專利名稱：組合使用具有fkbp12親和性的化合物和神經營養因子刺激軸突生長的方法和組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及刺激神經細胞中軸突生長的方法和藥物組合物。該組合物包含神經營養量的化合物和神經營養因子，例如神經生長因子(NGF)。該方法包括用上述組合物或含有該化合物但不含神經營養因子的組合物處理神經細胞。本發明的方法可用于促進由于疾病或身體創傷導致的神經元損害的修復。
背景技術：
神經疾病與神經元細胞的死亡和損傷有關。黑質中多巴胺能神經元的損失是帕金森病的病因。雖然早老性癡呆中神經退化的分子學機理尚未確立，但腦部炎癥、β-淀粉樣蛋白和其它這類物質的沉積可抑制神經元的存活和減緩用于神經元間傳達的軸突的生長是清楚的。在患腦局部缺血或脊髓損傷的患者中，觀察到大量神經元細胞的死亡。目前，對這類疾病尚缺乏滿意的治療。
神經疾病的典型治療包括使用可抑制神經元細胞死亡的藥物。新近的一種方法包括通過促進軸突長出(outgrowth)而促進神經再生。
軸突長出對神經元的存活十分重要，其在體外由神經生長因子(NGF)刺激。例如膠質細胞系衍化的神經營養因子(GDNF)在體內和體外均表現出神經營養活性，目前正被研究用于治療帕金森病。胰島素和胰島素樣生長因子顯示出刺激大鼠嗜鉻細胞瘤PC12細胞中以及在培養的交感和感覺神經元中的軸突生長[Recio-Pinto等，神經科學雜志(J.Neurosci.)，6，第1211-1219頁(1986)]。胰島素和胰島素樣生長因子在體內和體外還刺激損傷運動神經的再生[Near等，PNAS，pp.89，11716-11720(1992)；和Edbladh等，大腦研究(Brain Res.)，641，pp.76-82(1994)]。同樣，成纖維細胞生長因子(FGF)刺激神經增殖[D.Gospodarowicz等，細胞分化(Cell Differ.)，19，p.1(1986)]和生長[M.A.Walter等，淋巴因子和細胞因子研究(Lymphokine CytokineRes.)，12，p.135(1993)]。
然而，使用神經生長因子治療神經疾病存在某些缺陷。它們不易穿透血腦屏障。它們在血漿中不穩定。此外，它們還具有較差的藥物釋放特性。
最近顯示，有些小分子在體內也刺激軸突長出。在患神經疾病的個體中，這種對軸突長出的刺激作用避免了神經元進一步退化并加速神經細胞的再生。例如雌激素顯示出促進軸索和樹突的生長，它們是在發育或受損的成人大腦中通過神經細胞發送的彼此傳達的軸突[C.Dominque Toran-Allerand等，甾體生物化學和分子生物學雜志(J.Steroid Biochem.Mol.Biol.)，56，pp.169-78(1996)；和B.S.McEwen等，大腦研究進展(Brain Res.Dev.Brain.Res.)，87，pp.91-95(1995)]。在服用雌激素的婦女中，早老性癡呆的發展減慢了。設想雌激素可補充NGF和其它神經營養蛋白，因此有助于神經元的分化和存活。
藤霉素(Tacrolimus)，一種免疫抑制藥，與NGF在刺激PC12細胞以及感覺神經節的軸突長出中表現出協同作用[Lyons等，PNAS，91，pp.3191-3195(1994)]。該化合物還對腦局部缺血病灶表現出神經保護作用[J.Sharkey和S.P.Butcher，自然(Nature)，371，pp.336-339(1994)]并提高損傷坐骨神經中軸索的再生速率[Gold等，神經科學雜志(J.Neurosci.)，15，pp.7509-16(1995)]。
雖然各種神經變性疾病可通過刺激軸突長出進行治療，但已知僅有極少的藥物具有這種性質。因此，仍十分需要具有刺激患者軸突長出能力的新型可藥用化合物和組合物。
發明概述申請人通過發現先前由一個共同申請人發明的可用于逆轉多種抗藥性的化合物也驚奇和出人意料地具有向神經活性而解決了上述問題。這些1，2，3，4-四氫化萘衍生物公開于共同未決的序列號為08/444567的美國專利申請中，該文獻公開的內容均被結合到本文中以供參考。
在外源性或內源性NGF的存在下，這些化合物刺激軸突生長出。本文公開的組合物包含一種上述的這類化合物和一種神經元生長因子。本文公開的刺激軸突長出的方法單獨采用上述氨基酸衍生物或結合采用上述氨基酸衍生物與神經元生長因子。這些方法用于治療由各種神經疾病和身體創傷引起的神經損害以及應用在離體神經的再生中。
發明詳述本發明提供包含三種成分的藥物組合物。第一種成分是式(I)化合物及其可藥用衍生物
其中A、B和C獨立地選自氫、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-[(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基]、(CH2)nAr、Y(CH2)n-Ar或鹵素；其中n＝O-4；其中Y＝O、S或NR1，其中R1＝(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或氫；其中Ar各自選自苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、甘菊環基、芴基和蒽基，2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、異噁唑基、異三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、異氮雜茚基、3H-吲哚基、二氫吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、異喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、肉啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮雜萘基、蝶啶基(peridinyl)、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基或吩噁嗪基；其中Ar可任意地含有一至三個取代基，所述取代基獨立地選自氫、羥基、鹵素、硝基、-SO3H、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-芐基、O-苯基、1，2-亞甲二氧基、羧基、嗎啉基、哌啶基、NR2R3或NR2R3羧酰胺，其中R2和R3獨立地選自氫、(C1-C5)-直鏈或支鏈烷基或芐基；其中D選自氫或(CH2)m-E，其中E是Ar或NR4R5；其中m＝1-3，R4和R5各自獨立地選自氫、(C1-C5)-直鏈或支鏈烷基或(CH2)Ar或者R4和R5可一起形成5或6元雜環。
其中X是O或NR6，其中R6選自氫、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或(CH2)m-Ar，其中m＝1-3；其中J和K獨立地為(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基取代的Ar，或者其中J和K一起形成5或6元環或者5或6元苯并稠合環；其中M是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或Ar；其中1位碳和2位碳的立體化學獨立地是R或S。
本發明的化合物包括所有旋光異構體和外消旋異構體。
本文中采用的“可藥用衍生物”是指本發明化合物或在對患者給藥時能直接或間接提供本發明化合物的任何其它化合物的任何可藥用鹽、酯或這類酯的鹽，或者它們的具有促進或增強軸突長出能力的代謝物或殘留物。
按照一種優選實施方案，本發明的藥物組合物包含式(II)化合物
和其可藥用衍生物，其中M、X、A、B、C和D如上述所定義。
按照另一種優選實施方案，本發明的藥物組合物包含式(III)化合物
和其可藥用衍生物，其中M、X、A、B、C和D如上述所定義。
按照另一種優選實施方案，本發明的藥物組合物包含式(IV)化合物
和其可藥用衍生物，其中M、X、A、B、C和D如上述所定義；J是甲基或氫；并且K是(CH2)m-Ar或(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基。在式(IV)化合物中，K更優選是取代的或未取代的芐基。式(IV)化合物中的K最優選是芐基或4-鹵代芐基。
本發明式(I)范圍內的藥物化合物實例如下表1所示。
表I
如果采用化合物的可藥用鹽，那些鹽優選由無機或有機酸和堿衍生。這類酸的鹽包括下述乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽(glucoheptanoate)、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。堿鹽包括銨鹽、堿金屬鹽(如鈉和鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣和鎂鹽)、與有機堿形成的鹽(如二環己基胺鹽、N-甲基-D-葡糖胺的鹽)和與氨基酸(如精氨酸、賴氨酸等)形成的鹽。此外，堿性含氮基團可用如下試劑季銨化，所述試劑是低級烷基鹵化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯，如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長鏈鹵化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基溴化物和其它。由此可獲得水溶性、油溶性或者水或油可分散性產物。
用于本發明組合物和方法的化合物也可通過增加適當的功能基而改性以提高選擇性生物特性。這類改性是本領域已知的，包括增強向確定生物系統(如血液、淋巴系統、中樞神經系統)的生物滲透性、增強口服利用度、增強溶解性以便于注射給藥、改變代謝和改變排泄速率。
上述各藥物組合物中的第二種成分是神經營養因子。本文采用的術語“神經營養因子”是指能刺激神經組織生長或增殖的化合物。本申請中采用的術語“神經營養因子”不包括本文所述的化合物。
本領域中已鑒別出許多種神經營養因子，任何這類的因子均可用于本發明的組合物。這類神經營養因子包括，但不限于神經生長因子(NGF)、胰島素生長因子(IGF-1)及其活性截斷衍生物(如gIGF-1)、酸性和堿性的成纖維細胞生長因子(分別為aFGF和bFGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腦衍生神經營養因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、神經膠質細胞系衍生的神經營養因子(GDNF)、神經營養蛋白-3(NT-3)和神經營養蛋白-4/5(NT-4/5)。本發明組合物中最優選的神經營養因子是NGF。
本發明的可藥用組合物中的第三種成分是可藥用載體。可用于這些藥物組合物中的可藥用載體包括，但不限于離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、緩沖物質(如磷酸鹽)、甘油、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質，如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、膠態二氧化硅、三硅酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素基的物質、聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸酯、蠟、聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本發明的組合物可口服、胃腸外、吸入噴霧、局部、直腸、鼻、頰、陰道給藥或通過植入儲庫給藥。術語“胃腸外”包括皮下、靜脈內、肌內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、損害內、顱內注射或輸注技術。所述組合物優選口服、經腹膜內或靜脈內給藥。
本發明組合物的無菌注射形式可以是水或油懸浮液。這些懸浮液可根據本領域已知的技術，用適宜的分散劑或潤濕劑和懸浮劑配制。無菌注射劑也可以是在無毒性的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的載體和溶劑中，可采用的有水、Ringer’s溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，常采用無菌的固定油作為溶劑或懸浮介質。為此，包括合成的甘油單酯或甘油二酯在內的任何溫和的固定油均可采用。脂肪酸，如油酸及其甘油酯衍生物和天然的可藥用油，如橄欖油或蓖麻油，尤其是它們的聚氧乙基化物一樣可用于注射劑中。這些油的溶液或懸浮液還可含有長鏈醇稀釋劑或分散劑，如Ph.Helv或類似的醇。
本發明的藥物組合物可以任何可口服的劑型口服給藥，所述劑型包括，但不限于膠囊、片劑、水懸浮液或水溶液。在口服片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常也加入潤滑劑，如硬脂酸鎂。以膠囊形式口服給藥時，可用的稀釋劑包括乳糖和干燥玉米淀粉。當需要口服水懸浮液時，將活性成分與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要，還可加入某些甜味劑、調味劑或著色劑。
或者，本發明的藥物組合物可以栓劑形式經直腸給藥。栓劑可通過將藥物與適宜的非刺激性賦形劑混合而制備，所述賦形劑在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因而可在直腸中熔化而釋放藥物。這類材料包括可可脂、蜂蠟和聚乙二醇。
本發明的藥物組合物還可局部給藥，尤其是當所治療的靶位包括適于局部應用的患面或器官時，包括眼、皮膚或下部腸道的疾病。用于這些患面和器官的適合的局部制劑很容易制備。
可以直腸栓劑(見上)或以適合的灌腸劑局部應用于下部腸道。還可使用局部經皮貼劑。
局部給藥的藥物組合物可配制成含有懸浮或溶于一種或多種載體中的活性成分的合適軟膏。將本發明化合物局部給藥的載體包括，但不限于礦物油、液體石蠟、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物，乳化蠟和水。或者，本發明的藥物組合物可配制成含有懸浮或溶于一種或多種可藥用載體中的活性成分的合適洗劑或霜劑形式。適宜的載體包括，但不限于礦物油、脫水山梨醇一硬脂酸酯、多乙氧基醚60、鯨蠟酯蠟、鯨蠟基硬脂醇(cetearyl alcohol)、2-辛基十二烷醇、芐醇和水。
對于眼科應用，藥物組合物可配制成在等滲的調節過pH的無菌鹽水中的微粉懸浮液或優選配制成在等滲的調節過pH的無菌鹽水中的溶液，其中可含或不含防腐劑，如氯芐烷銨。或者可將眼科用藥物組合物配制成軟膏，如凡士林軟膏。
本發明的藥物組合物還可通過鼻用氣霧劑或吸入給藥。這類組合物可采用制藥領域熟知的技術制備，可用芐醇或其它適宜的防腐劑、提高生物利用度的吸收促進劑、碳氟化合物和/或其它常規增溶劑或分散劑配制為鹽水溶液。
可與載體材料結合生產單一劑型的化合物與神經營養因子二者的量根據所治療的宿主、特定給藥方式的不同而不同。本發明藥物組合物的兩種活性成分協同作用以刺激軸突長出。因此，神經營養因子在這類組合物中的量將低于僅使用該因子的單一治療所需的量。對接受該類組合物的患者而言，組合物優選配制成的給藥劑量為0.01-100mg化合物/kg體重/天和0.01-100μg神經營養因子/kg體重/天。
應該理解，對于特定患者的特定給藥劑量和治療方案將取決于多種因素，包括使用的特定化合物活性、年齡、體重、健康狀況、性別、日常飲食、給藥時間、排泄率、聯合用藥和治療醫師的判斷以及所治療疾病的嚴重程度。活性成分的量也取決于組合物中的具體化合物和神經營養因子。
根據另一種實施方案，本發明提供刺激軸突長出的方法。在該實施方案的一方面，所述方法用于刺激患者的軸突長出，并通過向患者施用含有上述任何化合物和可藥用載體的可藥用組合物來實現。化合物在這些方法中的用量為約0.01-100mg/kg體重/天。
在該實施方案的另一方面中，所述方法用于刺激離體神經的生長。在此，可將上述化合物直接應用于培養物中的神經細胞。本發明的該方面可用于離體神經的再生。
根據另一種實施方案，刺激軸突長出的方法包括用神經營養因子，例如在上述的本發明藥物組合物中包含的那些治療患者或處理在培養物中的離體神經細胞的附加步驟。該方案包括當施用于患者時，所述化合物和神經營養劑可以單一劑量形式或獨立的多次劑量形式給藥。如果采用獨立的劑量形式，它們可同時、順次或在彼此低于約5小時的時間內給藥。
本發明的方法和組合物可用于治療由各種疾病或身體創傷引起的神經損害。這些包括，但不限于早老性癡呆、帕金森病、ALS、多發性硬化癥、中風和與中風有關的局部缺血、neural paropathy、其它神經退化性疾病、運動性神經元疾病、坐骨神經痛(sciatic crush)、外周神經病、尤其是與糖尿病有關的神經病、脊髓損傷和面神經痛。
為便于充分理解本發明，給出下面的實施例。應該理解，這些實施例僅是說明性的，而不是以任何方式對本發明的范圍構成限制。
實施例通用方法在Bruker AMX500上于500MHz記錄質子核磁共振(1H NMR)光譜。報告的化學位移值以相對于四甲基硅烷(δ0.0)的百萬分之一為單位表示(δ)。分析高效液相色譜在Waters600E或Hewlett Packard1050液相色譜儀上進行。
實施例17-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-酮(化合物1)往7-羥基-1-四氫萘酮(15.0g，92.59mmol)的二甲基亞砜(150ml)溶液中分次加入粉末碳酸鉀(30.66g，0.11mol)，然后加入4-吡啶甲基(picoyl)氯鹽酸鹽(18.22g，0.22mol)。將所得混合物于50℃加熱30分鐘。得到的深棕色混合物用水(200ml)稀釋和用乙酸乙酯(500ml)萃取。水相再用乙酸乙酯(300ml)萃取，將萃取液合并，并經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離(用40-60％乙酸乙酯己烷洗脫)，得到20.82g油狀的化合物1，該產物經放置結晶。
實施例27-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-酚(化合物2)在0℃下，往化合物1(16.41g，64.9mmol)的四氫呋喃(75ml)溶液中滴加1M二異丁基氫化鋁的甲苯溶液(97.3ml)。1小時后，用酒石酸鉀鈉水溶液使反應停止，用乙酸乙酯稀釋后，溫熱到室溫。再攪拌1小時后，分離各層，水相用乙酸乙酯再萃取兩次。將萃取液合并，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物在硅膠上進行色譜分離，用乙酸乙酯洗脫，得到12.96g的油狀化合物2，該化合物經放置結晶。
實施例2(S)和3(R)7-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-酚(化合物2(S))和1(R)-乙酰氧基-7-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘(化合物3(R))化合物2(12.96g，50.82mmol)的四氫呋喃(20ml)溶液用叔丁基甲基醚(260ml)稀釋后，加入乙酸乙烯酯(19.1ml，0.21mol)和AmanoPS-30Lipase(13.0g)。攪拌8小時后，將反應物過濾并真空濃縮，得到油狀物。經硅膠色譜分離，用20％丙酮己烷洗脫，得到7.41g白色結晶的乙酸酯3(R)。再用60％丙酮己烷洗脫，得到6.1g白色結晶的化合物2(S)。經HPLC用Chiralpak OD柱確定化合物2(S)的對映體純度為＞99.8％ee。
實施例2(R)7-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-酚(化合物2(R))往化合物3(R)(6.1g，20.9mmol)的甲醇(35ml)溶液中加入粉末碳酸鉀(2.88g，20.9mmol)。攪拌45分鐘后，將反應物真空濃縮。殘余物加到二氯甲烷和50％鹽水中。分離各層，水相用二氯甲烷再萃取。合并有機相，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到4.7g白色結晶狀的化合物2(R)。經HPLC用Chiralpak OD柱確定化合物2(S)的對映體純度為＞99.4％ee。
實施例4(S)-哌啶-1，2-二羧酸1-烯丙基酯(2-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酯(化合物4)往化合物2(663mg，2.6mmol)、Alloc-(S)-2-哌啶酸(610mg，2.86mmol)和二甲氨基吡啶(32mg，0.26mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入(3-二甲氨基丙基)-3-乙基-碳化二亞胺鹽酸鹽(548mg，2.86mmol)。攪拌24小時后，反應物用乙酸乙酯和水稀釋。分離各層，水相用乙酸乙酯再萃取。將萃取液合并，用飽和碳酸氫鈉、水、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用20％丙酮己烷洗脫，得到940mg非對映體混合物形式的化合物4。
實施例5(S)-哌啶-2-羧酸(2-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酯(化合物5)往化合物4(940mg，2.09mmol)的四氫呋喃(5.0ml)溶液中加入嗎啉(1.1ml，12.6mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(241mg，0.21mmol)。1小時后，該非均相混合物用乙酸乙酯稀釋，用50％鹽水、5％碳酸氫鈉、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用50-100％丙酮己烷洗脫，得到510mg化合物5。
實施例6和71-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酯(化合物6)和1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯(化合物7)往化合物5(510mg，1.4mmol)和3，4，5-三甲氧基苯甲酰甲酸(3，4，5-trimethoxybenzyolformic acid)(505mg，2.1mmol)的二氯甲烷(6ml)溶液中加入(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(400mg，2.1mmol)。攪拌24小時后，反應物用乙酸乙酯和水稀釋。分離各層，水相用乙酸乙酯再萃取。萃取液合并，用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用25％丙酮己烷洗脫，得到558mg非對映體混合物形式的產物。反相MPLC得到非對映體純形式的化合物6和化合物7。
或者，用實施例4-5的拆分的化合物2(s)代替化合物2，則上面的實施例直接得到化合物6；若采用化合物2(R)，則得到化合物7。化合物6旋轉異構體(rotomers)混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.53(d)，8.55(d)，7.38(s)，7.34-7.28(m)，7.17(s)，7.05(d)，7.01(d)，6.88-6.79(m)，6.64(d)6.00(t)，5.93(t)，5.39(br d)，5.05-5.00(m)，4.58(br d)，4.34(br d)，3.93-3.88(m)，3.79(s)，3.49(br d)，3.28(dt)，3.02(dt)，2.80(dt)，2.73-2.60(m)，2.36-2.28(m)，2.08-1.49(m)，1.37-1.27(m).化合物7旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.56-8.54(m)，7.35(s)，7.29-7.28(m)，7.16(s)，7.05(d)，7.00(d)，6.86-6.81(m)，6.73(d)，6.00(t)，5.87(t)，5.35(br d)，5.07-4.93(m)，4.58(br d)，4.34(m)，3.94-3.89(m)，3.84(s)，3.45(br d)，3.22(dt)，3.09(dt)，2.79(dt)，2.72-2.60(m)，2.25(m)，2.10(m)，2.03-1.47(m)，1.40-1.30(m)，1.27-1.17(m).
實施例81-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((6-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酯(化合物8)
如實施例1-2和4-6所述，用6-羥基-1-四氫萘酮代替7-羥基-1-四氫萘酮制備化合物8，得到非對映體混合物形式的化合物8。非對映體和旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.59(d)，7.38(s)，7.37(s)，7.33(m)，7.22(d)，7.18(dd)，7.04(d)，6.77(dt)，6.70(m)，6.64(m)，6.04(m)，5.92(t)，5.88(t)，5.35(m)，5.06(s)，5.05(s)，5.03(s)，4.58(m)，4.31(dd)，3.94(s)，3.93(s)，3.92(s)，3.87(s)，3.86(s)，3.47(br d)，3.27(dq)，3.13(dt)，3.07(dt)，2.87-2.61(m)，2.34(br d)，2.26(br d)，2.18-1.18(m).
實施例91-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((5-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酯(化合物9)如實施例1-2和4-6所述，用5-羥基-1-四氫萘酮代替7-羥基-1-四氫萘酮制備化合物9，得到非對映體混合物形式的化合物8。非對映體和旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.64(m)，7.39(m)，7.27(s)，7.20(d)，7.17(q)，6.98(d)，6.92(d)，6.80(t)，6.73(dd)，6.40(d)，6.10(q)，5.99(t)，5.95(t)，5.40(m)，5.12(m)，5.12(s)，5.08(d)，4.60(m)，4.35(m)，3.96(s)，3.85(s)，3.94E(s)，3.90(s)，3.89(s)，3.50(br d)，3.30(dq)，3.19-3.08(m)，3.0-2.86(m)，2.74-2.58(m)，2.38(m)，2.30(m)，2.10-1.50(m)，1.45-1.25(m).
實施例101-氨基-7-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘(化合物10)往化合物1(1.71g，6.75mmol)和甲氧胺鹽酸鹽(845mg，10.12mmol)的無水乙醇(20ml)溶液中加入粉末碳酸鉀(2.25g，16.88mmol)并將該反應物加熱回流。2小時后，將反應物冷卻并真空濃縮。殘余物用乙酸乙酯稀釋，用5％碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用40％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到1.9g肟。
往上述肟的四氫呋喃(5ml)溶液中加入1M甲硼烷的四氫呋喃(20.25ml)溶液并將該反應物加熱至回流，攪拌18小時。將反應物冷卻并用飽和的甲醇鹽酸(20ml)使反應停止，將反應物再加熱至回流并攪拌30分鐘。將反應物冷卻并濃縮至干。殘余物溶于水(10ml)中，用乙醚洗滌(3×20ml)。水相用飽和碳酸氫鈉調至pH8.0，用乙酸乙酯萃取(3×50ml)。將萃取液合并，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到945mg化合物10。
實施例11A和11B1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酰胺和1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酰胺(化合物11A和11B)如實施例4-6所述，用化合物10代替化合物2制備化合物11A和11B，得到非對映體混合物。殘余物經硅膠色譜分離，用20％丙酮∶己烷洗脫，得到化合物11A。進一步洗脫，得到化合物11B。化合物11A非對映體和旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.57(m)，7.36(d)，7.34(s)，7.30(d)，7.13(s)，7.02(t)，6.97(d)，6.82(dd)，6.79(dd)，6.73(d)，6.11(d)，5.21(m)，5.18-5.08(m)，5.02(s)，4.66(br d)，4.18(d)，3.92(s)，3.87(s)，3.81(s)，3.60(br d)，3.32(dt)，2.81-2.64(m)，2.40(br d)，2.26(m)，2.11-2.01(m)，1.84-1.65(m)，1.51-1.42(m).化合物11B非對映體和旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.58(m)，8.48(m)，7.34(s)，7.33(m)，7.29(m)，7.21(d)，7.17(s)，7.02(t)，6.86(d)，6.86-6.76(m)，6.01(d)，5.19-5.10(m)，5.02(m)，4.99(q)，4.58(br d)，4.18(d)，3.93(s)，3.89(s)，3.86(s)，3.48(br d)，3.41(dt)，2.80-2.62(m)，2.41(br d)，2.21(br d)，2.12-2.00(m)，1.88-1.40(m).
實施例12N-芐基-1-氨基-7-(吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘(化合物12)將化合物1(820mg，3.24mmol)和芐胺(354L，3.24mmol)的甲苯(10ml)溶液在共沸條件下加熱至回流。收集到計算量的水后，將反應物冷卻并真空濃縮。殘余物溶于乙醇(5ml)中并加到硼氫化鈉(246mg，6.48mmol)在乙醇(15ml)中的漿狀物中。將反應物加熱到80℃，攪拌30分鐘，冷卻并真空濃縮。殘余物用乙酸乙酯稀釋后，緩慢地加入1N鹽酸。分離各層。水相用2N氫氧化鈉調至pH7，用二氯甲烷萃取兩次。將有機相合并，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用5％甲醇∶二氯甲烷洗脫，得到1.09g油狀的化合物12。
實施例13A和13B(S)-哌啶-1，2-二羧酸1-叔丁基酯2-(N-芐基-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酰胺和(S)-哌啶-1，2-二羧酸1-叔丁基酯2-(N-芐基-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酰胺(化合物13A和13B)往化合物12(1.09g，3.16mmol)和Boc-(S)-2-哌啶酸(868mg，3.79mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(725mg，3.79mmol)。攪拌72小時后，反應物用乙酸乙酯和水稀釋。分離各層，水相用乙酸乙酯再萃取。將萃取液合并，用飽和碳酸氫鈉溶液、水、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用40％丙酮∶己烷洗脫，得到601mg固體狀化合物13A，進一步洗脫得到181mg白色固體狀化合物13B。
實施例14(S)-哌啶-2-二羧酸2-(N-芐基-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酰胺(化合物14)往化合物13A(601mg，1.08mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中加入三氟乙酸(1ml)。攪拌1.5小時后，反應物真空濃縮。殘余物用飽和碳酸鉀中和并用乙酸乙酯萃取兩次。將合并的萃取液用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮，得到450mg化合物14。
實施例151-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸2-(N-芐基-(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酰胺(化合物15)用化合物14代替化合物5，按照實施例6制備化合物15。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.52(d)，8.39(dd)，7.51(m)，7.44(s)，7.37(s)，7.37(t)，7.30-7.15(m)，7.09(d)，7.05(d)，6.99(d)，6.89(dd)，6.74(m)，6.39(m)，5.69(d)，5.41(m)，5.21(m)，5.15(q)，4.90(q)，4.72(d)，4.64(d)，3.95-3.86(m)，3.70-3.67(m)，3.57(br d)，3.54(d)，3.48(m)，2.74-2.64(m)，2.20-1.58(m).
實施例161-(2-氧代-2-(3，4，-三甲氧基苯基)-乙酰基)-哌啶-2(S)-羧酸(2-N-芐基(7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1-基)酰胺(化合物16)用化合物13B代替化合物13A，按照實施例14-15制備化合物16。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.63(d)，7.37-7.33(m)，7.30-7.22(m)，7.13-7.10(m)，7.03(dd)，6.87(brs)，6.79(dt)，5.83(m)，5.06(q)，4.96(q)，4.90(d)，4.83(q)，4.38(d)，4.13(d)，3.94(s)，3.90(s)，3.87(s)，3.85(5)，2.70-2.62(m)，2.14(m)，1.91(m)，1.88-1.68(m)，1.54-1.44(m)，1.35-1.22(m).
實施例172-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯(化合物17)
用化合物(S)-Alloc-3-羧基-1，2，3，4-四氫異喹啉代替(S)-Alloc-2-哌啶酸并使用化合物2(R)，按照實施例4-6制備化合物17。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.62(d)，8.54(d)，7.44(s)，7.33(d)，7.27(d)，7.26-7.08(m)，7.05(d)，7.01(d)，6.98(d)，6.88-6.78(m)，6.43(d)，5.93(t)，5.77(t)，5.32(t)，5.08(d)，5.02(q)，4.90(s)，4.83(q)，4.67(d)，4.57(q)，3.96-3.82(m)，3.34-3.20(m)，2.80(dt)，2.77-2.57(m)，1.88-1.82(m)，1.79-1.64(m).
實施例182-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)-乙酰基)-1，2，3，4-四氫異喹啉-3(S)-羧酸2-((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酯(化合物18)用化合物(S)-Alloc-3-羧基-1，2，3，4-四氫異喹啉代替(S)-Alloc-2-哌啶酸并使用化合物2(S)，按照實施例4-6制備化合物17。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.61(m)，7.41(s)，7.40(s)，7.31-6.96(m)，6.88-6.80(m)，6.47(m)，5.88(m)，5.74(m)，5.39(m)，5.07(d)，4.87-4.74(m)，4.60(q)，3.98-3.82(m)，3.28-3.18(m)，2.02-1.62(m)，1.53-1.45(m).
實施例193-芐基-2(S)-((2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)氨基)丙酸((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯(化合物19)用化合物(S)-Alloc-苯丙氨酸代替(S)-Alloc-2-哌啶酸并使用化合物2(R)，按照實施例4-6制備化合物19。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.57(dd)，7.66(s)，7.52(d)，7.32-7.23(m)，7.19(d)，7.05(d)，6.87(m)，6.86(s)，6.00(t)，5.03(q)，4.88(q)，3.94(s)，3.88(s)，3.20(dq)，2.78(dt)，2.69-2.63(m)，1.97-1.73(m).
實施例203-芐基-2(S)-(甲基-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)氨基)丙酸((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯(化合物20)用化合物(S)-Alloc-N-甲基-苯丙氨酸代替(S)-Alloc-2-哌啶酸并使用化合物2(R)，按照實施例4-6制備化合物20。旋轉異構體混合物的1H NMR (500MHz，CDCl3)d8.55(d)，8.52(d)，7.34(s)，7.31-7.19(m)，7.12(m)，7.06-6.99(m)，6.94-6.82(m)，6.06(t)，5.94(t)，5.05(q)，4.99(q)，4.56(q)，3.90(s)，3.91(s)，3.82(s)，3.75(s)，3.37(dd)，3.28(dd)，3.16(dd)，3.08(s)，2.99(dd)，2.82-2.62(m)，2.76(s)，2.05-1.74(m).
實施例213-芐基-2(S)-(甲基-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)氨基)丙酸((7-吡啶-4-基甲氧基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酯(化合物21)用化合物(S)-Alloc-N-甲基-苯丙氨酸代替(S)-Alloc-2-哌啶酸并使用化合物2(S)，按照實施例4-6制備化合物21。旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.58(dd)，8.53(dd)，7.36(d)，7.31-7.20(m)，7.14(s)，7.13-7.08(m)，7.04(d)，6.97(dd)，6.88-6.84(m)，6.04(m)，5.18(t)，5.13(q)，4.98(q)，4.53(q)，3.89(s)，3.88(s)，3.78(s)，3.67(s)，3.44(dd)，3.22(dd)，3.19(dd)，3.03(s)，2.98(dd)，2.82-2.62(m)，2.78(s)，2.01-1.87(m)，1.83-1.73(m).
實施例224-(6-甲基-5，7-二甲氧基苯基)丁酸(化合物22)在0℃下，往2，4-二甲氧基苯甲醛(5.1g，28.3mmol)和丙酸三苯基溴化鏻(propanoic triphenylphosphonium bromide)(14.4g，34.9mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中加入1.0M叔丁醇鉀的四氫呋喃液(70ml)。使該反應物溫熱到室溫并攪拌2小時。加入2N鹽酸溶液使反應停止，用乙酸乙酯萃取兩次。將萃取液合并，用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用5％甲醇∶二氯甲烷洗脫，得到5.81g黃色油狀物。將該油狀物溶于乙酸乙酯(20ml)，用10％鈀/碳(581mg)處理并于40psi氫化。12小時后，用氮氣置換氫氣，過濾反應物并真空濃縮，得到5.73g化合物22。
實施例236-甲基-5，7-二甲氧基-1，2，3，4-四氫萘-1-酮(化合物23)于50℃下，往化合物22(5.73g，24.07mmol)和85％磷酸(2.36g，24.07mmol)的乙腈(50ml)溶液中加入三氟乙酸酐(3.5ml，25mmol)。15分鐘后，將反應物冷卻，用乙酸乙酯稀釋并用水、10％碳酸氫鈉、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用5％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到3.54g化合物23。
實施例246-甲基-5，7-二丙氧基-1，2，3，4-四氫萘-1-酮(化合物24)往化合物23(3.54g，16.1mmol)的甲苯(50ml)溶液中分批加入氯化鋁(10.7g，80.5mmol)。一旦添加完畢，將該混合物加熱至回流，攪拌30分鐘，然后冷卻到0℃。加入1N鹽酸使反應停止，用乙酸乙酯萃取產物兩次。將萃取液合并，用水、鹽酸洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。使殘余物通過硅膠柱，用20％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到2.78g的二醇。將該二醇溶于2-丁酮(25ml)，用1-溴丙烷(6.6ml，72.6mmol)和粉末碳酸鉀(9.68g，72.6mmol)處理并加熱至回流。12小時后，將反應物冷卻，用水稀釋，乙酸乙酯萃取兩次。將萃取液合并，用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用10％乙酸乙酯∶已烷洗脫，得到3.42g化合物24。
實施例257-(吡啶-4-基甲氧基)-2-吡啶-3-基亞甲基-3，4-二氫-2H-萘-1-酮(化合物25)往化合物24(3.42g，12.4mmol)和3-吡啶甲醛(1.59g，14.9mmol)的無水乙醇(25ml)溶液中加入氫氧化鉀(350mg，6.2mmol)并使反應攪拌15分鐘。濃縮反應物，殘余物溶于乙酸乙酯，用水、鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用50％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到4.26g近白色固體狀的化合物25。
實施例266-甲基-5，7-二丙氧基-2-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1-酮(化合物26)將化合物25(3.96g，10.8mmol)和10％鈀/碳(600mg)在無水甲醇(100ml)中的混合物于1個大氣壓下氫化12小時。用氮氣置換氫氣，將反應物過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用20％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到2.72g化合物26。
實施例27和28順-6-甲基-5，7-二丙氧基-2-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1-酚(化合物27)和反-6-甲基-5，7-二丙氧基-2-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1-酚(化合物28)往化合物26(1.10g，2.98mmol)的無水甲醇(10ml)溶液中緩慢地加入硼氫化鈉(226mg，2.98mmol)。攪拌1小時后，將反應物濃縮，殘余物分配于乙酸乙酯和水之間。分離各層，有機相用鹽水洗滌，經無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。殘余物經硅膠色譜分離，用10％乙酸乙酯∶己烷洗脫，得到502mg化合物27。進一步洗脫得到475mg化合物28。
實施例29A和29B1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)哌啶-2(S)-羧酸(7-吡啶-4-基甲氧基)-2(R)-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酯和1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)哌啶-2(S)-羧酸(7-吡啶-4-基甲氧基)-2(S)-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯(化合物29A和29B)如實施例4-6所述，用化合物28代替化合物2制備化合物29A和29B，得到非對映體混合物。混合物經硅膠色譜分離，用10％丙酮∶己烷洗脫，得到化合物29A。進一步洗脫得到化合物29B。化合物29A旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.54-8.43(m)，7.60(d)，7.41(s)，7.31(s)，7.30-7.28(m)，6.61(s)，6.57(s)，5.97(d)，5.93(d)，5.40(d)，4.63(br d)，4.43(d)，3.98(s)，3.97-3.68(m)，3.93(s)，3.89(s)，3.50(br d)，3.32(dt)，3.22(dt)，3.01(dt)，2.91(m)，2.78(dq)，2.56(quintet)，2.44(m)，2.23-2.10(m)，2.17(s)，1.85-1.71(m)，1.69-1.49(m)，1.1(t)，1.03(t)，1.00(t).化合物29B旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.49(s)，8.47(s)，7.54(m)，7.36(s)，7.38-7.21(m)，6.62(s)，6.53(s)，6.03(d)，5.39(d)，4.55(br d)，4.38(d)，3.96(s)，3.95(s)，3.93(s)，3.90(s)，3.83(dt)，3.69(dt)，3.48(q)，3.44(br d)，3.16(dt)，3.009br d)，2.83(dd)，2.72-2.49(m)，2.45(br d)，2.18(m)，2.15(s)，2.14(s)，1.94-1.68(m)，1.61(m)，1.49(m)，1.35(m)，1.20(t)，1.04(t)，0.97(t).
實施例30A和30B1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)哌啶-2(S)-羧酸(7-(吡啶-4-基甲氧基)-2(R)-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1(R)-基)酯和1-(2-氧代-2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙酰基)哌啶-2(S)-羧酸(7-(吡啶-4-基甲氧基)-2(S)-(吡啶-3-基甲基)-1，2，3，4-四氫萘-1(S)-基)酯(化合物30A和30B)
如實施例4-6所述，用化合物29代替化合物2制備化合物30A和30B，得到非對映體混合物。混合物經硅膠色譜分離，用10％丙酮∶己烷洗脫，得到化合物30A。進一步洗脫得到化合物30B。化合物30A旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.48(m)，7.57(m)，7.37(s)，7.33-7.27(m)，7.20(5)，6.51(s)，6.49(s)，5.85(d)，5.38(d)，4.60(br d)，4.39(d)，3.97(s)，3.95-3.28(m)，3.94(s)，3.87(s)，3.73(t)，3.50(dd)，3.30(dt)，2.98(dt)，2.84-2.65(m)，2.51(dd)，2.42(br d)，2.32(m)，2.17(t)，1.98(m)，1.87-1.73(m)，1.68-1.50(m)，1.47(m)，1.09(t)，1.07(t)，1.04(t)，0.99(t).化合物30B旋轉異構體混合物的1H NMR(500MHz，CDCl3)d8.49(m)，8.43(d)，8.32(d)，7.57(m)，7.36(s)，7.35(s)，7.30-7.25(m)，7.18(s)，6.63(s)，6.48(s)，6.35(s)，6.02(d)，5.87(d)，5.77(d)，5.38(m)，4.66(br d)，4.44(d)，3.98-3.67(m)，3.52(br d)，3.44(brd)，3.33(dt)，3.26(dt)，3.14(dt)，3.01(br d)，2.88-2.49(m)，2.32(m)，2.17(s)，2.16(s)，2.12(s)，2.01(m)，1.87-1.72(m)，1.68-1.53(m)，1.09(t)，1.04(t)，1.02(t)，0.98(t).
實施例31為直接測定本發明中描述的化合物的神經營養活性，用如Lyons等(1994)描述的嗜鉻細胞瘤PC12細胞進行軸突長出分析。
將PC12細胞在37℃和5％CO2下在Dulbecco改進的Eagle培養基(DMEM)中保持，所述培養基中補加有10％加熱滅活的馬血清、5％加熱滅活的胎牛血清(FBS)和1％谷氨酸鹽。然后將細胞以每孔105個細胞的密度置于涂有5μg/cm2大鼠尾膠原的96孔板上并放置過夜。然后用DMEM、2％加熱滅活的馬血清、1％甘氨酸鹽、1-5ng/mlNGF(Sigma)和不同濃度的化合物(0.1nM-10nM)替換培養基。將不加化合物的105ng/mlNGF單獨加到背景對照培養液中。將高濃度的NGF(50ng/ml)加到陽性對照培養液中。
與背景對照培養液相比，本發明中描述的化合物可明顯增強軸突長出。
雖然我們在上文中提供了許多本發明的實施方案，但顯然可以改變基本結構，從而提供利用本發明方法的其它實施方案。因此，應該清楚本發明的范圍由附加的權利要求書限定，而非由上文以實施例提供的具體實施方案限定。
權利要求
1.一種可藥用組合物，包含a)神經營養量的式(I)化合物及其可藥用衍生物
其中A、B和C獨立地是氫、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-[(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基]、(CH2)n-Ar、Y(CH2)n-Ar或鹵素；其中n＝O-4；Y＝O、S或NR1；R1是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或氫；其中各個Ar獨立地選自苯基、1-萘基、2-萘基、茚基、甘菊環基、芴基、蒽基，2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、異噁唑基、異三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、中氮茚基、吲哚基、異氮雜茚基、3H-吲哚基、二氫吲哚基、苯并[b]呋喃基、苯并[b]噻吩基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、1，2，3，4-四氫喹啉基、異喹啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉基、肉啉基、2，3-二氮雜萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮雜萘基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基或吩噁嗪基；其中各個Ar可任意地含有一至三個取代基，所述取代基獨立地選自氫、羥基、鹵素、硝基、-SO3H、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、O-芐基、O-苯基、1，2-亞甲二氧基、羧基、嗎啉基、哌啶基、NR2R3或NR2R3羧酰胺；其中R2和R3獨立地選自氫、(C1-C5)-直鏈或支鏈烷基或芐基；其中D選自氫或(CH2)m-E，其中E是Ar或NR4R5；m＝1-3；并且R4和R5各自獨立地選自氫、(C1-C5)-直鏈或支鏈烷基或(CH2)Ar或者R4和R5可一起形成5或6元雜環；其中X是O或NR6，其中R6選自氫、(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或(CH2)m-Ar；m＝1-3；其中J和K獨立地為(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基取代的Ar，或者其中J和K一起形成5或6元環或者5或6元苯并稠合環；其中M是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基或Ar；其中1位碳和2位碳的立體化學獨立地是R或S；b)神經營養因子；和c)可藥用載體。
2.權利要求1的可藥用組合物，其中所述化合物具有式(II)結構
其中M、X、A、B、C和D如上所定義。
3.權利要求1的可藥用組合物，其中所述化合物具有式(III)結構
其中M、X、A、B、C和D如上所定義。
4.權利要求1的可藥用組合物，其中所述化合物具有式(IV)結構
其中M、X、A、B、C和D如上所定義；J是甲基或氫；并且K是(CH2)m-Ar或(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基。
5.權利要求4的可藥用組合物，其中J是取代或未取代的芐基。
6.權利要求1-5任一項的可藥用組合物，其中A和C獨立地選自-O-CH2-4-吡啶、-O-丙基或氫；B選自-O-CH2-4-吡啶、-O-丙基或氫；并且D選自-CH2-3-吡啶或氫。
7.權利要求1-5任一項的可藥用組合物，其中M是3，4，5-三甲氧基苯基。
8.權利要求1-5任一項的可藥用組合物，其中X選自氧、NH2或N-芐基。
9.權利要求1的可藥用組合物，其中所述神經營養因子選自神經生長因子(NGF)、胰島素生長因子(IGF)及其活性截斷衍生物、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腦衍生神經營養因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、神經膠質細胞衍生的神經營養因子(GDNF)、神經營養蛋白-3(NT-3)和神經營養蛋白-4/5(NT-4/5)。
10.權利要求9的可藥用組合物，其中所述神經營養因子是神經生長因子(NGF)。
11.一種刺激患者或離體神經細胞的軸突生長的方法，包括向所述患者或所述神經施用神經營養量的式(I)化合物及其可藥用衍生物的步驟
其中M、J、K、X、A、B、C和D如權利要求1中所定義。
12.權利要求11的方法，其中所述化合物具有式(II)結構
其中M、A、B、C和D如權利要求1所定義。
13.權利要求11的方法，其中所述化合物具有式(III)結構
其中M、X、A、B、C和D如權利要求1所定義。
14.權利要求11的方法，其中所述化合物具有式(IV)結構
中M、J、K、X、A、B、C和D如權利要求4所定義。
15.權利要求14的方法，其中J是取代或未取代的芐基。
16.權利要求11-15任一項的方法，其中A和C獨立地選自-O-CH2-4-吡啶、-O-丙基或氫；B選自-O-CH2-4-吡啶、-O-丙基或氫；并且D選自-CH2-3-吡啶或氫。
17.權利要求11-15任一項的方法，其中M是3，4，5-三甲氧基苯基。
18.權利要求11-15任一項的方法，其中X選自氧、NH2或N-芐基。
19.權利要求12的方法，其中所述化合物選自如表I中定義的化合物6-9、11A、11B、15、16、29A、29B、30A或30B中的任一個。
20.權利要求13的方法，其中所述化合物選自如表I中定義的化合物17或18中的任一個。
21.權利要求14的方法，其中所述化合物選自如表I中定義的化合物19、20或21中的任一個。
22.根據權利要求14-18任一項的方法，其中將所述化合物與可藥用載體一起配制成可藥用組合物對患者給藥。
23.權利要求22的方法，其中所述方法用于治療患有早老性癡呆、帕金森病、ALS、多發性硬化癥、中風和與中風有關的局部缺血、neural paropathy、其它神經退化性疾病、運動性神經元疾病、坐骨神經痛、外周神經病、糖尿病神經病、脊髓損傷或面神經痛的患者。
24.權利要求23的方法，包括向所述患者施用作為與所述化合物組成的多次劑量形式的一部分或作為單獨的劑量形式的神經營養因子的附加步驟。
25.權利要求24的方法，其中所述的神經營養因子選自神經生長因子(NGF)、胰島素生長因子(IGF)及其活性截斷衍生物、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腦衍生神經營養因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、神經膠質細胞衍生的神經營養因子(GDNF)、神經營養蛋白-3(NT-3)和神經營養蛋白-4/5(NT-4/5)。
26.權利要求25的方法，其中所述神經營養因子是神經生長因子(NGF)。
27.權利要求23-26任一項的方法，其中所述患者患有與糖尿病有關的外周神經病。
28.權利要求11-18任一項的方法，其中所述方法用于刺激離體神經的再生。
29.權利要求28的方法，包括將所述神經細胞與神經營養因子接觸的附加步驟。
30.權利要求29的方法，其中所述的神經營養因子選自神經生長因子(NGF)、胰島素生長因子(IGF)及其活性截斷衍生物、酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腦衍生神經營養因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、神經膠質細胞衍生的神經營養因子(GDNF)、神經營養蛋白-3(NT-3)和神經營養蛋白-4/5(NT-4/5)。
31.權利要求30的方法，其中所述神經營養因子是神經生長因子(NGF)。
全文摘要
本發明涉及刺激神經細胞中軸突生長的方法和藥物組合物。該組合物包含神經營養量的化合物和神經營養因子，例如神經生長因子(NGF)。該方法包括用上述組合物或含有該化合物但不含神經營養因子的組合物處理神經細胞。本發明的方法可用于促進由于疾病或身體創傷導致的神經元損害的修復。
文檔編號A61K31/4725GK1239435SQ97180249
公開日1999年12月22日 申請日期1997年11月13日 優先權日1996年11月13日
發明者R·E·采勒, M·蘇 申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司