含有產生擴散性生物產物的細胞的可植入的瓊脂糖－膠原珠及其應用的制作方法

專利名稱：含有產生擴散性生物產物的細胞的可植入的瓊脂糖－膠原珠及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及運用瓊脂糖和膠原膠囊化細胞隨后用瓊脂糖包被的方法，采用這樣物質細胞的治療方法，以及其制造方法。背景和現有技術用生物相容性物質膠囊化各種生物物質是運用了一段時間的技術，盡管成功率有限。該技術的例子是美國專利5,227,298(Weber等)；5,053,332(Cook等)；4,997,443(Walthall等)；4,971,833(Larsson等)；4,902,295(Walthall等)；4,798,786(Tice等)；4,673,566(Goosen等)；4,647,536(Mosbach等)；4,409,331(Lim)；4,392,909(Lim)；4,352,883(Lim)；和4,663,286(Tsang等)。另一個例子是共同未決申請08/483,738(1995年6月7日提交，申請人Jain等，本文一并參考)。Jain等較詳細地討論了用各種生物相容性物質膠囊化分泌細胞的方法。如其中所討論的，分泌細胞是分泌生物產物的細胞。一般而言，分泌細胞具有內分泌細胞的至少某些性質，并且一般可以作為本質上是內分泌細胞的細胞等同物對待。所說的共同未決申請討論了，例如將產生胰島素的細胞(優選的以胰島形式)膠囊化到包被有瓊脂糖的瓊脂糖-膠原珠中的方法。所形成的產物在患者需要胰島素治療的疾病(如糖尿病)的治療中是有用的。
Jain等的申請較詳細地討論了移植治療中的技術所采用的現有方法。這里也總結了這些。
大家知道保護所移植的組織使之免受宿主的免疫反應主要有五種方法。所有方法均涉及將所移植的組織與宿主的免疫系統隔開的嘗試。至今采用的免疫分離技術包括血管外擴散室，血管內擴散室，血管內超濾室，微囊化，以及大膠囊化。然而，所有這些方法都是失敗的，因為存在下列問題中一種或多種宿主對植入材料的纖維化反應，植入材料的不穩定性，透過半透膜營養擴散的有限性，促分泌素和產物的通透性，以及透過半透膜障礙擴散的時間落后性。
例如，用于將活細胞，組織，以及其它易變的膜包裹在半透膜中的微囊化作用方法于1978年由Lim研制(Lim，研究報導，Damon公司(1978))。Lim采用藻酸鹽和聚L-賴氨酸微膠囊來密封朗氏胰島。1980年，在糖尿病研究中報導了體內應用這一新奇技術的首次成功(Lim等，科學210:908(1980))。這些微膠囊化朗氏胰島的植入使患糖尿病的動物維持血糖量正常狀態。然而，其它研究者重復這些實驗，發現藻酸鹽引起組織反應，且不能再現Lim等的結果(Lamberti等，應用生物化學和生物技術10:101(1984)；Dupuy等，生物醫學材料和研究雜志，22:1061(1988)；Weber等，移植49:396(1990)；和Doon-shiong等，移植進展22:754(1990))。現在認為是這些聚合物的水溶解性造成體內這些微膠囊有限的穩定性和生物相容性(Dupuy等，同上，Weber等，同上，Doon-shiong等，同上，以及Smidsrod，化學學會Faraday討論，57:263(1974))。
前不久，Iwata等，(Iwata等，生物醫學材料和研究雜志。26:967(1992))用瓊脂糖對異源胰腺胰島進行微囊化作用，并且發現它能作為制備微珠的介質。在他們的研究中，將1500-2000個胰島在5％瓊脂糖中分別進行微膠囊化，并且植入鏈脲佐菌素引起的糖尿病的小鼠中。移植物存活了一段較長的時間，接受者確實保持血糖量正常。
然而，他們的方法有一些弊端，其麻煩及不精確。例如，許多珠只是部分地涂布有一層瓊脂糖并有幾百粒空的瓊脂糖形式的珠。這樣要求額外時間把膠囊化的胰島與空的珠分離。此外，大多數植入的微珠聚集在骨盆溝槽，要求大量完全被包被的胰島個體珠來維持血糖量正常。此外，所移植的珠很難重新取出，易于破碎，并且在輕微破壞下即容易釋放胰島。
也試驗了大膠囊化方法。將采用各種不同材料(如聚-2-羥乙基-甲基丙烯酸，聚氯乙烯-c-丙烯酸，和乙酸纖維素)的大膠囊用做朗氏胰島的免疫分離物。(參見Altman等，糖尿病35:625(1986)；Altman等，移植人造內部的器官的美國學會30:382(1984)；Ronel等，生物醫學材料和研究雜志，17:855(1983)；Klomp等，生物醫學材料和研究雜志17:865-871(1983))。在所有這些研究中，僅僅一例糖血癥短時間內達到正常化。
Archer等(外科研究期刊28:77(1980))利用丙烯酸共聚物的中空纖維臨時阻止胰島異種移植的排斥作用。他們報導在中空纖維中分散的幼鼠胰腺移植物(其被移植入患糖尿病的倉鼠中)能長期的存活。前不久，Lacy等，科學254:1782-1784(1991)證實了他們的結果，但是發現血糖量正常狀態時間很短。他們發現，當將胰島注射入纖維，它們在中空的管內聚集，導致胰島塊中央部分形成壞死區。中央壞死區排除了移植物的長時間存活。為解決這一問題，它們利用藻酸鹽分散纖維內的胰島。然而，這一實驗還沒有廣泛重復。因此，作為人類胰島移植的介質的膜的機能尚存在問題。
因而，需要實現分泌細胞的移植，尤其是，不使用慢性免疫抑制劑的胰腺胰島的異源和異種移植物的存活。
在Jain等上述討論的工作中，發明人報導了在親水凝膠材料中膠囊化分泌細胞形成一種有功能的，非免疫原性的材料，這一材料可以移植入動物中，并能長時間存活。該膠囊化分泌細胞技術為分泌細胞的移植提供了一種更有效和更便于施用的技術。該膠囊化技術對密封其它生物成分同樣有用，例如酶，微生物，營養劑包括重組產生的營養劑，細胞毒性劑，和化學化療劑。討論了膠囊化的生物制劑對治療已知對生物試劑有反應的疾病很有用。
所說的申請沒有深入討論可產生擴散性生物物質細胞的摻入方法，這些細胞在治療中有用。本文中區別了分泌細胞與產生擴散性生物材料的細胞二者之間的差異。前者，在如Jain的申請中所給出的每個例子中，一般地指產物如激素，細胞信號劑等等，這些通常被認為是生物"信使"。相反地，擴散性生物物質指這樣的物質如MHC呈遞的肽，細胞表達調節物如抑制子，啟動子，誘導子，等等。如下列所討論的，在腫瘤學等領域中將顯示其差異。
廣泛癌研究包括關于異源細胞的提取物，以及各種細胞組分的工作。通過利用單克隆抗體，現有技術已確定相關的癌抗原，例如，GM2,TF,STn MUC-1，以及由此衍生的各種抗原決定基。當前的理論提出從各種腫瘤標記中衍生的抗原決定基與MHC分子非共價復合，因而通過特異性溶細胞T細胞而形成不同類型。這一機理不同于各種對病毒感染的生物反應中所牽涉的各種機制。Van der Bruggen等，科學254:1643-1647(1991)；Boon等，5,405,940，以及Boon等，5,342,774(本文一并參考)描述了這一點，所有這些并入參考中。
平行于該工作的另外的研究(關于鑒定所謂的癌抗原決定基)集中在研究癌增殖的調節，例如通過抑制或更常見地，是生物調節。參見，例如，Mitchell，臨床藥理學雜志，32:2-9 1992)；Maclean等，加拿大腫瘤學雜志，4:249-254(1994)。結合所有這些各種各樣的對付癌的方法，其目標是宿主免疫反應的修飾作用，以引起患者癥狀的某些改善。
所有這些方法的關鍵是一種或多種擴散性生物產物的活性，其與其它材料相協調以調節免疫反應。Boon等以及Van der Bruggen等，例如，揭示了小肽分子。Mitchell討論了起作用的大分子，如抑制子。
使用這些材料的所有治療方法的一個問題是如何以一種安全，有效的形式進行遞送。這不容易完成。現在已經驚人地發現，Jain等的教導(其對需要分泌細胞產物的疾病的治療法的開發中非常有用)現在可以用于其它領域中。
如何完成這項工作是本發明的主題，以下詳細描述。優選實施方案的詳細描述實施例1這一實施例及以下那些實施例采用RENCA細胞。這些是BALB/C小鼠的自發性腎癌細胞(其可供廣泛地獲得)，保持在體外和體內培養物中。參見，Franco等，溶細胞誘發腫瘤免疫原性，181-193(1994)。
將凍結的RENCA細胞的樣品在37℃解凍，然后放置在含Dulbecco修飾培養基(D-MEM)的組織培養瓶中，其已補充了10％牛血清，青霉素(100u/ml)和鏈霉素(50ug/ml)，以給出此后所指的"完全培養基"。
待細胞培育至匯合生長，則進行胰酶消化，接著用Hank平衡鹽溶液洗滌，然后用以上所提及的完全培養基洗滌。
為了鑒定RENCA細胞是否有效地產生腫瘤，以106個該細胞對兩只BALB/C小鼠腹膜內注射。觀察小鼠3-4周。臨床上，頭兩周它們表現健康，并表現出正常活性。此后，癌癥臨床表現明顯。一只小鼠23天后死去，并且第二只25天后也死去。小鼠死亡后，對其檢查，注意到有許多各種大小的腫瘤。其中一些腫瘤也顯示出血性。
將從一只小鼠取下的一個腫瘤樣品固定在10％福爾馬林中，以進行組織學檢查。實施例2依據RENCA細胞確實在體內生長的情況，進行研究以測定依據本發明這些細胞是否在珠中生長。如前所述，待細胞培育至匯合生長，則進行胰酶消化，接著洗滌(同樣如前所述)。制備60,000個到90,000個細胞樣品。然后將細胞以750rpm離心，移走液體。接著將細胞懸浮在1％的atelocollagen溶液(在pH為6.5的磷酸緩沖鹽溶液中)中。
在最小基本培養基(MEM)中制備1％低粘度的瓊脂糖溶液，在60℃下保存，然后，加100ul至上述RENCA細胞和atellocollagen的懸浮液中。然后立即將材料以一大滴的形式轉移到無菌室溫礦物油中。混合物形成單一，光滑，半固性的珠。重復這一操作以制備大量珠。
一分鐘之后，在37℃下，將珠轉移到上述完全培養基中。用最小基本培養基(包含前面所列的抗生素)將珠洗滌三次。然后在37℃、5％CO2的濕潤的空氣中過夜溫育珠。溫育后，將已為固體的珠轉移到盛有1ml在最小基本培養基中的5％瓊脂糖的無菌勺中。將珠在溶液中翻滾2-3次以使它們均勻地涂布一層瓊脂糖。在瓊脂糖固化之前，將珠轉移到礦物油中，以形成平滑的外表面。60秒后，在37℃，用完全培養基洗滌珠五次以去掉油。接著過夜溫育(37℃,5％CO2的濕潤空氣)。
這些包含RENCA的珠用于以下的實驗中。實施例3在體內研究開展之前，有必要檢測RENCA細胞是否能在以上述方式制備的珠中生長。
為證實這一點，將實施例2中所制備的珠，按所列出的條件，在如實施例2中所述的培養基中溫育三周。然后將這些珠的三個切成小片，在標準培養瓶中培養，直接與燒瓶和培養基相接觸。
對這些培養物的觀察表明細胞能生長并形成標準的RENCA集落。這表明細胞在珠中仍然能存活。實施例4然后在體內進行實驗。實驗中將珠在37℃溫育七天，然后讓受試小鼠接收珠移植。為做到這一點，對四只小鼠中的每只做一個深至腹膜內的中等切口。移植進三粒均包含60,000個RENCA細胞的珠。然后利用可吸收縫合線縫合切口(兩層縫合)。四只雄性小鼠(BALB/C)均正常，重量為24-26克之間，并且表現健康。建立兩組對照。在第一組中，兩只小鼠接收不包含任何RENCA細胞的三粒珠，而第二組，兩只小鼠未經任何處理。
在植入三周后，所有小鼠接收106RENCA細胞的腹膜內注射。再過十八天，一組對照組的小鼠死去。然后處死所有剩下的小鼠，進行觀察。
對照組小鼠出現了許多腫瘤，而接收了珠-膠囊化細胞移植的小鼠只在腹腔中出現隨機小結。
這些令人鼓舞的結果使得提出下面實施例中的實驗設計。實施例5
在這些實驗中，對六只BALB/C小鼠的每只進行腎膜內RENCA細胞的注射，而產生癌。十五天后，將小鼠分成兩小組。如前實施例4所描述的，將第一組中的三只小鼠分別接收三粒珠。第二小組(對照組小組)接收不含RENCA細胞的珠。
4-5天之后，曾接收含RENCA細胞的移植物的小鼠看上去無生氣，皮毛變得粗短刺狀，而對照組小組仍然是精力旺盛，其皮毛狀況沒有發生變化。
然而，植入十天后(RENCA細胞注射25天后)，對照組小鼠變得行動遲緩，并且腹部脹大。珠移植十四天后，對照組三只小鼠的一只死去。然后處死小鼠。
對照組小鼠的體腔內顯示出大量出血，有很多的腫瘤遍布營養消化道，肝，胃部和肺臟。整個腹腔因為猖獗的腫瘤生長而無法分辨出。然而曾接收了膠囊化RENCA細胞的珠的小鼠無任何出血，僅僅在消化道癌上有一些小結節。試驗組與對照組的比較說明在試驗組中腫瘤沒有發展。實施例6當與膠囊化RENCA細胞同時溫育時，自由接種的RENCA細胞的生長則被抑制。進一步進行了一組實驗以檢測這一影響是否對其它細胞也明顯。
從美國典型培養物保藏中心獲得腺癌細胞系，即MMT(小鼠乳房腫瘤)。如上述，用MMT細胞制備膠囊化的MMT細胞，產生每珠包含120,000個或者240,000個細胞的珠。制備珠后，用它們來檢測其是否能抑制RENCA細胞在體外的增殖。具體地說，準備兩個六孔培養平板，并在4ml培養基中每孔接種1×104RENCA細胞。在每個平板中，三個孔作為對照組，另三個為試驗組。讓每平板中的三個對照組的一個孔接收一粒珠。其它兩孔的每孔接收兩個或者三個空的珠。同樣處理第二組，點樣孔中分別接收一粒，兩粒或者三粒含120,000個或者240,000個MMT細胞的珠。37℃下溫育點樣孔一周，在之后用胰酶消化RENCA細胞，洗滌，并且利用血細胞計來計數。結果如下
實施例7接著實施例6的結果，利用1×104MMT細胞而非RENCA細胞進行了相同的實驗。實驗精確地按實施例6進行。結果如下所示。
這些結果促進了體內實驗的應用。這點在實施例8中說明。實施例8如前面實施例中使用的RENCA細胞是腎癌細胞。為更完全顯示本發明的普遍效應，利用不同類型的癌細胞進行了研究。具體地說，即利用腺癌細胞。
從美國典型培養物保藏中心獲得小鼠乳房腫瘤細胞系(MMT)。利用前面的方案，制備每珠包含120,000個細胞，和包含240,000個細胞的植入物。
所利用實驗模型是前面的小鼠模型。將二十二只小鼠劃分成4只、9只、9只各組。第一小組，即對照組，進一步劃分成三組分別為兩只，一只，一只。第一亞組所接收的植入物是不包含任何細胞的一粒珠。一只小鼠接收兩個空的珠，同時另一只接收三個空的珠。
在實驗小組A(9只動物)中是包含120,000個細胞的珠，而在B小組中是包含240,000個細胞的珠。在小組"A"和"B"中，再分組為三個亞組，每亞組有三只小鼠。亞組中小鼠分別接收一粒，兩粒或者三粒包含MMT細胞的珠。
植入二十一天后，給所有動物注射40,000個RENCA細胞。注射后，小鼠立即無生氣，毛發粗短刺狀。大約持續五天，在這之后觀察到正常的行為。
二十天之后，對照組小鼠腹部脹大，毛發表現明顯粗短刺狀。在注射25天后，一只對照組小鼠死去，且余下的對照組小鼠呈現將死狀態。處死所有小鼠，觀察腫瘤發展情況。觀察記錄如下
這些結果表明，檢驗的十八只小鼠中，有十三只不顯示任何疾病。在小組A中，一只小鼠有少量模塊，另一只小鼠有少量腫瘤。接收兩粒珠的一只小鼠有一些腫瘤。
在小組B中，接收一粒珠的一只小鼠，及接收兩粒珠的一只小鼠，顯示出一些圍繞腸的腫瘤。接收三粒珠的一只小鼠長了一個大的實體腫瘤，并且呈現明顯病態。但是，總體結果表明膠囊化的小鼠乳腺瘤細胞抑制腫瘤形成。實施例9如前述，本發明的實踐產生一些物質或因子，它們抑制和/或防止腫瘤細胞增殖。這點在以下實驗中作進一步探討。
除不加atellocallogen外，按照前面實施例2所述制造出另外的珠。因此，這些珠是瓊脂糖/瓊脂糖珠。將上述的RENCA細胞再一次按如上所述摻入到這些珠中。
然后，用三個為一組的兩套六孔平板分別作為對照組和實驗組。在對照組中，在孔中加入4ml RPMI完全培養基(10％胎牛血清和11ml/l青霉素)。然后給每一對照組接種10,000個RENCA細胞。
實驗組中，在含50ml RPMI完全培養基的35×100mm培養平板中，加入經溫育10粒包含RENCA的免疫-隔離的珠(每珠含120,000個細胞)而得到的物質，調節RPMI完全培養基條件。溫育五天后，從平板收集培養基，并將4ml的培養基放置在每一檢驗孔中。然后給這些孔接種10,000個RENCA細胞。
所有平板(對照組和實驗組)在37℃溫育五天。溫育后，用胰蛋白酶消化洗滌細胞，并用血細胞計計數。胰蛋白酶消化后，將平板中每個孔中的細胞集中起來，并且計數，結果如下。
這些結果表明這些細胞當限制在本發明珠中時產生某些抑制腫瘤細胞增殖的因子。這些細胞由于陷入珠中而產生限制性抑制因子，其不同于其它物質，如當細胞相互接觸時產生的接觸性抑制因子。實施例10前面進行的實驗表明，在條件培養基中RENCA細胞生長率是對照組培養基中細胞生長率的一半。此處進行的實驗用于檢查在條件培養基被冷凍之后抑制因子是否仍能保持活性。
溫育10粒包含免疫分離的RENCA的珠五天，從而制備RENCA條件培養基。37℃，在35×100mm培養平板中，用50ml RMPI完全培養基進行溫育。溫育后，收集培養基并存放于-20℃。溫育包含免疫分離的MMT(小鼠乳房腫瘤)細胞的珠，從而制備條件培養基。每個珠包含240,000個細胞；其它所有條件都相同。
冷凍培養基在37℃下解凍，然后用于下列檢驗。三個六孔平板分別用于每種處理，即(1)RMPI對照組培養基，(2)RENCA冷凍的條件培養基，(3)MMT冷凍的條件培養基。總共為4ml的培養基分配到每個孔中。然后給所有孔接種10,000個RENCA細胞，37℃溫育五天。溫育后，從兩個平板的每個孔中取出樣品，用胰酶消化，集中起來并且用血細胞計計數。八天后，將余下的三個平板的每個孔以相同的方法進行檢驗。
結果如下<
將結果與前面實施例6的結果比較發現盡管冷凍/解凍的RENCA條件培養基不能抑制生長達未冷凍培養基所能達到的相同程度(比較實施例6和7)，但是它仍然抑制生長。采用MMT細胞的冷凍條件培養基比未冷凍的MMT條件培養基更能抑制生長。這些結果表明18只檢驗小鼠中，13只無任何疾病。小組(A)的小鼠中，一只小鼠有少量模塊，另一只小鼠有少量腫瘤。
前面所提及的內容描述了可植入珠的制造，其含有一個或多個類型的能產生一種擴散性生物產物的細胞，在這里定義這一詞組。擴散性生物產物是一種對植入了珠的受治療者有作用的物質。優選的這一作用是免疫調節，如刺激免疫反應，或者抑制反應。在癌癥的情況下，例如，擴散性生物產物可能是一種肽，其與受治療者中癌細胞上的MHC分子復合，由此引起CTL作用，反過來導致降低受治療者中腫瘤出現。擴散性產物也可以是腫瘤生長的抑制劑。與此治療形式有關的，在所確定的腫瘤內或附近放置所植入的珠是可能的(雖然不一定是優選的)。
此處所使用的"擴散性生物產物"指諸如蛋白質，糖蛋白，脂蛋白，碳水化合物，類脂，糖脂，以及肽。更具體地說，例如抗體，細胞因子，激素，酶，等等之類的物質，但不僅僅指所包括的這些物質類型。已知的細胞過程中的"終產物"，如CO2和H2O不包括在內。
如實驗所示，可植入的珠也能用于預防。大家知道，癌患者人群中至少一部分易于再發病。本文所描述的實驗表明，植入物可以通過擴散性產物對受治療者系統的生物效應而抑制癌的發生或者再發生。
本發明的討論集中于體內方法。同樣必須了解本發明也包括體外方法，在這里討論了一些。例如，眾所周知，能產生所需產物的許多細胞在體外培養時，需要存在飼養細胞。針對飼養細胞總有些爭論，它們可能比所需細胞生長快，從而導致了感興趣物質的"窒息"。此外，存在飼養細胞層產生各種有毒產物的問題。本發明的可植入的珠幾乎作為細胞溫箱起作用，保護摻入進的細胞，同時使擴散性產物進入培養基，例如，可收集它們的地方。
如前所述，制備可植入的珠首先要求細胞懸浮在溶液中，優選地是懸浮在含水膠原中。優選地，膠原是約0.5％到約2％的atelocollagen溶液。根據所用細胞類型，在給定時間時，溶液中細胞數量，由此珠中的細胞數量都將變化。優選地，每個珠用約10,000到約20,000個細胞，更優選地，用約30,000到約100,000個細胞。最優選地，用約40,000到約60,000個細胞。
將細胞懸浮在膠原溶液中后，加入瓊脂糖溶液。優選地，瓊脂糖溶液從約0.5％到約5％的范圍，優選地約1％。將混合物滴在惰性物質上或滴入進，如TEFLON或礦物油中，形成珠。這個珠是半固體。然后將半固體珠轉移到無菌培養基中，優選地為包含抗生素的培養基，進行洗滌，及溫育以使膠原聚合。膠原聚合是一種充分研究過的現象，這一現象發生的條件不必在這里詳細描述。
珠凝固后，用瓊脂糖包被，優選地是通過使它在瓊脂糖溶液中翻滾包被。一種優選的完成這一操作的方式是簡單的涂布有TEFLON的勺子，勺子盛有瓊脂糖的溶液(優選為5％到10％)。
前面所提及的關于擴散性生物產物的討論，不應該限制在野生型的物質。例如，人們可以容易地摻入轉導或者轉染的宿主細胞，如真核細胞(例如，293細胞，CHO細胞，COS細胞)，或甚至是原核細胞(如大腸桿菌)，這些細胞經過處理以產生異源的蛋白質，或者經過修飾，如同源重組，而產生增加量的所需生物產物，其它材料，例如雜交瘤也可以使用，其擴散性生物產物是單克隆抗體。
本發明的其它特性與方面對于技術人員來說很清楚，這里不必敘述。
采用的表達和術語用來作為描述的術語但不是限制的術語，無意于用這些術語和表達來排除所示的或所描述的特征的任何等同特征或者其部分，應認識到在本發明的范圍內進行各種修改是可能的。
權利要求
1．一種組合物，該組合物包含瓊脂糖包被的固體瓊脂糖膠原珠，該珠含有產生擴散性生物物質的細胞。
2．權利要求1的組合物，其中所說的細胞是癌細胞。
3．權利要求2的組合物，其中所說的癌細胞是腎癌細胞。
4．權利要求1的組合物，其中所說的珠含有約10,000至約200,000個細胞。
5．權利要求4的組合物，其中所說的珠含有約30,000至約100,000個細胞。
6．一種用于將擴散性生物物質施用到受治療者的方法，該方法包括將權利要求1的組合物植入到所說的受治療者中。
7．權利要求6的方法，其中所說的受治療者患有可以由所說的擴散性生物物質治療的疾病。
8．權利要求7的方法，其中所說的疾病以異常細胞生長為特征。
9．權利要求8的方法，其中所說的疾病是癌癥。
10．一種用于制造含有產生擴散性生物物質之細胞的瓊脂糖包被的固體瓊脂糖珠的方法，該方法包括(a)將產生所說的擴散性生物物質的細胞懸浮在含有膠原的物質中，(b)添加瓊脂糖至所說的溶液中，(c)形成所說的膠原、瓊脂糖和產生擴散性生物物質的細胞的半固體珠，(d)聚合所說的半固體珠中的膠原，以形成含有產生所說的擴散性生物物質的細胞的固體瓊脂糖-膠原珠，和(e)用瓊脂糖包被所說的含有細胞的固體瓊脂糖-膠原珠。
11．權利要求10的方法，其中所說的細胞是癌細胞。
12．權利要求10的方法，該方法包括將約10,000個到約200,000個細胞懸浮到所說的含膠原的溶液中。
13．權利要求10的方法，該方法包括將約30,000個到約100,000個細胞懸浮到所說的含膠原的溶液中。
全文摘要
可植入的珠(其由瓊脂糖和膠原組成,和/或包被有一層瓊脂糖)內已經摻入細胞樣品。所說的細胞產生擴散性生物產物。這些珠可以用作植入物來調節接受者的免疫反應。這些珠也可以用于在體外環境中促進特定類型的細胞生長,從而在培養物中產生所需產物,或者也可以用于抑制某些細胞的生長。在施用到受治療者后,所說的植入物也可以抑制某些細胞生長。
文檔編號A61K35/12GK1215309SQ97193544
公開日1999年4月28日 申請日期1997年3月21日 優先權日1996年4月3日
發明者坎蒂·賈殷, 阿爾伯特·L·魯賓, 希林·阿西納, 伯里·史密斯, 庫爾特·施滕策爾 申請人:羅格森研究所