專利名稱：新的2,3,5－三甲基－4－羥基－n－酰苯胺衍生物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的N-酰苯胺衍生物及其制備方法與在治療人體疾病中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及這些衍生物在用于治療血膽固醇過多癥和動脈粥狀硬化癥的藥物制備中的應(yīng)用。
飲食中的膽固醇是以游離膽固醇的形式被腸道細(xì)胞吸收，隨后在血清ACTA酶(?；?CoA膽固醇O-?；D(zhuǎn)移酶)的作用下酯化。對ACTA的抑制可以防止膽固醇的腸道吸收及其在動脈組織內(nèi)的堆積。另外，經(jīng)氧化后的低密度脂蛋白(LDL)可被清除劑受體捕獲，進(jìn)而形成起泡細(xì)胞，這種細(xì)胞是動脈粥樣硬化蝕斑的起始位點(D．Steinberg等人，英國，J．Med．320，915-924，1989)。
本發(fā)明的目的是制得新的具有降低血膽固醇作用和抗氧化作用的衍生物。該衍生物對于LDL的數(shù)量和性質(zhì)都產(chǎn)生影響，以便降低LDL致動脈粥樣硬化的可能性及其對血管壁造成的長效有害作用。
本發(fā)明化合物如通式1所示
其中·R1和R2，二者相同或不同，彼此獨立地代表-氫-直鏈或支鏈的C1-C6烷基-芳基，例如苯基、萘基或吡啶基，這些基團(tuán)視具體情況而定被一個或多個C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基或鹵素基團(tuán)取代·R3表示直鏈或支鏈的C6-C15烷基鏈，或視具體情況而定被一個或多個C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基或鹵素基團(tuán)取代的苯基·A代表氧原子或硫原子或次硫酸基。
由于通式Ⅰ所示的化合物可能含有不對稱中心，所以本發(fā)明包括該類化合物的全部立體異構(gòu)體和對映體及其混合物。
通式Ⅰ所示化合物可以用于制備藥物組合物或藥物，這些藥物可用于治療高血膽固醇癥或動脈粥樣硬化疾病。
最后，本發(fā)明還涉及通式Ⅰ化合物的制備方法。
通式Ⅰ所示化合物可以根據(jù)下列方法得到(反應(yīng)流程圖Ⅰ)方法Aa)將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與α-鹵代酰鹵Ⅱ反應(yīng)，反應(yīng)是在含堿例如三乙胺的條件下進(jìn)行，反應(yīng)得到化合物Ⅲ；其中Hal和Hal’代表溴或氯，R1和R2與上述定義相同。b)將化合物Ⅱ與衍生物Ⅳ反應(yīng)，反應(yīng)是在鈉／甲醇或叔丁醇鉀／叔丁醇介質(zhì)中進(jìn)行，得到化合物Ⅰ；其中R3和A與上述定義相同。方法B-將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與α-鹵代酸Ⅴ反應(yīng)，反應(yīng)在活化劑和堿共存條件下進(jìn)行，得到化合物Ⅲ，隨后按照與方法A-b相同的步驟進(jìn)一步反應(yīng)；其中Hal、R1和R2基團(tuán)與上述定義相同；所用活化劑例如是二環(huán)己基碳化二亞胺或2氯-1-甲基碘化吡啶；所用堿例如是三乙胺。方法C將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與衍生物Ⅳ反應(yīng)，反應(yīng)在活化劑和堿共存的條件下進(jìn)行，得到化合物Ⅰ；其中R1、R2、R3和A基團(tuán)與上述定義相同；所用的活化劑例如是二環(huán)己基碳化二亞胺或2-氯-1-甲基碘化吡啶；所用的堿例如是三乙胺。
反應(yīng)流程圖Ⅰ
本發(fā)明還可以通過下列非限定性實施例作為優(yōu)選實施方案來進(jìn)一步說明。實施例1(方法A)2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-丙酰苯胺
a-2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-溴-N-丙酰苯胺la在氮氣氛中，向2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物(1．87g；0．01mol)的二甲基甲酰胺溶液中加入三乙胺(3．48ml；0．25mol)。隨后再滴加α-溴代丙酰氯(1．32ml；0．0125mol)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時。
用水稀釋后，用乙酸乙酯萃取。有機相用1N鹽酸和水洗滌，然后干燥(MgSO4)并真空濃縮至干。殘留物溶于己烷，隨后過濾、干燥，得到化合物1a(2．10g)。M．P．=186℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．61(乙酸乙酯)b-2’，3’，5’三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-丙酰苯胺1將n-十二烷基硫醇(2．11ml；0．0088mol)溶于甲醇(20ml)中，再加入甲醇鈉(0．47g；0．0088mol)。15分鐘后再加入化合物1a(2．10g；0．0073mol)，將反應(yīng)混合物升溫至60℃并保持2小時。隨后，蒸除甲醇，所得殘留物用乙酸乙酯萃取。
用水洗滌并干燥(MgSO4)有機相，然后將其在真空下濃縮至干。采用閃式色譜法純化所得的殘留物(洗脫液30／70的乙酸乙酯／已烷)，得到1．24g白色晶體(1)。M．P．=123℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．59(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例22’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-乙酰苯胺2
該化合物按照與實施例1相同的方法采用溴代乙酰氯進(jìn)行制備。M．P．=99℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．51(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例32’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-丁酰苯胺3
該化合物按照與實施例1相同的方法采用2-溴丁酰溴進(jìn)行制備。M．P．=127℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．61(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例42’，3’，5，-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-己酰苯胺4
該化合物按照與實施例1相同的方法采用2-溴己酰溴進(jìn)行制備。M．P．=80℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．36(30／70的乙酸乙酯／己烷)實施例52’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-異戊酰苯胺5
該化合物按照與實施例1相同的方法采用2-溴異戊酰氯制備。M．P．=123℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．30(30／70的乙酸乙酯／己烷)實施例62’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-戊酰苯胺6
該化合物按照與實施例1相同的方法采用2-溴戊酰溴制備。M．P．=116℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．39(30／70的乙酸乙酯／己烷)實施例7(方法B)2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-苯基-N-乙酰苯胺7
a)-2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-氯-α-苯基-N-乙酰苯胺7a在氮氣氛中，向2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物(1．27g；0．0067mol)的二氯甲烷(35ml)懸浮液中加入三乙胺(0．94ml；0．0067mol)。
然后加入α-氯代苯基乙酸(1．27g；0．0074mol)和二環(huán)己基碳化二亞胺(1．54g；0．0074mol)，反應(yīng)混合物在室溫下劇烈攪拌2小時。
此后，過濾生成的二環(huán)己基脲，依次用0．1N鹽酸、水、鹽水溶液洗滌有機相。干燥(MgSO4)后在真空下蒸發(fā)至干，用乙醚溶解殘留物。過濾出生成的晶體并干燥，得到化合物7a(1．22g)。M．P．=199℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．68(50／50的乙酸乙酯／己烷)b)-2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-苯基-N-乙酰苯胺7以化合物7a為起始物，采用實施例1b的方法制備化合物7M．P．=129℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．64(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例8(方法C)2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-異丁酰苯胺8
將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物(3．52g；0．018mol)、α-十二烷硫基異丁酸(5．4lg；0．018mol)和三乙胺(9．4ml；0．067mol)依次加入到2-氯-1-甲基碘化吡啶(5．75g；0．022mol)的氯仿(225ml)懸浮液內(nèi)，然后，加熱回流2小時。隨后，冷卻反應(yīng)混合物，用乙醚(350ml)稀釋并過濾。有機相依次用1N鹽酸、水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)后在真空下濃縮至干，殘留物用異丙醚溶解并過濾，得到7．32g白色結(jié)晶化合物8。M．P．=71℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．65(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例92，，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-對氯苯硫基-N-異丁酰苯胺9
以α-對氯苯硫基異丁酸為起始物，采用實施例8的方法制得化合物9。M．P．=134℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．54(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例102’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-對氯苯基亞磺?；?N-異丁酰苯胺10
以α-對氯苯基亞磺?；惗∷釣槠鹗嘉铮捎脤嵤├?的方法制得化合物10。M．P．=157-158℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．33(50／50的乙酸乙酯／己烷)實施例112’，3’，5’-三甲基4’-羥基-α對氯苯氧基-N-異丁酰苯胺11
向冷卻至0℃的對氯苯氧異丁酸(2．14g；0．01mol)和三乙胺(1．48ml；0．0105mol)的四氫呋喃(25ml)溶液中滴加氯甲酸乙酯(0．96ml；0．01mol)。攪拌20分鐘后，將所得的混合酸酐緩慢加入到2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物(1．87g；0．01mol)的二甲基甲酰胺(10ml)和三乙胺(1．48ml；0．0105mol)懸浮液中。
在持續(xù)通入氮氣流和5℃條件下，將反應(yīng)混合物繼續(xù)攪拌1小時，再在室溫下攪拌12小時，然后傾入水中并用乙酸乙酯萃取。有機相用水、鹽水洗滌，MgSO4干燥，隨后真空蒸發(fā)至干。殘留物在乙醚中結(jié)晶并在乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到化合物11。M．P．=175℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．30(30／70的乙酸乙酯／己烷)實施例122’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷基亞磺?；鵑-異丁酰苯胺12
以α-十二烷基亞磺酰基異丁酸為起始物，采用實施例8的方法制得化合物12。M．P．=73℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．43(乙酸乙酯／己烷)實施例132’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-(3，5-二叔丁基-4-羥基)苯基-N-乙酰苯胺13
以α-十二烷硫基-3，5二叔丁基-4-羥基苯基乙酸為起始物，采用實施例11的方法制得化合物13。M．P．=150℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．31(乙酸乙酯／己烷30-70)實施例142’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-對甲氧基苯基N-乙酰苯胺14
以α-十二烷硫基-α-對甲氧基苯基乙酸為起始物，采用實施例7a的方法制得化合物14。M．P．=122℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．74(30／70的乙酸乙酯／己烷)實施例152’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-萘基N-乙酰苯胺15
以α-十二烷硫基-α-萘基乙酸為起始物，采用實施例7a的方法制得化合物15。M．P．=134℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．60(95／5的二氯甲烷／乙酸乙酯)實施例16(+)-2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-苯基-N-乙酰苯胺16
以(+)α-十二烷硫基-α-苯基乙酸為起始物，按照實施例7a的方法制得化合物16。M．P．=128℃TLCMERK產(chǎn)60F254硅膠，Rf=0．64(50／50的乙酸乙酯／己烷)αD25=+34．7°(C=0．5；乙醇)在藥理實驗中，本發(fā)明化合物對高血膽固醇癥和動脈粥樣硬化疾病表現(xiàn)出了顯著的治療功效。
一方面，我們研究了本發(fā)明化合物對大鼠ACAT的抑制作用及其血膽固醇降低作用，另一方面，本發(fā)明還對這些化合物的抗氧化作用進(jìn)行了研究。1)ACAT抑制作用采用H．Chautan等人所述的技術(shù)(分析生物化學(xué)，173，436-439，1988)，通過體外試驗對本發(fā)明化合物的ACAT(?；?CoA膽固醇O-?；D(zhuǎn)移酶)抑制作用進(jìn)行評價。
借助本發(fā)明化合物得到了以50％抑制濃度(IC50)表示的活性結(jié)果，結(jié)果記錄在表1中
表1
2)血膽固醇降低活性以Altromin C 1061類型的致高血膽固醇飲食來喂食雄鼠(160-180g)并持續(xù)4天，在此同時還口服本發(fā)明化合物；其中本發(fā)明化合物懸浮在含有2％吐溫80的蒸餾水溶液中。
第五天，將未禁食的受試動物用乙醚麻醉，自其腹部主動脈部位取血并將血樣置于EDTA中。立即離心該血樣并將血漿貯存在4℃下。
采用CHOD-PAP方法(Boehringer-Mannheim參考號237574)分析血漿內(nèi)膽固醇含量。半數(shù)有效劑量(ED50)是指相對于空白受試動物而言，將血漿膽固醇濃度降低至一半時的劑量
3)抗氧化活性a)化學(xué)過氧化作用在Fe3+和ADP(腺苷二磷酸)存在下，二羥基富馬酸發(fā)生自氧化作用，產(chǎn)生氧自由基。氧自由基使肝微粒體脂質(zhì)發(fā)生過氧化作用。
在大鼠肝臟微粒體內(nèi)的這種過氧化作用可按照S．Y．H Tse等人公開的硫巴比妥酸檢測技術(shù)(形成TBARS)來測定。(生物化學(xué)藥學(xué)，第42卷，第3期，459-464頁，1991
b)LDL的氧化人體LDL(Sigma L 2139)被10μM CuSO4氧化，保溫6小時后，根據(jù)TBARS技術(shù)，利用分光光度計在532nm下估譯過氧化作用。
本發(fā)明化合物是降血膽固醇藥物，該類化合物可以抑制ACAT和氧化劑，因此可以用于治療高血膽固醇癥和動脈粥樣硬化疾病。
本發(fā)明藥物組合物可制成口服、腸胃外或局部給藥的劑型，例如膠囊、片劑、粒劑、溶液、糖漿劑或混懸液，該組合物中還可以含有適當(dāng)?shù)馁x形劑。
日劑量在10-3000mg范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1)新的N-酰苯胺衍生物，其特征在于如通式Ⅰ所示
其中·R1和R2，二者相同或不同，彼此獨立地代表·氫·直鏈或支鏈的C1-C6烷基·芳基例如苯基、萘基或吡啶基，這些基團(tuán)視具體情況而定被一個或多個C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基或鹵素取代；·R3表示直鏈或支鏈的C6-C15烷基鏈，或視具體情況而定被一個或多個C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、羥基或鹵素取代的苯基；·A代表氧原子或硫原子或次硫酸基；含有一個或多個不對稱中心的化合物包括其全部立體異構(gòu)體或?qū)τ丑w及其混合物。
2)根據(jù)權(quán)利要求1的通式Ⅰ化合物，選自下列物質(zhì)2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-丙酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-乙酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-己酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-異戊酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-N-戊酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-苯基-N-乙酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-(十二烷硫基-)N-異丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-對氯苯硫基-N-異丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-對氯苯基亞磺?；?N-異丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-對氯苯氧基-N-異丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷基亞磺?；?N-異丁酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-(3，5-二叔丁基-4-羥基)苯基-N-乙酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’-羥基-α-十二烷硫基-α-對甲氧苯基N-乙酰苯胺；2’，3’，5’-三甲基-4’羥基-α-十二烷硫基-α-萘基-N-乙酰苯胺；(+)-2’，3’，5’-三甲基4’-羥基-α-十二烷硫基-α-苯基-N-乙酰苯胺；
3)權(quán)利要求1或2的化合物的制備方法，其特征在于a)-第一步，將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與α-鹵代酰鹵Ⅱ反應(yīng)，反應(yīng)在堿，例如三乙胺存在下進(jìn)行，反應(yīng)得到中間體Ⅲ；其中，R1和R2與權(quán)利要求1中的定義相同，Hal代表溴或氯原子；
b)-將中間體Ⅱ與衍生物R3(A)H反應(yīng)，反應(yīng)是在鈉／甲醇或叔丁醇鉀／叔丁醇介質(zhì)中進(jìn)行，其中R3和A與權(quán)利要求1的定義相同。
4)權(quán)利要求3的化合物的制備方法，其特征在于將2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與α-鹵酸在活化劑和堿共存的條件下反應(yīng)，得到中間體Ⅲ；其中，該活化劑例如是二環(huán)己基碳化二亞胺或2-氯-1-甲基碘化吡啶；所用堿例如是三乙胺。
5)權(quán)利要求1和2的化合物的制備方法，其特征在于2，3，6-三甲基-4-氨基苯酚鹽酸化物與衍生物Ⅵ反應(yīng)
其中R1、R2、R3和A的定義如權(quán)利要求1中定義，在堿如三乙胺存在下，反應(yīng)經(jīng)氯甲酸乙酯或二環(huán)己基碳化二亞胺或2-氯-1-甲基碘化吡啶活化。
6)權(quán)利要求1或2的通式Ⅰ化合物作為治療用藥物，尤其是作為治療例如高血膽固醇癥和動脈粥樣硬化之類疾病的藥物的用途。
7)藥物組合物，其特征在于除了可藥用載體以外，還含有至少一種權(quán)利要求1或2的通式Ⅰ所示化合物。
8)權(quán)利要求1或2中通式Ⅰ所示化合物在治療高血膽固醇癥和動脈粥樣硬化疾病的藥物制備方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及了新的如通式Ⅰ所示的2,3,5－三甲基－4－羥基－N－酰苯胺衍生物,其中,優(yōu)選R
文檔編號A61P5/36GK1205689SQ9619927
公開日1999年1月20日 申請日期1996年11月27日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月28日
發(fā)明者J－F·帕托伊西奧, J－M·奧丁, A·戴龍, P·歐姆司, D·瓊奎羅 申請人:皮埃爾法博赫藥品公司