專利名稱：：熱穩定的造影劑的制作方法
技術領域：
：本發明涉及含有超聲波造影劑的熱穩定的冷凍干燥的小囊及其制備方法。小囊(本文中該術語用來表示單層和多層結構，例如各種如脂質體、微胞、微泡和微球結構)是用來釋放治療上或診斷上的活性藥劑的常用手段。在超聲波成像造影介質領域中，含有體溫下為氣態的物質(本文稱之為起泡物質)的小囊特別是在對脈管系統給藥時，可被用作能產生回波的造影劑。起泡造影介質一般是以含水分散系的形式給藥，該分散系含有相對于含水載體介質來說是低濃度的小囊。因此，如果小囊能以干燥形式保存，那么顯然，這種起泡造影劑的貯存和運輸效率將會顯著提高。起泡組合物的冷凍干燥是可能的，為此一般將藥劑賦型劑包含在該組合物中，有助于干燥工藝的實現。該賦型劑一般起到兩個作用之一。加入填充劑可提高總固體成分，以得到機械上更堅固耐久的產品。加入穩定劑，或者稱之為低溫防護劑或溶媒防護劑，有助于在脫水過程中形成玻璃態，有助于提高干燥產品的物理強度。以這種方式使用的穩定劑實例包括甘露糖醇和葡萄糖。冷凍干燥的起泡超聲波造影劑由于與含水即用分散系相比體積大量減少，在具備貯存和運輸優點的同時，也產生了一些問題，由于冷凍干燥產品在運輸和貯存過程中，在通常遇到的室溫范圍內不是熱穩定的，結果是在次級制備之前必須將其保存在溫度低于室溫的環境中(例如5至10℃)。現已令人驚奇地發現，通過對用于冷凍干燥的穩定劑進行適當選擇，是有可能制備冷凍干燥的起泡超聲波造影劑的，該造影劑在室溫及以上溫度下、實際上在所有運輸和貯存過程中通常遇到的溫度下都是熱穩定的。然后可以在無需控制環境溫度的情況下貯存和運輸該熱穩定的冷凍干燥產品，特別是可以供應給醫院和醫生，當場配制成可給藥的分散系，無需用戶使用專門的貯存措施。因此從本發明的一個方面來看，提供了一種含有超聲波造影劑的冷凍干燥的小囊，該造影劑含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑在超過20℃溫度下是熱穩定的，優選為至少22℃，尤其是22℃，至少為25℃，更優選為至少30℃，尤其優選為至少40℃，例如高達65℃或以上。從本發明的另一個方面來看，提供了一種含有超聲波造影劑的冷凍干燥的小囊，該造影劑含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑的玻璃化轉變溫度(Tg)在20℃以上，優選為22℃，尤其優選為至少25℃，更優選為至少30℃，尤其優選為至少40℃，例如高達65℃或以上。從本發明的進一步方面來看，提供了一種含有超聲波造影劑的熱穩定的冷凍干燥的小囊的制備方法，該方法包括冷凍干燥一種含水分散系，該分散系含有一種起泡超聲波造影劑和一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物，其特征在于所述穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃(優選為至少22℃，尤其為至少25℃，更優選為至少30℃，尤其優選為至少40℃，例如高達65℃或以上)，其Tg’值為-37℃或以上(優選為-36℃以上，尤其優選為-35℃以上，例如-10至-37℃)。從本發明的更進一步方面來看，提供了一種超聲波造影介質，該介質含有一種含水載體介質、一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物和一種能產生回波的起泡超聲波造影劑，其特征在于所述穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃(優選為至少22℃，尤其為至少25℃，更優選為至少30℃，尤其優選為至少40℃，例如高達65℃或以上)，其Tg’值為-37℃或以上(優選為-36℃以上，尤其優選為-35℃以上，例如-10至-37℃)。從本發明的再進一步方面來看，提供了一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物的用途，該穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃(優選為至少22℃，尤其為至少25℃，更優選為至少30℃，尤其優選為至少40℃，例如高達65℃或以上)，其Tg’值為-37℃或以上(優選為-36℃以上，尤其優選為-35℃以上，例如-10至-37℃)，用于制備含有超聲波造影介質的小囊，該造影介質用于有關診斷超聲波成像的診斷分析。從本發明的進一步方面來看，提供了一種起泡超聲波造影劑的貯存或運輸方法，其特征在于所述造影劑是以冷凍干燥形式存在的，含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑的玻璃化轉變溫度(Tg)為至少20℃(優選為至少22℃等)，其特征還在于貯存和運輸無需冷卻。從本發明的更進一步方面來看，提供了一種含有超聲波造影介質的小囊的制備方法，所述方法包括將按照本發明的冷凍干燥的造影劑分散在一種生理學上可耐受的含水分散介質中。對任何物質來說，Tg是干燥物質的玻璃化轉變溫度，Tg’是最大程度冷凍濃縮的純物質水溶液的玻璃化轉變溫度。除了提高熱穩定性以外，按照本發明的冷凍干燥的起泡造影劑也令人驚奇地提高了小囊保留超聲波造影劑所常用的鹵代烴氣體和氣體前體的能力。本發明中，超聲波造影劑可以是任何生理學上可耐受的能產生回波的起泡劑，優選為不論該小囊含有氣體還是氣體前體(例如一種基本上是氣態(包括蒸汽)的化合物或化合物混合物，在正常人體溫(37℃)下生成)。可以使用任何生物相容性的氣體、氣體前體或混合物。因此氣體例如可以包括空氣；氮；氧；二氧化碳；氫；氧化亞氮；一種惰性氣體，如氦、氬、氙或氪；一種氟化硫，如六氟化硫、十氟化二硫或三氟甲基五氟化硫；六氟化硒；一種可選為鹵代的硅烷，如四甲基硅烷；一種小分子量的烴(例如含有至多7個碳原子)，例如一種烷烴，如甲烷、乙烷、一種丙烷、一種丁烷或一種戊烷，一種環烷烴，如環丁烷或環戊烷，一種烯烴，如丙烯或一種丁烯，或一種炔烴，如乙炔；一種醚；一種酮；一種酯；一種小分子量的鹵代烴(例如含有至多7個碳原子)；或任意前述物質的混合物。理想的是鹵代氣體中至少一部分鹵原子是氟原子。因此生物相容性鹵代烴氣體例如可以選自溴氯二氟甲烷、氯二氟甲烷、二氯二氟甲烷、溴三氟甲烷、氯三氟甲烷、氯五氟乙烷、二氯四氟乙烷和全氟化碳類，例如全氟代烷，如全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷(例如全氟正丁烷，可選與其他異構體混合，如全氟異丁烷)、全氟戊烷、全氟己烷和全氟庚烷；全氟代烯，如全氟丙烯、全氟丁烯(例如全氟丁-2-烯)和全氟丁二烯；全氟代炔，如全氟丁-2-炔；和全氟代環烷，如全氟環丁烷、全氟甲基環丁烷、全氟二甲基環丁烷、全氟三甲基環丁烷、全氟環戊烷、全氟甲基環戊烷、全氟二甲基環戊烷、全氟環己烷、全氟甲基環己烷和全氟環庚烷。其他鹵代氣體包括氟代、例如全氟代的酮，如全氟丙酮，和氟代、例如全氟代的醚，如全氟二乙醚。小囊特別優選含有一種全氟代烷，尤其是一種全氟丁烷、全氟戊烷或全氟己烷，特別是正全氟丁烷。小囊中，膜可以由任何生理學上可耐受的成膜材料形成，特別是磷脂，并且可以是交聯或非交聯的。尤其優選的是由帶電磷脂和不帶電磷脂的混合物所形成的膜，特別優選小囊帶凈表面電荷，優選為負電荷。該磷脂小囊特別具有可取的血液保留時間。小囊成分可進一步具有一種血液保留延長劑，例如通過與膜共軛或與親油基共軛，使該延長劑結合在膜中。該血液保留延長劑例如是聚乙二醇等聚氧化亞烷基類，它是起到調理作用的抑制劑，能夠延遲網狀內皮系統從脈管系統中攝取小囊。本發明造影劑中，需要至少75％、優選實際上為全部的磷脂物質由在制備和/或使用條件下分別具有凈總電荷的分子組成，分子可以帶正電，或者更優選帶負電。代表性的帶正電磷脂包括二棕櫚酰基磷脂酸或二硬脂酰基磷脂酸等磷脂酸與羥基乙二胺等氨基醇所形成的酯。帶負電磷脂的實例包括天然來源(如來自大豆或蛋黃)、半合成(如部分或完全氫化)和合成的磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸及心磷脂。該磷脂的脂肪酰基一般每個含有14-22個碳原子，例如棕櫚酰基和硬脂酰基。按照本發明，該帶電磷脂的溶血形式(lysoform)也是適用的，“溶血形式”一詞表示僅含有一個脂肪酰基的磷脂，且優選與甘油基部分的1位碳原子連接成酯。該帶電磷脂的溶血形式宜用來與含有兩個脂肪酰基的帶電磷脂混合。磷脂酰絲氨酸代表了尤其優選用于按照本發明造影劑中的磷脂，且優選其構成最初磷脂成分的主要部分，如至少80％，例如85-92％，不過隨后在后面的加熱滅菌等過程中會略有降低，如大約至70％。我們并不希望囿于理論上的考慮，在鄰近絲氨酸的羧基與氨基之間發生的離子橋連可對該系統的穩定性作出貢獻。優選的磷脂酰絲氨酸包括飽和的(例如氫化或合成的)天然磷脂酰絲氨酸和合成或半合成的二烷酰基磷脂酰絲氨酸，如二硬脂酰基磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰基磷脂酰絲氨酸及二花生酰基磷脂酰絲氨酸。使用以該磷脂酰絲氨酸為基礎的造影劑的一個重要優點是機體可通過其表面上的高濃度磷脂酰絲氨酸識別出老化的紅細胞和血小板，于是可以按照類似于消除老化紅細胞的方式從血流中消除造影劑。而且，由于該造影劑的表面可被機體認定為內源性的，可避免誘發不利的全身副作用，如血液動力學作用和其他過敏反應，而這些副作用恰是可以伴隨某些脂質體制劑的給藥而產生的(例如參見WO-A-9512386)。按照本發明，適用的脂質體超聲波造影劑可以按文獻所述方法制備，例如參見WO-A-92/22247、WO-A-94/28780、WO-A-93/05819、WO-A-95/16467、PCT/GB96/01361和Unger等人《放射學研究》Invest.Radiol.29(增刊2):S134-S136(1994)。按照本發明，所用穩定劑可以是一種生理學上可耐受的冷凍干燥穩定劑(或混合物)，其玻璃化轉變溫度(Tg)為20℃以上，例如在25至70℃范圍內，Tg’值為-37℃或以上。適宜的穩定劑實例包括蔗糖、麥芽糖H2O、海藻糖、棉子糖和水蘇糖。一個特別適宜的實例是蔗糖，可選與少量(例如至多20重量％，優選至多10重量％)其他穩定劑混合。一般，存在于待冷凍干燥的組合物中的穩定劑濃度明顯超過起泡造影劑的濃度，例如重量比為至少10∶1，更一般為至少20∶1，最佳為200∶1，例如高至5000∶1或甚至更高。因此相對來說，起泡成分對干燥產物的玻璃化轉變溫度(Tg)沒有貢獻，用常規技術能很容易地屏蔽候選穩定劑的作用，以測定它們與其他存在于含水載體介質中的賦型劑的組合是否干燥生成玻璃化轉變溫度(Tg)大于20℃的產物。存在于待冷凍干燥的組合物中的穩定劑濃度宜為1至50重量％，優選為5至30重量％，尤其是約10至20重量％。如果需要的話，穩定劑的濃度可以大大超過等滲濃度，反正在冷凍干燥之后進行再生時，產物還是要被稀釋的。小囊成分的濃度優選為0.01至5重量％，更優選為0.1至3％，尤其優選為約0.5至1.5重量％(其重量僅是成膜材料的重量)。穩定劑相對于再生流體的量的選擇取決于待成像的機體部位或器官以及所選擇的給藥方式，該再生流體用于將冷凍干燥的產物轉變為可給藥的分散系。在待冷凍干燥的組合物的實施例中，該量可以至少是兩倍。對于心回波掃描術等超聲波應用來說，為了使肺系統通道暢通，也為了與優選的約0.1-15MHz成像頻率實現共振，宜使用平均尺寸為0.1-10μm、如1-7μm的小囊。小囊可產生非常狹窄的尺寸分布，其范圍正是心回波掃描術所優選的，因此大大提高了其體內產生回波的能力以及安全性，使造影劑在血壓測量、血流跟蹤和超聲波斷層掃描術等應用中尤為有利。例如，超過90％(例如至少95％，優選至少98％)的小囊直徑在1-7μm范圍內，且低于5％(例如不超過3％，優選不超過2％)的小囊直徑大于7μm，這樣的產品是易于制得的。在超聲波應用中，造影介質的給藥劑量例如可以是使所注入的成膜材料(例如磷脂)的量在0.1-10μg/kg體重范圍內，更優選為1-5μg/kg。應當這樣認為，使用如此低濃度的成膜材料在減少可能產生的毒副作用上是重要的優點。利用本發明干燥產物制得的即用組合物中成膜材料的總濃度應在0.01至5重量％范圍內，優選為0.05至2％，特別是約0.5重量％。進行冷凍干燥的組合物中含有至少一種填充劑將是有利的，例如一種多元醇(如甘油或丙二醇等C3多元醇)或一種多糖、如葡聚糖，或一種聚二醇、如聚乙二醇或其混合物。一般所用填充劑的濃度可以相當于或略低于穩定劑的濃度，例如3至10重量％，優選約為5重量％。填充劑在冷凍干燥過程中應當能夠結晶，因為只有以這種狀態它們才對產物的穩定性沒有影響。于是可將它們與穩定劑區別開來，后者在冷凍干燥過程中應當是以非晶形態存在的。如果需要的話，待干燥組合物中也可含有其他賦型劑，或者在給藥制劑中加入其他賦型劑。該賦型劑例如可以包括pH調節劑、重量克分子滲透壓濃度調節劑、粘度增強劑、乳化劑等，可以使用其常規用量。干燥的產物一般是以粉末形式存在的，而且是易于再生的，再生是在水、鹽水(有利于張力的調節，使最終的注射產品不是低滲的)等水溶液中，或者是在一或多種張力調節物質的水溶液中，如鹽(如具有生理學上可耐受的反離子的等離子體陽離子)、或糖、糖醇、二元醇和其他非離子多元醇物質(如葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、聚乙二醇、丙二醇等)。再生一般僅需要最微小的攪拌，例如可以用手輕微振搖。所生成的小囊尺寸是重復一致的，實際上與所用攪拌能量無關，是由最初小囊分散系中生成的小囊尺寸決定的，令人驚奇的是在凍干及再生產物中也保持了該尺寸特征。這樣，由于借助工藝參數容易控制最初分散系中的小囊尺寸，如方法、速度和攪拌的持續時間，最終的小囊尺寸也是容易控制的。需要時可對再生液體的體積和濃度進行調節，使所得即用制劑基本上是等滲的。因此所選擇再生流體的體積和濃度將取決于冷凍干燥產物中存在的穩定劑(和其他填充劑)的類型和數量。按照本發明的冷凍干燥產物已被證明在環境條件下貯存若干月后仍是穩定的。在水(或其他上述再生液體)中再生生成的小囊分散系可以在相當長的時間內保持穩定，例如至少12個小時，這樣就給在注射前再生干燥產物提供了相當大的靈活性。如果再生液體含有與冷凍干燥所用穩定劑相同的化合物作為張力調節劑，待冷凍干燥組合物中穩定劑的含量只需足以在冷凍干燥過程中產生最恰當的穩定作用即可。通過選擇適當用量和濃度的再生液體，可以使終產物是等滲的。因此在冷凍干燥步驟過程中，在選擇被用作穩定劑的化合物的濃度和類型上以及在選擇再生液體中的化合物濃度和類型上都具有相當大的靈活性，同時仍能得到穩定的再生產物。按照本發明的冷凍干燥可以采用一種常規方法，不過在按照本發明使用穩定劑后會具有額外的優點，即，由于干燥前的組合物的玻璃溫度(Tg’)比含有葡萄糖或甘露糖醇等低溫防護劑的相同組合物高，于是縮短了冷凍干燥周期。以上參照起泡超聲波造影劑對本發明進行了描述。不過本發明也可用于其他診斷成像模型(例如MRI、X射線、SPECT、PET、磁成像等)的起泡造影劑。現參考下列非限定性實施例對本發明作進一步描述。實施例1冷凍干燥產物的制備向含有5.4％(w/w)丙二醇與甘油(3∶10w/w)混合物的100ml水中加入500.4mg氫化卵磷脂酰絲氨酸。混合物振搖后在80℃下加熱五分鐘，再冷卻至室溫，再次振搖，使用前放置過夜。將50ml所得溶液移至頸部為圓錐形的圓底燒瓶中。燒瓶裝有玻璃套管，玻璃套管具有與溫度保持在25℃的水浴相連接的溫度調節入口和出口。將轉子定子混合軸導入溶液中，為避免氣體溢漏，頸部內壁與混合軸之間的空間用一個專門設計的金屬塞密封，金屬塞上配有一個氣體入口/出口連接，用于調節氣體成分和壓力。氣體出口與真空泵連接，對溶液進行一分鐘的脫氣處理。然后通過氣體入口通入全氟正丁烷氣體。溶液以23000rpm均化10分鐘，并保持轉子定子混合軸的開口稍高于液面。將所得白色著色的乳膏狀分散系移至一個可密封的容器中，用全氟正丁烷沖洗。然后將分散系移至分液漏斗中，以12000rpm離心30分鐘，得到頂部為乳膏狀氣泡層的混濁下清液(infranatant)。除去下清液并用水代替。然后重復離心兩次，但是這回是以12000rpm離心15分鐘。最后一次離心后，上清液用10％(w/w)蔗糖代替。以2ml為一份，將所得分散系分裝在專為冷凍干燥設計的10ml平底小瓶中，小瓶冷卻至-47℃，冷凍干燥大約48小時，得到白色蓬松固體物質。將小瓶移至真空腔中，用真空泵除去空氣，并用全氟丁烷氣體代替。使用前加入水，用手輕微振搖小瓶幾秒鐘，得到適用作超聲波造影劑的微泡分散系。鑒定用CoulterMarkⅡ計數設備測量微囊的尺寸分布和體積濃度，該設備帶有一個50μm孔，其測量范圍為1-30μm。測量前在室溫下將20μl樣本用200ml空氣飽和的鹽水稀釋，使其平衡3分鐘。將deJong,N.與Hoff《超聲波》Ultrasonics,31:175-181(1993)所述的實驗裝置稍加改進，進行超聲波鑒定。該裝置測量造影劑稀懸液在2-8MHz頻率范圍內的超聲波衰減效力。在衰減測量過程中，將樣本在120mmHg過壓下暴露90秒鐘，進行壓力穩定性試驗。一般在進行分析前，將2-3μl樣本稀釋在55mlIsotonⅡ中，并將稀釋的樣本懸液攪拌3分鐘。使用3.5MHz下的衰減值以及釋放掉過壓后在3.5MHz下衰減的恢復值作為基本響應參數。表1按照實施例1制得的氣泡分散系的體外特征。數量與體積稱量濃度和體積平均直徑。按照上述說明測量的聲學性質。<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="603">數量濃度(106/ml)體積濃度(％)體積平均直徑(μm)3.5MHz下的衰減(dB/cm)過壓后的殘留(％)最大衰減頻率(MHz)105186.513.16150.4964.3</table></tables>實施例2按照實施例1制備的五份樣本的氣體成分按照下列方法分別用空氣、全氟丁烷、六氟化硫、三氟甲基五氟化硫和四甲基硅烷代替將來自實施例1的兩份含冷凍干燥產物的樣本置于具有一個氣體入口和一個氣體出口的干燥器中。干燥器與Büchi168真空/蒸餾器控制器連接，后者控制樣本的抽真空和通入所選擇氣體。樣本在大約10毫巴下抽真空5分鐘，其后通入所選擇的氣體使壓力升至大氣壓，然后小心地蓋上小瓶蓋。對其他樣本與每種所選擇氣體的組合都重復使用該方法。使用前向每個小瓶中加入2ml蒸餾水，并用手輕微振搖小瓶。所得微泡分散系進行與例1所述尺寸分布測量有關的特征化鑒定。結果總結在表2中。表2按照實施例2制得的被磷脂酰絲氨酸穩定的微囊分散系的體外特征-數量與體積稱量濃度和體積平均直徑<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="604">氣體數量濃度(106/ml)數量平均直徑(μm)體積濃度(％)體積平均直徑(μm)全氟丁烷97561.84.95.8三氟甲基五氟化硫102431.95.93.5六氟化硫99271.95.73.2四甲基硅烷99471.96.13.7空氣99091.96.44.0</table></tables>從上述結果可以看出，氣體交換后的尺寸分布沒有顯著變化，表示所得微泡尺寸在冷凍干燥和再生過程中基本上均得以保持。體內結果用五種氣體分別制得一批造影劑，在10MHz下評價其體內多普勒增強性質。將分散系通過耳靜脈注入絨鼠(chinchilla)兔體內，用多普勒技術進行測量，測量時將超聲波探針直接放置在頸動脈上。記錄信號的強度和持續時間，計算多普勒曲線的積分值。所得結果(見下表3)顯示，含有全氟丁烷的微囊具有最強的多普勒強度增強作用。含有六氟化硫、三氟甲基五氟化硫或四甲基硅烷的微泡作為多普勒增強劑，其增強效果僅比含有全氟丁烷的微泡略低，積分值相當于全氟丁烷的60-80％。表3給兔靜脈注射實施例2產物的結果。為基線漂移進行數值調節。多普勒單位定義為多普勒信號相對于血液的增加<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="604">氣體動脈多普勒的累計增強(NDU.s)全氟丁烷*10361三氟甲基五氟化硫8006四甲基硅烷6370六氟化硫6297空氣1024</table></tables>*兩次注射的平均值實施例3如實施例1所述制得含有全氟丁烷氣氛下冷凍干燥物質的小瓶。在即將開始使用前向小瓶中加水，得到微囊分散系。在室溫下將200mlIsotonⅡ流體在空氣中暴露幾天，得到完全被空氣飽和的溶液。在60℃下另取200ml該流體在真空燒瓶中脫氣一小時，再保持真空冷卻至室溫。在即將開始使用前向燒瓶中通入空氣。向每份流體中加入10μl微泡分散系，所得混合物溫育5分鐘，然后進行尺寸鑒定(CoulterMultisizerMarkⅡ)。脫氣環境是預期沒有氣體從流體擴散至微囊的，在該環境中平均微泡直徑為1.77μm，并有0.25％的微囊大于5μm。在空氣飽和的流體中，相應的數值為2.43μm和0.67％；5分鐘后重復測量，結果表明微囊尺寸已達到一個穩定的數值。這些發現說明，當微囊暴露在類似于動脈血的空氣飽和流體中，其平均直徑僅增加了37％，且只有非常少的微囊的尺寸達到了可能導致毛細血管栓塞的程度。該數據與WO-A-95/03835的實施例Ⅱ所報告的類似環境中含有空氣/全氟己烷的微泡(即，被大量含有溶解空氣的水稀釋的微泡分散系)的尺寸加倍形成對照。實施例4對照在冷凍干燥之前，用(a)65mg/ml蔗糖加65mg/ml甘露糖醇、(b)100mg/ml甘露糖醇加50mg/ml葡萄糖、(c)20mg/ml蔗糖、76mg/ml甘露糖醇和38mg/ml葡萄糖、和(d)90mg/ml蔗糖代替上清液，重復例1。測定濕潤和干燥組合物的Tg’和Tg值，列在下表4中。表4<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="609">制劑Tg’Tg(a)(b)(c)(d)-38℃-43℃-42℃-32℃19℃14℃12℃66℃</table></tables>制劑(a)至(c)比制劑(d)需要較長的冷凍干燥周期，并且與制劑(d)不同，必須貯存在室溫以下，以保持其完整性。實施例5氣體保留值在冷凍干燥之前，用(a)10％(w/w)蔗糖、(b)5％(w/w)PEG3000、(c)2％(w/w)甘露糖醇和1％(w/w)葡萄糖、和(d)5％(w/w)海藻糖代替上清液，制得類似于例1的物質，用大量N2沖洗，反復進行真空循環，再壓碎，以試驗產物保留全氟丁烷的能力。采用應力處理后，測定剩余的全氟丁烷成分。結果列在下表5中。表5<tablesid="table5"num="005"><tablewidth="609">低溫防護劑mgPFB/g產物蔗糖PEG3000甘露糖醇+葡萄糖海藻糖0.69±0.10≤0.050.29±0.101.24±0.38</table></tables>上述實施例中，可以使用高濃度的穩定劑(例如20％，而不是10％)，參照上述也可以使用除水以外的其他再生流體，例如鹽水或多元醇溶液。同樣，冷凍干燥的樣本體積可以更大(例如4ml，而不是2ml)，冷凍干燥的小瓶可以更大(例如20ml)，冷凍干燥的時間可以更長(例如60小時)。權利要求1．一種含有超聲波造影劑的冷凍干燥的小囊，該造影劑含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑在超過20℃的溫度下是穩定的。2．一種含有超聲波造影劑的冷凍干燥的小囊，該造影劑含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑的玻璃化轉變溫度(Tg)在20℃以上。3．根據權利要求1和2之一的造影劑，其中所述的穩定劑選自由蔗糖、麥芽糖H2O、海藻糖、棉子糖和水蘇糖組成的組。4．根據權利要求1和2之一的造影劑，其中所述的穩定劑含有蔗糖。5．根據權利要求1至4中任一項權利要求的造影劑，其中在所述造影劑中所述穩定劑與小囊的重量比為至少10∶1。6．根據權利要求1至4中任一項權利要求的造影劑，其中在所述造影劑中所述穩定劑與小囊的重量比為至少20∶1。7．根據權利要求1至6中任一項權利要求的造影劑，其中的小囊在所述造影劑中含有一種鹵化碳氣體或氣體前體。8．根據權利要求7的造影劑，其中的小囊在所述造影劑中含有一種全氟代烷。9．根據權利要求7的造影劑，其中的小囊在所述造影劑中含有一種選自全氟丁烷和全氟戊烷的全氟代烷。10．根據權利要求1至9中任一項權利要求的造影劑，其中的小囊的膜在所述造影劑中含有一種磷脂。11．一種含有超聲波造影劑的熱穩定的冷凍干燥的小囊的制備方法，該方法包括冷凍干燥一種含水分散系，該分散系含有一種起泡超聲波造影劑和一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物，其特征在于所述穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃，其Tg’值為-37℃或以上。12．根據權利要求11的方法，其中所述的含水分散系含有1至50重量％的所述穩定劑。13．根據權利要求11和12之一的方法，其中所述的含水分散系含有重量比為10∶1的所述穩定劑和起泡超聲波造影劑。14．根據權利要求11至13中任一項權利要求的方法，其中所述的起泡超聲波造影劑含有一種鹵化碳氣體或氣體前體。15．根據權利要求14的方法，其中所述的小囊含有一種選自全氟丁烷和全氟戊烷的鹵化碳。16．根據權利要求11至15中任一項權利要求的方法，其中所述的含水分散系進一步含有一種填充劑。17．根據權利要求16的方法，其中所述的填充劑是一種C3多元醇。18．根據權利要求16和17之一的方法，其中所述的含水分散系含有3至10重量％的所述填充劑。19．一種超聲波造影介質，該造影介質含有一種含水載體介質、一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物和一種可產生回波的起泡超聲波造影劑，其特征在于所述的穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃,Tg’值為-37℃或以上。20．一種冷凍干燥穩定劑或幾種穩定劑的混合物的用途，該穩定劑或幾種穩定劑的混合物的Tg值為至少20℃,Tg’值為-37℃或以上，用于制備含有超聲波造影介質的小囊，該造影介質用于有關診斷超聲波成像的診斷分析。21．一種含有超聲波造影劑的小囊的貯存或運輸方法，其特征在于所述造影劑是以冷凍干燥形式存在的，含有一種冷凍干燥穩定劑，該造影劑的玻璃化轉變溫度(Tg)為至少20℃(優選為至少22℃等)，其特征還在于貯存和運輸無需冷卻。22．一種含有超聲波造影介質的小囊的制備方法，所述方法包括將根據權利要求1至10中任一項權利要求的的冷凍干燥的造影劑分散在一種生理學上可耐受的含水分散介質中。全文摘要本發明涉及一種含有超聲波造影劑的冷凍干燥的小囊,該造影劑含有一種冷凍干燥穩定劑,該造影劑在超過20℃的溫度下是熱穩定的。文檔編號A61K49/22GK1213971SQ9719318公開日1999年4月14日申請日期1997年2月19日優先權日1996年2月19日發明者M·斯瓦德-諾德莫,P·H·古利克森,J·U·布蘭登,A·K·法爾威克申請人:奈科姆成像有限公司