用于泌尿生殖道和腸道疾病的組合物的制作方法

專利名稱：用于泌尿生殖道和腸道疾病的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于預防和/或治療泌尿生殖系統疾病和腸道疾病的組合物。
背景技術：
在溫血動物的泌尿生殖道和腸道中，布滿了復雜的微觀生態系統。數以兆計的微生物中有數以百計的物種，它們占據著哺乳動物的泌尿生殖道和腸道，影響并維持著消化和泌尿功能。占據這些部位的微生物有潛在的致病菌，如大腸桿菌、腸道球菌、念珠菌、加德納菌(gardnerella)、克雷伯氏菌(klebsiella)和梭狀芽胞桿菌，也有較不致病的菌如乳桿菌和雙歧桿菌。這種精巧的菌群平衡狀態的失衡，在病因學上與多種泌尿生殖道疾病和/或腸胃道疾病是緊密相關的；這種失衡還造成了致病菌種增殖并占據優勢。因此，建立和維持這種精巧的菌群平衡，對于維持最佳健康狀態是至關重要的。
一種建立或維持身體的菌群方法是服用乳桿菌。促進乳酸菌(如乳桿菌或雙歧桿菌)的生長。例如，在1992年4月4日授予Bruce等人的加拿大專利1,298,556,1993年5月27日出版的Reid等人的PCT申請WO 93/09793和1995年1月5日授予Tosi等人的美國專利5,176,911中已提出用乳桿菌來治療泌尿生殖道和腸道疾病。研究者的假設是，乳桿菌通過粘附于腸道或陰道的上皮細胞來提供宿主保護。
盡管這些建議的一些要素已被確認，但對單獨使用乳桿菌來治療泌尿生殖道和腸道感染也提出了幾點疑問。1)乳桿菌的不同菌株間在與上皮細胞表面的粘附程度方面存在差異。Reid,G等，對乳桿菌菌株可能影響其在尿道中細菌干擾作用的特性的研究(Examination of strains of Lactobacillus for properties that mayinfluence bacterial interference in the urinary tract),J.Urol.,138:330-335；1987。2)在病原性侵染之前先建立起乳桿菌菌落才能最可靠地驅除致病微生物。Hawthorn,L.A.等，利用嗜酸乳桿菌排除尿道病原菌與聚合物表面的粘附(Exclusion of uropathogen adhesion to polymer surface by Lactobacillus acidophilus),Jour.Biomed.Mat.Res.,24；39-46；1990；但是，這實際并不存在而僅存在于體外設計中。3)活的有生命的細菌培養物經口服消化后還存在能否存活的活性問題。臨床研究發現，并非所有的細菌都能經受胃及上消化道的消化液而存活。而那些確實存活下來的也可能出現因活力太弱或數量太少而無法有效地在下消化道內形成菌落。而且，認識到在本領域需要可靠的臨床研究，部分研究者對某幾種乳桿菌的效力進一步表示關切。所以，雖然發明了有關乳桿菌的產品，目前仍然有必要設法改善用于泌尿生殖道和胃腸道的含乳桿菌的組合物。
本發明人已發現，將杜鵑花科植物或提取物與微囊化了的乳桿菌和/或雙歧桿菌摻合而得的組合物，是通過改變病原體與細胞組織的相互作用而治療和/或預防泌尿生殖道和腸道疾病的更好的組合物。最近研究也揭示了這些提取物在治療泌尿道感染方面的價值。研究人員已觀察到，越橘屬的多個品種(如蔓越橘(cranberry)和烏飯樹(blueberry))含有一種聚合物，該化合物會抑制常見泌尿道病原體(如大腸桿菌)粘附于泌尿道內的感染位點。Ofek I等人，“蔓越橘和烏飯樹汁的抗大腸桿菌粘附的活性”(Anti-Escherichia coli Adhesin Activity of Cranberry and BlueberryJuices)，《(新英格蘭醫學雜志》(N Engl J Med),1991；324；1599。出乎意料地是，本發明的組合物能提供更好的環境、更有利于乳酸細胞的定居。所以，本發明的目的之一是提供作為補充飲食的組合物。
本發明的另一目的是提供經改進的組合物，其中包含微囊化乳桿菌和/或雙歧桿菌的活菌落。
本發明的另一目的是提供有效預防和/或治療泌尿生殖道和腸道疾病的組合物。
本發明的另一目的是提供一種陰道使用的局部用的組合物。
本發明的另一目的是提供有效預防和/或治療泌尿生殖道和腸道疾病的方法。
通過下面的描述，這些及其他目的會變得很清楚。
發明概述本發明涉及治療或預防泌尿生殖道和腸道疾病的組合物，它包括a．)抗粘附量的的杜鵑花科植物中至少一種或其提取物；和b)選自乳桿菌、雙歧桿菌及其混合物中至少一種的微囊化細菌活菌培養物。
本發明還涉及上述組合物另含有促進乳酸菌生長的生長因子(growthfactor)。
如本文所用，術語“泌尿生殖道和腸道組合物”指在常規使用過程中可以被含在口腔中、或吞服、或局部施用而提供泌尿生殖道和/或腸道內的活性的產品。
如本文所用，術語“抗粘附量”指可有效減少泌尿生殖道和/或腸道的上皮和/或粘膜系上病原性微生物數量的量。
如本文所用，術語“泌尿生殖道”指與尿液生成和排泄以及與生殖有關的器官系統。
如本文所用，術語“腸道(的)”指腸的，或與腸有關。
如本文所用，術語“非病原性”指在健康哺乳動物體內基本上缺乏引起疾病或異常的能力。“健康”指沒有潛伏的疾病和/或免疫抑制。
本文中使用的所有百分比和比例都按重量計，除非另有說明。而且，本文中所有的測量都是在25℃進行的，除非另有說明。
發明詳述在下面段落中描述本發明的組合物必要組份和任選組份。
必要組份杜鵑花科植物或提取物由約110個屬和4000個種所組成的杜鵑花(歐石南)科，是杜鵑花目中最重要的科，包括了眾多不同的產果的灌木和常綠植物。在歸入杜鵑花科中的屬包括越橘屬(Vaccinium)、熊果屬(Arctostaphylos)、白珠樹屬(Gaultheria)、和無藥芒屬(Gaylussacia)。熊果屬包括諸如平鋪白珠樹(checkerberry)和熊果(Uva ursi)之類的物種。其他可食用的果子，如匍匐白珠樹或moxie梅(moxie plum)屬于白珠樹屬。黑果木是無藥芒屬中熟知的物種。因其果實而聞名的越橘屬，包括某些最常見的漿果，其中包括烏飯樹(如V.australe)、蔓越橘(如V.macrocarpon)和歐洲越橘(如V.myrtillus)。如本文所提到，術語“漿果”指莓子、核果、梅子等果子。
大腸桿菌的粘附作用主要是由微生物上翹起的毛發狀的菌毛(或菌發)上的粘附素造成。這些粘附素被分為MS(甘露糖敏感型)和MR(甘露糖耐受型)。與大多數果子相似，杜鵑花科果子含有果糖，這是MS粘附素的抑制物。然而，最近揭示，杜鵑花科物種植物或提取物中還含有一種未被鑒定的、不可透析的聚合化合物，該化合物可抑制與導致腎盂腎炎的(pyelonephritogenic)大腸桿菌菌株相關的MR粘附素。根據在越橘屬物種中的研究，已發現這種未被鑒定的聚合化合物可抑制大腸桿菌的尿液和糞便分離株的粘附作用，其中尿道分離株被抑制的程度更大。Ofek,I.等人，“蔓越橘和烏飯樹汁的抗大腸桿菌粘附素的活性”，《新英格蘭醫學雜志》(N Engl.J Med),1991；324；1599。還報道，攝入大量的蔓越橘果汁增加了尿液中馬尿酸的含量(一天增加數克)。這種馬尿酸排泌增加伴隨著尿液pH的小幅下降。體內試驗已表明，馬尿酸在pH 5.0時，對于常見的尿道病原體有抑菌作用，但該作用隨著尿酸pH的上升而明顯減小。Papas,N.P.等人“蔓越橘汁在治療尿道感染中的作用”(Cranberry Juice Inthe Treatment of Urinary TractInfection),Southwestern Medicin,47:No.1(1996年1月)。本發明的杜鵑花科物種可有效地抗其他病原體(如綠膿假單胞菌)，這公開于1995年12月12日授予Walker等的美國專利No.5,474,774中，該文獻全部在此引用作為參考；對乳桿菌粘附于細胞的粘附作用則沒有觀察到。不受任何理論的限制，據信由杜鵑花科植物或提取物造成的病原體抑制作用可導致致病作用的減少，從而給乳桿菌提供更有利，拮抗性更少的環境，以便開始粘附并維持粘附。如本文所用，術語“抗粘附活性”指數量能有效地抑制致病微生物粘附于泌尿生殖道和/或腸道的上皮或粘膜層。
可用于本發明組合物的植物或提取物來自杜鵑花科中范圍廣大的各屬，其中包括但并不限于越橘屬(Vaccinium)、熊果屬(Arctostaphylos)、白珠樹屬(Gaultheria)、和無藥芒屬(Gaylussacia)。優選的物種包括V.australe、傘房花越橘(V.corymbosum)、V.occidentale、卵葉越橘(V.ovatum)、黑果越橘(V.myrtillus)、小葉越橘(V.parviflium)、篤斯(V.uliginosum)、V.macrocarpon、V.oxycoccus、V.erythrocarpum、越橘(V.vitis-idaea)、V.australe、V.macrocarpon。最優選的越橘屬中用于本發明的物種是V.australe、V.macrocarpon和黑果越橘。還可以使用杜鵑花科植物和/或提取物的混合物。
本發明的植物或提取物宜為濃縮的，其比例為至少約4磅植物提濃物或提取物濃縮成一磅濃縮物，更佳地約為4-50磅植物提濃物或提取物濃縮成一磅濃縮物。每個單位劑量中杜鵑花科提取物的含量至少為10毫克，較佳地為約100毫克-約18克，最佳地為約250毫克-約4克。每個劑量產品中所含的提取物的量，可根據劑型調節。例如，用于飲用混合物中的粉末形式的提取物量可達每個劑量18克之內，而用于可吞服膠囊中的量可達約4克。杜鵑花科植物或提取物的優選含量，是使尿道和/或腸道中上述未鑒定的、不可透析的聚合化合物的液體濃度達到約12-約25微克/毫升。而且，本發明的植物或提取物宜保留超過2.5％其總含酸量和超過約0.1％其苯甲酸含量。選擇這一水平以提供所需程度的抗粘附素活性，該水平也可根據需要進行改變。蔓越橘和蔓越橘提取物可用于治療和/或預防尿道感染，還可以用作陰道除臭劑。
乳桿菌或雙歧桿菌的菌種本發明的另一必需組份是微囊化乳桿菌或雙歧桿菌的活菌落。乳桿菌屬的細菌的特征是桿形、革蘭氏陽性和不形成孢子的細菌。在乳桿菌科中，乳桿菌屬寄居在動物和人的泌尿生殖道和腸道中，它們是產乳酸的細菌組中的主要成員。在商業上，各種不同的乳桿菌屬菌種被用于生產酸奶、奶酪、和酸乳。乳桿菌還在生產發酵蔬菜制品(如酸菜和泡菜)、飲料(如啤酒、酒和果汁)、酵頭面包和某些香腸等方面起重要作用。
適用于本發明的乳桿菌菌種是這樣的細菌，它們(1)容易粘附于哺乳動物泌尿生殖道或腸道的上皮細胞；(2)產生過氧化氫；(3)促使低pH值；并產生細菌素。如本文所用，“細菌素”指由細菌合成的蛋白質類型的殺細菌物質，這些物質只有狹窄的活性范圍，只抑制相同或緊密相關菌種的菌株。細菌素似乎能夠導致取代或抑制其他細菌的生長，因此對于生長于雌性生殖道生態系統中的微生物而言是有利的。優選的乳桿菌屬菌種包括嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、L.catenaforme、短乳桿菌(L.brevis)、L.bulgaricus、乳酸乳桿菌(L.lactis)、L.reuterii、L.gasseri、瑞士乳桿菌(L.helveticus)、干酪乳桿菌(L.casei)、胚芽乳桿菌(L.plantarum)、戴爾布呂克氏乳桿菌(L.delbrueckii)、嗜熱乳桿菌(L.thermophilis)、L.jensenii、L.crispatus、L.rogosae和發酵乳桿菌(L.fermentum)。最優選用于本發明組合物的乳桿菌菌種是嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、L.crispatus、發酵乳桿菌、和胚芽乳桿菌。較佳地，本發明的乳桿菌屬菌種是產過氧化氫的，例如嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、L.catenaforme、干酪乳桿菌(L.casei)、L.crispatus、戴爾布呂克氏乳桿菌(L.delbrueckii)、L.jensenii、L.rogosae。考慮到它們的粘附性能，發酵乳桿菌(L.fermentun)、L.gasseri和胚芽乳桿菌(L.plantarum)也是優選用于此處的。
也寄居在哺乳動物的泌尿生殖道和腸道中并可用于本發明組合物的是雙歧桿菌屬的菌種(放線菌科)。雙歧桿菌菌種是非耐酸(non-acid-fast)的、非能動型(nonmotile)的、革蘭氏陰性桿菌。產乳酸和產乙酸的雙歧桿菌還被認為是哺乳動物泌尿生殖道和腸道菌群的重要調控者。適用于本發明組合物的菌種包括(但并不限于)B.longum、B.Breve、雙叉乳桿菌(Lactobacillus Bifidus)和雙叉乳桿菌的賓夕法尼亞亞種(Lactobacillus Bifidus subsp pennsylvanicus)。優選用于本發明組合物的是B.Bifidum，最優選的是B.Bifidum subsp pennsylvanicus。
還可使用乳桿菌和/或雙歧桿菌的混合物。上述的任何菌種可以從市場上購得，也可以通過實驗室培養而獲得。
作為內核和/或包衣組份的乳桿菌和/或雙歧桿菌的濃度為每個單位劑量至少約103個細胞，較佳地濃度為每個單位劑量約104-約1012個細胞，最佳地濃度為每個單位劑量約106-約1010細胞。如本文所用，術語“單位劑量”指物理上獨立分離的單元，適合作為單元劑型給哺乳動物使用，每個這種單元含有經計算可產生所需治療效果的預定數量的活性成分和藥學上可接受的載體。含量水平可加以選擇，以提供所需程度的泌尿生殖道和腸道活性，該含量也可按需要而改變。在室溫下和制造過程中，乳桿菌的活力會減低4-6倍，因此根據制造條件，可加入過量的乳桿菌以維持每個最終單位劑型中有合適數目的活微生物。或者，在數值用其他測量值表示(例如用總蛋白濃度表示)時，可給病人施用相當于這些濃度的微生物。
本發明的乳桿菌和/或雙歧桿菌還必須是微囊化的。可將去除生長培養基后經低溫干燥的活的乳桿菌和/或雙歧桿菌加以微囊化。細菌可以購買，也可以由實驗室菌株制備。合適的培養基包括MRS,Thayer-Martin培養基，胰蛋白酶大豆培養基、腦-心浸潤培養液(Brain-Heart Infusion Broth)，或者任何其它用于培養所述細菌的強化培養基，因為具體的培養基對本栓劑的成功并不是關鍵性的。唯一重要的因素是通常由標準臨床實驗室用稀釋方法測定的微生物的活力和數量，這些方法例如將定量稀釋后的細菌稀釋液鋪平在血液瓊脂培養板或其它強化培養基上，然后在37℃、5-10％二氧化碳氛圍中培養24至48小時，然后進行菌落計數。通過在0℃至4℃以14,000xg離心來去除營養培養基，然后在初次離心之后用無菌平衡鹽水和5％葡萄糖溶液洗滌至少3次。然后用液氮將細菌“快速冷凍”，然后在高度真空中低溫干燥。然后按照常規微囊化技術將細菌微囊化。合適的微囊化方法可參見在此參考的1995年11月4日Ford的美國專利5,466,463和1995年4月18日Tice等的美國專利5,407,609。
任選組份乳桿菌生長因子促進乳酸菌生長的生長因子也是對本發明組合物有助益的。“促進乳酸菌生長的生長因子”在本文中指為促進產乳酸菌生長而提供必需的食物和/或能量來源的營養源或培養基。生長因子最好選擇性地確保和維持乳酸菌，最好是乳桿菌和/或雙歧桿菌的生長，但是不促使病原菌的過度生長。當生長因子包含可發酵的糖、蛋白胨、肉膏或酵母提取物時，細菌和/或菌落生長所必需的各種營養需求一般能夠得以滿足。補充以西紅柿汁、錳、乙酸鹽和油酸酯，特別是吐溫80，對于大多數菌種來說具有刺激生長作用或者甚至是必需的，所以，大多數MRS培養基中包含以上成分。適應特殊基質的乳酸菌可能需要特殊的生長因子。
合適的生長因子包括例如，但是不限于，酵母提取物；神經節苷脂；水楊苷；單糖、二糖和多糖，例如糖原、葡萄糖、果糖、鼠李糖、二蔗酮糖、甲基-α-D-甘露糖苷、p-硝基苯酚-α-D-甘露糖苷、麥芽糖、麥芽糖糊精、糊精、葡聚糖、果聚糖、唾液酸和N-乙酰葡糖胺，以及寡聚糖，例如但不限于寡聚果糖、寡聚半乳糖和大豆寡聚糖。纖維或車前草(psyllium)之類的可發酵基質和諸如瓜爾樹膠和黃蓍膠之類的樹膠一樣也可以用于本發明。同樣，諸如胨、角蛋白之類的蛋白質類物質；蔬菜；大豆(soy)，諸如月桂酸的不飽和脂肪酸，以脂磷壁酸為例的磷壁酸，以及以甘油磷酸酯或β-甘油磷酸酯為例的酯類也可以用作生長因子。生長因子最好選擇性地確保和維持乳酸菌，最好是乳桿菌和/或雙歧桿菌的生長。用作本發明組合物中生長因子較好的包括乳糖、二蔗酮糖、鼠李糖、寡聚糖和糖原。也可以使用以上營養素的混合物。
更好的是，本發明的生長因子是寡聚糖，例如但不限于，寡聚半乳糖、大豆寡聚糖和寡聚果糖。寡聚糖具有生物粘附性，這有助于固定這些生長因子的位置，更便于被乳酸菌所接近。最適合在此使用的是寡聚果糖。例如乳桿菌和雙歧桿菌的乳酸菌部分地利用寡聚果糖作為能源，即通過發酵將其轉化成乳酸或乳酸與乙酸和CO2的混合物。由這一糖發酵產生的乳酸和其它脂肪酸起著維持低pH的作用，低pH是防止病原菌集結的重要調控機制之一。
從化學上說，寡聚果糖是菊糖的寡糖部分。它由GFn和Fn型分子(G=葡萄糖；F=果糖；n=果糖基團的數量)按約2∶1的比例由β(2,1)鍵連接而成，n=2-6，平均聚合度為4。菊糖是用熱水從菊苣根中萃取得到的，由GFn型分子構成，n高達60，平均聚合度為10。適合用于本發明的寡聚果糖可以也可以不以非果糖基單元代替其果糖基末端單元。這對其它寡糖的糖基(osyl)末端單元也一樣。非果糖基單元包括，但不限于，多元醇，例如木糖酵、甘露醇和山梨醇。最適合用于本發明組合物的寡聚果糖是菊糖或寡果糖。也可以使用以上營養素的混合物。
除了理論所述之外，據信，隨著消化作用，生長因子會增加乳桿菌和/或雙歧桿菌的存在數量從而取代上皮細胞表面的病原性微生物。乳桿菌和/或雙歧桿菌數量的增加競爭性地驅除病原菌，使得后者被取代并被排泄；結果是宿主病原菌的全面減少。而且，由于陰道感染通常被認為是由病原菌從直腸向陰道遷移造成的，所以，隨著遷移性病原菌數量的減少，入侵陰道的病原菌數量也減少了。
在每單位劑量的本發明組合物中，生長因子的含量以約5％至約75％為宜，約20％至約70％更好，約30％至約65％則最好。
包衣物質本發明組合物還可以包含包衣物質。適用于本發明組合物的包衣物質可以是水溶性的和非水溶性的。本發明的包衣物質最好干燥至水活度(water activity(Aw))低于約0.6，低于約0.45更好，低于約0.3則最好。“水活度”是本領域公知的的衡量相同溫度下物體例如食物(固體或液體)上方的平衡水蒸氣壓力與純水蒸汽壓之比的量度。有關水活度更詳細的說明可參見UK專利2,014,429。
適用于本發明組合物的水溶性包衣包括糖或有機物包衣。用于本發明組合物的糖包衣可以是糖漿，其中含有單糖或兩種或兩種以上糖單元的聚合物。有機物包衣也可以用于本發明組合物。可使用的有機聚合物或共聚物包括具有多個羧酸或酯基團的那些。這些基團主要負責與活性成分發生物理或化學相互作用而得到有效的遮味性能。較好的聚合物或共聚物含有乙烯基和丙烯酸和/或酯基團，或者羧酸和/或酯基團。本領域一般技術人員能夠容易地確定具體的聚合物/共聚物。一般說來，可以使用就安全性和毒性而言在藥學上可接受的聚合物/共聚物。這類聚合物/共聚物宜可溶于某種溶劑或混合溶劑。這類聚合物/共聚物包括聚合或樹脂類物質，例如丙烯酸和取代丙烯酸的共聚物；纖維素酯；乙烯基和取代乙烯基酯；多磺酸、其酯和其酰胺。具體的例子包括例如蟲漆和玉米蛋白的天然物質和例如乙基纖維素、纖維素乙酸酯、纖維素乙酸鄰苯二甲酸酯、乙酸和/或鄰苯二甲酸乙基乙烯酯、聚乙酸和/或鄰苯二甲酸乙烯酯、甲基丙烯酸乙酯和/或甲酯、酯類和共聚物、羥基烷基纖維素乙酸酯和/或鄰苯二甲酸酯之類的合成和半合成物質。這類混合物包括以商品名出售的市售物質例如Eudragit S(Rohm Pharma的商品名)和Phthalavin(Colorcon的商品名)。本發明的包衣物質最好是甲基丙烯酸和甲基丙烯酸酯的聚合物混合物。也可以使用糖和有機物包衣物質的混合物。
本發明的一種特殊實施方式包括含有杜鵑花科中至少一種的內核和含有上述被微囊化細菌中至少一種的活菌培養物的包衣。或者，微囊化的乳桿菌可以位于內核而包以含杜鵑花科的包衣。后一種可用于提供適合乳桿菌存活和生長的酸性的環境。還可以再加上其它包衣層。
或者，可以包含蛋白質樣包衣組份。為了用于改善胃腸道疾病，這類組份可以含有被支鏈氨基酸修飾的蛋白。例如，在氨基酸乙基L-亮氨酸(16.1份)、乙基L-異亮氨酸(7.4份)、乙基L-纈氨酸(10.2份)、鹽酸半光氨酸(1.5份)和碳酸鈉(26份)存在下，在水中在40℃用木瓜蛋白酶處理乳清粉末20分鐘來制造含10％游離氨基酸和43％支鏈氨基酸的包被粉末。支鏈氨基酸修飾的粉末可以與脂肪、糊精、鹽、維生素等混合制成片劑。
片劑包衣物質的其它例子有可改善片劑口感的沸石和粘土。沸石已被用作牲畜用細菌性飼料的包衣。例如，在畜牧業中，富馬酸硫粘菌素被溶解在甲醇中，以絲光沸石或淀粉作為載體，干燥并進一步與載體預混合成緩釋型包衣顆粒劑。片劑包衣物質的其它例子還包括復雜的糖和內含復合物。
本發明的糖和/或有機物包衣可以利用常規方法來涂施，其中包括機械方法，例如衣鍋包衣法、空氣懸浮技術、多孔離心技術和噴霧干燥技術，以及理化方法，例如凝聚-相分離。在本文參考的《雷明頓藥物科學》(Remington’s PharmaceuticalSciences)(Alfonso Gennarol,editor),1666-1675(1990)中對包衣過程有更為詳細的論述。
緩沖劑本發明組合物中還可以含有緩沖劑。對于口用組合物，可以將pH緩沖至酸性來改善口味。對于用于陰道的產品，適合用作本發明組合物中的緩沖劑是能夠維持約3.0至約5.5的泌尿生殖系統pH值的那些。任何溫和的藥學上可接受的酸，除了在此公開的杜鵑花科中的那些，都可以使用。合適的酸包括硼酸，或有機酸，例如奎尼酸、丙酸、蘋果酸、丙酮酸、馬尿酸、酒石酸，山梨酸、苯甲酸、乳酸、維生素C、檸檬酸或乙酸，并與其相應的鈉鹽或其它藥學上可接受的鹽組合(直至達到所需的pH)。在使用緩沖劑時，本發明組合物最好緩沖至pH約3.5至約5.0，約3.7至約4.7更好，而且最好使用乳酸與乳酸鈉，或者乳酸/乳酸鈉和苯甲酸的組合，或者乳酸/乳酸鈉與丙酸的組合。
其它植物提取物其它治療性和/或藥用植物或提取物也可以加在本發明組合物中。這類植物或提取物包括松果菊屬、蔥屬、bucha、刺柏屬、人參屬、蒜素、小球藻、藻素等。也可以使用以上其它植物或提取物的混合物。
營養添加劑本發明組合物中還可以加入營養添加劑。這類添加劑包括，但不限于，除了前文提及作生長因子素之外的蛋白質和糖、維生素、礦物質、氨基酸例如甘氨酸、植化物質(phytochemicals)，及其混合物。或者，這些添加劑可以先加到本發明的乳桿菌和/或雙歧桿菌中。
藥物活性成分本發明組合物還可以與藥物活性成分合用。藥物活性成分最好選自鎮痛劑和/或胃腸道藥物中至少一種。當加有藥物活性成分時，必需采取適當的措施防止其與本發明的微生物接觸。這類措施包括，但不限于，如Ford的美國專利5,466,463中所述改變微囊化過程。
本發明優選的鎮痛劑包括例如對乙酰氨基酚、乙酰水楊酸、吲哚美辛和布洛芬的光學活性異構體或外消旋體、萘普生、氟比洛芬、卡洛芬、噻洛芬酸、環洛芬、酮洛芬、酮咯酸、依托度酸、吲哚美辛、舒林酸、非諾洛芬、雙氯芬酸、吡羅昔康、芐達明(benzydomine)、萘丁美酮，其藥學上可接受的鹽，以及上述的混合物。
本發明優選的胃腸道藥物包括抗膽堿藥，其中包括抗膽堿藥，包括阿托品、克利溴銨(clidinium)和雙環維林；抗酸藥，包括氫氧化鋁、堿式水楊酸鉍、堿式檸檬酸鉍、二甲硅油、碳酸鈣水化鋁酸鎂；H2受體拮抗劑，包括西咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁和雷尼替丁；緩瀉劑，包括多庫酯鈉、酚酞和鼠李蒽吩(casanthol)；胃保護劑，包括硫糖鋁和硫糖鋁濕凝膠；胃動力藥，包括甲氧氯普胺和西沙吡利；質子泵抑制劑，包括奧美拉唑，和止瀉藥，包括地芬諾酯、白陶土果膠、綠坡縷石(attapulgite)和洛哌丁胺。
載體物質本發明組合物可以加到許多不同的載體中，載體主要取決于組合物的最終用途。這些載體是藥學上可接受的，包括口用的和局部使用的組合物。它們可以是完全惰性的，或者包含或就是其它活性成分，但是載體必需與在此公開的組合物相容。“相容性”在此指，載體組份可以與本發明組份以及載體組份彼此之間相互混合，要以不發生會在一般使用情況下明顯降低組合物的活性或生命活力的相互作用的方式混合。當然，載體物質必須具有足夠高的純度和足夠低的毒性，使得它們適合用于被接受治療的人。較好的是，本發明組合物約含0.01％至約99.99％一種或多種載體物質。
適合本發明組合物局部使用的載體包括栓劑、陰道片劑或膠囊、陰道栓劑、乳膏劑、灌洗用溶液、乳劑、泡沫劑、凝膠、搽劑、油劑和軟膏劑、粘膜灌洗劑。
乳膏劑、凝膠劑和其它基礎制劑可以用于將本發明組合物局部使用于例如男性或女性的生殖器(包括陰戶和陰道)，它們是利用制備半固體組合物的常規方法制備的，使用的賦形劑例如凡士林、石蠟、凡士林油、植物油、動物油、固體和液體的合成甘油酯、蠟、羊毛脂、羊毛醇(lanolin alcohols)、山梨酯、脂肪醇、液體/固體聚乙二醇、丙二醇、聚乙烯、淀粉、丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、纖維素和羧基乙烯基聚合物的衍生物。
陰道栓劑、一般栓劑、陰道膠囊或片劑和泡騰片也可以用在本發明的局部預防使用中。陰道栓劑與一般栓劑類似，呈卵形，主要使用的賦形劑是半合成的甘油酯和聚乙二醇，還有可選性的乳化劑和表面活性劑。
陰道膠囊是凝膠狀的藥袋或藥囊，其中是進一步分開的懸浮液，后者通常是無水的，而且含有液態石蠟、凡士林、植物油和半合成油和增稠劑。其形狀適合用于陰道的片劑含有作為主要賦形劑的乳糖、淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮、纖維素衍生物、硬脂酸鎂、乙二醇。泡騰片含有為了發生泡騰而產生二氧化碳所必需的化學組份(即碳酸氫鈉加檸檬酸或酒石酸)。
本發明組合物還可以加到紡織布或無紡布中并通過后者局部使用，后者例如紙巾、擦手紙、衛生棉、褲襯、綿墊、尿片、失禁癥護理產品等。在此，較好的是使用無紡布。適合使用本發明組合物的無紡布可參見在此參考的Thaman等的美國專利4,891,227。
口用劑型也可以作為本發明的載體。這些劑型中含有適合給人或較低級動物口用的相容性固體或液態填料稀釋劑或膠囊化物質。
口用液態劑型可包含將本發明組合物溶解或懸浮在可飲用的液體中，例如無菌水或潔凈水中。或者，液體或干燥口服劑型包含含有所述劑型的腸衣膠囊。合適的形式包括乳液、懸浮液、溶液、糖漿和酏劑，其中含有本領域常用的惰性稀釋劑，例如純水、糖、多糖、硅膠、明膠或醇。這些惰性稀釋劑不積極參與本發明的治療性作用。但是，對于這類液體形式，當與乳桿菌一起存在有游離水時，可能需要特別注意防止乳桿菌的發酵或降解。除了惰性稀釋劑之外，這類組合物還可以含有潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、和其它治療性活性成分。有關液體和液體樣劑型的更為詳細的說明可參見在此參考的《雷明頓藥物科學》第17版，Mack出版公司，Easton,Pa(1990)，第1519-1544頁。
片劑可以是壓制片、模制片、研磨片、腸衣片、糖衣片、膜衣片或多層壓制片，其中含有合適的粘合劑、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑和引流劑。
也可以使用軟性或硬性明膠膠囊。較好的是，明膠外殼基本上是透明的，這樣可以改善膠囊的外觀。軟性或硬性明膠囊通常含有明膠、增塑劑和水。用于制造這類膠囊的起始明膠物質通常來自膠原物質的部分水解。適合制造膠囊的明膠可以向Sigma Chemical Company,St.Louis,Mo.購買。為了形成明膠殼，可加入一種或多種增塑劑。可用于本發明的增塑劑包括甘油、山梨糖醇酐、山梨醇或類似的低分子量多元醇，及以上物質的混合物。
制造固體口用劑型的技術和配方可參見在此參考的“固體口用劑型”《現代藥學》(“Solid Oral Dosage Forms”Modern Pharmaceutics)第7卷，(Banker和Rhodes編輯)，359-427(1979)。制造片劑(壓制和模制)、膠囊(軟性和硬性)、錠劑和丸劑的技術和配方可參見在此參考的《雷明頓藥物科學》(Arther Osol編輯)，1553-1593(1980)和Borkan等的1990年6月19日的美國專利4,935,243。用于配制口用劑型的藥學上可接受的載體和賦形劑的具體例子可參見在此參考的1975年9月2日Robert的美國專利3,903,297。
或者，本發明組合物可以制成含于冷凍干燥或低溫干燥的片劑中。冷凍干燥或低溫干燥可以通過將干燥的組合物形成開放性基質網絡結構而有助于組合物的崩解。在大多數情況中，這樣可造成液體介質的快速浸潤，促進產品的及時釋藥傳遞。合適的冷凍干燥方法是本領域熟知而且常用的。任何合適的常規冷凍干燥方法均可使用。較好的方法之一是快速冷凍組合物然后干燥至最終含水量為約2％至約5％。合適的冷凍干燥和生產方法可參見在此參考的1987年2月17日Dacies的美國專利4,642,903，1990年8月7日Blank等的美國專利號分別為4,946,684，1981年12月15日和1983年2月1日Gregory等的美國專利4,303,502和4,371,516，和1993年2月23日Iles等的美國專利5,188,825。
同樣，本發明組合物也可以真空干燥。真空干燥包括在組合物的皺縮(collapse)溫度以上至少部分干燥組合物。相反，冷凍干燥涉及在組合物皺縮溫度以下干燥組合物。任何合適的真空干燥方法均可使用。合適的真空干燥方法可參見在此參考的1994年3月29日Pebley等的美國專利5,298,261。
另一種可用于本發明的制片技術是Janssen Pharmaceutica Inc.開發的液/液萃取，其商品名為QuicksolvTM。在此參考的美國專利5,215,756對此技術進行了全面的說明。
本發明組合物還可以包含制藥行業熟知的其它可選組份，各自的相應含量也是公知的，這類組份例如用于使最終成品可口和美觀的天然或人造甜味劑、調味劑、色素、香精、緩沖劑等，用于延長保存期的例如丁羥基茴香醚或丁羥基甲苯的抗氧化劑和例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯、山梨酸鉀或苯甲酸鈉等防腐劑。優選的可選組份還包括咖啡因。
本領域一般技術人員通過常規實驗將很快認識到或確定其它合適的組份、稀釋劑和劑型。而且，各種組合物的給藥可以通過本領域一般技術人員熟知的標準方法進行。
實施例以下實施例進一步說明了本發明范圍內的實施方式。這些實施例僅以說明為目的，而不應被理解成是對本發明的限定，因為可能有許多改變也是在以上所述的本發明的精神和范圍之內。
實施例Ⅰ可以將乳桿菌和/或雙歧桿菌的培養物冷凍干燥(或者購買凍干制品)。為了提供冷凍干燥的培養物，在無菌營養培養基(例如胰蛋白酶大豆瓊脂培養液)中培養乳桿菌和/或雙歧桿菌的接種物。離心去除培養基。分離后的細菌用平衡鹽水和5％葡萄糖溶液洗滌。然后用液氮“快速冷凍”細菌，并真空冷凍干燥。然后對凍干產品進行細菌平板計數檢測，然后稀釋，使得單位劑量組合物的平板計數為約103至約1012。
實施例Ⅱ在0至4℃，將如上所述新鮮制得的、洗滌過的低溫干燥的細菌在10毫升5％葡萄糖生理鹽水溶液中懸浮成每毫升含1至1010個細菌的濃懸浮液。為了維持會在室溫下失活的乳桿菌的生命活性，所有步驟均在0至4℃范圍內進行，除非另作說明。快速而溫和攪拌細菌懸浮液，同時加入0.2-0.4毫升藻酸鈉溶液(1.5％(重量/體積))。然后利用氮氣流通過一帶套管的14號針頭將上述混合物轉移到4升園底燒瓶中。4升園底燒瓶事先用5％白蛋白溶液洗滌，然后在65℃至少加熱了10小時，過程中使用的針頭和試管也用相同的方法處理過。
然后，利用一大注射器和氮氣流令上述混合物在加壓條件下通過一30號多研磨針頭。很小的液滴在針頭端形成，被30號針頭周圍的氮氣和空氣流干燥，然后這些液滴被收集在1.3-2％的氯化鈣水溶液中，并在此膠凝。然后，用0.08-0.13％的2-(N-環己基-氨基)乙磺酸(CHES)溶液和1.0-1.5％氯化鈣溶液至少洗滌3次。
膠凝后的液滴或小球再用至少5倍過量的0.1％CHES和1.1％氯化鈣和生理鹽水溶液洗滌。然后將洗滌后的小球“快速冷凍”在液氮中，然后低溫干燥。完成以上步驟后，膠囊化了的微生物就可用在本發明的制劑中了。
實施例Ⅲ利用常規混合方法和制片技術混合以下組份制成本發明的片劑。
成分 ％(重量)蔓越橘濃縮提取物 37.300％乳桿菌129.900％K2932(5％乙醇溶液)213.400％
Avicel(pH101)313.400％Explotab41.8％滑石粉3.600％硬脂酸鎂 0.600％1微囊化的干酪乳桿菌(Lactobacillus Caseii var.rhamnosus)(108cfu/g)2聚乙烯基吡咯烷酮3微晶纖維素的商品名，是一種高度純化的顆粒狀的纖維素4一種淀粉乙二酸鈉的品牌蔓越橘提取物用一半Acicel和K2932的乙醇溶液制成顆粒。然后通過一12目的篩，并在120°F干燥。將干燥后的顆粒過20目的篩。在過篩后的顆粒中加入乳桿菌，剩余的Acicel、Explotab和滑石粉，混合至均勻。然后在均勻的混合物中攪拌加入硬脂酸鎂。然后利用常規壓片技術將形成的顆粒化混合物壓片。
實施例Ⅳ利用常規混合技術混合以下組份制成本發明的口服膠囊。
成分％(重量)蔓越橘濃縮提取物29.900％雙歧桿菌115.000％寡聚果糖229.900％Avicel322.400％Ac Di Sol42.800％1微囊化的雙歧乳桿菌(Lactobacillus bifidus subsppennsylvanicus)(108cfu/g)2按NutraFlora FOS名稱購自Golden Technologies Company,Inc.
3微晶纖維素的商品名，是一種高度純化的顆粒狀的纖維素4一種交聯羧甲基纖維素鈉的品牌在一V-混合儀中將蔓越橘提取物、寡聚果糖、乳桿菌培養物、Avicel和AcDi Sol混合均勻。然后將單位劑量的形成的混合物裝入大小合適的硬明膠膠囊中。
實施例Ⅴ利用常規混合技術混合以下組份制成本發明的局部使用凝膠劑。
成分 ％(重量)蔓越橘濃縮提取物 0.50％乳桿菌12.50％
寡聚果糖26.00％聚丙烯酰胺和C13-14異鏈烷烴和Lauteth-734.00％PPG-14丁基醚48.00％純水 余量1微囊化的干酪乳桿菌(Lactobacillus Caseii var.rhamnosus)(108cfu/g)2按NutraFlora FOS名稱購自Golden Technologies Company,Inc.
3按Speigel名稱購自Seppic Coporation。
在一大小合適的容器中加入水。在中速(300rpm)攪拌的同時，在水中加入聚丙烯酰胺和C13-14異鏈烷烴和Lauteth-7，形成水相。將PPG-14丁基醚置于另一容器中，并加蓋。使用Lightnin三葉攪拌器在PPG-14丁基醚中加入蔓越橘提取物和寡聚果糖，并低速(100rpm)攪拌直至蔓越橘提取物和寡聚果糖溶解。將乳桿菌加入水相并低速(100rpm)攪拌直至形成均勻的溶液。將PPG-14丁基醚緩慢加入水相形成凝膠。形成的凝膠用中速攪拌至均勻。
權利要求
1．一種用于治療或預防泌尿生殖系統和腸道疾病的組合物，它包含a)抗粘附量的杜鵑花科植物中至少一種或其提取物；和b)選自乳桿菌、雙歧桿菌及其混合物中至少一種的微囊化細菌的活菌培養物。
2．根據權利要求1所述的組合物，它還包含選自二蔗酮糖、鼠李糖、寡糖、糖原及其混合物的生長因子。
3．根據權利要求1或2所述的組合物，它還包含Aw約低于0.6并有微囊化細菌懸浮于其中的包衣物質。
4．根據前述權利要求中任一項所述的組合物，它還包含選自栓劑、片劑、錠劑、口服液、懸浮劑、膠囊、明膠膠囊的載體。
5．根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述的乳桿菌選自嗜酸乳桿菌、L.gasseri、L.catenaforme、干酪乳桿菌、L.crispatus、德爾布呂克氏乳桿菌、L.jensenii、L.rogosae、發酵乳桿菌、胚芽乳桿菌及其混合物，其中所述菌種的含量為每單位劑量組合物104至102個乳桿菌細胞，每單位劑量組合物106至1010個乳桿菌細胞則更好。
6．根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所用植物或提取物選自越桔屬。
7．根據前述權利要求中任一項所述的組合物，它還包含選自維生素、礦物質、氨基酸、植化成份(phytochemicals)及其混合物的營養添加劑和/或選自松果菊屬、蔥屬、bucha、刺柏屬、人參屬、蒜素、小球藻、藻素及其混合物的其它植物提取物和/或選自鎮痛劑、胃腸道藥及其混合物的藥物活性成分。
8．一種治療或防止泌尿生殖系統疾病的局部使用組合物，它包含a)抗粘附量的杜鵑花科植物中至少一種植物或其提取物；和b)選自乳桿菌、雙歧桿菌及其混合物中至少一種的微囊化細菌的活菌培養物。
9．根據權利要求8所述的組合物，它還包含選自寡聚半乳糖、大豆寡糖、寡聚果糖及其混合物的寡糖生長因子和/或選自硼酸、馬尿酸、酒石酸，山梨酸、苯甲酸、乳酸、維生素C、檸檬酸、乙酸、丙酸、其藥學上可接受的鹽，以及它們的混合物的緩沖劑。
10．根據權利要求8或9所述的組合物，它還包含選自栓劑、陰道片劑、陰道明膠膠囊、陰道錠劑、乳膏劑、凝膠劑、軟膏劑、洗液、灌洗劑、粘膜灌洗劑、紙巾、擦手紙、褲襯、衛生棉、綿墊、尿片和失禁癥護理產品等的載體。
全文摘要
本申請涉及用于預防和/或治療泌尿生殖系統和腸道疾病的組合物,它包含有效量的杜鵑花科植物中至少一種植物或其提取物和選自乳桿菌、雙歧桿菌及其混合物中至少一種的微囊化細菌。
文檔編號A61K36/00GK1211188SQ97192254
公開日1999年3月17日 申請日期1997年2月6日 優先權日1996年2月14日
發明者P·J·薩格爾, A·M·卡雷拉 申請人:普羅克特和甘保爾公司