藥物復合物的制造方法

專利名稱：藥物復合物的制造方法
技術領域：
本發明是關于多糖衍生物和抗腫瘤藥等的醫藥化合物結合形成的藥物復合物的制造方法。
背景技術：
在肺癌和消化道癌等的固型癌以及白血病等的血液癌的治療時使用的抗腫瘤藥，通過靜脈注射或口服等的給藥途徑全身性地給藥之后，分布到特定的腫瘤部位，通過阻礙或者抑制癌細胞的增殖而發揮治療效果。但是，經全身給藥的抗腫瘤藥，因為可以從血中迅速地被肝臟·內皮網狀系統攝取，或者迅速地被從尿中排泄，有血中濃度低，向腫瘤部位的分布不充分的情況。并且，對于通常的抗腫瘤藥自身來說，存在有以下問題因其向腫瘤部位分布的選擇性(腫瘤選擇性)低，故抗腫瘤藥廣泛分布于全身的各種細胞和組織等，對于正常的細胞和組織等也產生細胞毒作用，致使嘔吐、發熱、或者脫發等的副作用發生率極高。因此，抗腫瘤藥在追求其效果的同時亦要追求能夠選擇性地分布到腫瘤部位的手段的開發。
作為象這樣的手段之一，提出了使用具有羧基的多糖衍生物作為藥物載體，在該多糖衍生物上結合抗腫瘤藥，延遲抗腫瘤藥從血中消除的同時，提高向癌組織分布的靶向性的方法。例如，在國際專利W094/19376號中，公開了一種藥物復合物，它是在具有羧基的多糖的羧基上結合上肽鏈(氨基酸數目1～8)，然后進一步通過這個肽鏈再結合阿霉素、道諾紅霉素、絲裂霉素C、或者博來霉素等形成藥物復合物。另外，在日本特開平7-84481號中公開了在被羧甲基化的甘露醇葡聚糖衍生物上，通過席夫堿或酰胺鍵導入了上述抗腫瘤藥的藥物復合物。這些藥物復合物與不結合藥物傳遞載體的抗腫瘤藥自身相比，具有優異的抗腫瘤效果，同時毒性和副作用減輕。
另外，對于與使用多元醇化多糖衍生物作為藥物傳遞載體的藥物復合物有關的技術來說，有“關于多糖-肽-阿霉素復合物的研究·多糖衍生物的血中穩定性和抗腫瘤效果的關系”(第10次日本DDS學會講演要旨集，279,1994)；“關于多糖-肽-阿霉素復合物的研究·體內動力學和抗腫瘤效果”(第9次日本藥物動態學會年會講演要旨集，292,1994)；第19次研究開發動向研討會(醫藥品機構舉辦)要旨集，D-9,1995；以及“關于通過多糖載體向腫瘤傳遞藥物的研究”(第12次膠體·界面技術討論會，日本化學會，講演要旨集，51,1995)等。
以前，這些的藥物復合物，可以將羧甲基プルラン、羧甲基葡聚糖等的含有羧基的多糖衍生物制成鈉鹽后，讓該多糖衍生物的羧基和抗腫瘤藥的氨基(或者與抗腫瘤藥結合著的肽鏈的N末端氨基)通過酰胺鍵結合來制造。因為多糖衍生物的鈉鹽在有機溶劑中幾乎不溶解，要進行此反應，可采用將多糖衍生物的鈉鹽配制成水或含水的水性有機溶劑的溶液之后，在此溶液中使縮合劑和鹽酸鹽等形式的抗腫瘤藥(或者具有肽鏈的抗腫瘤藥)溶解的方法。
但是，因為在此反應中，脫水縮合反應在含有水的溶劑中進行，產物要得到高收率是不可能的。作為反應原料使用的抗腫瘤藥等一般是高價格的物品，從制造成本的觀點應尋求能高效率地制造上述藥物復合物的方法。另外，在日本特開平6-87746號記載的，作為抗腫瘤藥有效的化合物，因為在分子中有內酯環存在，對此將以肽式鍵合著的化合物進行上述的反應時，在堿及水的存在下內酯環開環，生成的羧基同與抗腫瘤藥結合著的肽鏈的N末端氨基反應，使產物的收率顯著地降低，并且得不到均一的藥物復合物。為此，應尋求能夠避免內酯環開環的化合物生成的反應方法。
發明概述本發明的課題是提供高效率的，將抗腫瘤藥及抗炎藥等的有效成分，制造成對于腫瘤部位等能夠具有靶向性的藥物復合物的方法。更具體地說，是讓具有羧基的多糖衍生物和抗腫瘤藥等的醫藥化合物或結合了醫藥化合物的低聚肽等的間隔基進行高效率的反應，提供能夠大量并且廉價的制造藥物復合物的方法。
本發明者們為了解決上述的課題，進行了深入細致的研究，結果發現具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物或者結合了醫藥化合物的間隔基進行反應，使用有機胺的鹽代替以前使用的多糖衍生物的鈉鹽時，多糖衍生物的鹽可基本上在非水溶劑中高濃度地溶解，使多糖衍生物同醫藥化合物或者結合了醫藥化合物的間隔基的反應能夠以很高的收率進行，并且能夠使副產物等降低。本發明是基于以上的發現而完成的。
即本發明是提供具有以下特征的方法具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基結合起來的藥物復合物；或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基而直接結合起來的藥物復合物的制造方法，具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了間隔基的醫藥化合物在非水系統中進行反應。并且在該藥物復合物的制造方法中包括以下的工序(1)將具有羧基的多糖衍生物的堿金屬鹽轉換成有機胺的鹽的工序；以及(2)該有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了間隔基的醫藥化合物在非水系統中進行反應的工序。
通過本發明的優選方式，能夠提供具有羧基的多糖衍生物是羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的上述方法；構成羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇，在實質上可能完全多元醇化的條件下，處理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇為特征的上述方法；羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇是羧甲基葡聚糖多元醇的上述方法；羧基C1-4烷基葡聚糖多元醇分子量是在5,000～500,000的范圍，優選在50,000～450,000的范圍，更優選200,000～400,000的范圍的羧甲基葡聚糖多元醇，羧甲基化度相當于每個糖殘基為0.01～2.0的范圍，優選0.1～1.0的范圍，更優選0.3～0.5的范圍的上述方法；并且醫藥化合物為抗腫瘤藥或者抗炎藥的上述方法。
進一步來說，通過本發明的優選方式能夠提供醫藥化合物是能夠形成內酯環的化合物的上述方法；在有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基的反應中，使用形成了內酯環的醫藥化合物或結合了形成內酯環的醫藥化合物的間隔基的上述方法；以及能夠形成內酯環的上述醫藥化合物是(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3＇,4＇:6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮的上述方法。
附圖的簡單的說明

圖1是表示用本發明的方法制造出的例8的藥物復合物的GPC圖。
圖2是表示用本發明的方法制造出的例8的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖3是表示用本發明的方法制造出的例9的藥物復合物的GPC圖。
圖4是表示用本發明的方法制造出的例9的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖5是表示用本發明的方法制造出的例10的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖6是表示用本發明的方法制造出的例15的藥物復合物的GPC圖。
圖7是表示用本發明的方法制造出的例15的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖8是表示用本發明的方法制造出的例28的藥物復合物的GPC圖。
圖9是表示用本發明的方法制造出的例28的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖10是表示用本發明的方法制造出的例29的藥物復合物的GPC圖。
圖11是表示用本發明的方法制造出的例29的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖12是表示用本發明的方法制造出的例34的藥物復合物的GPC圖。
圖13是表示用本發明的方法制造出的例34的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖14是表示用本發明的方法制造出的例39的藥物復合物的GPC圖。
圖15是表示用本發明的方法制造出的例39的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖16是表示用本發明的方法制造出的例41的藥物復合物的GPC圖。
圖17是表示用本發明的方法制造出的例41的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖18是表示用本發明的方法制造出的例44的藥物復合物的GPC圖。
圖19是表示用本發明的方法制造出的例44的藥物復合物的紫外吸收光譜圖。
圖20是表示用本發明的方法制造出的例15的藥物復合物體內動力學的圖。圖中的各點表示3例的平均值。
發明的優選實施方案由本發明的制造方法制造出的藥物復合物，其特征如下具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基為媒介結合起來、或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基直接結合起來。
包含在藥物復合物中的醫藥化合物的殘基，來源于例如抗腫瘤藥、抗炎藥、抗菌素等的、被應用在包括人在內的哺乳類動物疾病的治療以及/或者預防的醫藥化合物，由它們的部分結構構成。但作為該殘基來源的醫藥化合物并不限定在上述的范圍。并且，作為醫藥化合物來說，可以使用能夠與多糖衍生物或者間隔基結合有關的、具有1或2個以上的反應性官能團(例如氨基、羧基、羥基、巰基、酯基等)的任何的物質。對于在說明書中所謂的醫藥化合物的范圍，包括它本身是有醫藥作用的化合物的主要結構形成的由其部分構造組成的化合物，也包括在生物體內能夠再生該化合物的前體化合物。
更具體的說，在本說明書內的所謂醫藥化合物的殘基，假定多糖衍生物或者間隔基同醫藥化合物殘基的結合是通過醫藥化合物中的反應性官能團同多糖衍生物或者間隔基中的反應性官能團之間的反應(例如脫水縮合等)形成的時候，是指在結合后的化合物中存在的源自原先醫藥化合物的部分結構。例如，醫藥化合物用D-NH2,D-COOH,D-COOR,D-OH,D-SH,D-CONH2,D-NH-COOR(R是低級烷基等)表示的時候，醫藥化合物的殘基分別可以用D-NH-(D-NH-CO-Q等)，D-CO-(D-CO-NH-Q,D-CO-O-Q,D-CO-S-Q等)，D-CO-(D-CO-NH-Q,D-CO-O-Q,D-CO-S-Q等)，D-O-(D-O-CO-Q,D-O-Q等)，D-S-(D-S-CO-Q,D-S-Q等)，D-CONH-(D-CO-NH-CO-Q等)，D-NH-CO-(D-NH-CO-O-Q,D-NH-CO-NH-Q等)表示(括弧內表示間隔基或多糖衍生物同醫藥化合物殘基的結合，Q表示從間隔基或多糖衍生物中分別除去反應性官能團以及羧基后剩余的部分結構)。間隔基或多糖衍生物同醫藥化合物殘基的結合的種類并不僅限于上述的物質。醫藥化合物的殘基可以與多糖衍生物的羧基、間隔基的N末端氨基或者C末端羧基、或者存在于組成間隔基的氨基酸中的反應性官能團結合。
作為醫藥化合物的殘基來說，可適宜使用例如阿霉素、道諾紅霉素、絲裂霉素C、博來霉素、環胞苷、長春新堿、長春堿、甲氨蝶呤、鉑類抗腫瘤藥(順鉑或其衍生物)、紫杉醇或其衍生物、喜樹堿或其衍生物(日本特開平6-87746號公開的抗腫瘤藥，優選權利要求2記載的(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3＇,4′:6,7]吲哚嗪基[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮等)等的抗腫瘤藥的殘基。另外也可適宜例如琥珀酸氫化可的松、琥珀酸潑尼松等的甾體類抗炎藥；或者甲滅酸、氟滅酸、雙氯芬酸、布洛芬、氨芐噻吡酯等的非甾體抗炎藥的殘基。
醫藥化合物的殘基可以同多糖衍生物直接結合，也可以通過間隔基結合。作為象這樣的間隔基來說，可以使用含有1個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基。更具體地說，對于醫藥化合物的殘基同多糖衍生物通過間隔基結合起來的情況，該間隔基有著1個氨基酸的殘基(其意義是從氨基酸的氨基以及羧基分別除去1個氫原子以及1個羥基的殘基)、或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的低聚肽的殘基(其意義是從N末端的氨基以及C末端的羧基分別除去1個的氫原子以及1個羥基的殘基)的形式。
優選的間隔基是含有2～6個氨基酸的低聚肽的殘基。構成間隔基的氨基酸的種類沒有特別的限定，可使用例如L-或D-氨基酸、優選L-氨基酸，除α-氨基酸之外，也可以使用β-丙氨酸、ε-氨基己酸、y-氨基酪酸等。象這個樣的α-氨基酸以外的氨基酸，在間隔基中優選配置與多糖衍生物接近的位置。
例如使用低聚肽間隔基的時候的結合方向，沒有特別的限制，但一般地可以將間隔基的N末端通過酰胺鍵結合在羧基C1-4的烷基葡聚糖多元醇的羧基上，而將間隔基的C末端結合在醫藥化合物的氨基上。另外，例如肽間隔基的構成單元中包括著賴氨酸殘基，將賴氨酸殘基的α-氨基以及ε-氨基各自同其他氨基酸的羧基經酰胺鍵結合時，因為肽間隔基的兩端均變為N末端，結合醫藥化合物的羧基即成為可能的事情。進一步說，在間隔基中其構成單元包括著1個或1個以上的二氨基化合物或二羧酸化合物的殘基(例如乙二氨基等的二氨基的殘基和琥珀酸等的二羧酸的殘基等)，也可使用兩末端為N末端的間隔基以及兩末端為C末端的間隔基。
使用由低聚肽組成的間隔基時的氨基酸序列沒有特定地限定，但可優選使用例如，間隔基是用-X-Z-表示的二肽的殘基(X表示疏水性氨基酸的殘基，Z表示親水性氨基酸的殘基，-X-Z-的意義是疏水性氨基酸(X)和親水性氨基酸(Z)分別以N末端側以及C末端側，通過肽式鍵合起來的二肽的N末端的氨基以及C末端的羧基各自除去1個氫原子以及1個羥基的殘基)、或者將該二肽的殘基作為部分肽序列適當地用于間隔基。作為疏水性氨基酸來說，可使用例如苯丙氨酸、酪氨酸、亮氨酸等；作為親水性氨基酸來說，可使用例如甘氨酸、丙氨酸等。間隔基也可以有象這個樣的二肽殘基的重復序列(例如-X-Z-X-Z-,-X-Z-X-Z-X-Z-等)。
使用包括象這個樣的二肽結構的間隔基時，間隔基在被認為肽酶豐富的腫瘤部位及炎癥部分加水分解，因為在該部位能使醫藥化合物高濃度地游離，所以包含上述二肽的間隔基和醫藥化合物結合而形成的結構，是通過本發明的方法制造出來的藥物復合物的優選的部分結構。作為醫藥化合物的殘基，對于使用與濃度有依賴關系的具有抗腫瘤作用的抗腫瘤藥(隨濃度增加抗腫瘤作用增強的抗腫瘤藥濃度依賴型的抗腫瘤藥，例如阿霉素等)的殘基時，特別優選使用用-X-Z-表示的上述由二肽殘基組成的間隔基或者包括該二肽的殘基在作為部分肽排列的間隔基。
另外，作為醫藥化合物的殘基，對于使用在一定的濃度的，以作用時間的持續作為必須的時間依賴型的抗腫瘤藥時，通過使用上述的間隔基有時也能夠達到高的抗腫瘤效果，例如在日本特開平6-87746號記載的抗腫瘤藥，能夠舉出優選權利要求2記載的抗腫瘤藥。在一般情況，并不限定在上述的間隔基，有必要從抗腫瘤藥的作用機制、體內動力學及顯示毒性的特點、抗腫瘤藥在體內的游離性等方面選擇優選的間隔基。另外在一般情況下，對于增殖迅速的癌癥來說，優選能夠在短時間內游離出高濃度的醫藥化合物的上述的間隔基。
在以下表示間隔基的具體例子，但被用于本發明的醫藥復合物的制造方法的間隔基并不僅限定在以下的化合物，象能夠給予醫藥化合物最佳游離速度這樣的問題，本專業的人員當然可以適宜地選擇。表中，肽序列左邊是N末端、在C末端一側結合醫藥化合物的殘基。D-phe表示D-苯丙氨酸殘基，其他的氨基酸表示L-氨基酸。另外游離速度的大小是通過結合了阿霉素的藥物復合物對感染Walker256癌大鼠的藥效的體現的程度、或者在感染Walker256癌大鼠的腫瘤部位的游離阿霉素的濃度來判定。這些的間隔基中，對于阿霉素來說，優選使用(N末端)-Gly-Gly-Phe-Gly-等的在短時間內能夠游離出高濃度的醫藥化合物的間隔基。
表1(a)游離速度大的間隔基-Leu-Gly--Tyr-Gly--Phe-Gly--Gly-Phe-Gly--Gly-Gly-Phe-Gly--Gly-Phe-Gly-Gly--Phe-Gly-Gly-Gly--Phe-Phe-Gly-Gly--Gly-Gly-Gly-Phe-Gly-(b)游離速度比較大的間隔基-Gly-Gly-Phe-Phe--Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-(c)游離速度比較小的間隔基-Phe-Phe--Ala-Gly--Pro-Gly--Gly-Gly-Gly-Phe-(d)游離速度小的間隔基-Gly--D-Phe-Gly--Gly-Phe--Ser-Gly--Gly-Gly--Gly-Gly-Gly--Gly-Gly-Gly-Gly-
作為構成藥物復合物的多糖衍生物部分的具有羧基的多糖衍生物來說，可以使用例如多糖類或者將其經化學或生物學方面的修飾的在分子中具有羧基的任何化合物。例如，除了能夠使用透明質酸、果膠、褐藻酸、軟骨素、肝素等的多糖類之外，還能夠使用プルラン、葡聚糖、甘露聚糖、殼聚糖、旋覆花素、果聚糖、木聚糖、阿拉伯聚糖、マンノグルカン、脫乙酰殼聚糖等的、在多糖的部分或者全部的羥基上導入了具有羧基的官能團的化合物等。例如，可以優選使用將羥基進行羧C1-4烷化后的化合物，及將多元酸的一個羧基與羥基經酯鍵結合起來的化合物等。另外，也可以使用在將上述多糖類多元醇化之后，導入了具有羧基的官能團的化合物。
在這樣的多糖衍生物中，優選使用羧C1-4烷基葡聚糖多元醇。羧C1-4烷基葡聚糖多元醇的多元醇化程度沒有特別的限定，但構成羧C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇，優選的是在實際上有可能完全地多元醇化的條件下處理葡聚糖得到的葡聚糖多元醇。
對于制造羧C1-4烷基葡聚糖多元醇來說，使用的葡聚糖的種類沒有特別地限定，可以包含任意比例的α-D-1,6-鍵。例如α-D-1,6-鍵的比例可以使用85％以上、90％以上、或者95％以上的葡聚糖等。葡聚糖的分子量沒有特別地限定，可使用例如從10,000左右到2,000,000左右的化合物，優選50,000左右到800,000左右的化合物。作為構成羧C1-4烷基葡聚糖多元醇的羧C1-4烷基的C1-4烷基來說，可使用直鏈或者支鏈的C1-4烷基，具體地說，有甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基等，其中可優選使用甲基。
本發明的方法，在于制造上述的藥物復合物，其特征在于，具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽同醫藥化合物自身、或者具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽同結合了醫藥化合物的間隔基，在實質上不含有水的有機溶劑中，即在非水體系下進行反應。以下作為本發明的方法的優選實施方案，對于使用羧C1-4烷基葡聚糖多元醇作為多糖衍生物的情況進行具體地說明，但是本發明的范圍并不局限于這些實施方案。
對于使用葡聚糖作為起始原料的時候，將遠遠過量的高碘酸鈉和硼氫化鈉依次與葡聚糖作用，能夠制造實質上將葡聚糖完全地多元醇化的葡聚糖多元醇。然而葡聚糖的多元醇化的方法并不僅限定于上述的方法，研究人員可以采用可能利用的任何的方法。羧C1-4烷基化能夠通過例如將氯代醋酸、溴代醋酸、α-氯丙酸、α-甲基-α-氯丙酸、β-氯丙酸、α-甲基-β-氯丙酸、α-氯酪酸、β-氯酪酸、γ-氯酪酸等的鹵代C1-4烷基羧酸，優選氯代醋酸與葡聚糖多元醇的羥基反應，將羥基部分或者完全地羧C1-4烷基化。
例如，將葡聚糖多元醇溶解在與反應無關的惰性溶劑中(例如水、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜等)，在堿(例如氫氧化鈉及氫氧化鉀等)的存在下，添加鹵代C1-4烷基羧酸或其鹽，在冰冷下至100℃左右的溫度范圍進行數分鐘至數日的反應。羧C1-4烷基的導入的程度，通過適宜地選擇例如羧C1-4烷基化的反應溫度及作為試藥使用的鹵代C1-4烷基羧酸以及堿的量，能夠容易地得以調節，象這樣的手段對于研究人員是公知的。對于葡聚糖多元醇的羥基的羧C1-4烷基化的程度沒有特別的限定，但是例如相當于構成糖殘基的0.01～2.0的范圍，優選是0.1～1.0、更優選是0.3～0.5的范圍。羧C1-4烷基葡聚糖多元醇的分子量，在用凝膠過濾法測定時，是從5,000～500,000左右，優選50,000～450,000左右，更優選200,000～400,000左右。
象這樣制造出的羧C1-4烷基葡聚糖多元醇，被調制成以鈉鹽或鉀鹽等的堿金屬鹽形式的水溶液存在。本發明的方法的特征是，對于象這樣的多糖衍生物的羧基來說，在與醫藥化合物或者同醫藥化合物的殘基結合后的間隔基結合時，用以有機胺的鹽的形式的多糖衍生物代替上述的堿金屬鹽的形式的多糖衍生物。象這種樣的以有機胺的鹽的形式的多糖衍生物，在不含水的有機溶劑中實際應用時能夠以高濃度溶解，因為反應可以在非水系統中進行，所以反應效率可以顯著地得到提高。
作為有機胺的鹽來說，例如除了能夠使用三乙基胺、三甲基胺、三乙醇胺等的脂肪族胺類的鹽之外，還能夠使用N-甲基吡咯烷、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二甲基氨基吡啶等的脂環式或者芳香族胺類的鹽、氯化四甲基銨、氯化四乙基銨等的季銨鹽等。由多糖衍生物的鈉鹽轉換成有機胺的鹽，可以使用離子交換樹脂來進行。例如將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽溶解于水，上到填充了Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)樹脂的柱中，用水洗脫后，添加三乙基胺等的有機胺，能夠經冷凍干燥得到。另外，將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽溶解于水，使其通過三乙基銨型的樹脂，也可以經一步工藝進行轉換。
醫藥化合物自身同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基的結合、或者結合了醫藥化合物的間隔基同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基的結合，通常可以通過醫藥化合物具有的反應性的氨基或間隔基的N末端氨基同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基經酰胺鍵結合。另外，醫藥化合物或者間隔基同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基的結合并不限定于上述的方式，也可以用其它的化學鍵或利用1或1個以上的間隔基的鍵合。例如，可以通過間隔基C末端的羧基或者醫藥化合物的羧基同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基形成酸酐，另外也可以使用亞乙基二氨基等的二氨基化合物作為間隔基，將各自的羧基與二氨基的各個氨基經酰胺鍵結合。
通過醫藥化合物具有的反應活性的氨基或間隔基的N末端氨基同羧甲基葡聚糖多元醇的羧基經酰胺鍵結合的時候，能夠使用通常用于肽鏈的合成的脫水縮合劑，例如除象N,N＇-二環己基碳化二亞胺(DCC)那樣的N,N＇-二環烷基碳化二亞胺類、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDAPC)等的碳化二亞胺衍生物、象1-羥基苯并三唑(HOBT)那樣的苯并三唑衍生物之外，還有1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(EEDQ)等。并且也可以通過活性酯法及酰鹵化物法等進行反應。
反應實際上是在不含有水的有機溶劑中進行，可以使用能夠溶解反應物(羧甲基葡聚糖多元醇的有機胺鹽以及醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基)的任何溶劑。例如，優選使用N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、環丁砜等。醫藥化合物或者結合了醫藥化合物的間隔基經過反應導入羧甲基葡聚糖多元醇的醫藥化合物殘基的量沒有特別的限定，但是應該從醫藥化合物殘基的物理化學方面的性質、藥物復合物的體內動力學、藥效、以及毒性等的方面適宜選擇。通常能夠選擇0.1～30重量％，優選1～15重量％左右的范圍。被導入了羧甲基葡聚糖多元醇的醫藥化合物殘基的比例，可以通過例如吸光度分析等方法容易地測定。
作為本發明的制造方法的優選實施方案，在日本特開平6-87746號的權利要求書第2項記載的抗腫瘤藥的醫藥化合物，其與低聚肽式鍵合后，再導入羧甲基葡聚糖多元醇的方法，可用以下的流程圖表示，但本發明的方法并不局限于在這個流程圖中被表示的方法。在下述流程圖中，醫藥化合物殘基的導入量，是例如1～15重量％，優選4～8重量％左右。另外，在下述流程圖中，在例示中記載的多元醇的組成單元中只有導入了1個或2個的羧甲基的組成單元，藥物復合物的多糖衍生物部分沒有通過上述組成單元的反復組合來構成之事，是應該被理解的。


上述流程圖中的醫藥化合物，在酸性水性溶劑中(例如pH3左右)平衡偏向于形成內酯環的化合物(閉環體)；另一方面，在堿性水性溶劑中(例如pH10左右)平衡偏向于形-成內酯環開環的化合物(開環體)，這些是公知的常識，但是導入相應于這樣的閉環體及開環體的殘基的藥物復合物，具有同等的抗腫瘤效果。然而，羧甲基葡聚糖多元醇在同結合了上述醫藥化合物的間隔基(例如低聚肽·間隔基)進行反應時，如果開環型的反應種類存在于反應系統，在來源于內酯環的羧基同來源于間隔基的氨基之間進行縮合反應，不僅使反應收率顯著地降低，而且有時得不到均一的目的藥物復合物。象這個樣的副反應，在不能達到平衡的非水性系統中可以通過使用閉環體這種反應種類得以避免。因此本發明的方法對包括上述的醫藥化合物的藥物復合物的制造特別地適合。
由本發明的方法制造出的上述藥物復合物，對應于醫藥化合物的殘基種類(例如抗腫瘤藥或者抗炎藥等的醫藥化合物的殘基)，在腫瘤部位及炎癥部位等的局部能夠得到所希望的醫藥活性，并且還有能夠減低醫藥化合物自身所具有的毒性的特點。例如，是多糖衍生物部分的羧甲基葡聚糖多元醇作為藥物輸送的載體有著極其優異的血中滯留性及向腫瘤·炎癥部位的積聚性，使上述的藥物復合物具有著腫瘤選擇性以及炎癥部位選擇性。另外，因為在腫瘤部位及炎癥部位被認為發現了蛋白酶(肽酶)，具有由低聚肽組成的間隔基的藥物復合物在其肽鏈部分可容易地被加水分解，游離出的醫藥化合物發揮藥效。
包含通過本發明的方法制造出來的藥物復合物的藥物，通常可以用冷凍干燥品等的形式填充入玻璃瓶等，以使用時臨時溶解型的注射用或者點滴用制劑等的非口服給藥制劑應用于臨床，但象這樣的藥物的制劑形式并不局限于上述的形式。對于上述制劑的制造，例如可以使用助溶劑、pH調節劑、穩定劑等在本行業可以使用的制劑用輔料，制造出醫藥組合物。上述藥物的劑量沒有特別的限定，但通常根據構成醫藥化合物的殘基的醫藥化合物的給藥量，藥物復合物中被導入的藥物化合物的殘基量、患者的狀態及疾病的種類等來決定。例如，在日本特開平6-87746號權利要求2記載的抗腫瘤藥的殘基，在用約6重量％左右的比例導入的藥物復合物非口服給藥時，一般每天以體表面積每1m2約1～500mg左右，優選約10～100mg的范圍一次給藥，優選每周反復給藥3～4次。
實施例以下通過實施例進一步具體地說明本發明，但本發明的范圍并不局限于下述的實施例。實施例中，[A-NH-]表示在象日本特開平6-87746號權利要求2記載的醫藥化合物(在實施例中也叫做“DX-8951”)等的那樣的有內酯環的醫藥化合物中，內酯環是閉環的醫藥化合物用A-NH2表示的時候的醫藥化合物殘基，其中一例，是在上述的間隔基中用A-NH-表示的基團(形成了內酯環的化合物)。另外，A＇-NH-表示用A-NH-表示的醫藥化合物殘基中的內酯環是以閉環型或開環型的任一種或者它們的混合型存在的物質。
在實施例中，對于沒有特別說明的時候，羧甲基葡聚糖多元醇的羧甲基化的取代度(相當于每構成糖殘基的羧甲基的取代度)，通過將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽轉換成游離型后，溶解于0.1N氫氧化鈉水溶液，用0.1N鹽酸滴定求出。將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽的水溶液上Bio-Rad AG50W-x2(H+型)柱，將洗脫液冷凍干燥后作為供試品使用。將此供試品溶解于定量過量的0.1N氫氧化鈉水溶液，以酚酞為指示劑，用0.1N鹽酸滴定。供試品的取樣量為s(mg)、0.1N氫氧化鈉水溶液的定量過量為a(ml)、0.1N鹽酸的滴定量為b(ml)，羧甲基取代度通過式13.4(a-b)/[s-5.8(a-b)]求出。另外藥物的導入量(重量％)，可利用藥物的特性吸收由分光光度法(362nm附近)求出。凝膠過濾法按下述的條件進行(柱TSK gel G4000PWXL、洗脫液0.1MNaCl、流速0.8ml/min、柱溫40℃)。例1:3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)

將Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(600mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(160mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，冷卻到4℃后，添加N,N＇-二環己基碳化二亞胺(280mg)。在此溶液中加入溶解了日本特開平6-87746號權利要求2記載的醫藥化合物的甲磺酸鹽(600mg在上述專利的實施例50記載的化合物)和三乙基胺(0.16ml)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液，遮光下在室溫邊攪拌16小時邊反應。將此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液含0.5％醋酸的二氯甲烷∶甲醇=10∶1溶液)精制，得到標題化合物(1.0g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.40(d,1H,J=8.3Hz),8.10-817(m,2H),7.91-801(m,1H),7.78(d,1H,J=10.75Hz),7.32(s,1H),6.94-6.96(m,1H),6.50(s,1H),5.57(t,1H,J=4.5Hz),5.43(s,2H),5.23(s,2H),3.77(dd,2H,J=5.85Hz,J=8.80Hz),3.70(d,2H,J=4.40Hz),3.65(d,2H,J=5.35Hz),3.56(d,2H,J=5.85),3.15-3.25(m,2H),2.40(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.86(m,2H),1.35(s,9H),0.88(t,3H,J=7.35).Mass(FAB)；m/e854(M+1)例2:3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的合成將Boc-Gly-Gly-Gly-Phe(600mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(160mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，冷卻到4℃后，添加N,N＇-二環己基碳化二亞胺(280mg)。在此溶液中加入溶解了DX-8951的甲磺酸鹽(600mg)和三乙基胺(0.16ml)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液，遮光下在室溫邊攪拌16小時邊反應。將此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液含0.5％醋酸的二氯甲烷∶甲醇=10∶1溶液)精制，得到標題化合物(700mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.57(d,1H,J=7.8Hz),8.19(d,1H),8.05-8.07(m,2H),7.79(d,1H,J=11.2Hz),7.32(s,1H),7.10(d,2H,J=7.8Hz),6.93-7.03(m,4H),6.51(s,1H),5.52-5.55(m,1H),5.44(s,2H),5.18(d,1H,J=18.5Hz),4.84(d,1H,J=18.5Hz),4.57-4.59(m,1H),3.57-3.71(m,6H),3.15-3.25(m,2H),3.00-3.02(m,1H),2.80-2.90(m,1H),2.40(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.86(m,2H),1.35(s,9H),0.88(t,3H,J=7.35Hz).Mass(FAB)；m/e854(M+1)例3:3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的合成將Boc-Gly-Gly-Gly-Gly(120mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(39mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)，冷卻到4℃后，添加N,N＇-二環己基碳化二亞胺(70mg)。在此溶液中加入溶解了DX-8951的甲磺酸鹽(150mg)和三乙基胺(0.039ml)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液，遮光下在室溫邊攪拌16小時邊反應。將此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=10∶1溶液)精制，得到標題化合物(100mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.40(d,1H,J=8.3Hz),8.10-8.17(m,2H),7.91-8.01(m,1H),7.78(d,1H,J=10.75Hz),7.32(s,1H),6.94-6.96(m,1H),6.50(s,1H),5.57(t,1H,J=4.5Hz),5.43(s,2H),5.23(s,2H),3.77(dd,2H,J=5.85Hz,J=8.80Hz),3.70(d,2H,J=4.40Hz),3.65(d,2H,J=5.35Hz),3.56(d,2H,J=5.85Hz),3.15-3.25(m,2H),2.40(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.86(m,2H),1.35(s,9H),0.88(t,3H,J=7.35Hz).Mass(FAB)；m/e764(M+1)例4:3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成

將3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(79mg)溶解于三氟醋酸(3ml)，放置1小時。除去溶劑，分別用甲醇(30ml)2次、乙醇(30ml)2次進行共沸后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(80mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.59-8.61(m,1H),8.50(d,1H,J=8.3Hz),8.21-8.27(m,2H),7.91-8.01(br,3H),7.81(d,1H,J=11.2Hz),7.32(s,1H),6.50-6.52(br,1H),5.57-5.59(m,1H),5.43(s,2H),5.23(s,2H),3.80-3.82(m,3H),3.70-3.75(m,3H),3.15-3.25(m,2H),2.41(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.86-1.88(m,2H),0.88(t,3H,J=7.35Hz).例5羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成葡聚糖T2000(10g，法魯瑪西亞(フプルマミア)公司制造，平均分子量2,000,000)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,1000ml)，加入高碘酸鈉(33.0g)的水溶液(1000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(7.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(14g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-30膜(ミリポァ公司制造)，經超濾法除去低分子組分。將高分子組分冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇。此葡聚糖多元醇在pH3.0處理1小時后，用バィオマックス-50膜除去低分子組分，然后用バィオマックス-100膜除去高分子組分，冷凍干燥，得到精制葡聚糖多元醇(2.0g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，葡聚糖標準)是220K。
此精制葡聚糖多元醇(1.8g)加入到在水(45ml)中溶解了氫氧化鈉(10.5g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(15g)，使其溶解后，在室溫反應20小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-10膜經超濾法除去低分子組分。高分子組分冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(1.8g)。此物質的分子量(凝膠過濾，葡聚糖標準)是330K，羧甲基化度是0.8。
上述的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(300mg)溶解于水，上Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)柱(1.5×8.6cm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(0.5ml)后，進行冷凍干燥，得到羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(380mg)。將羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(各300mg)進行同上述同樣的柱處理，得到羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(380mg,400mg)。例6羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽的合成在上述例5得到的葡聚糖多元醇的鈉鹽(0.15g)，加入到在水(4.5ml)中溶解了氫氧化鈉(1.05g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(1.5g)，使其溶解后，在室溫反應18小時。將此反應液用醋酸調節至pH8，滴入到90ml的甲醇中之后，加入3M氯化鈉水溶液(0.15ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀用甲醇洗凈后，溶解在水(5ml)中，加入3M氯化鈉水溶液(0.15ml)。將此溶液用米利波阿過濾器(0.45μm)過濾，濾液滴入到35ml的乙醇中，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀用乙醇洗凈后，溶解在水中，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(0.18g)。此物質相當于每糖殘基的羧甲基化度(堿滴定法)是1.2。例7羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽的合成在上述例5得到的精制葡聚糖多元醇(0.2g)，加入到在水(6ml)中溶解了氫氧化鈉(0.84g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(1.2g)，使其溶解后，在室溫反應18小時。將此反應液用醋酸調節至pH8，滴入到120ml的甲醇中之后，加入3M氯化鈉水溶液(0.2ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm，8分鐘)收集。此沉淀用甲醇洗凈后，溶解在水(5ml)中，加入3M氯化鈉水溶液(0.2ml)。將此水溶液用米利波阿過濾器(0.45μm)過濾，濾液滴入到35ml的乙醇中，析出的沉淀經離心分離(3500rpm，8分鐘)收集。此沉淀用乙醇洗凈后，溶解在水中，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(0.20g)。此物質相當于每糖殘基的羧甲基化度(堿滴定法)是0.4。例8羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成在例5得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(380mg，羧甲基化度是0.8)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(30ml)。在此溶液中，順次加入3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(49mg)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液、三乙基胺(0.017ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(380mg)，在室溫邊攪拌一夜邊反應。此反應液用1M氫氧化鈉水溶液調節至pH10后，在25ml的乙醇中每5ml分別滴入。在這個混合物中加入3M氯化鈉水溶液(1ml)、乙醚(5ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。
此沉淀溶解在水中，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥。得到的粗品溶解于水(30ml)，用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，在37℃處理1小時。此處理液同上述同樣地進行透析后，透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾，冷凍干燥，得到標題化合物289mg。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-株式會社制TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1M三醋酸緩沖液，pH9.0,0.25mg/ml)分別表示在圖1及圖2。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1M三醋酸緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.3％(W/W)。例9羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成由3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(50mg)用同例4同樣的方法經脫Boc，得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A的三氟醋酸鹽，按同例8同樣的方法，導入在例5得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(380mg)，合成出標題化合物(300mg)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-株式會社制TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.19mg/ml)分別表示在圖3及圖4。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.3％(W/W)。例10羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成由3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(41mg)用同例4同樣的方法經脫Boc化得到的3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Gly)-NH-A的三氟醋酸鹽，按同例8同樣的方法，導入在例5得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(380mg)，合成出標題化合物(190mg)。本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.34mg/ml)表示在圖5。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.3％(W/W)。例11本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用將小鼠纖維肉瘤Meth A細胞1×106個移植到BALB/c種的雄性小鼠(7周齡)的右鼠頸(蹊)部皮下，制成感染Meth A癌小鼠(1組7只)。在第7天將溶解于注射用蒸餾水的例9的藥物復合物經Meth A癌小鼠的尾靜脈內每4天給藥4次。在移植后第21天摘出腫瘤，測定重量，腫瘤增殖抑制率由下式算出腫瘤增殖抑制率(％)=[1-(受試品給藥組的平均腫瘤重量/對照組的平均腫瘤重量)]×100。其結果，在例9得到的本發明的藥物復合物沒有發現毒性(體重減輕)，與上述醫藥化合物自身(沒有間隔基以及多糖衍生物)進行比較，抗腫瘤效果大幅度增強。多糖衍生物自身(例5)以及只導入了間隔基的醫藥化合物殘基(由例1的化合物按例4的方法脫BOC化得到的H2N-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽)是無效的。
表2受試品化合物給藥量(mg/kg)抑制率(％)醫藥化合物自身 7.5×4 761.875×4 460.9375×436例9的化合物 1.41)× 4940.71)×4590.351)×4 411)醫藥化合物的換算量例12本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用按與例11同樣的方法作成感染Meth A癌小鼠(1組6只)，在第7天比較將例8以及例9的藥物復合物單次給藥時的抗腫瘤作用。其結果，抗腫瘤作用的強度為(多糖衍生物)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇＞(多糖衍生物)-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇＞醫藥化合物自身。沒有導入間隔基的醫藥化合物殘基與例5的羧甲基葡聚糖多元醇的羧基直接結合的化合物(醫藥化合物殘基的導入量6.2重量％)是無效的。
表3受試品化合物給藥量(mg/kg)抑制率(％)醫藥化合物自身 60 7720 59例8的化合物101)8551)76例9的化合物51)982.51)871)醫藥化合物的換算量例13羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成葡聚糖T500(10g，法魯瑪西亞公司制造，分子量500K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,1000ml)，加入高碘酸鈉(33g)的水溶液(1000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加入乙二醇(7.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(14g)溶解后，攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5得到溶液1。另外對于葡聚糖T500(10g，法魯瑪西亞公司制造，分子量500K)，進行上述的連續操作，得到溶液2。進一步對于葡聚糖T250(各10g，法魯瑪西亞公司制造，分子量250K)，進行上述的連續操作，得到溶液3和溶液4。合并這些溶液1～4，用バィオマックス-50膜經限外過濾法除去低分子組分。高分子組分冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇(25g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是163K。
此葡聚糖多元醇(11g)加入到在水(330ml)中溶解了氫氧化鈉(46.2g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(66g)，使其溶解后，在室溫反應一夜。將此反應液用醋酸調節至pH9后，用バィオマックス-30膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(13g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是228K，羧甲基化度是0.4。
上述的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(600mg)溶解于水，上Bio-Rad AG5W-X2(200-400目，H+型)柱(直徑44mm，長210mm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(0.93ml)后，進行冷凍干燥，得到標題化合物(690mg)。例14:3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成將在例1得到的3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(79mg)溶解于三氟醋酸(3ml)，放置1小時。除去溶劑，依次用甲醇(30ml)、乙醇(30ml)分別進行共沸2次之后，殘渣用乙醇洗凈，得到標題化合物(80mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.53(d,1H,J=8.3Hz),8.40-8.48(m,2H),8.28(d,1H,J=8.3Hz),7.95-8.07(br,3H),7.81(d,1H,J=10.2Hz),7.30-7.37(m,2H),7.15-7.30(m,5H),6.50-6.55(br,1H),5.50-5.57(m,1H),5.41(d,2H,J=7.82Hz),5.25(s,2H),4.55-4.62(m,1H),3.55-3.92(m,6H),3.15-3.25(br,2H),2.98-3,03(m,1H),2.73-2.82(m,1H),2.40(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.84-1.92(m,2H),0.88(t,3H,J=7.35Hz).例15羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例13得到的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(400mg)轉換成三乙基銨鹽(470mg)，溶解于N,N-二甲基甲酰胺(30ml)。在此溶液中，順次加入在例14得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(62mg)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液、三乙基胺(0.02ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(470mg)，遮光下在室溫邊攪拌一夜邊反應。此反應液每5ml在各10ml的乙醇中滴入。在此液中加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離收集。此沉淀溶解在0.5M氯化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(600mg)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-株式會社制TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.1mg/ml)分別表示在圖6及圖7。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.8％(W/W)。例16:3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成將在例2得到的3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(79mg)溶解于三氟醋酸(3ml)，放置1小時。除去溶劑，依次用甲醇(30ml)、乙醇(30ml)分別進行共沸2次之后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(80mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.62-8.66(m,2H),8.23(d,1H,J=8.3Hz),8.18-8.20(m,1H),7.98-8.10(br,2H),7.79(d,1H,J=10.7Hz),7.32(s,1H),7.09(d,2H,J=7.3Hz),6.93-7.03(m,4H),6.50-6.60(br,1H),5.52-5.55(m,1H),5.44(s,2H),5.18(d,1H,J=18.5Hz),4.80(d,1H,J=18.5Hz),4.57-4.59(m,1H),3.57-3.71(m,6H),3.15-3.25(m,2H),3.00-3.02(m,1H),2.80-2.90(m,1H),2.50(s,3H),2.05-2 25(m,1H),1.86-2.00(m,2H),0.88(t,3H,J=7.35Hz).例17羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例13得到的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(1.0g)轉換成三乙基銨鹽(1.2g)，溶解于N,N-二甲基甲酰胺(90ml)。在此溶液中，順次加入在例16得到的3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(158mg)的N,N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液、三乙基胺(0.05ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.2g)，遮光下在室溫邊攪拌一夜邊反應。此反應液每5ml在各10ml的乙醇中滴入。在此液中加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離收集。此沉淀溶解在0.5M氯化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.4g)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.2％(W/W)。例18:Boc-Gly-Phe-Leu-OH的合成在50％二噁烷水溶液(48ml)中加入H-Gly-Phe-Leu-OH(3.0g)，冰冷卻。在此溶液中加入含有1N氫氧化鈉水溶液(9.45ml)和(Boc)2O(2.27g)的二噁烷(24ml)溶液，攪拌一夜。在反應液中加入1N鹽酸(9.45ml)，餾去溶劑。得到的殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=5∶1溶液)精制，得到標題化合物(2.5g)。例19:Boc-Gly-Phe-Leu-Gly-OBzl的合成將在例18得到的Boc-Gly-Phe-Leu-OH(2.4g)以及N-羥基琥珀酰亞胺(656mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50ml)，在4℃冷卻后，添加N,N’-二環己基碳化二亞胺(1.17g)，攪拌2小時。在此溶液中加入溶解了H-Gly-OBzl的甲苯磺酸鹽(1.9g)和三乙基胺(0.79ml)的N,N-二甲基甲酰胺(40ml)溶液，在室溫邊攪拌16小時邊進行反應。此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=50∶1)精制，得到標題化合物(2.0g)。1H-NMR(DNSO-d6)δ:8.20-8.30(m,1H),8.12(d,1H,J=8.3Hz),7.83(d,1H,J=8.3Hz),7.32-7.37(m,5H),6.89-6.95(m,1H),5.12(s,1H),4.52-4.59(br,1H),4.34(dd,1H,J=7.3Hz,J=15.1Hz),3.93(dd,1H,J=5.5Hz,J=17.2Hz),3.84(dd,1H,J=5.5Hz,J=17.2Hz),3.54(dd,1H,J=5.9Hz,J=16.7Hz),3.42(dd,J=5.9Hz,J=16.7Hz)3.00(dd,1H,J=4.4Hz,13.7Hz),2.78(dd,1H,J=8.8Hz,J=13.2Hz),1.50-1.65 (m,1H).1.45(t,2H,J=7.3Hz),1.36(s,9H),0.86(d.3H,J=6.4Hz),0.82(d,3H,J=6.4Hz)。例20:Boc-Gly-Phe-Leu-Gly-OH的合成將在例19得到的Boc-Gly-Phe-Leu-Gly-OBzl(1.7g)在醋酸乙酯(30ml)和甲醇(30ml)的混合溶劑中使其溶解后，加入5％Pd-C(1.5g)，進行接觸還原。過濾反應液，濾液減壓干燥成固體，得到標題化合物(1.15g)。例21:3＇-N-(Boc-Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的合成將在例20得到的Boc-Gly-Phe-Leu-Gly-OH(200mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(58mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5ml)，在4℃冷卻后，添加N,N-二環己基碳化二亞胺(104mg)使其溶解。在此溶液中加入溶解了DX-8951的甲烷磺酸鹽(224mg)和三乙基胺(0.059ml)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液，在避光條件下室溫邊攪拌16小時邊進行反應。此反應液減壓干燥成固體，得到的殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液含有0.5％醋酸的二氯甲烷∶甲醇=10∶1溶液)精制，得到標題化合物(200mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.35(d,1H,J=7.8Hz),8.08-8.18(m,2H),7.75-7.85(m,2H),7.32(s,1H),7.10(d,2H,J=6.8Hz),7.08-7.13(m,3H),6.85-6.95(br,1H),6.40-6.65(br,1H),5.52-5.55(m,1H),5.46(d,1H,J=18.5Hz),5.37(d,1H,J=18.5Hz),5.24(s,2H),4.44-4.52(m,1H),4.15-4.25(m,1H),3.68-3.72(m,2H),3.40-3.52(m,2H),3.15-3.25(br,2H),2.85-2.95(m,1H),2.65-2.75(m,1H),2.40(s,3H),2.05-2.25(m,1H),1.80-1.91(m,2H),1.50-1.65(m,1H),1.45(t,2H,J=7.3Hz),1.35(s,9H),0.88(t,3H,J=7.4),0.86(d,3H,J=6.4Hz),0.82(d,3H,J=6.4Hz).例22:3＇-N-(Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成將在例21得到的3＇-N-(Boc-Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(97mg)溶解于三氟醋酸(3ml)，放置1小時。除去溶劑，依次分別用甲醇(30ml)、乙醇(30ml)各共沸2次后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(95mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.57(d,1H,J=83Hz),8.47(d,1H,J=8.3Hz),8.32(d,1H,J=7.8Hz),8.17(t,1H,J=5.5Hz),7.81-7.91(br,3H),7.79(d,1H,J=10.7Hz),7.32(s,1H),7.21-7.23(m,5H),7.12-7.17(m,1H),6.45-6.55(br,1H),5.57(q,1H,J=4.4Hz),5.43(d,1H,J=16.1Hz),5.34(d,1H,J=16.1Hz),5.23(s,2H),4.67(dt,1H,J=4.0Hz,J=9.0Hz),4.31(dd,1H,J=8.5Hz,J=15.0Hz),4.0-4.4(br,1H),3.74-3.76(m,2H),3.56(dd,1H,J=6.0Hz,J=16.0Hz),3.41(dd,1H,J=6.0Hz,J=16.0Hz),3.17-3.19(br,2H),3.02(dd,1H,J=4.0Hz,J=14.0Hz),2.70(dd,1H,J=10.0Hz,J=14.0Hz),2.40(s,3H),2.05-2.15(m,1H),1.85(dt,2H,J=7.0Hz,J=14.0Hz),1.50-1.55(m,1H),1.45(t,2H.J-6.0Hz),1,35(s,9H),0.88(t,3H,J=7.4),0.85(d,3H,J=6.4Hz),(0.80(d,3H,J=6.4Hz)例23羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Phe-Leu-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例13得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(690mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(50ml)。在此溶液中，順次加入在例22中得到的3＇-N-(Gly-Phe-Leu-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(95mg)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液、三乙基胺(0.03ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(690mg)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離收集。此沉淀溶解在0.5M氯化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，對純水透析。透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，濾液冷凍干燥，得到標題化合物(600mg)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是4.8％(W/W)。例24羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成葡聚糖T500(50g，法魯瑪西亞公司制造，分子量500K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,5000ml)，加入高碘酸鈉(165.0g)的水溶液(5000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(35.0ml)，攪拌一夜。反應液用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入氫化硼鈉(70g)溶解后，攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-50膜經限外過濾法除去低分子組分。高分子組分冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇(27.1g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是140K。
此葡聚糖多元醇(5g)加入到在水(150ml)中溶解了氫氧化鈉(21g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(30g)，使其溶解后，在室溫反應一夜。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(5.6g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是263K，羧甲基化度是0.4。
上述的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.0g)溶解于水，上Bio-RadAG50W-X2(200-400目，H+型)柱(直徑44mm，長210mm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(4ml)后，進行冷凍干燥，得到標題化合物(2.2g)。例25羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成將在例24得到的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(1.0g)溶解于水，上Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，Me3NH+型)柱，用水洗脫。冷凍干燥此洗脫液，得到標題化合物(950mg)。例26:3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)鹽酸鹽的合成用與例14同樣的方法從3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(400mg)得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A三氟醋酸鹽溶解于水-MeOH(1∶4)中，上Bio-Rad AG1-X8(200-400目、C1-型)柱(1.5cm×8.6cm)，用上述溶劑洗脫。濃縮此洗脫液后，冷凍干燥，得到標題化合物(310mg)。1H-NMR(DMS0-d6)δ:8.53(d,1H,J=8.5Hz),8.46-8.48(m,1H),8.37-8.39(m,1H),7.95(d,1H,J=8.0Hz),7.80(s,3H),7.78(d,1H,J=11.1Hz),7.34(s,1H),7.14-7.24(m,5H),6.50(s,1H),5.56-5.60(m,1H),5.35-5.40(m,2H),5.24(s,2H),4.51-4.56(m,1H),3.86(dd,J=4.8,13.5Hz,1H),3.68-3.79(m,3H),3.54(s,2H),3.15-3.22(m,2H),3.01(dd,J=5.6,13.5Hz,1H),2.78(dd,J=9.6,3.5Hz,1H),2.41(s,3H),2.12-2.23(m,2H),1.81-1.89(m,2H),0.88(t,3H,J=72Hz).Mass(FAB)；m/e753(M+1)例27羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例25得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三甲基銨鹽(0.1g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(6ml)。在此溶液中，順次加入在例26中得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)NH-A(A-NH2=DX-8951)的鹽酸鹽(24mg)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液、三乙基胺(5μl)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(0.1g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解在0.5M氯化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，得到的水溶液用バィオマックス-30膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(90mg)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是11％(W/W)。例28羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例25得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三甲基銨鹽(0.1g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(6ml)。在此溶液中，順次加入在例26中得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的鹽酸鹽(36mg)的N,N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液、三乙基胺(8μl)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(0.1g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解在0.5M氯化鈉水溶液中，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH12。得到的水溶液用バィオマックス-30膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(80mg)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,36μg/ml)分別表示在圖8及圖9。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是15％(W/W)。例29羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成葡聚糖T250(20g,EXTRASYNTHESE制，平均分子量為250K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,2000ml)，加入高碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(14.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(28g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-30膜經限外過濾法除去低分子組分，得到沒有通過膜的殘留溶液1。另外，葡聚糖T250(50g,EXTRASYNTHESE制，平均分子量為250K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,5000ml)，加入高碘酸鈉(165g)的水溶液(5000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(35.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(70g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-30膜經限外過濾法除去低分子組分，得到沒有通過膜的殘留溶液2。合并殘留溶液1和殘留溶液2，經限外過濾法將通過バィオマックス-50膜的組分用バィオマックス-30膜除去低分子組分，冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇(25.7g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是47K。
此葡聚糖多元醇(5g)加入到在水(150ml)中溶解了氫氧化鈉(35g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(50g)，使其溶解后，在室溫反應18小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(7.2g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是127K，羧甲基化度是0.8。這個羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.2g)溶解于水，上Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)柱(直徑44mm，長210mm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(4ml)后，進行冷凍干燥，得到羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(2.69g)。
將這個羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(2.67g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(200ml)。在此溶液中，順次加入在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中溶解了由和例2同樣的方法合成出的3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(350mg)，經用和例16同樣的方法脫Boc化后得到的3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A的三氟醋酸鹽和三乙基胺(0.116ml)得到的溶液、在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中溶解了1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(2.67g)得到的溶液，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。在此反應液中加入3M氯化鈉水溶液(100ml)，每8ml滴入到各30ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(1ml)、乙醚(5ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀用丙酮洗凈后，溶解于水，加入3M氯化鈉水溶液(10ml)后，用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，在37℃處理1小時。此處理液用バィオマックス-10膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(2.30g)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.20mg/ml)分別表示在圖10及圖11。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.8％(W/W)。例30羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成在葡聚糖T10(20g，法魯瑪西亞公司制造，分子量10K)的0.1M醋酸緩沖液(pH5.5)溶液(2000ml)中，加入高碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(14.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(28g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-5膜(ミリポァ公司制造)經限外過濾法除去低分子組分，沒有通過膜的殘留溶液再通過バィオマックス-30膜。得到的濾液冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇(8.0g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是13K。
此葡聚糖多元醇(3.7g)加入到在水(111ml)中溶解了氫氧化鈉(25.9g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(37g)，使其溶解后，在室溫反應20小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-5膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(6.2g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是37K，羧甲基化的取代度是0.9。
將此羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(6.0g)溶解于水，上Bio-RadAG50W-X2(200-400目，H+型)柱，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(9.3ml)后，進行冷凍干燥，得到標題化合物(7.2g)。例31羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成在例30得到的葡聚糖多元醇(3.9g)加入到在水(117ml)中溶解了氫氧化鈉(16.3g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(23.4g)使其溶解后，在室溫反應18小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-5膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(5.0g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是28K，羧甲基化度是0.5。這個羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(4.8g)與例30同樣的轉換成三乙基銨鹽，得到標題化合物(5.6g)。例32羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成在葡聚糖4(20g,フナコシ公司制造，平均分子量4K-6K)的0.1M醋酸緩沖液(pH5.5)溶液(2000ml)中，加入高碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(14.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(28g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時后，在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-3膜(ミリポァ公司制造)經限外過濾法除去低分子組分。得到的濾液冷凍干燥后，得到葡聚糖多元醇(6.0g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是9K。此葡聚糖多元醇(2.7g)加入到在水(81ml)中溶解了氫氧化鈉(18.9g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(27g)，使其溶解后，在室溫反應20小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-5膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(4.2g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是20K，羧甲基化度是0.9。
此羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(4.0g)與例30同樣轉換成三乙基銨鹽，得到標題化合物(4.8g)。例33羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成在例32得到的葡聚糖多元醇(2.7g)加入到在水(81ml)中溶解了氫氧化鈉(11.3g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(16.2g)使其溶解后，在室溫反應18小時。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-5膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.7g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是16K，羧甲基化度是0.5。這個羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.7g)與例30同樣的轉換成三乙基銨鹽，得到標題化合物(3.1g)。例34羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例30得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(1.5g)溶解于N,N-z二甲基甲酰胺(90ml)。在此溶液中，順次加入三乙基胺(0.07ml)和3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(210mg)的N,N-二甲基甲酰胺(40ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.5g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M氯化鈉水溶液，在冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-3膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.3g)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,65μg/ml)分別表示在圖12及圖13。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是6.4％(W/W)。例35羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例31得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(1.2g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(90ml)。在此溶液中，順次加入三乙基胺(0.056ml)和3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(168mg)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.2g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M氯化鈉水溶液，在冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-3膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.0g)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是4.8％(W/W)。例36羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例32得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(1.2g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(90ml)。在此溶液中，順次加入三乙基胺(0.056ml)和3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(168mg)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.2g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M氯化鈉水溶液，在冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-3膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.0g)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1M三醋酸緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.9％(W/W)。例37羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例33得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(1.5g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(90ml)。在此溶液中，順次加入三乙基胺(0.07ml)和3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(210mg)的N,N-二甲基甲酰胺(40ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.5g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M氯化鈉水溶液，在冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-3膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.3g)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是4.6％(W/W)。例38:Boc-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A(A-NH2=DW-8286)的合成Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(42mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(12mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2ml)，在4℃冷卻后，加入N,N＇-二環己基碳化二亞胺(22mg)。在此溶液中加入溶解了用下述式

表示的化合物[(1s,9s)-1-氨基-5-氯-9-乙基-2,3-二氫-9-羥基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3＇,4＇:6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮DW-8286]的鹽酸鹽(50mg)和三乙基胺(0.01ml)的N,N-二甲基甲酰胺(6ml)溶液，遮光，在室溫邊攪拌16小時邊進行反應。此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液含有0.5％醋酸的二氯甲烷∶甲醇=10∶1溶液)精制，得到標題化合物(27mg)。1H-NMR(CDCl3)δ:8.10-8.20(br,1H),7.95-8.05(br,1H),7.70-7.80(br,2H),7.50-7.60(br,1H),7.40-7.50(br,1H),7.10-7.25(m,5H),7.05-7.15(br,1H),5.85-5.95(br,1H),5.50-5.60(br,1H),5.40-5.50(m,1H),5.25-5.35(m,1H),5.05-5.15(m,1H),4.90-5.00(m,1H),4.70-4.80(br,1H),4.10-4.25(br,2H),3.60-3.90(m,4H),3.10-3.40(m,3H),2.95-3.05(br,1H),2.15-2.30(br,1H),1.75-1.90(br,2H),1.39(s,9H),0.80-1.00(m,3H).例39羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DW-8286)的合成將在例24得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(175mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(20ml)。在此溶液中，順次加入在N,N-二甲基甲酰胺(5ml)中溶解了由例38得到的3＇-N-Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DW-8286)(27mg)經用和例4同樣的方法脫Boc化后得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A的三氟醋酸鹽(29mg)和三乙基胺(9μl)得到的溶液、及1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(175mg)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(20ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M氯化鈉水溶液，在冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-30膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(135mg)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,99μg/ml)分別表示在圖14及圖15。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是6.1％(W/W)。例40:3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DW-8089)的合成Boc-Gly-Gly-Phe-Gly(163mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(45mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，在4℃冷卻后，加入N,N＇-二環己基碳化二亞胺(79mg)。在此溶液中加入溶解了用下述式

表示的化合物[(1s,9s)-1-氨基-9-乙基-2,3-二氫-9-羥基-1H,12H-苯并[de]吡喃[3＇,4＇:6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮DW-8089]的甲苯磺酸鹽(170mg)和三乙基胺(0.054ml)的N,N-二甲基甲酰胺(30ml)溶液，遮光，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液含有0.5％醋酸的二氯甲烷∶甲醇=94∶6溶液)精制，得到標題化合物(100mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.51(d,1H,J=8.5Hz),8.41(t,1H,J=5.6Hz),8.29(s,1H),8.17(d,1H,J=8.0Hz),8.03(d,1H,J=8.0Hz),7.90(dd,1H,J=4.8,5.6Hz),7.79(t,1H,J=5.6Hz),7.53(d,1H,J=7.2Hz),7.36(s,1H),7.13-7.25(m,5H),6.94-6.95(m,1H),5 60-5.63(m,1H),5.36-5.47(m,2H),5.21-5.30(m,2H),4.42-4.47(m,1H),3.63-3.96(m,3H),3.51-3.59(m,3H),3.31-3.40(m,1H),3.09-3.21(m,1H),3.02(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.76-2.81(m,1H),2.13-2.17(m,2H),1.85-1.90(m,2H),1.37(s,9H),0.89(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e 822(M+1)例41羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DW-8089)的合成將在例24得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(1.6g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(60ml)。在此溶液中，順次加入在N,N-二甲基甲酰胺(20ml)中溶解了由例40得到的3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DW-8089)(200mg)經用和例4同樣的方法脫Boc化后得到的3＇-N-(Gly-Gly-Phe-Gly)-NH-A的三氟醋酸鹽和三乙基胺(0.07ml)得到的溶液、及1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(1.6g)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.5ml)、乙醚(25ml)，析出的沉淀經離心分離(2500rpm,8分鐘)收集。此沉淀用乙醇洗凈后，溶解于水，加入3M氯化鈉水溶液(20ml)，用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9。得到的水溶液用バィオマックス-10膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(1.20g)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK GelPW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.26mg/ml)分別表示在圖16及圖17。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.0％(W/W)。例42羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽的合成將葡聚糖T150(20g，法魯瑪西亞公司制造，分子量150K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,2000ml)，加入高碘酸鈉(66.0g)的水溶液(2000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(14.0ml)，攪拌一夜。反應液在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。加入硼氫化鈉(28g)溶解后，在室溫攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時。在冰冷下用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-5膜(ミリポァ公司制造)經限外過濾法一直濃縮到500ml，得到溶液1。另外對于葡聚糖T110(20g)進行上述的一連串的操作，得到溶液2。混合溶液1和溶液2，混合溶液的pH調節至3.0，在40℃置于恒溫箱4小時后，調節pH至7，得到含有被低分子化的葡聚糖多元醇的溶液。使其通過バィオマックス-30膜，接著用バィオマックス-5膜脫鹽后，冷凍干燥，得到葡聚糖多元醇(4.6g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是17K。
此葡聚糖多元醇(2.5g)加入到在水(75ml)中溶解了氫氧化鈉(17.5g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(25g)，使其溶解后，在室溫反應20小時。將此反應液用醋酸調節至pH9后，用バィオマックス-5膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(4.0g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是45K,CM化度是0.9。
這個羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(3.7g)溶解于水，上Bio-RadAG50W-X2(200-400目，H+型)柱，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(5.8ml)后，進行冷凍干燥，得到標題化合物(4.4g)。例43羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例42得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(4.4g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(300ml)。在此溶液中，順次加入含有三乙基胺(0.19ml)和3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(580mg)的N,N-二甲基甲酰胺(45ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(4.4g)，遮光，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液用lM氫氧化鈉水溶液調節至pH10后，每5ml滴入到各25ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(1ml)、乙醚(5ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于水，用透析膜(スペクトラポァ1，透過分子量6,000-8,000)，向純水透析，透析內液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(3.4g)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是4.6％(W/W)。例44:α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Gly-Gly-Phe-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成在例42得到的葡聚糖多元醇(2g)，加入到在水(60ml)中溶解了氫氧化鈉(14g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液內冰冷下加入α-溴代丙酸(19ml)并使其溶解后，在室溫下反應18小時。此反應液在冰冷下用醋酸調節至pH8，用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.95g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是45K。相當于糖殘基的α-甲基羧甲基化度，以羧甲基葡聚糖多元醇為標準，由下述的方法求出。將α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽的水溶液上Bio-Rad AG50W-X2(H+型)柱，洗脫液冷凍干燥后用作供試品。此供試品溶解于定量過量0.1N氫氧化鈉水溶液，以酚酞為指示劑用0.1N鹽酸滴定。供試品的取樣量為s(mg)、0.1N氫氧化鈉水溶液的準確加入量為a(ml)、0.1N鹽酸的滴定量為b(ml)，α-甲基羧甲基化度通過式13.4(a-b)/[s-7.2(a-b)]求出。其結果α-甲基羧甲基化度是0.8。
將此α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.2g)溶解于水，上Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)柱(直徑44mm，長210mm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(4ml)后，進行冷凍干燥，得到α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(2.69g)。
將這個α-甲基羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(2.68g)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(60ml)。在此溶液中，順次加入在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中溶解了由和例2同樣的方法合成出的3＇-N-(Boc-Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(350mg)經用和例16同樣的方法脫Boc化后得到的3＇-N-(Gly-Gly-Gly-Phe)-NH-A的三氟醋酸鹽和三乙基胺(0.116ml)得到的溶液、及在N,N-二甲基甲酰胺(10ml)中溶解了1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(2.68g)得到的溶液，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。在此反應液中加入3M氯化鈉水溶液(40ml)，每6ml滴入到各30ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(1ml)、乙醚(5ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀用丙酮洗凈后，溶解于水，加入3M氯化鈉水溶液(10ml)后，用0.1M氫氧化鈉水溶液調節至pH9，在37℃處理1小時。此處理液用バィオマックス-10膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(2.15g)。本化合物溶解于0.1M氯化鈉水溶液，用GPC(柱東ソ-TSK Gel PW-4000XL，溶劑0.1MNaCl，流速0.8ml/min)分析出的結果、以及本化合物的紫外吸收光譜(0.1Mトリス緩沖液，pH9.0,0.21mg/ml)分別表示在圖18及圖19。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是5.9％(W/W)。例45:3＇-N-(Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DW-8951)三氟醋酸鹽的合成將Phe-Gly-OBzl的p-甲苯磺酸鹽(3.06g)、Boc-Gly-OH(1.10g)、N-羥基琥珀酰亞胺(941mg)、N-甲基嗎啉(0.725ml)、N,N-二甲基甲酰胺(40ml)的混合物在4℃冷卻后，加入N,N＇-二環己基碳化二亞胺(1.56g)。在室溫邊攪拌一夜邊進行反應，反應液減壓干固。殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=98∶2溶液)精制，得到 Boc-Gly-Phe-Gly-OBzl(1.93g)。1H-NMR(DMSO d6)δ:8.52(dd,1H,J=5.6,6.4Hz),7.97(d,1H,J=8.8Hz),7.30-7.39(m,5H),7.15-7.26(m,5H),6.83(t,1H,J=5.6Hz),5.14(s,1H),4.52-4.57(m,1H),3.87-3.96(m,2H),3.57(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.43(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.01(dd,1H,J=4.8,14.3Hz),2.77(dd,1H,J=5.6,14.3Hz),1.37(s,9H).
得到的Boc-Gly-Phe-Gly-OBzl(1.78g)溶解于醋酸乙酯(60ml)，在5％-Pd-C(1.8g)存在下，接觸還原24小時。濾除催化劑，濾液減壓濃縮，得到Boc-Gly-Phe-Gly-OH(1.41g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.35(t,1H,J=5.6Hz),7.94(d,1H,J=8.8Hz),7.15-7.26(m,5H),6.85(dd,1H,J=5.6,6.4Hz),4.52-4.58(m,1H),3.76(d,2H,J=5.6Hz),3.56(dd,1H,J=6.4,16.7Hz),3.43(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.03(dd,1H,J=5.0,13.5Hz),2.79(dd,1H,J=9.5,13.5Hz),1.37(s,9H).在上面得到的Boc-Gly-Phe-Gly-OH(500mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(161mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)。在此溶液中加入溶解了DX-8951的甲磺酸鹽(530mg)和三乙基胺(0.146ml)的N,N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液，在4℃冷卻后，加入N,N＇-二環己基碳化二亞胺(268mg)。遮光下在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=96∶4溶液)精制，得到3＇-N-(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(100mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.39(d,1H,J=8.0Hz),8.34(t,1H,J=5.6Hz),7.98(d,1H,J=7.2Hz),7.78(d,1H,J=10.3Hz),7.33(s,1H),7.13-7.24(m,5H),6.80(dd,1H,J=5.6,6 4Hz),5.55-5.61(m,1H),5.44(d,1H,J=16.0Hz),5.41(d,1H,J=16.0Hz),5.25(s,2H),4.43-4.46(m,1H),3.69-3.79(m,2H),3.50(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.41(dd,1H,J=5.6,16.7Hz),3.16-3.19(m,2H),2.98(dd,1H,J=4.8,14.3Hz),2.79(dd,1H,J=9.5,14.3Hz),2.41(s,3H),2.19-2.25(m,1H),2.10-2.15(m,1H),1.82-1.90(m,2H),1.35(s,9H),0.88(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e797(M+1)得到的3＇-N-(Boc-Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(100mg)溶解于三氟醋酸(3ml)，放置1小時。除去溶劑，依次分別用甲醇(30ml)、乙醇(30ml)各共沸2次后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(80mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.52-8.62(m,1H),7.94(s,3H),7.79(t,1H,J=11.1Hz),7.34(s,1H),7.15-7.27(m,5H),6.52(s,1H),5.57-5.61(m,1H),5.36-5.46(m,2H),5.24(s,2H),4.66-4.70(m,1H),3.69-3.81(m,2H),3.61-3.68(m,1H),3.40-3.47(m,1H),3.15-3.23(m,1H),3.01(dd,1H,J=4.0,13.5Hz),2.77(dd,1H,J=9.5,13.5Hz),2.12-2.23(m,2H),1.81-1.91(m,2H),0.89(t,3H,J=7.2Hz).Mass(FAB)；m/e697(M+1)例46:3＇-N-(Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成Boc-Phe-Gly(771mg)以及N-羥基琥珀酰亞胺(300mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)。在此溶液中加入溶解了DX-8951的甲磺酸鹽(1058mg)和三乙基胺(0.293ml)的N,N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液，在4℃冷卻后，加入N,N＇-二環己基碳化二亞胺(494mg)。遮光下在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=98∶2溶液)精制，得到3＇-N-(Boc-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(1.20g)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.29(d,1H,J=8.0Hz),8.21(t,1H,J=4.8Hz),7.76(d,1H,J=10.3Hz),7.32(s,1H),7.13-7.25(m,5H),6.92(d,1H,J=7.2Hz),6.49(s,1H),5.56-5.61(m,1H),5.44(d,1H,J=15.9Hz),5.38(d,1H,J=15.9Hz),5.25(s,2H),4.08-4.12(m,1H),3.78(d,1H,J=4.8Hz),3.16-3.25(m,2H),2.99(dd,1H,J=4.0,13.5Hz),2.72(dd,1H,J=10.3,13.5Hz),2.40(s,3H),2.09-2.35(m,2H),1.80-1.91(m,2H),1.16(s,9H),0.88(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e741(M+1)在上面得到的3＇-N-(Boc-Phe-Gly)-NH-A(170mg)溶解于三氟醋酸(4ml)，放置1小時。除去溶劑，依次分別用甲醇(10ml)、乙醇(10ml)各共沸2次后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(100mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.88(t,1H,J=4.8Hz),8.68(d,1H,J=8.7Hz),8.05-8.15(m,3H),7.79(d,1H,J=11.1Hz),7.26-7.36(m,5H),6.52(d,1H,J=7.2Hz),5.57-5.62(m,1H),5.43(d,1H,J=15.9Hz),5.38(d,1H,J=15.9Hz),5.19-5.28(m,1H),4.10-4.18(m,1H),3.93(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.82(dd,1H,J=4.8,16.7Hz),3.17-3.24(m,2H),3.14(dd,1H,J=4.8,13.5Hz),2.95(dd,1H,J=8.0,13.5Hz),2.42(s,3H),2.14-2.25(m,2H),1.83-1.91(m,2H),0.89(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e640(M+1)例47:3＇-N-Gly-NH-A(A-NH2=DX-8951)三氟醋酸鹽的合成DX-8951的甲烷磺酸鹽(530mg)和三乙基胺(0.28ml)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)，在4℃冷卻后，加入Boc-Gly的N-羥基琥珀酰亞胺酯(327mg)。遮光下在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。反應液減壓干固，殘渣用硅膠柱色譜(洗脫液二氯甲烷∶甲醇=98∶2溶液)精制，得到3＇-N-(Boc-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)(500mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.38(d,1H,J=8.3Hz),7.77(d,1H,J=10.7Hz),7.31(s,1H),6.89-6.91(m,1H),6.49(s,1H),5.55-5.59(m,1H),5.45(d,1H,J=16.1Hz),5.38(d,1H,J=16.1Hz),5.27(d,1H,J=19.0Hz),5.18(d,1H,J=19.0Hz),3.50-3.62(m,2H),3.15-3.19(m,2H),2.41(s,3H),2.18-2.24(m,1H),2.08-2.12(m,1H),1.81-1.91(m,2H),1.31(s,9H),0.87(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e 593(M+1)在上面得到的3＇-N-(Boc-Gly)-NH-A(100mg)溶解于三氟醋酸(2ml)，放置1小時。除去溶劑，依次分別用甲醇(10ml)、乙醇(10ml)各共沸2次后，殘渣用乙醚洗凈，得到標題化合物(70mg)。1H-NMR(DMSO-d6)δ:8.88(d,1H,J=8.8Hz),8.08(s,3H),7.81(d,1H,J=11.2Hz),7.34(s,1H),6.52(s,1H),5.63-5.67(m,1H),5.45(d,1H,J=16.7Hz),5.40(d,1H,J=16.7Hz),5.36(d,1H,J=19.1Hz),5.25(d,1H,J=19.1Hz),3.56(s,2H),3.11-3.19(m,2H),2.43(s,3H),2.23-2.28(m,1H),2.11-2.19(m,1H),1.81-1.91(m,2H),0.88(t,3H,J=8.0Hz).Mass(FAB)；m/e 493(M+1)例48羧甲基葡聚糖多元醇的三甲基銨鹽的合成將葡聚糖T500(50g，法魯瑪西亞公司制造，分子量500K)溶解于0.1M醋酸緩沖液(pH5.5,5000ml)，加入高碘酸鈉(165.0g)的水溶液(5000ml)。邊遮光邊在4℃下攪拌10天后，加乙二醇(35.0ml)，攪拌一夜。反應液用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7。加入氫化硼鈉(70g)溶解后，攪拌一夜。將反應液冰冷卻，用醋酸調節至pH5.5，在4℃攪拌1小時。用8M氫氧化鈉水溶液調節pH至7.5。得到的水溶液用バィオマックス-50膜經限外過濾法進行脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥，得到葡聚糖多元醇(20.2g)。此物質的分子量(凝膠過濾法，プルラン標準)是159K。
此葡聚糖多元醇(7.5g)加入到在水(225ml)中溶解了氫氧化鈉(31.5g)后得到的水溶液中，在室溫使其溶解。在此溶液中冰冷下加入一氯醋酸(45g)，使其溶解后，在室溫反應一夜。將此反應液用醋酸調節至pH8后，用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液冷凍干燥后，得到羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(8.5g)。此物質的分子量(凝膠過濾，プルラン標準)是274K，羧甲基化度是0.4。這個羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.0g)溶解于水，上Bio-Rad AG50W-X2(200-400目，H+型)柱(直徑44mm，長度210mm)，用水洗脫。在此洗脫液中加入三乙基胺(4ml)后，進行冷凍干燥，得到標題化合物(2.2g)。例49羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例48得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(200mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(7ml)。在此溶液中，順次加入在例45得到的3＇-N-(Gly-Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(41mg)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液、三乙基胺(0.014ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(100mg)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.0ml)、乙醚(25ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M食鹽水溶液，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節pH至9。得到的水溶液用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(190mg)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是4.5％(W/W)。例50羧甲基葡聚糖多元醇-Phe-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成在例24得到的羧甲基葡聚糖多元醇的鈉鹽(2.5g)溶解于水，上Bio-Rad AG 50W-X2(200-400目，Et3NH+型)柱，用水洗脫。此洗脫液進行冷凍干燥，得到羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(2.5g)。
將此羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(200mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(12ml)。在此溶液中，順次加入在例46得到的3＇-N-(Phe-Gly)-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(42mg)和三乙基胺(0.016ml)的N,N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(200mg)，遮光，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。在此反應液中加入水(300ml)，用超濾膜10K(フィルトロン公司制造)進行超濾。沒有通過膜的殘留溶液用0.1N氫氧化鈉水溶液調節pH至10，使其通過過濾膜(0.16μm,フィルトロン公司制造)。通過后的溶液用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽，接著用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(180mg)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是6.1％(W/W)。例51羧甲基葡聚糖多元醇-Gly-NH-A＇(A-NH2=DX-8951)的合成將在例48得到的羧甲基葡聚糖多元醇的三乙基銨鹽(370mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10ml)。在此溶液中，順次加入在例47得到的3＇-N-Gly-NH-A(A-NH2=DX-8951)的三氟醋酸鹽(57mg)的N,N-二甲基甲酰胺(3ml)溶液、三乙基胺(0.027ml)、1-乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二羥基喹啉(185mg)，在室溫邊攪拌一夜邊進行反應。將此反應液的每5ml滴入到各10ml的乙醇中。在此液中分別加入3M氯化鈉水溶液(2.0ml)、乙醚(25ml)，析出的沉淀經離心分離(3500rpm,8分鐘)收集。此沉淀溶解于0.5M食鹽水溶液，冰冷下用0.1M氫氧化鈉水溶液調節pH至9。得到的水溶液用バィオマックス-50膜經限外過濾法脫鹽。沒有通過膜的殘留溶液用米利波阿過濾器(0.22μm)過濾后，冷凍干燥，得到標題化合物(290mg)。本化合物的醫藥化合物殘基的含量根據在0.1Mトリス緩沖液(pH9.0)中的362nm處的吸收度進行定量時是0.5％(W/W)。例52本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用按與例11同樣的方法作成感染Meth A癌小鼠(1組6只)，對于例15的藥物復合物用與例12同樣的方法考察其單次給藥時的抗腫瘤作用。其結果，例15的藥物復合物與例12的醫藥化合物自身相比，顯示出顯著增強的抗腫瘤作用效果和有效用量范圍的擴大。受試品化合物給藥量(mg/kg)1)抑制率(％)例15的化合物 10 1005 992.5 951.25831)醫藥化合物的換算量例53本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用將人胃癌SC-6的腫瘤塊移植到裸鼠(BALB/c-nu/nu，雄性)的右鼠膝(徑)部皮下，制成感染SC-6癌裸鼠(1組5只)。在移植后第24天將溶解于注射用蒸餾水的例15的藥物復合物經靜脈內單次給藥，與醫藥化合物自身比較抗腫瘤作用。其結果，例15的藥物復合物與醫藥化合物自身相比，沒有出現中毒死亡，發揮出了高效的抗腫瘤效果。受試品化合物 給藥量(mg/kg) 抑制率(%) 死亡小鼠數/使用小鼠數醫藥化合物自身 60 982/515 610/5例15的化合物 81)100 0/521)710/51)醫藥化合物的換算量例54本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用按與例53同樣的方法制成感染人肺癌QG-90癌裸鼠(1組5只)。在移植后第16天將溶解于注射用蒸餾水的例15的藥物復合物經靜脈內單次給藥，與醫藥化合物自身比較抗腫瘤作用。其結果，例15的藥物復合物與醫藥化合物自身相比，顯示出顯著增強的抗腫瘤作用效果和有效用量范圍的擴大。被測化合物給藥量(mg/kg) 抑制率(％)死亡小鼠數/使用小鼠數醫藥化合物自身 50 60 0/512.5 51 0/5例15的化合物 71)98 0/51.751)97 0/51)醫藥化合物的換算量例55本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用按與例11同樣的方法制成感染Meth A癌小鼠(1組6只)。用和例12同樣的方法，將例41的藥物復合物單次給藥時的抗腫瘤作用與醫藥化合物自身進行比較。其結果，例41的藥物復合物與醫藥化合物自身相比，顯示出顯著增強的抗腫瘤作用效果和有效用量范圍的擴大。
被測化合物給藥量(mg/kg)抑制率(％)醫藥化合物自身 100 6450 5625 34例41的化合物 251)9912.51)956.251)813.1251)611)醫藥化合物的換算量例56本發明的藥物復合物的抗腫瘤作用按與例11同樣的方法制成感染Meth A癌小鼠(1組6只)。用和例12同樣的方法，考察例29、例43以及例44的各藥物復合物分別單次給藥時的抗腫瘤作用。
其結果，任一的藥物復合物均顯示出高效的抗腫瘤作用效果和寬廣的有效用量范圍。
被測化合物給藥量(mg/kg)1)抑制率(％)例29的化合物3099209910895 79例43的化合物100 94809240822075例44的化合物100 968094409720751)醫藥化合物的換算量例57本發明的藥物復合物的體內動力學按與例11同樣的方法制成感染Meth A癌小鼠，對于例15的藥物復合物，用和例12同樣的方法單次給藥(10mg/Kg醫藥化合物換算量)，考察藥物復合物在各組織內的濃度分布。其結果，例15的藥物復合物顯示出高的血中滯留性、對腫瘤組織的高度靶向性以及對于肝臟和小腸的高度選擇性。結果見圖20。
工業應用可能性具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物或結合了間隔基的醫藥化合物之間的反應能夠以高收率地進行，而且在同具有內酯環的醫藥化合物等進行反應的時候，因為能夠抑制副反應，所以作為藥物復合物的制造方法是極其有用的。
權利要求
1．藥物復合物的制造方法，是具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基結合起來的藥物復合物、或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基直接結合起來的藥物復合物的制造方法，其特征在于，具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基在非水系統中進行反應。
2．藥物復合物的制造方法，是具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基結合起來的藥物復合物、或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基直接結合起來的藥物復合物的制造方法，其包括以下工序(1)將具有羧基的多糖衍生物的堿金屬鹽轉換成有機胺的鹽的工序；以及(2)該有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基在非水系統中進行反應的工序。
3．根據權利要求1或2記載的方法，其中具有羧基的多糖衍生物是羧C1-4烷基葡聚糖多元醇。
4．根據權利要求3記載的方法，其特征在于構成羧C1-4烷基葡聚糖多元醇的葡聚糖多元醇，是在實質上可能完全多元醇化的條件下，處理葡聚糖后得到的葡聚糖多元醇。
5．根據權利要求3或4記載的方法，其中羧C1-4烷基葡聚糖多元醇是羧甲基葡聚糖多元醇。
6．根據權利要求1至5的任一項記載的方法，其中醫藥化合物是抗腫瘤藥或者抗炎藥。
7．根據權利要求1至5的任一項記載的方法，其中醫藥化合物是能形成內酯環的醫藥化合物。
8．根據權利要求1至7的任一項記載的方法，其中在有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基的反應中，使用形成了內酯環的醫藥化合物或結合了形成內酯環的醫藥化合物的間隔基。
9．根據權利要求8記載的方法，其中能形成內酯環的權利要求7記載的醫藥化合物是(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氫-9-羥基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3′,4′:6,7]中氮茚并[1,2-b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮。
10．具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽，用于具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基結合起來的藥物復合物、或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基直接結合起來的藥物復合物的制造中。
全文摘要
一種藥物復合物的制造方法，是具有羧基的多糖衍生物和醫藥化合物的殘基，通過含有一個氨基酸的間隔基或者肽式鍵合的含有2～8個氨基酸的間隔基結合起來的藥物復合物、或者具有羧基的多糖衍生物同醫藥化合物的殘基不通過導入該間隔基直接結合起來的藥物復合物的制造方法，其特征是，具有羧基的多糖衍生物的有機胺的鹽同醫藥化合物或結合了醫藥化合物的間隔基在非水系統中進行反應。具有羧基的多糖衍生物同結合了間隔基的醫藥化合物等之間的反應可以獲得較高的收率，而且在同具有內酯環的醫藥化合物等進行反應的時候，可以抑制副反應。
文檔編號A61K47/48GK1227500SQ97197115
公開日1999年9月1日 申請日期1997年6月5日 優先權日1996年6月6日
發明者井上和泓, 洲崎浩, 池田政浩 申請人:第一制藥株式會社