細胞NK活性，結果如下
*與B、C組比較，P＜0.01由于存在種屬差異，人α干擾素對小鼠無效，故不能用小鼠評價干擾素的作用，而裸鼠體內缺乏T細胞，只能檢測NK活性作為免疫指標。試驗結果表明α干擾素和白細胞介素2可以發生協同增強免疫系統的作用。
權利要求
1．一種復方α干擾素含片，其特征在于，其中包含作為有效成份的天然α干擾素和白細胞介素2，以及藥學上認可的輔料，所述天然α干擾素的含量為每片100-500IU，白細胞介素2的含量為每片1000-10000IU，所述的藥學上認可的輔料選自牛血清白蛋白、人血清白蛋白，甘露醇、聚乙二醇、乳糖、葡萄、淀粉、糊精、硬脂酸鎂。
2．根據權利要求1所述的復方α干擾素含片，其特征在于，所述天然α干擾素的含量為200-300IU，所述白細胞介素2的含量為2000-3000IU。
3．根據權利要求1所述的復方α干擾素含片，其特征在于，所述天然α干擾素的含量為250IU，所述白細胞介素2的含量為2500IU。
4．一種制備權利要求1所述的復方α干擾素含片的方法，其特征在于，它包括取無菌天然α干擾素和白細胞介素2，與藥學上認可的輔料混合，冷凍干燥成凍干粉；將藥學上認可的輔料制備濕軟材，將濕軟材過篩，干燥，制備成空白顆粒；將α干擾素與白細胞介素2凍干粉與等量空白顆粒充分混合，混合物再與剩余空白顆粒充分混合；在低溫至常溫條件下直接壓片。
全文摘要
本發明提供一種復方α干擾素含片，包含作為有效成分的低劑量的天然人α干擾素與白細胞介素2，以及藥學上認可的輔料。本發明還提供了通過在低溫至常溫工藝條件下壓片來制備以上含片的方法。該含片適用于乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性感染及腫瘤的治療。具有劑量低、療效好、病人耐受性高、服藥方便、價格低廉、性能穩定等優點。
文檔編號A61K38/21GK1227125SQ9810538
公開日1999年9月1日 申請日期1998年2月25日 優先權日1998年2月25日
發明者曹雪濤, 鞠佃文, 陶群 申請人:上海華晨生物技術研究所