紫杉醇的非腸道穩(wěn)定無毒制劑的制作方法

專利名稱：紫杉醇的非腸道穩(wěn)定無毒制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療和抑制惡性腫瘤疾病的紫杉烷類似物制劑而沒有使患者受到聚氧乙烯化蓖麻油或乙醇的副作用。
紫杉醇是近十年中進(jìn)入臨床試驗(yàn)最有希望的化學(xué)治療藥物。已經(jīng)顯示其對(duì)卵巢癌和乳腺癌的顯著活性，并且目前正在進(jìn)行對(duì)幾種不同的惡性腫瘤的II-III期臨床試驗(yàn)。所得結(jié)果說明該藥物還對(duì)淋巴瘤和不同種類的白血病非常有價(jià)值。該藥物使用已經(jīng)受到限制是由于繁瑣的提取方法，其唯一的起始原料是利用太平洋紫杉樹的樹皮。該缺點(diǎn)在某種程度上已經(jīng)阻礙了從紫杉樹樹針和樹皮中提取紫杉醇的技術(shù)的最近發(fā)展。還開發(fā)了從豐富來源的天然前體物質(zhì)制備紫杉醇的半合成技術(shù)。盡管目前紫杉醇是通過非腸道給藥，但是已經(jīng)獲得批準(zhǔn)用于人的制劑僅有一種(Bristol-Myers-Squibb(TaxolTM)提供)。該制劑含有50％(v/v)乙醇，及88倍過量的聚氧乙烯化蓖麻油(CremophorEL)，其具有誘發(fā)嚴(yán)重的副作用的可能性。所述紫杉醇制劑的急性和普通臨床副作用是嚴(yán)重的呼吸困難，低血壓，血管水腫，全身性尋麻疹，及最顯著的過敏性樣反應(yīng)，及致命危險(xiǎn)。另外，高濃度CremophorEL會(huì)促進(jìn)“塑化劑”的滲漏，即用于處理輸注袋的生產(chǎn)中使用的化學(xué)品的泄漏和靜脈注射管進(jìn)入輸注物，及患者受到未知化學(xué)品作用的風(fēng)險(xiǎn)(長(zhǎng)期)。目前使用藥物制劑的嚴(yán)重急性副作用的經(jīng)驗(yàn)已經(jīng)要求用苯海拉明，H2-拮抗劑，甚至皮質(zhì)類固醇類進(jìn)行前驅(qū)用藥。
因此，需要基于改變?nèi)軇┫到y(tǒng)的紫杉烷類制劑。這將緩解危險(xiǎn)的副作用并且提供用紫杉醇和相關(guān)紫杉烷類化合物的常規(guī)劑量治療和高劑量化學(xué)治療的藥物。
本發(fā)明通過用無毒溶劑系統(tǒng)(基于提供改變的、可產(chǎn)生穩(wěn)定藥物制劑的可藥用溶劑載體同時(shí)不使用CremophorEL和乙醇的共溶解能力原則)提供再配藥物力求克服現(xiàn)有技術(shù)中的那些缺點(diǎn)。這些制劑經(jīng)過血管內(nèi)給藥后顯著調(diào)整了藥物動(dòng)力學(xué)/藥化學(xué)并且也可以改變副作用范圍，因?yàn)?，例如目前使用的紫杉醇方案?duì)于平均成年患者要求給予多達(dá)20-30ml CremophorEl。
本發(fā)明還廣泛描述了用紫杉醇作為原型物質(zhì)溶解非腸道使用的紫杉烷類似物的組合物和方法的發(fā)現(xiàn)。作為該發(fā)現(xiàn)的實(shí)例，將紫杉烷類似物如紫杉醇溶解在作為第一載體的有機(jī)溶劑中，即二甲基乙酰胺(DMA)或二甲亞砜(DMSO)中，然后用第二溶劑，如聚乙二醇400(PEG)穩(wěn)定后來(最終)于水性溶劑中稀釋溶液中的藥物。優(yōu)選的最終溶劑是水性脂類乳液，例如乳化的大豆油(IntralipidTM，購自Kabi-Pharmacia Inc.，Stockholm，Sweden)。盡管這里所述實(shí)例利用具有平均分子量為400的聚乙二醇，但是應(yīng)當(dāng)理解該P(yáng)EG的分子量是在約300至約10,000之間變化。另外，預(yù)期有效的其它助溶劑包括但不限于例如多種酰胺類，其實(shí)例是2-吡咯烷酮，1-甲基-2-吡咯烷酮，及其它含硫化合物如環(huán)丁砜，四亞甲基嗍砜和四亞甲基亞砜。這些試劑是可用于穩(wěn)定紫杉烷化合物的雙質(zhì)子對(duì)極性惰性溶劑的所有實(shí)例，盡管它們以前少有或沒有被記錄用作藥物溶劑。
優(yōu)選的脂類溶劑提供一些優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)橛米髟妥仙纪轭愃莆锏淖仙即际歉哂H脂的并且水性脂類乳液的使用預(yù)期可穩(wěn)定水性稀釋液中的藥物，以便在超過24小時(shí)輸注的治療價(jià)值可以系統(tǒng)地和方便地體現(xiàn)而由于沉淀或降解損失藥物活性。脂肪乳劑(Intralipid)容易得到并且己批準(zhǔn)可用于常規(guī)非腸道營養(yǎng)載體。應(yīng)當(dāng)理解本領(lǐng)域中已知的其它脂類乳劑是無毒的及對(duì)人是低過敏的。類似可使用的脂類乳劑包括Liposyn，Soyacal和Travemulsion。
此外，紫杉醇是光敏感的，使用水性脂類乳液作為最終溶劑將提供輸注藥物時(shí)對(duì)光的保護(hù)。
已經(jīng)證明本發(fā)明的一種紫杉醇制劑(25mg/ml)在室溫可以穩(wěn)定幾個(gè)月。最終使用的制劑(1-5mg/ml)至少穩(wěn)定7天，并且用商購制劑作為對(duì)照溶液測(cè)定對(duì)兩種人白血病細(xì)胞系時(shí)，保留完全的細(xì)胞毒活性。而且其載體制劑在溶血測(cè)定中是無毒的。已經(jīng)使用的另一個(gè)制劑證明在嚙齒動(dòng)物模型中以3mg/kg體重注射后紫杉醇的明顯殺細(xì)胞濃度保持了數(shù)小時(shí)。因此，這里所述制劑提供了改變目前使用的紫杉醇、用于血管內(nèi)輸注治療人和飼養(yǎng)動(dòng)物惡性腫瘤疾病的可藥用制劑，同時(shí)其比目前使用的臨床制劑具有更大的效益及相當(dāng)小的副作用。用本發(fā)明制劑可以治療的惡性腫瘤疾病包括卵巢癌，乳腺癌，惡性淋巴瘤，肺癌或卡波濟(jì)肉瘤。可以預(yù)測(cè)使用這些新的溶劑系統(tǒng)溶解其它(親脂)紫杉烷類似物有利于這些非常活性的抗癌劑的臨床研究。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)包括1.親脂紫杉烷類似物的藥物穩(wěn)定和非腸道可接受的新型制劑，其可被用于治療人和飼養(yǎng)動(dòng)物的惡性腫瘤疾病。所得制劑是以藥物助溶解的原則為基礎(chǔ)，這是通常用于藥物工業(yè)并且被FDA認(rèn)可的原則；2.可與作為最終溶劑且臨床可接受、水性非腸道輸注液體混合的新制劑；3.在組織培養(yǎng)評(píng)價(jià)中保留完全細(xì)胞毒活性，且將人惡性腫瘤細(xì)胞系作為靶的新制劑；及4.根據(jù)與以前使用的制劑在大鼠模型中靜脈給藥后獲得的藥物動(dòng)力學(xué)比較，血管內(nèi)給藥可接受的制劑。
本發(fā)明提供了紫杉烷類似物(即紫杉醇)溶解在復(fù)合的、可藥用液體載體中的組合物和方法，其避免使用聚氧乙烯化蓖麻油如Cremophor或乙醇，以便該藥物保留物理和化學(xué)穩(wěn)定并且可以血管內(nèi)給藥而在預(yù)期有效顯示臨床殺腫瘤效果的藥物劑量時(shí)沒有由于不溶解藥物和/或溶劑載體帶來的毒性。
根據(jù)助溶解原則，優(yōu)選制劑結(jié)合使用無水N，N-二甲基乙酰胺(DMA)，二甲亞砜(DMSO)，和聚乙二醇-400(PEG)作為第一(儲(chǔ)備)溶劑，其在第二/最終水性溶劑中混溶，這些第二溶劑的實(shí)例是標(biāo)準(zhǔn)鹽水，5％葡萄糖水溶液和水性大豆脂類乳劑(IntralipidTM)。這些溶劑是其中紫杉烷類似物如紫杉醇單獨(dú)或與其它藥物結(jié)合使用時(shí)適當(dāng)被溶解并且對(duì)于人給藥是安全的載體的實(shí)例。
可以使用所述載體溶解紫杉醇的濃度范圍在0.1至大于25mg/ml之間。預(yù)期該范圍覆蓋了治療對(duì)這些藥物敏感的惡性腫瘤時(shí)需要產(chǎn)生體內(nèi)活性細(xì)胞毒濃度的給藥劑量。因此，本發(fā)明將允許在用于治療惡性腫瘤疾病的臨床實(shí)踐中引入紫杉醇和其它紫杉烷類似物而沒有使患者受到CremophorEL，乙醇或其它不希望的溶劑的嚴(yán)重的和可能毒性的作用。
從廣義上講，本發(fā)明公開了極不溶于水的紫杉烷類似物如紫杉醇的血管內(nèi)給藥方法。該方法防止了藥物的不好的腸道吸收以及避免了目前僅用的藥物制劑中遇到的聚氧乙烯化蓖麻油和乙醇的嚴(yán)重系統(tǒng)性副作用。新的藥物制劑的穩(wěn)定性將延長(zhǎng)非腸道輸注，相反目前使用的制劑在臨床接受的輸注液體中缺乏延長(zhǎng)的穩(wěn)定性，因此預(yù)期會(huì)提高這些藥物的治療效果。
本申請(qǐng)中使用的縮寫ATCC；美國組織培養(yǎng)中心，Rockvill，MDCremophorEL；聚氧乙烯化蓖麻油的商品名DMA；無水N，N-二降解乙酰胺DMF；二甲基甲酰胺FDA；美國聯(lián)邦食品和藥品管理署HPLC；高壓液相色譜HL-60；人骨髓白血病細(xì)胞系IMDM；Iscove改進(jìn)的dulbecco培養(yǎng)基(GIBCO，GrandIsland，New York，NY)IntralipidTM；從大豆油制備的水性脂類乳劑，由Kabi-Pharmacia，Inc.，Stockholm，Sweden銷售用于非腸道營養(yǎng)KBM-7/B5；人骨髓白血病細(xì)胞系MeOH；甲醇MTT；3，[4，5-二甲基噻唑-2-基]2，5-二苯基四唑溴化嗡NCI；國立癌癥研究所NH4-乙酸鹽；乙酸銨NS；標(biāo)準(zhǔn)鹽水(150mM NaCl)
PBS；磷酸鹽緩沖鹽水(Dulbecco配方，pH7.4)PEG；聚乙二醇-400PG；丙二醇PTFE；聚四氟乙烯(過濾膜)，TeflonTMRT；室溫(22℃)Sep Pak Vac1 cctC2TM；從Waters Inc.，Milford得到的可處理萃取柱，MA SDS；十二烷基硫酸鈉附

圖1.室溫(RT，22℃)和4℃紫杉醇的DMA∶PEG(1∶3，v/v)儲(chǔ)備制劑的穩(wěn)定性，濃度25mg/ml。在4℃穩(wěn)定性是與樣品在RT儲(chǔ)備記錄的穩(wěn)定性重疊的日期(4.5月)。
附圖2.4℃，室溫(RT，22℃)，40℃和60℃紫杉醇的DMA∶PEG(1∶3，v/v)儲(chǔ)備制劑的加速穩(wěn)定性研究，濃度25mg/ml。穩(wěn)定性曲線用4℃時(shí)樣品獲得，并且在整個(gè)60天觀察期與室溫曲線100％重疊。
附圖3.在RT，紫杉醇在DMA/PEG(1∶3，v/v)的最終使用制劑中的穩(wěn)定性，然后用Intralipid稀釋至1mg/ml，和5mg/ml。制備溶解紫杉醇的兩種不同樣品并且平行進(jìn)行試驗(yàn)。
附圖4.在穩(wěn)定性研究中使用HPLC測(cè)定的紫杉醇濃度對(duì)曲線下面積(AUC)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。制備類似標(biāo)準(zhǔn)曲線用于藥理學(xué)研究。
附圖5A-附圖5B 在附圖5A中用Waters μBondapak Phenyl柱在穩(wěn)定性研究中從HPLC獲得色譜圖實(shí)例。在附圖5B中注射樣品體積是20μl，附圖5C使用C8SymmetryTM柱，注射體積是20μl(附圖5B；1μg/ml，附圖5C；10μg/ml)。HPLC條件如下面實(shí)施例1所述。
附圖6.沒有(□)有(■)紫杉醇的DMAPEGIntralipid的最終使用制劑的溶血潛力。
附圖7.紫杉醇的DMAPEGIntralipid的使用制劑在60分鐘藥物暴露后用克隆基因鑒定評(píng)價(jià)對(duì)兩種人細(xì)胞系KBM-7/B5和HL-60的細(xì)胞毒活性。將紫杉醇的商品制劑用作陽性對(duì)照。詳細(xì)情況參見試驗(yàn)中實(shí)施例2。
附圖8.在HPLC前用如下面實(shí)施例3所述SepPak簡(jiǎn)柱提取的血漿樣品的色譜圖；a)空白血漿，b)用紫杉醇的新制劑10μg/ml形成峰值的血漿，及c)從藥理學(xué)研究中得到的可靠的色譜圖，其中大鼠用3mg/kg藥物注射。該血樣注射5分鐘后獲得。
附圖9.雄性Sprague-Dawley大鼠注射3mg/ml的紫杉醇的血漿濃度對(duì)時(shí)間的圖(-Δ-新制劑，DMAPEGIntralipid)。用商品制劑注射作陽性對(duì)照(□)。
本發(fā)明提供了非腸道或血管內(nèi)給予水溶性差的紫杉烷類似物的制劑，其中沒有乙醇和聚氧乙烯化蓖麻油，其被用于改進(jìn)對(duì)這些藥物敏感的惡性腫瘤的控制。將這里所示實(shí)施例制劑用于人惡性腫瘤，例如人白血病細(xì)胞系KBM-7/B5和HL-60模型時(shí)，該制劑是有效的。以前的藥物實(shí)踐已經(jīng)證明紫杉烷類如紫杉醇和docetaxel作為非腸道抗癌劑的用途，并且它們?cè)隗w外試驗(yàn)以及臨床試驗(yàn)中具有良好的、被完全證明的細(xì)胞毒性質(zhì)(Rowinsky等人，1990；Nicoletti等人，1993；Rose，1993；Verweij等人，1994；Rowinsky等人，1993；Brown等人，1991；Seidman等人，1995；Chevallier等人，1994)。
對(duì)于紫杉烷類似物用于治療系統(tǒng)性惡性腫瘤來說非腸道給藥是優(yōu)選的方法。不幸的是，大多數(shù)這些藥物在多數(shù)生理上可接受的水性溶劑(適合血管內(nèi)給藥)中具有極低的溶解性。用于商品紫杉醇制劑的溶劑系統(tǒng)是以乙醇和聚氧乙烯化蓖麻油的結(jié)合為基礎(chǔ)的，其具有嚴(yán)重副作用的可能性。已經(jīng)證明在該“標(biāo)準(zhǔn)”載體中的紫杉醇具有主要過敏樣性質(zhì)的急性副作用，有必要廣泛采用苯海拉明，組胺H2拮抗劑及皮質(zhì)類固醇類的前驅(qū)給藥法(Weiss等人，1990；TAXOL(紫杉醇))。已經(jīng)證明了這里公開的以助溶解原則(Spiegel和Noseworthy，1963；Yalkowsky和Roseman，1981)為基礎(chǔ)的制劑具有溶解紫杉烷類似物象紫杉醇的能力而沒有影響其細(xì)胞毒性質(zhì)。
優(yōu)選的溶劑對(duì)于試驗(yàn)動(dòng)物和人的建議濃度及使用的總劑量下給藥時(shí)實(shí)際上是無毒的并且證明是安全的。實(shí)際上，以前已經(jīng)使用DMA用于溶解各種給藥于人的藥物活性成分(U.S.Department of Health andHuman Services，1984；Weiss等人，1962；Kim，1988)。PEG的非腸道給藥已經(jīng)在猿模型中詳細(xì)研究(Lockard等人，1979)，并且也已經(jīng)臨床使用PEG作為治療淋巴細(xì)胞白血病和淋巴瘤中的L-天冬酰胺酶(共價(jià)鍵)載體(Keating等人，1993)。DMSO已經(jīng)廣泛用于臨床藥物，最廣泛用作冷凍保護(hù)劑在高劑量化學(xué)治療和家族生血細(xì)胞移植前用于冷凍保存骨髓和祖先末梢血細(xì)胞(Davis和Rowley，1990；Gorin，1992)。從使用這些稀釋劑的經(jīng)驗(yàn)說明沒有嚴(yán)重的臨床副作用。已經(jīng)很好地建立了臨床使用標(biāo)準(zhǔn)鹽水(NS)，葡萄糖水(5-70％)，和水性脂類乳劑的常規(guī)方法以校正液體和電解質(zhì)平衡及供應(yīng)非腸道營養(yǎng)。標(biāo)準(zhǔn)鹽水和葡萄糖水廣泛用于稀釋各種非腸道使用的藥物。盡管水性脂類乳劑還沒有發(fā)現(xiàn)廣泛用作藥物稀釋劑，但是這種應(yīng)用已經(jīng)建立(Fortner等人，1975)。在嚙齒動(dòng)物模型中獲得的數(shù)據(jù)證明建議的穩(wěn)定的紫杉烷制劑將允許非腸道治療系統(tǒng)性惡性腫瘤并且將提供100％生物利用度而沒有使患者受到乙醇和CremophorEL的作用。紫杉醇經(jīng)暫時(shí)靜脈輸注后，明顯達(dá)到血漿濃度，并且在延長(zhǎng)的時(shí)間里保持在抗腫瘤范圍內(nèi)，該范圍是對(duì)人惡性腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性研究的體外試驗(yàn)中建立的。特別地，這里公開的紫杉醇使用制劑在RT化學(xué)穩(wěn)定超過1星期，并且其操作簡(jiǎn)單及提供了可靠和容易控制的具有藥物100％生物利用度的劑量。
總之，本發(fā)現(xiàn)通過在延長(zhǎng)的時(shí)間里給藥紫杉醇，提供了用于治療免疫危及患者的一些惡性腫瘤如卵巢，乳腺癌和卡波皮肉瘤的改進(jìn)方法和制劑。這些方法和制劑還提供了消除在親脂試劑的制劑中使用乙醇和/或聚氧乙烯化蓖麻油的相關(guān)副作用的危險(xiǎn)的優(yōu)點(diǎn)。
以下實(shí)施例包括證明本發(fā)明的進(jìn)一步優(yōu)選方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解公開在實(shí)施例中的這些技術(shù)遵循本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的代表性技術(shù)，在本發(fā)明實(shí)踐中具有好的功能，因此可以認(rèn)為其構(gòu)成了本發(fā)明實(shí)踐的優(yōu)選方式。但是，根據(jù)本公開，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解在具體公開實(shí)例中可以作出許多變化并且仍獲得類似的結(jié)果而沒有背離本發(fā)明的精神和范圍。
實(shí)施例1非腸道給藥的紫杉烷類似物計(jì)算所需溶解性根據(jù)從已知具有顯著抗人腫瘤效力的劑量外推已經(jīng)計(jì)算出紫杉醇的相關(guān)溶解性范圍。已經(jīng)用乙醇/CremophorEL制劑(其是目前唯一經(jīng)過FDA批準(zhǔn)的非腸道制劑)進(jìn)行了所有這些研究。目前使用的紫杉醇治療方案的典型處方劑量范圍為135-250mg/m2人體表面(Verweij等人，1994；Rowinsky等人，1993；Brown等人，1991；Holmes等人，1991；Seidman等人，1995；TAXOL(紫杉醇)。紫杉醇的臨床最有效的給藥方式還不知道。但是，很明顯用延時(shí)輸注方式，藥物的神經(jīng)病學(xué)副作用顯著小于常用的短時(shí)(3小時(shí))輸注。因此假定紫杉醇的臨床最佳給藥方式是延時(shí)輸注，可能超過24小時(shí)，需要使用制劑在室溫具有至少36-48小時(shí)所需穩(wěn)定性以便進(jìn)行常規(guī)處理。如果該劑量以濃度1-5mg/ml溶解，至少10-25mg/ml的儲(chǔ)備制劑將優(yōu)選進(jìn)行適當(dāng)稀釋處理至相當(dāng)寬范圍的使用濃度，以使其可以容易在需要延長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行輸注而不需要由于在輸注物中的藥物的物理或化學(xué)降解而重復(fù)交換輸注液體。
提高在生理可接受的溶劑中的溶解性測(cè)定在幾種單個(gè)載體中的紫杉醇的溶解性。在1小時(shí)內(nèi)將已知量的粉劑藥物(從Xechem Inc.New Brunswick，New Jersey獲得兩個(gè)不同等分的純化藥物)在室溫(22℃)不同溶劑中平衡1小時(shí)。然后除去等分部分并在HPLC預(yù)測(cè)定時(shí)間前在MeOH中稀釋。根據(jù)紫杉醇在這些特定載體中的溶解性，根據(jù)助溶解原則通過混合不同溶劑來提高(穩(wěn)定)溶解性(Spiegel和Noseworthy，1963；Yalkowsky和Roseman，1981)。根據(jù)需要達(dá)到臨床相關(guān)穩(wěn)定儲(chǔ)備制劑的上述溶解性的估計(jì)值，評(píng)價(jià)不同的溶劑系統(tǒng)。然后將這些儲(chǔ)備制劑用“最終溶劑”稀釋以產(chǎn)生完全穩(wěn)定的臨床使用制劑1-5mg/ml，其可用于非腸道輸注。從通常用于非腸道輸注液體，NS，5％葡萄糖水或非腸道可接受的水性脂類乳劑(例如Intralipid)之一(所有這些溶劑容易得到并且被批準(zhǔn)用于非腸道給藥)選擇最終溶劑。
HPLC測(cè)定用于含蛋白和不含蛋白混合物的紫杉醇的低濃度溶液的多數(shù)精確和敏感檢測(cè)系統(tǒng)是利用檢測(cè)器在uv譜227nm進(jìn)行吸收檢測(cè)的HPLC測(cè)定，根據(jù)紫杉醇分子的固有吸收最大值選擇數(shù)值。幾個(gè)研究者以前已經(jīng)研究了這種通用方法(Rizzo等人，1990；Willey等人，1993；Sharma等人，1994；Eiseman等人，1994)。
使用裝有LDC4000多溶劑輸送系統(tǒng)TM和Water系統(tǒng)717加自動(dòng)注射器TM的液體色譜系統(tǒng)。吸收檢測(cè)器是LDC3100可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，其帶有LDC型CI4100全計(jì)算機(jī)化積分儀。所用柱開始是WatersμBondapakTM苯基柱，3.9×300mm，后來使用Waters CiSymmetryTM柱，3.9×150mm(Millipore Corp.，Marlborough，MA)。等度流動(dòng)相系統(tǒng)由NH4-乙酸鹽(20mM，pH5.0)/乙腈/MeOH(體積比50∶40∶10)組成。除非另有說明，所有化學(xué)品是HPLC級(jí)。流速是1.0ml/分鐘，記錄圖速度是5mm/分鐘。分析系統(tǒng)由(Rizzo等人，1990；Willey等人，1993；Sharma等人，1994；Eiseman等人，1994；未公開方法Courtesy of Xechem Inc.，Newark，New Jersey，和從公開的方法，courtesy of Dr.T.Madden，Department of Pediatris，UT MDAnderson Cancer Center)建立。
內(nèi)源性血漿(蛋白)色譜峰的形狀受藥理學(xué)研究中HPLC洗脫劑的干擾。因此，加入使用Sep Pak Vac 1 cc tC2提取處理柱(WatersCororation Inc.，Miford，MA)的提取/純化步驟。這些可以自由使用的提取處理柱的使用條件是1ml MeOH和具有500μl MeOH∶水(85∶15，v/v)的1ml水為流動(dòng)相。然后用上述HPLC分析洗脫液。
紫杉醇溶解性評(píng)價(jià)在適合人給藥的水混溶生理上可接受載體中溶解紫杉醇的幾種方法。除了水性溶劑NS，5％葡萄糖水和水性大豆脂類乳液(Intralipid)外，檢測(cè)參選溶劑包括DMA，DMSO，PEG，和PG。DMA和DMSO是最好的首選溶劑，此時(shí)，如所預(yù)計(jì)，紫杉醇在多數(shù)水性溶劑中不溶(表1)。只有用DMA和DMSO時(shí)其溶解度超過10mg/ml。實(shí)際上，這兩種溶劑都使紫杉醇濃度超過100mg/ml并且該藥物在RT及溶液中保持穩(wěn)定4小時(shí)以上。但是，盡管紫杉醇能溶解在DMA和DMSO中至少100mg/ml，但是藥物在該溶劑中約12小時(shí)內(nèi)開始降解。由于考慮DMSO可能與紫杉烷類進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，多數(shù)研究強(qiáng)調(diào)如何用助溶劑方法穩(wěn)定溶解在DMA中的紫杉醇(Spiegel和Noseworthy，1963；Yalkowsky和Roseman，1981)。研究了幾種助溶劑的結(jié)合；加入PEG使25mg/ml溶液穩(wěn)定(附圖1和附圖2)，當(dāng)將該儲(chǔ)備溶液進(jìn)一步用水性脂類乳液稀釋為1mg/ml或5mg/ml時(shí)，所得“使用制劑”在RT至少穩(wěn)定7天(參見附圖3)HPLC測(cè)定從HPLC測(cè)定得到的實(shí)際紫杉醇色譜實(shí)例如附圖4和附圖5。在該專門研究中，從用在水性DMA/PEG/脂類“使用”溶劑中的藥物的穩(wěn)定性研究中分析藥物。在上述條件下利用μBondapak苯基柱的保留時(shí)間是17-18分鐘。經(jīng)過比較其它方法后，用C8Symmetry柱替代μBondapak苯基柱，其給出相同的回收和靈敏性數(shù)據(jù)，但是具有更好的分辨率和僅10.3-11.3分鐘的保留時(shí)間。該測(cè)定在10ng/ml-50.0μg/ml無蛋白溶液中是線性的，即各種溶劑系統(tǒng)用于制劑-可行性和穩(wěn)定性研究中。該測(cè)定一致產(chǎn)生了高回收、準(zhǔn)確和低于約5ng/ml靈敏限。該技術(shù)是標(biāo)準(zhǔn)化的并且用于所有沒有修正的穩(wěn)定性研究。對(duì)于藥理學(xué)研究，色譜中內(nèi)源性血漿蛋白峰的出現(xiàn)需要加入提取/純化步驟。該提取用Waters Sep Pak Vac 1 cc tC2提取柱進(jìn)行。血漿分析結(jié)果參見實(shí)施例3。
實(shí)施例2體外穩(wěn)定性和其它性質(zhì)，優(yōu)選制劑溶解性研究在RTF將粉狀過量的紫杉醇加到DMA，DMSO，PEG，和PG中。將每個(gè)混合物放在暗環(huán)境中并且憑視覺檢查溶解現(xiàn)象達(dá)1小時(shí)。在不同間隔時(shí)間取出1ml樣品并用裝有聯(lián)合注射器的0.45μm PTFETM膜過濾器(Whatman Inc.，Clifton，NJ)過濾，適當(dāng)稀釋后用HPLC測(cè)定紫杉醇的濃度。
各種紫杉醇制劑的穩(wěn)定性為了研究各種非腸道制劑的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，進(jìn)行以下3項(xiàng)研究(a)將紫杉醇以濃度100mg/ml溶解在DMA中(“第一儲(chǔ)備溶液”)并且在4℃、22℃、40℃和60℃培養(yǎng)。用HPLC測(cè)定溶解后立即取出的樣品和逐漸增加時(shí)間間隔直到48小時(shí)后取出的樣品的紫杉醇濃度。
(b)用PEG(1∶3，v/v，DMA/PEG)，或脂類乳液(1∶10或1∶100，v/v，DMA∶脂肪乳劑)稀釋DMA-紫杉醇混合物產(chǎn)生藥物儲(chǔ)備濃度范圍為10-25mg/ml。
(c)用標(biāo)準(zhǔn)鹽水或5％葡萄糖水稀釋DMA-紫杉醇混合物產(chǎn)生藥物儲(chǔ)備濃度為1mg/ml和5m/ml。
混合后、每小時(shí)(共8小時(shí))、逐漸增加時(shí)間間隔多于10天后根據(jù)在各個(gè)溶劑中降解的起始速度立即用HPLC分析各種制劑。
不同的第一溶劑藥物的溶解度顯著不同。僅DMA和DMSO提供了如上所述超過100mg/ml的溶解度，優(yōu)選DMA作為第一溶劑進(jìn)一步研究。
為了降低在最終使用制劑中DMA的濃度及改進(jìn)其藥物的貨架壽命，研究將PEG作為助溶劑。PEG的使用將使水性載體進(jìn)一步稀釋而沒有藥物沉淀和快速的化學(xué)降解，即使藥物的“儲(chǔ)備”濃度高達(dá)25mg/ml。另外，在全溶劑系統(tǒng)中低的總DMA濃度預(yù)期比已經(jīng)用于第一溶解步驟中高的DMA或DMSO濃度產(chǎn)生更低的最終使用制劑的溶血可能性。
滲透壓的測(cè)定用微-滲透壓計(jì)型號(hào)3moplus osmometer(Advanced InstrumentsInc.，Needham Heights，MA)測(cè)定滲透壓。該儀器用AdvansTM內(nèi)部校正標(biāo)準(zhǔn)(Advanced Instruments Inc.)在范圍500-2000mOsm/kg內(nèi)校正。將使用溶液放在試驗(yàn)試劑盒的樣品池中并且在mOsm/kg單位平衡后記錄滲透壓讀數(shù)。每個(gè)載體(沒有紫杉醇)進(jìn)行一式三份測(cè)定，加入紫杉醇進(jìn)行六次測(cè)定。
使用雙尾t檢驗(yàn)評(píng)價(jià)有和沒有紫杉醇的各種載體制劑的滲透壓差別(Mann and Whitney，1947)。兩組的方法差別認(rèn)為差別顯著(P≤0.05)。
體外溶血研究使用Parthasarthy等人的方法檢測(cè)選擇的幾個(gè)制劑的溶血可能性并且構(gòu)建如(Parthasarathy等人，1994)所述最佳制劑的LD50值。將肝素化的血與等體積Alsever溶液混合。將該混合物用PBS洗滌兩次然后制備10％(v/v)紅細(xì)胞/PBS溶液并與增量的有或沒有加入紫杉醇的全溶解系統(tǒng)混合。然后將這些混合物在37℃培養(yǎng)4小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束后，將細(xì)胞在Eppendorf微離心機(jī)以10,000×g?；⒂梅止夤舛葍x在550nm測(cè)定上清液(即溶血)中釋放的血紅蛋白。測(cè)定相對(duì)于已經(jīng)用低滲儲(chǔ)備液完全溶解的血紅蛋白的參考溶液的最大溶解。如(Parthasarathy等人，1994)所述評(píng)價(jià)“最佳”最終制劑的溶血能力并將數(shù)據(jù)用健康細(xì)胞部分對(duì)1n(總體積百分比)作圖?？傮w積百分比定義為用血液稀釋后混合物中載體的體積百分比。做這個(gè)是為了刺激非腸道給藥后血流中每個(gè)藥物的稀釋。健康紅細(xì)胞定義為有或沒有紫杉醇的溶劑載體混合物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后能保留其血紅蛋白的那些紅細(xì)胞(Parthasarathy等人，1994)。
體外紫杉醇的細(xì)胞毒性用已經(jīng)公開的細(xì)胞毒性測(cè)定方法，“MTT”(Hansen等人，1989；Andersson等人，1995)，及克隆基因測(cè)定方法(Andersson等人，1994)測(cè)定所選擇的有和沒有紫杉醇的溶劑系統(tǒng)對(duì)兩個(gè)人骨髓白血病細(xì)胞系HL-60(Gallagher等人，1979)的細(xì)胞毒潛力。將在補(bǔ)充10％胎牛血清的Iscove改進(jìn)的Dulbecco培養(yǎng)基(IMDM)中的HL-60或KBM-7/B5細(xì)胞在37℃培養(yǎng)60分鐘。24小時(shí)后向每個(gè)樣品中加入25μl MTT溶液(5mg/ml)(Sigma Chemicals，St.Louis.MO)并在37℃再培養(yǎng)2小時(shí)，加入100μl萃取緩沖液[萃取緩沖液37℃ 20％(w/v)SDS溶解在DMF和去離子水(1∶1)溶液中至飽和；pH4.7]。在37℃培養(yǎng)過夜后，在570nm用Titer-TechTM96-wellmulti-scannerTM測(cè)定萃取緩沖液作為校正空白的光密度。用暴露于上述溶劑±紫杉醇的樣品和已經(jīng)只在PBS進(jìn)行平行培養(yǎng)的細(xì)胞的基本反應(yīng)性的比色差異測(cè)定細(xì)胞毒性。所有測(cè)定進(jìn)行一式三份?；蛘?，培養(yǎng)60分鐘后，用冰冷卻的PBS(pH7.4)洗滌細(xì)胞并再懸浮在具有20％胎牛血清和0.3％瓊脂作為粘性載體的IMDM中。在37℃培養(yǎng)7天后，在轉(zhuǎn)化相對(duì)照顯微鏡下計(jì)數(shù)＞50細(xì)胞的克隆并如(Andersson等人，1994)建立存活曲線。
平衡溶解性測(cè)定紫杉醇的最大平衡溶解性＞100mg/ml是在DMA和DMSO中及RT在1小時(shí)內(nèi)獲得的。該溶解性將分別使用PEG-400，PG，NS，Intralipid，和5％葡萄糖水，而不產(chǎn)生任何顯著的溶解藥物濃度(表1)。因此不認(rèn)為這些溶劑可作為第一溶劑用于研究。在DMA和DMSO中，紫杉醇在RT下至少完全穩(wěn)定4小時(shí)，但是，在RT下延長(zhǎng)暴露后預(yù)期DMSO的硫基團(tuán)可能與紫杉烷結(jié)構(gòu)反應(yīng)。因此，無水DMA有利作為第一溶劑。當(dāng)在DMA中紫杉醇溶解性達(dá)到＞100mg/ml時(shí)，在RT下儲(chǔ)備過夜后，藥物開始慢慢降解。為了穩(wěn)定藥物，研究幾種助溶劑。當(dāng)PEG與DMA結(jié)合使用時(shí)，在4℃和RT下研究真正穩(wěn)定性壽命，在4.5個(gè)月內(nèi)沒有產(chǎn)生明顯的降解(附圖1)。
各種制劑的穩(wěn)定性研究在不同溶劑制劑中溶解的紫杉醇的溫度依賴穩(wěn)定性研究如下將藥物以100mg/ml溶解在DMA，加入PEG(1∶3，v/v)后，最終紫杉醇濃度為25mg/ml。將不同等分在4℃，22℃，40℃，和60℃儲(chǔ)備(附圖2)。溶解和在各種間隔多達(dá)超過50天后立即用HPLC分析不同樣品的的等分部分。儲(chǔ)備在4℃，RT，和40℃的藥物樣品在前60天觀察中沒有顯示任何顯著的降解。在60℃的樣品在前6小時(shí)觀察中有約10-15％的損失，之后超過6星期內(nèi)沒有明顯的進(jìn)一步降解。該研究結(jié)果認(rèn)為該藥物在這種儲(chǔ)備制劑中在升高溫度下也是穩(wěn)定的。
當(dāng)NS或5％葡萄糖水用作最終溶劑時(shí)，在4-6小時(shí)內(nèi)發(fā)生明顯降解。相反，當(dāng)水性脂類乳液用作最終溶劑載體時(shí)，所得1mg/ml和5mg/ml溶液在4℃和RT下穩(wěn)定1星期，參見附圖3。
滲透壓藥理學(xué)活性物質(zhì)的非腸道制劑需要與血液等滲。如果藥物/溶劑是通過(中心)靜脈管輸注并且逐漸在大量血液體積中稀釋，可以使用高滲輸送系統(tǒng)。目前制劑之一的滲透壓如表2所示。有和沒有紫杉醇的第一DMA/PEG-儲(chǔ)備制劑是非常高滲的；與人血液280-295mOsm/kg比較，估計(jì)其滲透壓超過4,000mOsm/kg。相反，DMA/PEG/紫杉醇與Intralipid的混合物很接近滲透壓。通過加入1ml/mg(＜5％)紫杉醇沒有明顯改變?cè)撜麄€(gè)載體的滲透性。
溶血如附圖6所示，當(dāng)使用沒有或加入紫杉醇的整個(gè)載體時(shí)，使用制劑顯示了低引起溶血能力。紫杉醇依賴性溶解在藥物濃度(高達(dá)和超過50μg/ml)背景以上幾乎不明顯。在不同的研究中特定紫杉烷溶血高度重復(fù)出現(xiàn)。用有或沒有紫杉醇的全使用-載體的不同研究的詳細(xì)情況概括在附圖6中。DMA/PEG/IntralipidTM制劑具有非常低的溶血傾向。
紫杉醇細(xì)胞毒性的體外試驗(yàn)將HL-60和KBM-7/B5骨髓細(xì)胞暴露在增加有和沒有加入藥物濃度的體積比例的DMA/PEG/Intralipid的最終使用載體中，并且用紫杉醇的CremophorEL/乙醇制劑作為陽性對(duì)照。這些溶劑系統(tǒng)對(duì)用MTT的這些研究中或克隆基因測(cè)定中的細(xì)胞系沒有任何可檢測(cè)細(xì)胞毒性。當(dāng)將紫杉醇加到每個(gè)溶劑系統(tǒng)中時(shí)，對(duì)于兩種制劑觀察到濃度依賴細(xì)胞毒性(參見附圖7，由克隆基因測(cè)定中獲得的數(shù)據(jù)；由MTT測(cè)定獲得了類似肯定的數(shù)據(jù))。與標(biāo)準(zhǔn)制劑比較，該藥物似乎在檢測(cè)新制劑中至少保留相等的細(xì)胞毒性。
實(shí)施例3血漿中紫杉醇定量分析和體內(nèi)紫杉醇藥理學(xué)血漿中紫杉醇的定量提取將鼠血漿(500μl)與不同量的紫杉醇(在＜3％的最終體積中)混合以產(chǎn)生0.05-3.0μg/ml的藥物濃度(得自藥物濃度5mg/ml的DMA/DMSO/Intralipid的紫杉醇儲(chǔ)備使用溶液)。如上所述，從血漿樣品中提取藥物。將500μl血漿裝入已經(jīng)先后用1ml MeOH和1ml水預(yù)處理的Sep Pak Vac 1 cc-tC2柱上。接著依次用1ml水和1mlMeOH∶水(1∶3，v/v)洗滌樣品，然后用500μl MeOH∶水(85∶15，v/v)洗脫。如上所述用HPLC分析洗脫液并在227nm用分光光度法檢測(cè)紫杉醇。從鼠血漿峰值藥物濃度10μg/ml計(jì)算紫杉醇回收率是87±3％。在間隔10ng/ml-50μg/ml的測(cè)定是線性的，檢測(cè)限為5ng/ml。
鼠的非腸道紫杉醇對(duì)于體內(nèi)研究，使用體重250-300g雄性Sprague-Dawley鼠。這些鼠從Houston Texas的Harlan-Sprague-Dawley當(dāng)?shù)仫曫B(yǎng)工廠得到。這些動(dòng)物運(yùn)到MD Anderson癌癥中心后至少使其適應(yīng)3-4天環(huán)境變化。在藥理學(xué)研究之前和期間所有動(dòng)物可自由喂養(yǎng)和龍頭給水。用慢速靜脈注射CremophorEL為主制劑(其在缺乏藥理學(xué)前驅(qū)給藥法下沒有致死過敏性樣反應(yīng))測(cè)定的最高劑量為3mg/ml劑量。當(dāng)使用CremophorEL為主制劑，但是沒有使用本文公開的制劑時(shí)，注射5mg/kg體重和10mg/kg體重會(huì)導(dǎo)致過敏性突然死亡。
對(duì)于體內(nèi)藥理學(xué)研究，將紫杉醇在DMA/DMSO中制成25mg/ml儲(chǔ)備藥物濃度的制劑，然后用Intralipid稀釋使該劑量(3.0mg/kg)能通過尾靜脈注射以最大體積0.5ml注射給藥。與上市紫杉醇制劑(TAXOL(紫杉醇))的制造商建議相反，在本研究中沒有對(duì)動(dòng)物使用藥理學(xué)前驅(qū)給藥法。這避免了誘發(fā)能改變藥物代謝/消除的微粒體肝酶的可能影響和影響(最后部分)血漿濃度曲線。由于相同理由，沒有麻醉所有動(dòng)物并且僅在藥物注射期間進(jìn)行物理限制。注射使用-制劑的藥物濃度在使用前由HPLC確定。在藥物輸注前(用于空白血漿)，及注射測(cè)定紫杉醇血漿濃度的5分鐘至24小時(shí)選擇時(shí)間點(diǎn)，用肝素化管通過心臟穿刺在光CO2麻醉下抽取血樣0.5-1.0ml。將血液以1,000×g離心10分鐘并分離血漿及儲(chǔ)備在-80℃直到提取和如上上述用HPLC分析。
血漿中紫杉醇和體內(nèi)藥物藥理學(xué)用Sep Pak Vac 1 cc tC2柱從具有MeOH的血漿中提取藥物對(duì)于避免內(nèi)源性血漿成分的干擾和回收最大量藥物是必要的?？瞻籽獫{、紫杉醇-峰值血漿，和從目前藥物動(dòng)力學(xué)研究中血漿樣品提取后獲得的一個(gè)實(shí)例的實(shí)際色譜如附圖8所示。在該系統(tǒng)中紫杉醇的保留時(shí)間是10.3-11.3分鐘。當(dāng)鼠血漿體外具有藥物峰值10μg/ml時(shí)，用上述方法紫杉醇的回收率是87±3％。當(dāng)從血漿樣品在10ng/ml-50μg/ml范圍進(jìn)行藥物提取后該測(cè)定是線性的。當(dāng)色譜圖中以200μl注射時(shí)，敏感限約5ng/ml。預(yù)期通過使用2ml較大體積注射環(huán)系統(tǒng)和通過在較小體積中蒸發(fā)/重配500μl洗脫液可以改進(jìn)這種敏感性。在濃度范圍10ng/ml至1,000ng/ml中制備用于藥理學(xué)研究的標(biāo)準(zhǔn)曲線并且在血漿紫杉醇濃度和峰AUC值之間獲得好的相關(guān)性。
數(shù)據(jù)說明將新的紫杉醇制劑可產(chǎn)生與注射相同劑量3mg/ml體重的市購制劑至少相同的血漿濃度(附圖9)。
總之，本實(shí)施例說明用紫杉醇作為原型化合物成功設(shè)計(jì)了紫杉烷類似物的藥用穩(wěn)定制劑。如嚙齒動(dòng)物模型所示，該最佳溶劑系統(tǒng)是生理相容并具有好的耐受的血管內(nèi)給藥和可忽略的急性溶劑系統(tǒng)毒性。給鼠血管內(nèi)注射一種制劑(3.0mg/ml，類似于200mg/m-2體表面)，在幾小時(shí)內(nèi)達(dá)到血漿濃度，保持紫杉醇細(xì)胞毒濃度。應(yīng)當(dāng)注意，在該研究中，對(duì)于使用-制劑，使用含Intralipid的1∶3 DMA和PEG混合物作為“最終”溶劑的制劑。
用優(yōu)選的最終使用-制劑，DMA/PEG/Intralipid獲得的數(shù)據(jù)明確證明在臨床治療惡性疾病中引入這種非腸道紫杉烷(紫杉醇)制劑的可行性，和預(yù)期達(dá)到的細(xì)胞毒活性及溶劑載體低的或可忽略的對(duì)正常器官的毒性。特別地，現(xiàn)在可以完全避免至少部分與使用大量注射CremophorEL和乙醇相關(guān)的嚴(yán)重的威脅生命的過敏性反應(yīng)的可能性。這些新的溶劑系統(tǒng)預(yù)期不僅明顯減少溶劑系統(tǒng)毒性的危險(xiǎn)，而且使有機(jī)溶劑可能加強(qiáng)紫杉烷如紫杉醇有關(guān)的臨床副作用的危險(xiǎn)降至最小，及方便延長(zhǎng)給藥的處理和精確評(píng)價(jià)。
結(jié)論已經(jīng)發(fā)明了用于親脂性紫杉烷類似物如紫杉醇的穩(wěn)定及可藥用的制劑的血管內(nèi)給藥的新載體。已經(jīng)開發(fā)了敏感的和特定的HPLC測(cè)定，其可重現(xiàn)定量紫杉醇濃度低至10-50ng/ml。類似地，開發(fā)了提取技術(shù)以重復(fù)回收從血管內(nèi)給藥后得到的血漿樣品中的紫杉醇。開始了新的非腸道配伍載體的穩(wěn)定性研究以選擇用于溶血可能性和體外細(xì)胞毒活性研究的最好制劑。因此，一種穩(wěn)定的新制劑可以以3.0mg/kg體重非腸道注射給鼠。從所得結(jié)果看出，高藥物濃度可以在鼠模型中靜脈注射新制劑后獲得。此外，該制劑產(chǎn)生血漿藥物濃度和在血漿濃度對(duì)時(shí)間曲線下的面積(明顯是細(xì)胞毒范圍內(nèi))?，F(xiàn)在可以研究含有紫杉烷類如紫杉醇的這些最穩(wěn)定的、低毒性載體用于非腸道治療轉(zhuǎn)移性癌癥。最后，將進(jìn)行有效的紫杉醇和其它紫杉烷類似物對(duì)惡性腫瘤疾病的臨床研究。
表1紫杉醇在各種溶劑中的溶解性溶劑 實(shí)驗(yàn)次數(shù) 溶解性，mg/mlDMA 3 ＞200DMSO1 ＞100丙二醇 1 不溶aPEG 1 不溶標(biāo)準(zhǔn)鹽水1 不溶5％葡萄糖 1 不溶IntralipidTM1 不溶a不溶這里被定義為在室溫60分鐘后溶解度＜0.1mg/ml。
表2一種新紫杉醇制劑的滲透壓溶液na滲透壓，mOsm/kg(±S.D.)新儲(chǔ)備制劑 1 ＞4,000bDMA∶PEG(1∶3)新使用制劑 3 568±10僅載體c，新使用制劑d， 3 592±110含紫杉醇的載體5％葡萄糖水 3 286±12標(biāo)準(zhǔn)鹽水3 233-238血液8 280-295水 3 3na，獨(dú)立觀察的數(shù)量b，該實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可能是人工的；滲透壓計(jì)使用冷凍點(diǎn)降低，其可能不真正反應(yīng)生理?xiàng)l件下有機(jī)溶劑的物理性質(zhì)c，該制劑是在本文中所述DMAPEGIntralipid使用-制劑d，制劑是上述使用-制劑，紫杉醇濃度是1.0mg/ml根據(jù)優(yōu)選的實(shí)例，已經(jīng)描述了本發(fā)明組合物和方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員將明白在不背離本發(fā)明概念、精神和范圍情況下，各種變化可以用于這里所述的組合物、方法和方法步驟和后續(xù)步驟中。相信對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說明顯的所有這些類似的替代和改變將在后面權(quán)利要求中定義的本發(fā)明的精神、范圍和概念之內(nèi)。
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權(quán)利要求
1.非腸道給藥的藥物組合物，包括紫杉烷類似物，二甲基乙酰胺(DMA)，聚乙二醇(PEG)和水性脂類乳劑。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述紫杉烷類似物是紫杉醇。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中紫杉烷類似物的濃度至少約為1-5mg/ml。
4.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述水性脂類乳劑是大豆油乳劑。
5.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述PEG的分子量約400。
6.權(quán)利要求1的藥物組合物，進(jìn)一步限定包括DMA和PEG的比例約1∶3(v/v)。
7.制備用于血管內(nèi)給藥的紫杉醇組合物的方法，包括以下步驟將紫杉醇溶解在DMA中使?jié)舛雀哌_(dá)約100mg/ml；以DMA∶PEG約為1∶3(v/v)的比例將聚乙二醇(PEG)加到紫杉醇溶液中以得到紫杉醇濃度高達(dá)25mg/ml的紫杉醇儲(chǔ)備制劑；及加入水性脂類乳劑以得到紫杉醇濃度約為1-5mg/ml。
8.用權(quán)利要求7的方法制備的藥物組合物。
9.治療紫杉醇敏感腫瘤的方法，包括獲得藥物組合物，包括紫杉醇溶解在比例DMA∶PEG約為1∶3(v/v)的二甲基甲酰胺(DMA)和聚乙二醇(PEG)中，并最后溶解在水性脂類乳劑中得到最終紫杉醇的濃度約為1-5mg/ml；和用所述藥物組合物與所述腫瘤接觸。
10.權(quán)利要求9的方法，其中所述腫瘤在患者中并且所述藥物組合物經(jīng)非腸道給藥。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述患者是人卵巢癌，乳腺癌，惡性淋巴瘤，肺癌或卡波濟(jì)肉瘤的患者。
12.權(quán)利要求9的方法，其中所述藥物組合物以劑量約135-250mg/m2體表面給藥。
13.一種紫杉醇儲(chǔ)備制劑，包括約25mg/ml紫杉醇和v/v比例為1∶3的二甲基乙酰胺∶聚乙二醇。
14.權(quán)利要求13的紫杉醇儲(chǔ)備制劑，其中所述聚乙二醇的分子量約為400。
全文摘要
本發(fā)明公開了穩(wěn)定的和有效的紫杉烷類似物，優(yōu)選紫杉醇的制劑。該制劑包括藥物的二甲基乙酰胺和聚乙二醇溶液，該溶液在使用前用水性脂類乳劑稀釋。該制劑作為非腸道藥物對(duì)紫杉烷敏感腫瘤是有效的。
文檔編號(hào)A61K47/34GK1228022SQ97196934
公開日1999年9月8日 申請(qǐng)日期1997年6月26日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月28日
發(fā)明者B·S·安德森 申請(qǐng)人:德克薩斯州立大學(xué)董事會(huì)