異戊二烯基轉移酶抑制劑的制作方法

專利名稱：異戊二烯基轉移酶抑制劑的制作方法
背景技術：
蛋白質的Ras家族在調節細胞生長的信號轉導途徑中是很重要的。蛋白質在核糖體中產生，釋放到胞質溶膠中，并翻譯后修飾。在翻譯后修飾系列地第一步是Cys168用法尼基或香葉基香葉基焦磷酸酯在由諸如法尼基轉移酶和香葉基香葉基轉移酶的異戊二烯基轉移酶(prenyltransferase)催化的反應中烷基化(Hancock,JF等，細胞57:1167-1177(1989))。隨后，三個C-端氨基酸被裂解(Gutierrez,L等，EMBO J.8:1093-1098(1989))，而末端Cys被轉化為甲基酯(Clark,S等，Proc.Nat’lAcad.Sci.(USA)85:4643-4647(1988))。某些形式的Ras也在半胱氨酸殘基上緊鄰Cys168的N-端可逆地棕櫚酰化(Buss,JE等，分子細胞生物學，6:116-122(1986))。人們相信，這些修飾增加了Ras C-端的疏水性，導致其在細胞膜的表面定位。Ras在細胞膜表面的定位對于信號轉導是必需的(Willumsen,BM等，科學，310:583-586(1984))。
Ras的致癌形式在相當大量的癌，包括超過50％結腸癌和超過90％的胰腺癌中觀察到(Bos,JL，癌癥研究，49:4682-4689(1989))。這些觀察使人聯想到，在介導信號轉導的Ras的功能方面的干擾可能在治療癌癥方面有用。
以前，已經顯示，Ras的C-端四肽是“CAAX”基序(其中C是半胱氨酸，A是脂族氨基酸，而X是任何氨基酸)。具有此結構的四肽已經顯示出是異戊二烯基轉移酶的抑制劑(Reiss等，細胞，62:81-88(1990))。這些早期的法尼基轉移酶抑制劑較弱的效力促進了具有更理想的藥物動力學行為的新抑制劑的研究(James,GL等，科學，260:1937-1942 (1993)；Kohl,NE等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA91:9141-9145(1994)；desolms,SJ等，藥物化學雜志，38:3967-3971(1995)；Lerner,EC等，生物化學雜志，270:26802-26806(1995)；Lerner,EC等，生物化學雜志，270:26770(1995)；和James等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA 93:4454(1996))。
最近，已經顯示，異戊二烯基轉移酶的抑制劑可以在裸鼠體內阻斷Ras-依賴的腫瘤的生長(Kohl,NE等，Proc.Nat’l Acad.SCi.USA91:9141-9145(1994))。另外，已經顯示，超過70％的大量取樣的腫瘤細胞系被異戊二烯基轉移酶的抑制劑以超過非-轉化的表皮細胞的選擇性抑制(Sepp-Lorenzino,Ⅰ等，癌癥研究，55:5302-5309(1995))。
發明提要
一方面，本發明涉及式Ⅰ或式Ⅱ化合物
原文P3結構式
式Ⅰ
式Ⅱ其中
R1是H或NR20R21；
R2是(CH2)mSR22,(CH2)mSSR22，取代或未取代的雜環，或取代或未取代的雜環低級烷基，其中m是1-6，而取代基是低級烷基，低級烯基，芳基，或芳基低級烷基；
各個R3和R7獨立地是CH2或C(O)；
各個R4和R15獨立地是H或低級烷基；
各個R5和R16獨立地是H或選自低級烷基，硫代低級烷基，低級烯基，硫代低級烯基，環烷基，環烷基低級烷基，芳基，和芳基低級烷基的取代或未取代的部分，其中取代基是低級烷基，羥基，鹵素，C(O)NR23R24，或COOH；
各個R6,R8,R9,R11,R12,R13和R17獨立地是H或選自低級烷基，低級烯基，硫代低級烷基，環烷基，芳基，和芳基低級烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低級烷基，鹵素，羥基，C(O)NR25R26,或COOH；
R10是S,SO，或SO2；
R18是COOR27或C(O)R28R29，或者，與R16一起形成-COOCH2CH2-。
R19是選自低級烷基，低級烯基，芳基和芳基低級烷基的取代(被一個或多個取代基；下同)或未取代部分，其中取代基是低級烷基(例如，烷基也可以被認為是取代基)，鹵素，或烷氧基；和
各個R20,R21,R22,R23,R24,R25,R26,R27,R28和R29獨立地是H或低級烷基；條件是，如果R2是(CH2)mSH且R5是硫代低級烷基，則R2和R5的游離的硫基可以形成二硫鍵；或其藥用鹽。
在一個方案中，該化合物是式Ⅰ的，其中R2是(CH2)mSR22，雜環，或雜環低級烷基；各個R4和R15獨立地是H；R5是低級烷基；R6是H；各個R8,R9,R11和R12獨立地是H或低級烷基；R10是S；R13是H；R16是低級烷基或取代的硫代低級烷基，其中取代基是低級烷基；R17是H。在此方案中，R1可以是NR20R21(例如，NH2)；R2可以是(CH2)mSR22(例如，CH2SH)；R3可以是CH2；各個R8和R9獨立地可以是H；而R18可以是COOR27；而且，R5可以是CH(CH3)(CH2CH3),(CH2)3CH3,CH(CH3)2，或C(CH3)3；各個R11和R12獨立地可以是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3。在同樣的方案中，R1可以是H；R2可以是雜環或雜環低級烷基；R3可以是CH2；各個R8和R9獨立地可以是H；而R18可以是COOR27，其中R27是H或低級烷基；而且，R2可以是咪唑基或咪唑基低級烷基；R5可以是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各個R11和R12獨立地可以是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3。
在另一方案中，該化合物是式Ⅱ的，其中R2是(CH2)mSR20，雜環，或雜環低級烷基；各個R8,R9,R11和R12獨立地是H或低級烷基；R10是S；R13是H；R15是H。在此方案中，R1可以是NR20R21；R2可以是(CH2)mSR22；R3可以是CH2；各個R8和R9獨立地可以是H；R19可以是取代或未取代的芳基低級烷基，其中取代基是鹵素或低級烷基；而且，R1可以是NH2；R2可以是CH2SH；各個R11和R12獨立地可以是CH3；R19是2,3-二氯芐基或1-萘基甲基。在同樣的方案中，R1可以是H；R2可以是雜環，或雜環低級烷基；R3可以是CH2；各個R8和R9獨立地可以是H；R19可以是取代或未取代的芳基低級烷基，其中取代基是鹵素或低級烷基；而且，R2可以是咪唑基或咪唑基低級烷基；各個R11和R12獨立地可以是CH3；R19是2,3-二氯芐基或1-萘基甲基。
本發明的例子包括如下
化合物1；
化合物2；
化合物3；
化合物4；
化合物5；
化合物6；
化合物7；
化合物8；
化合物9；
化合物10；
化合物11；
化合物12；
化合物13；
化合物14；
化合物15；
化合物16；
化合物17；
化合物18；
化合物19；
化合物20；and
化合物21。
在另一方案中，本發明涉及由第一部分和第二部分組成的二聚化合物，其中第一和第二部分各自獨立地是上面所示的式Ⅰ或式Ⅱ，只是第一部分的R2和第二部分的R2各自獨立地是-(CH2)mS-和形成二硫鍵；或其藥用鹽。第一和第二部分可以相同或不同。確實，第一部分的R2和第二部分的R2也可以相同或不同。這類二聚化合物的例子示于如下
化合物22。
本發明的化合物可以具有不對稱中心，并以外消旋體，外消旋混合物，和單個非對映體存在，所有可能的異構體，包括光學異構體，都包括在本發明中。簡單地說，其中在結構式中沒有描述特定的構型，被理解為表示所有的對映體形式和其混合物。
本文所用的“低級烷基”包括具有1-6個碳原子的飽和脂肪烴基。低級烷基的例子包括甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，等等。“低級烯基”包括具有2-6個碳原子并具有一個或多個雙鍵的基團。烯基的例子包括乙烯基，烯丙基，異丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，1-丙烯基，2-丁烯基，2-甲基-2-丁烯基，異戊二烯基，等等。“低級烷氧基”包括具有1-6個碳原子的基團。低級烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，異丙氧基，等等。所有烷基，烯基和烷氧基都可以是支鏈或直鏈的，但是非環狀的。術語“環烷基”意指3-7員碳環。環烷基的例子包括環丙基，環丁基，環戊基，環己基和環庚基。術語“鹵素”意指氯，溴，碘，或氟。術語“雜環低級烷基”，“硫代低級烷基”，“硫代低級烯基”，“芳基低級烷基”和“羥基低級烷基”分別被1至3個雜環，硫基，硫基，芳基，和羥基取代。
本文中，“芳基”包括任何穩定的在各個環中最多7個成員的單環，雙環，或三環碳環，其中至少一個環是芳香的。芳基的例子包括苯基，萘基，蒽基，聯苯基，四氫萘基，二氫茚基，苯并蒽基，等等。
本文的術語雜環表示穩定的5-至7-員單環或穩定的8-至11-員雙環，或穩定的11-至15-員三環雜環，它既可以是飽和的，也可以是未飽和的，并由碳原子和1至4個選自N,O，和S的雜原子組成，并包括任何其中上面定義的雜環與苯環稠合的雙環基。雜環可以在產生穩定結構的任何雜原子或碳原子上連接。這類雜環元素的例子包括，但不限于，丫庚因基，苯并咪唑基，苯并異噁唑基，苯并呋咱基，苯并吡喃基，苯并硫代吡喃基，苯并呋喃基，苯并噻唑基，苯并噻吩基，苯并噁唑基，苯并二氫吡喃基，噌啉基，二氫苯并呋喃基，二氫苯并噻吩基，二氫苯并硫代吡喃基，二氫苯并硫代吡喃基砜，呋喃基，咪唑烷基，咪唑啉基，咪唑基，吲哚啉基，吲哚基，異苯并二氫吡喃基，異吲哚啉基，異喹啉基，異噻唑烷基，嗎啉基，1,5-二氮雜萘基，噁二唑基，2-氧代丫庚因基，2-氧代哌嗪基，2-氧代哌啶基，2-氧代吡咯烷基，哌啶基，哌嗪基，吡啶基，吡啶基N-氧化物，喹喔啉基，四氫呋喃基，四氫異喹啉基，四氫喹啉基，硫代嗎啉基，硫代嗎啉基亞砜，噻唑基，噻唑啉基，噻唑烷基，噻吩并呋喃基，噻吩并噻吩基，噻吩基，等等。
當基團被取代時，可以被取代一至四次。各種取代基可以連接在碳原子或雜原子(例如，S,N或O)上。
本發明化合物可以以藥用鹽的形式提供。可接受的鹽包括，但不限于無機酸的加成鹽，如乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽，琥珀酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，甲磺酸鹽，對甲苯磺酸鹽，pamoate，水楊酸鹽，草酸鹽，和硬脂酸鹽。也在本發明范圍內，可應用的是由堿如氫氧化鈉或氫氧化鉀的鹽形式。藥用鹽的其它例子參見，“藥用鹽，”J.Pharm.Sci.66:1(1977)。
另一方面，本發明涉及通過對主體施用治療有效量的式Ⅰ或式Ⅱ化合物，在主體內，例如，哺乳動物如人體內抑制異戊二烯基轉移酶(例如，法尼基轉移酶或香葉基香葉基轉移酶)的方法。具體地，本發明也涉及通過對主體施用治療有效量的化合物或其鹽在主體內治療再狹窄或組織增生疾病(即腫瘤)的方法。組織增生疾病的例子既包括那些與良性(例如，非-惡性)細胞增生如纖維化，良性前列腺增生，動脈粥樣硬化，和再狹窄相關的，也包括與惡性細胞增生，如癌癥(例如，ras突變腫瘤)。可治療的腫瘤的例子包括乳腺，結腸，胰腺，前列腺，肺，卵巢，表皮，和血癌(Sepp-Lorenzino，Ⅰ等，癌癥研究55:5302(1995))。
治療有效量的本發明化合物和藥用載體物質(例如，碳酸鎂，乳酸，或治療化合物可以與其形成膠束的磷脂)一起形成對需要該化合物的主體給藥(例如，口服，靜脈內，經皮，或皮下)的藥物組合物(例如，丸劑，片劑，膠囊，或液體)。丸劑，片劑，或膠囊可以用能夠保護該組合物，在主體的胃內，足以使組合物在不消化地進入主體小腸的時間周期內不受胃酸或腸道酶作用的物質包衣。
用于治療上述疾病或病癥的本發明化合物的劑量依賴于給藥的方式，主體的年齡和體重，被治療的主體的狀況，并最終由主治醫生或獸醫決定。由由主治醫生或獸醫決定的這類化合物的量本文稱為“治療有效量”。
也包括在本發明范圍內的是式Ⅰ和式Ⅱ化合物的藥物制劑，制備式Ⅰ或式Ⅱ化合物的方法，用于如本文所述這些合成中的新化學中間體。
本發明的其它方面和優點從發明詳述和權利要求將顯而易見。
發明詳述
我們相信，本專業熟練的技術人員以本文的說明書為基礎，將可以最大限度地應用本發明。因此，下列具體方案僅僅是舉例說明，而不在任何意義上限制本發明。
除非另外定義，本文所用的所有技術和科學術語都具有本發明所屬領域普通技術人員通常理解的意義。而且，本文提到的所有出版物，專利申請，專利，和其它參考文獻都引作本文參考。
下面是化合物1至12合成的敘述。本發明的其它化合物可以由本專業熟練的技術人員以類似的方法制備。
本發明化合物通過用標準液相肽合成法，以及其它標準操作如酯水解和胺通過醛的還原性烷基化制備，例如，如Greenstein等，氨基酸化學，Vols.1-3(J.Wiley,New York(1961))；和M.Bodanszky,et al.，肽合成操作(Springer-Verlag,1984))所述的。對于酰胺形成反應，EDC/HOBt或HBTU/DIEA/DMF被用作偶聯劑。保護基的脫保護通過用TFA/DCM進行。用于胺的還原性烷基化的還原劑是氰基硼氫化鈉。最終的產物通過用制備性HPLC純化，并用1H NMR或質譜分析。
實施例1:N-[N’-[2-(S)-(2(R)-氨基-3-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物1)
(a)N-α-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸
將L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(2.5g,15.5mmol)在水(10ml)，二噁烷(20ml)，和2N氫氧化鈉(7.8ml)中的溶液攪拌，并在冰水浴中冷卻。加入重碳酸二叔丁基酯(3.72g,17.1mmol)，并在室溫繼續攪拌過夜。將溶液真空濃縮至約25ml，并加入乙酸乙酯(EtOAc；30ml)。溶液的pH值通過在0℃加入2N鹽酸調節至2。分出有機層，水層用乙酸乙酯(20ml)萃取。將兩個有機層合并，水洗(2次)，無水硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發。得到標題化合物白色固體(3.60g；產率89％)，不經進一步純化用于下步反應。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ4.68(m,2H),4.39(s,1H)4.23(s,1H),1.60-1.40(m,15H)。
(b)N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸]-L-甲硫氨酸甲酯
將N-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(1.00g,3.83mmol),1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC；0.734g；3.83mmol),1-羥基苯并三唑(HOBt；0.517g；3.83mmol),和二異丙基乙基胺(DIEA；0.495g；3.83mmol)的二氯甲烷(DCM；20ml)溶液在0℃攪拌10分鐘。往此溶液中加入甲硫氨酸甲酯鹽酸鹽(0.765g,3.83mmol)。將混合物溫熱至室溫并攪拌過夜。真空除去溶劑。將殘余物溶于乙酸乙酯，用5％檸檬酸洗滌(2次)，5％碳酸鈉(2次)，和食鹽水(2次)，無水硫酸鎂干燥，并過濾。濃縮后所得的殘余物通過硅膠柱色譜純化，用己烷/乙酸乙酯(2∶1)洗脫。得到標題化合物白色固體(1.09g；產率70％)。1H NMR(300MHz,CHCl3)δ6.67(d,1H),4.78-
4.60(m,3H),4.11(s,1H),3.75(s,3H),,2.55(m,2H),
2.24-2.00(m,5H),1.56-1.40(m,15H).
(c)N-(α-(叔丁氧羰基)-N-甲氧基-N-甲基-L-異亮氨酰胺
將N-α-(叔丁氧羰基)-異亮氨酸(8.00g,33.3mmol),O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基尿-六氟磷酸鹽(HBTU；12.63g；33.3mmol),DIEA(17.21g；133.2mmol)的二甲基甲酰胺(DMF；35ml)溶液在室溫下攪拌2分鐘。往此溶液中加入N,O-二甲基羥胺鹽酸鹽(3.25g,33.3mmol)，將混合物在室溫攪拌過夜。真空除去溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯，用5％檸檬酸洗滌(2次)，5％碳酸鈉(2次)，和食鹽水(2次)，無水硫酸鎂干燥，并過濾。濃縮后所得的殘余物通過硅膠柱色譜進一步純化，用已烷/乙酸乙酯(1∶1)洗脫。得到8.5g(產率90％)標題化合物。1H
NMR (300 MHz,CDCl3)δ5.12(d,1H),4.62(m,1H),3.79(s,
3H),3.23(s,3H),1.72(m,1H),1.58(m,1H),1.45(s,9H),
1.30-1.05(m,1H),1.00-0.85(m,6H).
(d)N-α-(叔丁氧羰基)-L-異亮氨醛
將氫化鋁鋰(0.20g,5.25mmol)在20ml無水乙醚中于室溫下攪拌30分鐘。將懸浮液冷卻至-45℃，往懸浮液中滴加N-α-(叔丁氧羰基)-N-甲氧基-N-甲基-L-異亮氨酰胺(1.10g,3.89mmol)在6ml四氫呋喃(THF)中的溶液。將混合物溫熱至0℃并攪拌2小時。然后將混合物冷卻至-45℃。往此溶液中慢慢加入硫酸氫鉀(1.17g)的水(10ml)溶液。產生的混合物濾過硅藻土。濾液用5％檸檬酸洗滌(2次)，食鹽水(2次)，無水硫酸鎂干燥，過濾，并濃縮至干。得到0.70g標題化合物無色油狀物，并不經純化立即用于下一步。
(e)N-[N’-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
將N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-L-甲硫氨酸甲酯(1.09g,2.68mmol)溶于TFA(15ml)和DCM(15ml)的混合物中，并攪拌30分鐘。將溶液真空濃縮。將產生的殘余物和N-α-(叔丁氧羰基)-L-異亮氨醛(0.70g,3.25mmol)溶于甲醇(MeOH；30ml)和乙酸(0.6ml)的混合物中。在30分鐘內往此溶液中分批加入氰基硼氫化鈉(0.204g,3.25mmol)。真空除去甲醇。往剩下的溶液中加入乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉。分出有機層并用飽和碳酸氫鈉洗滌(1次)，水(1次)和食鹽水(1次)，無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。所得的殘余物通過硅膠柱色譜進一步純化，用乙酸乙酯/己烷(1∶2)洗脫。得到1.06g(產率78％)標題化合物。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.70(d,1H),4.68(m,1H),4.53(s,2H),3.90(m,1H),3.79(s,1H),3.75(s,3H),
3.42(s,1H),2.95(dd,1H),2.78(dd,1H),2.50-2.70(m,
2H),2.22(m,2H),2.13(s,3H),1.60-1.40(m,12H),1.36
(m,2H),1.38(m,2H),0.92(m,9H)；質譜
(電子噴射)((MS(Es)):505.4，計算的分子量
(calc.MW)=505.7.
(f)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛
通過用與N-α-(叔丁氧羰基)-L-異亮氨醛的合成中所述相同的過程，從N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨酸開始合成標題化合物。
(g)N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
將N-[N’-[2(S)-(叔丁氧羰基氨基)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(1.06g,2.10mmol)溶于三氟乙酸(TFA；15ml)和DCM(15ml)的混合物中，并在室溫下攪拌30分鐘。將溶液真空濃縮。將所得的殘余物和N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(1.10g,2.46mmol)溶于甲醇(15ml)和乙酸(0.3ml)的混合物中。在30分鐘內，往其中分批加入氰基硼氫化鈉(0.158g,2.52mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。加入5ml飽和碳酸氫鈉，真空除去甲醇。往剩下的溶液中加入乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉。分出有機層并用飽和碳酸氫鈉(1次)和食鹽水(2次)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾。真空干燥給出標題化合物，不經進一步純化直接用于下一步。
MS(ES):836.5，計算值MW=836.8。
(h)N-[N’-[2-(S)-(2(R)-氨基-3-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸
在0℃將N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(0.50g,0.42mmol)溶于甲醇(16ml)和5N氫氧化鈉(4ml)的混合物中并攪拌3小時。該溶液通過加入2N鹽酸中和至pH7。真空除去甲醇并加入乙酸乙酯。將混合物冷卻至0℃，水層通過加入2N鹽酸酸化至pH2。分出有機層，水層用乙酸乙酯萃取。將有機層澄清，用食鹽水(1次)洗滌，無水硫酸鎂干燥并過濾。將真空濃縮后所得的殘余物溶于三氟乙酸(TFA；6ml),DCM(6ml)和三乙基甲硅烷(0.6ml)的混合物中。將溶液在室溫攪拌40分鐘。將真空濃縮后的殘余物分配在乙醚和0.1％TFA水溶液之分出水相，制備性高效液相色譜(HPLC)純化，用水/乙腈中的0.1％TFA緩沖液洗脫，凍干給出標題化合物。MS(ES):480.3，計算MW=480.8
實施例2:N-[N’-[2(S)-(2(R)-氨基-3-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(化合物2)
將N-[N’-[2(S)-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基胺)-3(S)-甲基戊基]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(0.60g,0.718mmol；實施例1(g))溶于TFA(10mL),DCM(10ml)和三乙基甲硅烷(1ml)的混合物中。將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。將溶液真空濃縮。殘余物分配在1％TFA水溶液和乙醚之間。分出水層，通過HPLC純化，凍干給出標題化合物。MS(ES):494.3，計算值MW=494.8。
實施例3:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物3)
(a)N-[N’-[(叔丁氧羰基)-t-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
將N-[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸]-L-甲硫氨酸甲酯(1.63g；4.01mmol；實施例1(b))溶于TFA(5ml)和DCM(5ml)的混合物中，并在室溫下攪拌30分鐘。將溶液真空濃縮。將殘余物溶于甲苯，將溶液真空濃縮。將此過程重復3次，得到白色泡沫體。
將N-α-(叔丁氧羰基)-叔-亮氨酸(1.0g,4.01mmoD,EDC(0.769g,4.01mmol),HOBt(0.650g,4.81mmol)，和DIEA(0.570g,4.41mmol)在DCM(15ml)中的溶液在室溫下攪拌30分鐘。往其中加入上述白色泡沫體。將混合物攪拌過夜。將溶液用DCM(15ml)稀釋，并用5％碳酸氫鈉(2次)，5％檸檬酸(2次)，和食鹽水(2次)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮。將殘余物通過柱層析純化，用己烷∶乙酸乙酯92∶1)和己烷∶乙酸乙酯(1∶1)洗脫。得到0.63g標題化合物(產率30％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3) δ6.48(d,1H),5.25(d,1H),5.12(d,1H),4.95-4.62(m,2H),4.43-4.30(m,2H),3.77(s,3H),2.58(m,2H),2.21,(m,1H),2.11(s,3H),2.04(m,1H),1.55-1.33(m,12H),1.12-0.94(m,12H).
(b)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯
將0.6g(1.15mmol)N-[N’-[叔丁氧羰基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯溶于TFA(5ml),DCM(5ml)和三乙基甲硅烷(Et3SiH)(1ml)的混合物中，并在室溫下攪拌30分鐘。將溶液真空濃縮。將殘余物溶于甲苯，并將溶液濃縮至干。重復此過程直至得到白色泡沫體(4次)。將此泡沫體和0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(實施例1(f))溶于4ml甲醇和0.2ml乙酸中。往此混合物中加入NaBH3CN(72mg,1.15mmol)，并將其攪拌30分鐘。加入0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛和72mg(1.15mmol)NaBH3CN。將反應混合物攪拌30分鐘。然后再加入0.5g(1.12mmol)N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛和72mg(1.15mmol)NaBH3CN，接著加入0.1ml乙酸。將溶液攪拌過夜并真空濃縮。將殘余物溶于乙酸乙酯并用飽和碳酸氫鈉(2次)和食鹽水(2次)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮。殘余物通過用柱色譜(硅膠)純化，用乙酸乙酯∶己烷(1∶2)和乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脫。得到930mg(產率95％)標題化合物白色固體。MS(ES):850.5計算值MW=850.8。
(c)N-[N’-[N”(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸
在0℃將230mg(0.27mmol)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯溶于2ml甲醇。往其中加入0.4ml 1N氫氧化鉀溶液。通過加入0.8ml THF溶解白色沉淀。將混合物溫熱至室溫并攪拌1.5小時。在0℃往溶液中加入2N鹽酸直至pH約為2。通過加入乙酸乙酯將溶液稀釋至25ml，然后加入10ml食鹽水。分出有機層，無水硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮給出白色固體(220mg)。將白色固體溶于5ml DCM和1ml三乙基甲硅烷(Et3SiH)的混合物中。往其中加入5ml TFA，并將溶液攪拌40分鐘。將溶液真空濃縮。將白色固體用己烷研制，然后溶于0.1％TFA水溶液中。將其用制備性HPLC純化，凍干給出標題化合物(47mg；產率36％)。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.28(d,1H),5.02(d,1H),4.74(d,1H),4.66(m,1H),4.53(s,1H),4.47(m,1H),3.30(m,2H),2.77(m,2H),2.58(m,1H),2.51(m,4H),2.03(m,4H),1.82(m,1H)1.54(s,2H),1.38(s,3H),1.03-0.88(m,12H)；MS(ES):494.2,Calc.MW=494.7
實施例4:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(化合物4)
將660mg(0.776mmol)N-[N’-[N”-(2(R)-(叔丁氧羰基氨基)-3-三苯基甲基-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸甲酯(實施例3(b))溶于DCM(5ml)和Et3SiH(1ml)的混合物中。往其中加入5mlTFA。混合物被攪拌0.5小時。將溶液真空濃縮。殘余物用己烷研制，然后溶于0.1％TFA水溶液中。通過制備性HPLC純化，梯度洗脫(緩沖液A:0.1％TFA水溶液，緩沖液B:0.1TFA乙腈溶液)。凍干給出標題化合物白色固體(310mg；產率78％)。MS(ES):508.3，計算值MW=508.8。
實施例5:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸(化合物5)
通過用與實施例3的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):476.2，計算值MW=476.3。
實施例6:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-叔-亮氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸甲酯
通過用與實施例4的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):490.3，計算值MW=490.7。
實施例7:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)纈氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸(化合物7)
通過用與實施例3的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):462.4，計算值MW=462.7。
實施例8:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)纈氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-亮氨酸甲酯(化合物8)
通過用與實施例4的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):476.3，計算值MW=476.7。
實施例9:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)纈氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸(化合物9)
通過用與實施例3的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):480.3，計算值MW=480.7。
實施例10:N-[N’-[N”-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)纈氨酸]-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-甲硫氨酸-甲酯(化合物10)
通過用與實施例4的合成中所述的類似過程合成標題化合物。MS(ES):494.3，計算值MW=494.8。
實施例11:[N-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺(化合物11)
(a)[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺
將N-α-(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(0.65g,2.50mmol；實施例1(a)),HBTU(0.948g,2.50mmol)，和DIEA(1.3g,10mmol)DMF(25ml)溶液在室溫下攪拌3分鐘。往其中加入2,3-二氯芐基胺(0.44g,2.50mmol)。將混合物攪拌過夜。真空除去溶劑，并將殘余物溶于乙酸乙酯中，用5％碳酸氫鈉(2次)，5％檸檬酸(2次)，和食鹽水(2次)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮。用乙酸乙酯∶己烷(1∶2)層析后得到標題化合物(0.83g；產率79％)。1H NMR (300MHz,CDCl3)δ7.40(m,2H),7.18(m,1H),6.55(bs, 1H),4.65(m,3H),4.52(m,1H),4.07(s,1H),1.58(s,3H), 1.20,(m,12H)。
(b)[N-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺
將[(叔丁氧羰基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]-2,3-二氯苯甲酰胺(0.419g,1mmol)溶于10ml在DCM中的50％TFA中。將混合物在室溫下攪拌0.5小時。真空除去TFA和溶劑。將殘余物和N-α-(叔丁氧羰基)-S-(三苯基甲基)-L-半胱氨醛(2mmol；實施例1(f))溶于甲醇(10ml)和乙酸(0.2ml)。往其中分批加入氰基硼氫化鈉(94mg,1.5mmol)。混合物在室溫下攪拌過夜。真空除去溶劑，并將殘余物溶于乙酸乙酯。溶液用5％碳酸氫鈉(2次)，5％檸檬酸(2次)和食鹽水(2次)洗滌，無水硫酸鎂干燥，過濾，真空濃縮。將殘余物溶于15ml DCM和2ml三異丙基甲硅烷中。往溶液中加入10ml TFA。反應混合物在室溫下攪拌0.5小時。將溶液真空濃縮，產生的殘余物分配在0.1％TFA水溶液和乙酸乙酯之間。有機層真空濃縮。殘余物用己烷研制，然后通過HPLC純化。凍干給出標題化合物(339mg；產率83％)。MS(ES):407.0,Calc.Mw=407.4.1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.21(bs,2H),7.61(t,1H),7.41(dd,1H),7.27(dd,1H),7.19(dd,1H),4.55(d,2H),4.43(d,1H),3.88,(d,1H),3.28(s,1H),3.22(m,1H),3.10(m,2H),2.79(m,2H),1.73(bs,1H),1.57(s,3H),1.38(s,3H)。
實施例12:[N-(2(R)-氨基-3-巰基丙基)-L-5,5-二甲基噻唑烷-4-羧基]萘甲酰胺(化合物12)
用類似于實施例11的過程合成標題化合物。
MS(ES): 389.1,Calc.MW=389.6 1H NMR(300MHz,CDC13)δ8.15(d,1H),7.90(m,1H),7.82(d,1H),7.61-7.41(m,5H),5.22(dd,1H),4.63(dd,1H),4.39(d,1H),3.78(d,1H),3.24(s,1H),2.97(m,2H),2.76(m,1H),2.48(m,2H),1.57(s,3H),1.40(s,3H),1.28(m,1H).
其它方案
應該理解，在本發明結合其詳細說明進行描述時，前述說明只是舉例說明，而不限制本發明的范圍，該范圍在權利要求書中定義。其它方面，優點和修飾在權利要求的范圍中。
權利要求
1．式Ⅰ或式Ⅱ化合物原文P29結構式
式Ⅰ
式Ⅱ
其中
R1是H或NR20R21；
R2是(CH2)mSR22,(CH2)mSSR22，取代或未取代的雜環，或取代或未取代的雜環低級烷基，其中m是1-6，而取代基是低級烷基，低級烯基，芳基，或芳基低級烷基；
各個R3和R7獨立地是CH2或C(O)；
各個R4和R15獨立地是H或低級烷基；
各個R5和R16獨立地是H或選自低級烷基，硫代低級烷基，低級烯基，硫代低級烯基，環烷基，環烷基低級烷基，芳基，和芳基低級烷基的取代或未取代的部分，其中取代基是低級烷基，羥基，鹵素，C(O)NR23R24，或COOH；
各個R6,R8,R9,R11,R12,R13和R17獨立地是H或選自低級烷基，低級烯基，硫代低級烷基，環烷基，芳基，和芳基低級烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低級烷基，鹵素，羥基，C(O)NR25R26,或COOH；
R10是S,SO，或SO2；
R18是COOR27或C(O)R28R29，或者，與R16一起形成-COOCH2CH2-；
R19是選自低級烷基，低級烯基，芳基和芳基低級烷基的取代或未取代部分，其中取代基是低級烷基，鹵素，或烷氧基；和
各個R20,R21,R22,R23,R24,R25,R26,R27,R28和R29獨立地是H或低級烷基；條件是，如果R2是(CH2)mSH且R5是硫代低級烷基，則R2和R5的游離的硫基可以形成二硫鍵；或其藥用鹽。
2．權利要求1的化合物，其中所說的化合物具有式Ⅰ；或其藥用鹽。
3．權利要求1的化合物，其中所說的化合物具有式Ⅱ；或其藥用鹽。
4．權利要求2的化合物，其中R2是(CH2)mSR22，雜環，或雜環低級烷基；各個R4和R15獨立地是H；R5是低級烷基；R6是H；各個R8,R9,R11和R12獨立地是H或低級烷基；R10是S；R13是H；R16是低級烷基或取代的硫代低級烷基，其中取代基是低級烷基；R17是H；或其藥用鹽。
5．權利要求4的化合物，其中R1是NR20R21而R2是(CH2)mSR22；或其藥用鹽。
6．權利要求5的化合物，其中R3是CH2；各個R8和R9獨立地是H；而R18是COOR27；或其藥用鹽。
7．權利要求6的化合物，其中R1是NH2；R2是CH2SH；R5是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各個R11和R12獨立地是CH3；R16是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3，或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3；或其藥用鹽。
8．權利要求4的化合物，其中R1是H；R2是雜環或雜環低級烷基；或其藥用鹽。
9．權利要求8的化合物，其中R3是CH2；各個R8和R9獨立地是H；而R18可以是COOR27；或其藥用鹽。
10．權利要求9的化合物，其中R2是咪唑基或咪唑基低級烷基；R5是CH(CH3)(CH2CH3),CH(CH3)2，或C(CH3)3；各個R11和R12獨立地是CH3；R16可以是(CH2)2SCH3,(CH2)3CH3或CH2CH(CH3)2；而R18可以是COOH或COOCH3；或其藥用鹽。
11．權利要求3的化合物，其中R2是(CH2)mSR20，雜環，或雜環低級烷基；各個R8,R9,R11和R12獨立地是H或低級烷基；R10是S；R13是H；而R15是H；或其藥用鹽。
12．權利要求11的化合物，其中R1是NR20R21；而R2是(CH2)mSR22；或其藥用鹽。
13．權利要求12的化合物，其中R3是CH2；R8和R9是H；而R19是取代或未取代的芳基低級烷基，其中所說的取代基是鹵素或低級烷基；或其藥用鹽。
14．權利要求13的化合物，其中R1是NH2；R2是CH2SH；各個R11和R12獨立地是CH3；而R19是2,3-二氯芐基或1-萘基甲基；或其藥用鹽。
15．權利要求11的化合物，其中R1是H且R2是雜環或雜環低級烷基；或其藥用鹽。
16．權利要求15的化合物，其中R3可以是CH2；各個R8和R9獨立地是H；R19可以是取代或未取代的芳基低級烷基，其中所說的取代基是鹵素或低級烷基；或其藥用鹽。
17．權利要求16的化合物，其中R2是咪唑基或咪唑基低級烷基；各個R11和R12獨立地可以是CH3；而R19是2,3-二氯芐基或1-萘基甲基；或其藥用鹽。
18．權利要求1的化合物，所說的化合物是下式的
19．由第一部分和第二部分組成的化合物，其中所說的第一和第二部分各自獨立地是權利要求1式Ⅰ或式Ⅱ，除了第一部分的R2和第二部分的R2各自獨立地是-(CH2)mS-并形成二硫鍵；或其藥用鹽。
20．權利要求19的化合物，其中所說的第一和第二部分是相同的；或其藥用鹽。
21．治療需要治療的受治者的腫瘤或再狹窄的方法，包括對所說的受治者施用治療有效量的權利要求1的化合物或鹽。
22．權利要求21的方法，其中所說的化合物或鹽是權利要求18的。
23．權利要求22的方法，其中所說的化合物或鹽是權利要求19的。
全文摘要
一系列可以抑制異戊二烯基轉移酶活性的化合物。該化合物由兩個式(Ⅰ)和(Ⅱ)之一覆蓋。各個R基團在說明書中定義。
文檔編號A61K31/33GK1223642SQ9719590
公開日1999年7月21日 申請日期1997年5月6日 優先權日1996年6月28日
發明者董正欣, 金善赫 申請人:生物測量公司