專利名稱：在受體控制鈣通道新部位顯活性的治療神經性疾病化合物的制作方法
這是公開未決的申請美國登記號08/485038(1995年6月7日申請)的繼續申請，其前一申請為公開未決的國際專利申請PCT/US94/12293(1994年10月26日申請，指定美國)的繼續申請，其前一申請為公開未決的申請美國登記號為08/288688(1994年8月9日申請)的繼續申請，其前一申請為公開未決的申請美國登記號為08/194210(1994年2月8日申請)的繼續申請，其前一申請為美國登記號為08/014813(1993年2月8日申請，現已經放棄)的繼續申請，在此，全部結合在本發明中作為參考。
本發明的范圍本發明涉及用作神經保護劑(neuroprotectants)、抗驚厥藥、抗焦慮藥、止痛藥、肌肉松弛藥或用于全麻的輔助劑。本發明也涉及用于治療下列神經性疾病的方法，所述疾病包括(但不限于)普遍和病灶性局部缺血和出血的突然發作(global and focal ischemic and hemorrhagicstroke)、頭部創傷、脊髓損傷、缺氧導致的神經細胞損傷[例如在心博停止或新生期痛苦(neonatal distress)中]、癲癇、焦慮和神經變性的疾病例如Alzheimer’s病、Huntington’s病、Parkinson’s病和肌萎縮性側索硬化癥(ALS)。本發明也涉及篩選在受體控制的鈣通道上新部位顯活性的化合物的方法，從而具有作為神經保護劑、抗驚厥藥、抗焦慮藥、止痛藥、肌肉松弛藥或用于全麻的輔助劑的治療用途和/或具有治療上述神經性疾病的可能的治療用途。
本發明的背景以下介紹相關技術，它們不被認為是本權利要求的現有技術。
谷氨酸是一種在哺乳動物中重要的興奮性的神經遞質。谷氨酸與一種或多種谷氨酸受體(它們在藥理學上可以被分成數個亞型)結合或相互作用。在哺乳動物的中樞神經系統(CNS)中，有三個主要亞型的離子轉變谷氨酸受體，在藥理學上被選擇性的拮抗劑N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)、紅藻氨酸鹽(kainate)(KA)和α-氨基-3-羥基-5-甲基異噁唑-4-丙酸(AMPA)所定義。所述NMDA受體與各種神經病理有關，包括突然發作、頭部創傷、脊髓損傷、癲癇、焦慮和神經變性的的疾病例如Alzheime’s病(Watkins and Collingridge，The NMDA Receptor，OxfordIRL Press，1989)。NMDA受體在感受傷害和止痛中的作用也已經被假定(Dickenson，A cure for wind-upNMDA receptor antagonistsas potential analgesics.Trends Pharmacol.Sci.11307，1990)。最近，已經廣泛研究了AMPA受體對于所述神經病理的可能的貢獻(Fisher andBogousslavsky，Evolving toward effective therapy for acute ischemic strokeJ.Amer.Med.Assoc.270360，1993；Yamaguchi et al.，Anticonvulsantactivity of AMP A/kainate antagonistsComparison of GYKI 52466 andNBQX in maximal electroshock and chemoconvulsant seizure models.Epilepsy Res.15179，1993)。
當被谷氨酸(內源性神經遞質)激活時，NMDA受體容許細胞外的鈣(Ca2+)和鈉(Na+)通過有關的離子通道流入。所述NMDA受體比紅藻氨酸鹽或AMPA受體使得更多的Ca2+流入(參見下述)，是受體控制的Ca2+通道的一個實例。一般來說，該通道只是短暫的開放，使得細胞內的Ca2+([Ca2+])濃度有局限性地和短暫地提高，進而，它改變了細胞的功能活性。然而，由NMDA受體慢性刺激所導致的[Ca2+]的持續地增加對細胞有毒害作用并導致細胞死亡。據認為由NMDA受體刺激所導致的[Ca2+]的慢性增加是突然發作后的神經變性的主要原因(Choi，Glutamate neurotoxicity and diseases of the nervous system.Neuron 1623，1988)。據說過量刺激NMDA受體也與某些形式的癲癇(Dingledine et al.，Excitaory amino acid receptors in epilepsy.Trends Pharmacol.Sci.11334，1990)、焦慮(Wiley and Balster，Preclinical evaluation of N-methl-D-aspartate antagonisis for antianxiety effectsA review.InMultiple Sigmaand PCP Receptor LigandsMechanisms for Neuromodulation andNeuroprotection？NPP Books，Ann Arbor，Michigan，pp.801-815，1992)、神經變性的疾病(Meldrum and Garthwaite，Excitatory amino acidneurotoxicity and neurodegenerative disease.Trends Pharmacol.Sci.11379，1990)和痛覺過敏癥(Dickenson，A cure for wind-upNMDAreceptor antagonists as potential analgesics.Trends Pharmacol.Sci.11307，1990)的發病機理有關。
NMDA受體-離子載體復合體(NMDA receptor-ionophore complex)的活性受可以作為選擇性拮抗劑靶向的不同調節部位的調節。競爭性的拮抗劑例如膦酸酯AP5作用在谷氨酸結合部位，而非競爭性的拮抗劑例如苯環己哌啶(PCP)、MK-801或鎂(Mg2+)在有關的離子通道(離子載體)內作用。也存在可以選擇性地被化合物例如7-氯犬酸喹啉酸阻滯的甘氨酸接合部位。有證據顯示甘氨酸作為協同激動劑起作用，以致為完全激發NMDA受體介導的應答，谷氨酸和甘氨酸兩者均是需要的。另外用于調節NMDA受體功能的可能部位包括鋅(Zn2+)結合部位和∑-配基結合部位。此外，內源性多胺例如精胺被認為結合在特定的部位，因而強化NMDA受體的功能(Ransom and Stec，Cooperativemodulation of[3H]MK-801 binding to the NMDA receptor-ion channelcomplex by glutamate，glycine and polyamine.J.Neurochem.51830，1988)。多胺對于NMDA受體功能的強化作用可以通過多胺的特定受體部位來介導；顯示激動劑、拮抗劑和逆轉激動劑活性的的多胺已經被介紹(Reynolds，Arcaine is a competitive antagonist of the polyaminessite on the NMDA receptor.Europ.J.Pharmacol.177215、1990；Williamset al，Characterization of polyamines having agonist，antagonist，andinverse agonist effects at the polyamine recognition site of the NMDAreceptor.Neuron 5199，1990)。放射配基結合研究已經另外顯示較高濃度的多胺抑制NMDA受體的功能(Reynolds and Miller，Ifenprodil is anovel type of NMDA receptor antagonistInteraction with polyamines.Molec.Pharmacol.36758，1989；Williams et al.，Effects of polyamines onthe binding of[3H]MK-801 to the NMDA receptorPharmacologicalevidence fbr the existence of a polyamine recognition site.Molec.Pharmacol.36575，1989；Sacaan and Johnson，Characterization of thestimulatory and inhibitory effects of polyamines on [3H]TCP binding to theNMDA receptor-ionophore complex.Molec.Pharmacol.37572，1990)。多胺對于NMDA受體的這種抑制作用可能是非特異作用(即不經過多胺受體)，因為膜片鉗法(patch clamp)電生理學研究已經顯示所述抑制作用是由以前在多胺受體上顯示為激動劑或拮抗劑作用的化合物產生的(Donevan et al.，Arcaine Blocks N-Methyl-D-Aspartate ReceptorResponses by an Open Channel MechanismWhole-Cell and Single-Channel Recording Studies in Cultured Hippocampal Neurons.Molec.Pharmcol 41727，1992；Rock and Macdonald，Spermine and RelatedPolyamines Produce a Voltage-Dependent Reduction of NMDA ReceptorSingle-Channel Conductance.Molec.Pharmacol.42157，1992)。
最近的研究已經顯示谷氨酸受體的分子多樣性(reviewed byNakanishi，Molecular Diversity of Glutamate Receptors and Implicationsfor Brain Function.Science 258597，1992)。迄今已經鑒定了至少五種不同的NMDA受體亞單位(NMDAR1和NMDAR2A-NMDAR2D)，每一個被不同的基因所編碼。在NMDAR1中，變化的拼接產生至少六種另外的異構形式。顯然，NMDAR1是需要的亞單位，及NMDAR1與不同數量的NMDAR2結合形成完全功能化的NMDA受體-離子載體復合物。從而，NMDA受體-離子載體復合物可以被定義為由至少NMDAR1和NMDAR2亞單位組成的雜低聚物結構；至于尚未發現的存在其它的亞單位被排出在該定義之外。已證明NMDAR1具有作為谷氨酸、甘氨酸、Mg2+、MK-801和Zn2+的結合部位。作為ε-配基的和多胺的結合部位尚未局限于NMDA受體亞單位，盡管最近報道芐哌酚醇在NMDAR2B亞單位上比在NMDAR2A亞單位上更有效力(Williams，Ifenprodil discriminates subtypes of the N-Methyl-D-aspartatereceptorselectivity and mechanisms at recombinant heteromeric receptors.Mol.Pharmacol.44851，1993)。
AMPA和紅藻氨酸鹽受體的幾個不同的亞單位也已經被克隆(reviewed by Nakanishi，Molecular diversity of glutamate receptors andimplications for brain function.Science 258597，1992)。其中特別相關的是稱為GluR1、GluR2、GluR3和GluR4(也稱為GluRA-GluRD)的AMPA受體，其中每一個以兩種形式之一存在[稱為來回換位(flip andflop)]，它們由RNA變化拼接而成。當以均聚物或雜聚物受體表示時，GluR1、GluR3和GluR4可容許透過Ca2+，從而是受體控制的Ca2+通道的實例。單獨GluR2的表達或與其它亞單位的結合的表達產生主要不透過Ca2+的受體。因為大多數研究的最原始的AMPA受體在原位是不透過Ca2+的(如上所討論的)，據認為在原處的該受體具有至少一個GluR2亞單位。
此外，基于以下事實假設GluR2亞單位在功能上不同，所述事實為在假定存在的成孔橫跨膜區域II中，GluR2含有精氨酸殘基；在該關鍵性的區域(稱為Q/R部位，其中Q和R為分別代表谷氨酸和精氨酸的單個字母)中，GluR1、GluR3和GluR4均含有谷氨酸殘基。所述AMPA受體的活性受到許多可以作為選擇性拮抗劑的目標的調節部位的調節(Honore et al.，Quinoxalinedionespotent competitive non-NMDA glutamate receptor antagonists.Science 241701，1988；Donevanand Rogawski，GYKI 52466，a 2，3-benzodiazepine，is a highly selective，noncompetitive antagonist of AMPA/kainate receptor responses.Neuron1051，1993)。競爭性拮抗劑例如NBQX作用于谷氨酸結合部位，而化合物例如GYKI 52466似乎非競爭性地作用于相關的變構部位。
據認為作為在NMDA受體上的競爭性或非競爭性的拮抗劑起作用的化合物在各種體外神經毒性測試中(Meldrum and Garthwaite，Excitatory amine acid neurotoxicity and neurodegenerative disease.TrendsPharmacol.Sci.11379，1990)和在體內突然發作模型中可有效地防止神經細胞的死亡(Scatton，Therapeutic potential of NMDA receptorantagonists in ischemic cerebrovascular disease in Drug Strategies in thePrevention and Treatment of Stroke，IBC Technical Services Ltd.，1990)。該化合物也是有效的抗驚厥藥(Meldrum，Excitatory amino acidneurotransmission in epilepsy and anticonvulsant therapy in ExcitatoryAmino Acids.Meldrum，Moroni，Simon，and Woods(Eds.)，New YorkRaven Press，p.655，1991)、抗焦慮藥(Wiley and Balster，Preclinicalevaluation of N-methyl-D-aspartate antagonists for antianxiety effectsAreview.InMultiple Sigma and PCP Receptor LigandsMechanisms forNeuromodulation and Neuroprotection？NPP Books，Ann Arbor，Michigan，pp.801-815，1992)和止痛藥(Dickenson，A cure for wind-upNMDAreceptor antagonists as potential analgesics.Trenks Pharmacol.Sci.11307，1990)，某些NMDA受體拮抗劑可以減輕與Alzheimer’s病有關的癡呆(Hughes，Merz’novel approach to the treatment of dementia Script No.166624，1991)。
類似，經深入細致地研究，AMPA受體拮抗劑可以作為治療上述神經性疾病的可能的治療劑。已證實AMPA受體拮抗劑分別在局部缺血突然發作和癲癇的動物模型上具有神經保護活性(Fisher andBogousslavsky，Evolving toward effective therapy for acute ischemic strokeJ.Amer.Med.Assoc.270360，1993)和抗驚厥活性(Yamaguchi et al.，Anticonvusant activity of AMPA/kainate antagonistscomparison of GYKI52466 and NBQX in maximal electroshock and chemoconvulsant seizuremodels.Epilepsy Res.15179，1993)。
存在于哺乳動物的CNS中的煙堿膽堿能受體是另一類受體控制的Ca2+通道例子(Deneris et al.，Pharmacological and functional diversityofneuronal nicotinic acetylchloline receptors.Trends Pharmacol.Sci.1234，1991)。已經克隆了幾種不同的受體亞單位，這些亞單位可以被表達(例如在非洲蟾蜍的卵母細胞中)形成具有其相關的陽離子通道的功能受體。假設該受體-離子載體復合物為雜五聚物結構。煙酸受體控制的Ca2+通道在神經性疾病例如局部缺血性突然發作、癲癇和神經變性的疾病的病理中的可能作用還基本上未做探究。
以前已證實某些蜘蛛和黃蜂的毒液含有對哺乳動物的CNS中的谷氨酸受體具有抑制活性的芳基烷基胺毒素(也稱作多胺毒素、芳胺毒素、酰基多胺毒素或多胺酰胺毒素)(其綜述見Jackson and Usherwood，Spider toxins as tools for dissecting elements of excitatory amino acidtransmission.Trends Neurosci.11278，1988；Jackson and Parks，SpiderToxinsRecent Applications In Neurobiology.Annu.Rev.Neurosci.12405，1989；Saccomano et al.，Polyamine spider toxinsUnique pharnacologicaltools.Annu.Rep.Med.Chem.24287，1989；Usherwood and Blagbrough，Spider Toxins Affecting Glutamate ReceptorsPolyamines in TheraputicNeurochemistry.Pharmacol.Therap.52245，1991；Kawai，NeuroactiveToxins of Spider Venoms.J.Toxicol.ToxinRev.10131，1991)。最初報道芳基烷基胺毒素是在哺乳動物的CNS中的谷氨酸受體的AMPA/紅藻氨酸鹽亞型的選擇性拮抗劑(Kawai et al.，Effect of a spider toxin onglutaminergic synapses in the mammalian brain.Biomed.Res.3353，1982；Saito et al.，Spider Toxin(JSTX)blocks glutamate synapse in hippocampalpyramidal neurons.Brain Res.346397，1985；Saito et al.，Effects of aspider toxin(JSTX)on hippocampal CA1 neurons in vitro.Brain Res.48116，1989；Akaike et al.，Spider toxin blocks excitatory amino acidresponses in isolated hippocampal pyramidal neurons.Neurosci.Lett.79326，1987；Ashe et al.，Argiotoxin-636 blocks excitatory synaptictransmission in rat hippocampal CA1 pyramidal neurons.Brain Res.480234，1989；Jones et al.，Philanthotoxin blocks quisqualate-induced，AMPA-induced and kainate-induced，but not NMDA-induced excitation ofrat brainstem neurons in vivo.Br.J.Pharmacol.101968，1990)。其后的研究已經證明盡管某些芳基烷基胺毒素對于不同的谷氨酸受體既無效力又無選擇性，然而，其它芳基烷基胺對由哺乳動物CNS中的NMDA受體活化所介導的拮抗反應既具有非常大的效力，又具有選擇性(Mueller et al.，Effects of polyamine spider toxins on NMDA receptor-mediated transmission in rat hippocampus in vitro.Soc.Neurosci.Abst.15945，1989；Mueller et al.，Arylamine spider toxins antagonize MDNAreceptor-mediated synaptic transmission in rat hippocampal slices.Synapse9244，1991；Parks et al.，Polyamine spider toxins block NMDA receptor-mediated increases in cytosolic calcium in cerebellar granule neurons.Soc.Neurosci.Abst.151169，1989；Parks et al.，Arylamine toxins from funnel-web spider(Agelenopsis aperta)venom antagonize N-methyl-D-aspartatereceptor function in mammalian brain.J.Biol.Chem.26621523，1991；Priestley et al.，Antagonism of responses to excitatory amino acids on ratcortical neurones by the spider toxin，argiotoxin-636.Br.J.Pharmacol.971315，1989；Draguhn et al.，Argiotoxin-636 inhibits NMDA-activatedion channels expressed in Xenopus oocytes.Neurosci.Lett.132187，1991；Kiskin et al.，A highly potent and selective N-methyl-D-aspartate teceptorantagonist from the venom of the Agelenopsis aperta spider.Neuroscience5111，1992；Brackley et al.，Selective antagonism of native and clonedkainate and NMDA receptors by polyamine-containing toxins.J.Pharmacol.EXP.Therap.2661573，1993；Williams，Effects of Agelenopsis apertatoxins on the N-methyl-D-aspartate receptorPolyamine-iike and high-affinity antagonist actions.J.Pharmacol.Exp.Therap.266231，1993)。也已經報道用芳基烷基胺毒素philanthotoxin抑制煙堿膽堿能受體(Rozental et al.，Allosteric inhibition of nicotinic acetylcholine recptors ofvertebrates and insects by philanthotoxin.J.Pharmacol.Exp.Therap.249123，1989)。
Parks等人(Aryl；amine toxins from funnel-web spider(Agelenopsisaperta) venom antagonize N-methyl-D-aspartate receptor function inmammalian brain.J.Biol.Chem.26621523，1991)介紹了拮抗在哺乳動物腦中的NMDA受體功能的芳基烷基胺蜘蛛毒素(α-agatoxins)。該作者討論了芳基烷基胺毒素的作用機理，認為NMDA受體控制的離子通道為α-agatoxins的可能的作用部位，非常可能是其它蜘蛛毒液芳基烷基胺的作用部位。他們認為“在脊椎動物腦中的內源性多胺調節NMDA受體的功能的發現提示芳胺毒素經在谷氨酸受體上的結合多胺部位可以產生其拮抗作用。Brackley等人研究了精胺和philanthotoxin433對于通過在蟾蜍卵細胞(注入來自鼠或雛雞腦的mRNA)中使用激動性氨基酸引起的應答的影響。所述作者報道了在低于可拮抗谷氨酸受體功能的濃度下，精胺和philanthotoxin強化激動性氨基酸和其它的一些神經遞質的作用。根據這些數據和其它一些數據，Brackley等人得出結論通過非特異性地與應激性細胞膜結合，芳胺毒素可以降低膜的流動性并改變受體的功能。關于NMDA受體功能的這種新奇性的想法沒有得到兩個最新的結合研究的支持。Reynolds報道了argiotoxin 636以對谷氨酸、甘氨酸或亞精胺不敏感的方式抑制[3H]MK-801與鼠的腦細胞膜結合。該作者得出結論argiotoxin 636通過與位于NMDA門控離子通道內的Mg2+部位之一結合，對所述NMDA受體復合物施加新的抑制作用。由Williams等人報道的數據也支持該結論，即argiotoxin 636主要不作用于NMDA受體上的多胺調節部位，而是直接作用產生離子通道的活性依賴性阻滯。已知像苯環己哌啶和氯胺酮這樣的化合物可以阻滯與節肢動物肌肉谷氨酸受體和哺乳動物NMDA受體均有關的離子通道。從而，脊椎動物和非脊椎動物的谷氨酸受體似乎可以共有其它的關于受體功能的變構調節器的結合部位，或許與二價陽離子結合部位有關。顯然，還需要做大量的工作，以確定是否芳胺規定所述新的調節部位。”Usherwood and Blagbrough(Spider Toxins Affecting GlutamateReceptorsPolyamines in Therapeutic Neurochemistry.Pharmacol.Therap.52245，1991)介紹了提出的位于膜電位域(稱為QUIS-R通道選擇性濾器)中作為芳基烷基胺毒素(多胺酰胺毒素)細胞內接合部位。作者假設作為多胺酰胺毒素的結合部位可以在接近由locust肌肉的QUIS-R控制的通道的內入口的位置。所述作者也注意到這類毒素中的一個(argiotoxin 636)選擇性地拮抗培養的鼠皮質神經元中的NMDA受體。
Gullak爭人(CNS binding sites ofthe novel NMDA antagonist Arg-636.Soc.Neurosci.Abst.151168，1989)介紹了作為蜘蛛毒液的多胺(芳基烷基胺)毒素成分的argiotoxin-636(Arg-636)。據認為該毒素以非競爭性方式阻滯NMDA導致的cGMP的升高。該作者認為“結合鼠前腦膜的[125I]Arg-636，其Kd和Bmax值為11.25μm和28.95 pmol/mg蛋白(80％特異)。其它已知的多胺和由Agelenopsis aperta新發現的多胺抑制結合的能力類似于作為NMDA拮抗劑的神經活性。所試驗的其它化合物不能阻滯特異性結合。”該作者然后認為所述多胺可以通過與膜離子通道的相互作用拮抗對NMDA的響應。
Seymour和Mena(In vivo NMDA antagonist activity of thepolyamine spider venom component，argiotoxin-636.Soc.Neurosci.Abst.151168，1989)介紹的研究結果據說顯示以有效地對抗DBA/2鼠聽原性癲癇發作的劑量沒有顯著地影響運動器官的活性，以最低有效劑量32mg/kg(皮下注射)，它可以顯著拮抗NMDA導致癲癇發作。
Herold和Yaksh(Anesthesia and muscle relaxation with intrathecalinjections of AR636 and AG487，two acylpolyamine spider toxins，in rats.Anesthesiology 77507，1992)介紹的研究結果據說顯示芳基烷基胺argiotoxin-636(AR636)(但不包括agatoxin-489(AG489))在鞘內給予鼠后產生肌肉松弛和麻醉作用。
Williams(Effects of Agelenopsis aperta toxins on the N-methyl-D-aspartate receporPolyamine-like and high-affinity antagonist actions，J.Pharmacol.Exp.Therap.266231，1993)報道α-agatoxins(芳基烷基胺)Agel-489和Agel-505通過在激動性多胺受體上的作用，增強[3H]MK-801與由鼠腦制備的生物膜上NMDA受體的結合；多胺受體激動劑阻塞Agel-489和Agel-505的激動作用，多胺受體拮抗劑抑制Agel-505的激動作用。較高濃度的Agel-489和Agel-505及在所有檢驗濃度下的argiotoxin-636對于[3H]MK-801的結合具有抑制作用。在箝位電壓為-70mV的蟾蜍卵細胞中，Agel-505抑制對NMDA響應的IC50為13nM；Agel-505的這種作用的濃度比影響[3H]MK-801結合的濃度約低10000倍。用30nM的Agel-505只能抑制11％的對紅藻氨酸鹽的響應。由NMDA誘導的電流的拮抗作用與毒素的敞開通道的阻滯作用一致，具有很強的電壓依賴性。Williams認為“盡管α-agatoxins可以相互作用于NMDA受體上的陽性變構多胺部位，由該相互作用產生的激動作用在功能性測定中，由于作為該受體的高度親和力、非競爭性拮抗劑的毒素的單獨作用而被掩蔽。”Brackley等人(Selective antagonism of native and cloned kainate andNMDA receptors by polyamine-containing toxins，J.Pharmacol.Exp.Therap.2661573，1993)報道含有多胺的毒素(芳基烷基胺)、philanthotoxin-343(PhTX-343)和argiotoxin-636(Arg-636)產生在注射鼠腦RNA的蟾蜍卵細胞中紅藻氨酸鹽和NMDA誘導的電流的可逆的、非競爭性的、部分電壓依賴性拮抗作用。已證實與紅藻氨酸鹽誘導的反應(IC50＝0.07μM)相比，Arg-636對NMDA誘導的反應具有選擇性(IC50＝0.04μM)，而與NMDA誘導的反應(IC50＝2.5μM)相比，PhTX-343具有對紅藻氨酸鹽誘導反應的選擇性(IC50＝0.12μM)。與對于表達克隆GluR1(IC50＝34μM)或GluR1+GluR2(IC50＝300μM)亞單位的卵細胞中的紅藻氨酸鹽的反應相比，Arg-636更有效地拮抗對于表達克隆NMDAR1亞單位的蟾蜍卵細胞中的NMDA的反應(IC50＝0.09μm)。另一方面，PhTX-343在拮抗NMIDAR1(IC50＝2.19μm)和GluR1(IC50＝2.8μm)方面是等效的，但是對抗GluR1+GluR2亞單位效力要小得多(IC50＝270μm)。
Raditsch等人(Subunit-specific block of cloned NMDA receptors byargiotoxin-636.FEBS Lett.32463，1993)報道盡管所有的受體亞單位在假定的成孔橫跨膜區域II(如上所討論的Q/R部位)中均含有天冬酰胺殘基，與NMDAR1+NMDAR2B亞單位相比(IC50＝460nM)，Arg-636更有效地拮抗在表達NMDAR1+NMDAR2A亞單位(IC50＝9nM)或NMDAR1+NMDAR2C亞單位(IC50＝2.5nM)的蟾蜍卵細胞中的反應。作者認為在NMDAR1+NMDAR2A和NMDAR1+NMDAR2C通道之間Arg-636選擇性方面的大的差異“必須用其它結構因素對照。”Herlitz等人(Argiotoxin detects molecular differences in AMPAreceptor channels.Neuron 101131，1993)報道與敞開通道阻滯一致，Arg-636以電壓依賴和用途依賴方式拮抗AMPA受體的亞單位。Arg-636有效地拮抗由GluRAi(Ki＝0.35μM)、GluRCi(Ki＝0.23μM)或GluRDi(Ki＝0.43μM)亞單位組成的可滲透Ca2+的AMPA受體，而在濃度多至15μM，對于不滲透Ca2+的GluRBi亞單位基本無效。由這些研究者報道的其它資料充分提出在假定的成孔橫跨膜區域II中的Q/R部位在確定Arg-636的功效和Ca2+的滲透性方面是頭等重要的。
Blaschke等人(A single amino acid determines the subunit-specificspider toxin block of α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionate/kainate receptor channels.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 906528，1993)報道芳基烷基胺JSTX-3有效地拮抗對于在表達GluR1(IC50＝0.04μM)或GluR3(IC50＝0.03μM)亞單位的蟾蜍卵細胞中的紅藻氨酸鹽的反應，然而在所表達的存在GluR2亞單位的受體基本不受所述毒素的影響。直接誘變部位的研究強烈地暗示Q/R部位作為影響毒素效力的主要部位。
Nakanishi等人(Bioorganic studies of transmitter receptors withphilanthotoxin analogs.Pure Appl.Chem.，in press)已經合成了許多高效的光親和標記的phelanthotoxin(PhTX)類似物。已經在作為受體控制的鈣通道的模型體系的表達的煙酸膽堿能的受體方面研究了這些類似物。這些研究者提出這些PhTX類似物用結合在靠近胞質表面部位的毒素的疏水帽(headpiece)阻滯了所述離子通道，而多胺的尾部由胞質側擴展進入該離子通道內。
本發明的概述申請人已經研究了在蜘蛛和黃蜂毒液中的芳基烷基胺(有時稱作芳胺毒素、多胺毒素、酰基多胺毒素或多胺酰胺毒素)的結構多樣性和生物活性，并確定在這些毒液中存在的一些芳基烷基胺作為在哺乳動物的CNS中谷氨酸受體控制的Ca2+通道的有效的非競爭性拮抗劑起作用。盡管這些芳基烷基胺化合物在其結構中含有多胺部分，他們不像其它已知的簡單的多胺，對于某些類型的受體控制的Ca2+通道具有及其有效和特異性的作用。
使用天然的芳基烷基胺作為先導結構，合成并檢驗了一些類似物。最初的發現的由毒液中分離和純化的芳基烷基胺是用合成的芳基烷基胺來確證的。這些化合物為小分子(分子量＜800)，證明在體外突然發作和癲癇模型中顯效。使用NMDA受體-離子載體復合體作為受體控制的Ca2+通道模型。所選擇的芳基烷基胺顯示由新的機理阻滯NMDA受體介導的反應。此外，這些化合物的獨特的行為藥理學性能提示它們不可能引起PCP樣的擬精神病的活性和其它NMDA受體抑制劑所特有的識別缺陷。最后，芳基烷基胺在能夠拮抗某些克隆和表達AMPA受體的亞單位的NMDA受體(即可透過Ca2+的受體)拮抗劑中是獨特的。因而，所述芳基烷基胺是唯一已知的一類能拮抗谷氨酸受體介導的細胞質Ca2+的提高，而與受體亞型的藥理學定義無關的化合物。另外，芳基烷基胺抑制另一個受體控制的Ca2+通道，即煙堿膽堿能的受體。假定細胞質Ca2+過量的和持續的增加已經與幾種神經性疾病有關，該芳基烷基胺可作為發現新的各種神經系統疾病治療劑的有價值的小分子先導物。
申請者已經確定選擇性的芳基烷基胺具有高的親和力與在NMDA受體-離子載體復合體上的新的部位(以前尚未鑒定過的部位)結合，該芳基烷基胺不具有高的親和力與NMDA受體-離子載體復合體上的任何已知的部位(谷氨酸接合部位、甘氨酸接合部位、MK-801接合部位、Mg2+接合部位、Zn2+接合部位、多胺接合部位、∑接合部位)結合。該確定的結果使申請者具有了用于鑒定有用的化合物的方法和方案，它們可以提供治療上有用的化合物及用于發現其它治療上有用的化合物的先導化合物。通過篩選與所述新的芳基烷基胺結合部位結合的化合物及通過確定是否該化合物具有所需要的生物學、藥理學和生理學性質來鑒定這些化合物。
該方法包括鑒定在結合具有以下結構的指定化合物1、化合物2或化合物3的芳基烷基胺化合物的部位上與受體控制的Ca2+通道結合的化合物的步驟。
化合物1
化合物2
化合物3
所謂“治療上有用的化合物”指的是可能用于治療疾病的化合物。經所述篩選方法所篩選出的化合物被認為可能具有治療用途，因為還未進行臨床實驗，以確定其實際的治療用途。
所謂“神經性疾病”指的是神經系統的疾病，包括(但不限于)普遍和病灶性局部缺血和出血的突然發作、頭部創傷、脊髓損傷、脊髓局部缺血、局部缺血或缺氧導致的神經細胞損傷(例如在心博停止或新生期痛苦中)、癲癇、焦慮、由于局部缺血或缺氧例如在心肺分流術下的心臟手術所經常造成的情況下的神經精神病學的或識別的缺陷和神經變性的疾病。所謂“神經性疾病”也指那些可以介紹使用、推薦或開處方使用神經保護劑、抗驚厥藥、抗焦慮藥、止痛藥、肌肉松弛藥和/或用于全麻的調節藥的疾病。
所謂“神經變性的疾病”指的是包括(但不限于此)Alzheimer’s病、Huntington’s病、Parkinson’s病和肌萎縮的外側硬化癥(ALS)的疾病。
所謂“神經保護劑”指的是能夠防止與神經性疾病有關的神經元的損傷或死亡的化合物。
所謂“抗驚厥藥”指的是能夠降低由疾病狀態例如簡單的部分驚厥發作、復雜的部分驚厥發作、癲癇持續狀態和外傷例如腦部損傷包括腦部手術后引起的驚厥發作產生的驚厥的化合物。
所謂“抗焦慮的藥”指的是能夠減輕作為憂慮癥特征的憂慮、不確知和恐懼感受的化合物。
所謂“止痛藥”指的是能夠通過改變感受傷害刺激的知覺減輕疼痛，不產生麻醉或喪失意識的化合物。
所謂“肌肉松弛藥”指的是減輕肌肉緊張性的化合物。
所謂“用于全麻的調節劑”指的是在產生與意識消失相連的痛感消失當中，與麻醉劑一起使用的化合物。
所謂“有效力”和“活性”指的是在受體控制的鈣通道(包括NMDA受體、可滲透Ca2+AMPA受體和煙酸膽堿能的受體)具有活性的化合物，其IC50值小于10μM，更優選小于100nM，最優選小于1nM。
所謂“選擇性”指的是所述化合物在以上定義的受體控制的鈣通道中有效力，然而，在其它的神經遞質受體、神經遞質受體控制的離子通道或電壓依賴性離子通道上的效力要低10倍，優選50倍，最優選100倍。
所謂“受體控制的鈣通道功能的生物化學和電生理學測定”指的是設計通過生物化學或電生理學的方法測定受體控制鈣通道的功能活性的測定方法和結果。該測定實例包括(但不限于此)在培養的鼠的小腦粒細胞中細胞質鈣的fura-2熒光劑測定(見實施例1和實施例2)、中膜片鉗法的電生理學的測定(見實施例3和實施例27)、鼠的海馬部分突觸傳遞測定(見實施例5)、放射配基結合測定(見實施例4、實施例24、實施例25和實施例26)和體外的神經保護劑測定(見實施例6)。
所謂“功效”指的是就所選擇的化合物而言，檢測到所需活性的統計學顯著的水平；所謂“顯著”指的是p＜0.05水平的統計學顯著。
所謂“神經保護活性”指的是在治療包括下列神經性疾病(但不限于此)方面的功效普遍和病灶性局部缺血和出血的突然發作、頭部創傷、脊髓損傷、脊髓局部缺血、局部缺血或缺氧導致的神經細胞損傷、缺氧導致的神經細胞損傷(例如在心博停止或新生期痛苦中)、由于局部缺血或缺氧例如作為在心肺分流術下的心臟手術所經常造成的情況下的神經精神病學的或識別的缺陷和神經變性的疾病例如Alzheimer’s病、Huntington’s病、Parkinson’s病和肌萎縮性側索硬化癥(ALS)(見以下實施例7和8)。
所謂“抗驚厥活性”指的是在減少由下列疾病產生的驚厥方面的功效例如簡單的部分驚厥發作、復雜的部分驚厥發作、癲癇持續狀態和外傷例如腦部損傷包括腦部手術后引起的驚厥發作(見以下實施例9和10)。
所謂“抗焦慮活性”指的是化合物減輕作為憂慮癥特征的憂慮、不確知和恐懼感受。
所謂“止痛活性”指的是化合物作為對于通常產生疼痛的刺激的應答不產生疼痛。該活性可用于臨床上急性或慢性疼痛癥狀，包括(但不限于此)手術前優先止痛、末梢神經例如糖尿病和多發性硬化病人的止痛、幻肢疼痛、灼痛、神經痛例如患帶狀皰疹的病人、中樞神經疼痛例如在脊髓損傷病人所見到的、痛覺過敏和異常性疼痛。
所謂“灼痛”指的是與末梢神經損傷有關的疼痛癥。
所謂“神經痛”指的是由一種神經或多種神經引起的疼痛。
所謂“中樞神經痛”指的是與中樞神經系統損傷有關的疼痛。
所謂“痛覺過敏”指的是提高的對正常疼痛刺激的反應。
所謂“異常性疼痛”指的是由通常不引起疼痛的刺激產生的疼痛(見以下實施例11-14)。
所謂“在鼠的海馬部分導入長期強化作用”指的是為激發在體外保持鼠海馬部分的Schaffer側突-CA1錐狀細胞通道中突觸傳遞強度的持續增加，傳入Schaffer側突纖維的強直性電刺激的能力(見實施例19)。
所謂“治療劑量”指的是將患者的一種或多種疾病狀態緩解到一定程度所需化合物的用量。此外，所謂“治療劑量”指的是使與疾病有關或是其起因的生理學或生物化學參數恢復到正常(部分或全部)所需的用量。一般來說，根據化合物的EC50(在拮抗劑情況下是IC50)、患者的年齡、體重和有關疾病，其用量為約1nmol-1μmol的化合物。
所謂“識別損害”指的是損害獲得記憶或學習效果的能力(見實施例20)。所謂“識別損害”也指干擾正常合理的思維過程和推理的能力。
所謂“破壞運動功能”指的是顯著改變運動活力(見實施例15)或引起顯著的運動失調，喪失翻正反射，鎮靜或肌肉松弛(見實施例16)的能力。
所謂“運動活力”指的是完成正常的行走運動的能力。
所謂“翻正反射的喪失”指的是動物一般為嚙齒動物在被置于仰臥狀態下自我反轉過來的能力。
所謂“神經元空泡形成”指的是在cingulate皮質或后夾肌(retrosplenial)皮質的神經元中產生空泡(見實施例18)。
所謂“心血管活性”指的是引起參數包括(但不限于此)平均動脈血壓和心率顯著的變化的能力(見實施例21和22)。
所謂“過度興奮性”指的是增強的對興奮性刺激的感受性。過度興奮性經常顯示為給予藥物的嚙齒動物運動活力的顯著增加(見實施例15)。
所謂“鎮靜”指的是鎮靜作用或減輕活力和興奮性。鎮靜通常顯示為給予藥物的嚙齒動物運動活力的顯著降低(見實施例15)。
所謂“PCP-樣濫用可能性”指的是藥物被錯用的可能性，如人使用PCP作為保養(即“angel dust”)的情況。據認為通過在受訓區分PCP和鹽水的嚙齒動物中泛化(generalize)到PCP的藥物的能力，可以預測PCP樣的濫用可能性(見實施例17)。
所謂“泛化到PCP”指的是在受訓區分PCP和鹽水的嚙齒動物中作為PCP察覺化合物(見實施例17)。
所謂“PCP樣擬精神病的活性”指的是藥物在人體上引起類似急性精神病(包括視幻覺、妄想狂、焦慮不安和精神錯亂)的行為綜合癥。據認為通過藥物產生PCP樣刻板癥行為(包括運動失調、搖頭、過度興奮性)的能力和通過在受訓區分PCP和鹽水的嚙齒動物中泛化到PCP的藥物的能力可以預測PCP樣擬精神病的活性(見實施例15、實施例16和實施例17)。
所謂“運動失調”指的是缺乏肌肉協調。
所謂“搖頭”指的是由PCP在嚙齒動物中引起的刻板癥行為，其中動物的頭緩慢和大幅度地重復從一側到另一側運動。
所謂“藥用組合物”指的是在藥學上可接受的載體中的有效治療量的本發明的化合物，即可以將所述化合物加入并溶解或有助于所述化合物給藥的制劑。藥學上可以接受的載體的實例包括水、鹽水和生理鹽水。所述藥用組合物以適當的劑量被提供。所述組合物一般指被FDA或美國以外的其它國家的類似機構所批準用于治療特定疾病的組合物。
在有關的方面，本發明以治療神經性疾病的方法為特征，所述方法包括給予包括在所述芳基烷基胺化合物1、化合物2和化合物3之一所連接的位置上，與受體控制的鈣通道結合的化合物的藥用組合物的步驟，所述化合物為在所述受體控制的鈣通道上有效力的和選擇性、非競爭性拮抗劑，并具有以下一種或多種藥理學和生理學性質在體外生物化學和電生理學測定的受體控制的鈣通道功能的功效、體內抗驚厥活性、體內神經保護活性、體內抗焦慮活性和體內止痛活性；所述化合物也具有以下一種或多種藥理學作用所述化合物不干擾在鼠的海馬部分中誘導長期強化作用，及在治療劑量下不損害識別，不損害運動性能，不產生神經元空泡形成，具有最低的心血管活性，不產生鎮靜或過度興奮性，具有最低的PCP樣濫用可能性，及具有最低的PCP樣擬精神病的活性。所謂“最低的”指的是為一般個體所能耐受的所述藥物的任何副作用，從而所述藥物可以用來治療所針對的疾病。所述副作用為本領域內眾所周知的，并在FDA批準藥物用于針對性疾病時，一般被其認為最低的副作用。
治療過程包括用標準的臨床方法確定患者所患的神經疾病的種類，然后，使用本發明的組合物治療該患者。
在另一方面，本發明的特征為用于治療神經性疾病的患者的化合物，其中所述化合物為具有下式的多胺型化合物或其類似物(即多雜原子分子)
其中，Ar是適當取代的芳環、環體系或其它的疏水部分；Ar可以是芳族(例如碳環芳基如苯基和雙環碳環芳環體系如萘基、1，2，3，4-四氫萘基、2，3-二氫化茚基和茚基)，雜芳族(例如吲哚基、二氫吲哚基、喹啉基和異喹啉基及它們各自的1，2，3，4-四氫-和2-氧-衍生物)，脂環族(環脂族)和雜環脂族環或環體系(單環、雙環或三環)，以上環為5-7元環，并可選被獨立選自下列基團的1-5個取代基取代1-5個碳原子的低級烷基、被1-7個鹵原子取代的1-5個碳原子的低級鹵代烷基、1-5個碳原子的低級烷氧基、鹵素、硝基、氨基、1-5個碳原子的低級烷氨基、酰胺基、1-5個碳原子的低級烷基酰胺基、氰基、羥基、巰基、2-4個碳原子的低級酰基、亞磺酰氨基、1-5個碳原子的低級烷基亞磺酰氨基、1-5個碳原子的低級烷基亞砜、1-5個碳原子的低級羥基烷基、1-5個碳原子的低級烷基酮基或1-5個碳原子的低級硫代烷基，每個m為0-3范圍內的整數，每個k為1-10范圍內的整數，每個j為相同或不同的，為1-12范圍內的整數，每個R1和R2獨立選自氫、1-5個碳原子的低級烷基、1-5個碳原子的低級烷基氨基、1-5個碳原子的低級烷基酰胺基、1-5個碳原子的低級一氟、二氟或三氟烷基、羥基、咪基、胍基或一般常見的氨基酸側鏈或與R1和R2所連接的碳原子一起形成羰基，和每個z選自氮原子、氧原子、硫原子、酰胺基、亞磺酰氨基和碳原子。
優選的芳族導向基團包括(但不限于)下列基團
其中
將其化學結構由上述通式所包括的已知化合物排除在本發明之外。
在其它的優選的實施例中，其化合物選自化合物4-18的組中，其中這類化合物具有下式
化合物7
化合物8
化合物9
化合物10
化合物15
化合物16
化合物17
化合物18申請人也已經確定簡化(simplified)的芳基烷基胺是NMDA受體-離子載體復合物的有效力的、非競爭性拮抗劑。所述簡化的芳基烷基胺不同于以上所述化合物4-18所例舉的芳基烷基胺。例如，這類化合物以高于拮抗NMDA受體介導的功能的濃度約1-400倍的濃度，與[3H]MK-801所標記部位結合。這類簡化的芳基烷基胺具有一種或多種下列其它的一些生物學性質顯著的神經保護活性，顯著的抗驚厥活性，顯著的止痛活性，在有效的神經保護劑、抗驚厥劑和止痛劑的劑量下，在嚙齒動物中無PCP樣刻板癥的行為(過度興奮性和搖頭)，在有效的神經保護劑、抗驚厥劑和止痛劑的劑量下，在PCP區分測試中，無泛化到PCP，在有效的神經保護劑、抗驚厥劑和止痛劑的劑量下，無神經元空泡形成，在有效的神經保護劑、抗驚厥劑和止痛劑的劑量下，對電壓敏感的鈣通道顯示顯著低的活性和最低限度的低血壓活性。然而在神經保護劑、抗驚厥劑和止痛劑的劑量下，，這類化合物可以抑制在鼠海馬部分中誘導LTP的作用并可以產生運動損傷。
本發明的一個方面的特征為治療患神經性疾病患者的方法，它包括給予式I化合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中所述化合物在NMDA受體上顯示活性
其中R1和R5獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、烷基和羥烷基；或R2和R6一起為亞氨基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；n為0-6的整數，然而只有1n可以是0；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基和環烷基；X獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；m獨立為0-5的整數；Y為-NR3R3，除非當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-時，則Y是氫。
所謂“患者”指的是具有帶NMDA受體細胞的動物。優選所述動物為哺乳動物。最優選所述動物為人類。
所謂“烷基”指的是包括1-6，優選1-4個碳原子的分支或未分支的鏈烴，例如像甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、2-甲基戊基、環丙基甲基、烯丙基和環丁基甲基。
所謂“低級烷基”指的是包括1-4個碳原子的分支或未分支的鏈烴，在此列出其實例。
所謂“羥烷基”指的是如上所定義的烷基被羥基取代。
所謂“烷基苯基”指的是如上所定義的烷基被苯基取代。
所謂“酰基”指的是-C(O)R，其中R是氫或如上定義的烷基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基或丁酰基；或R是烷氧基例如在碳酸烷基酯中，或R是N-烷基例如在氨基甲酸烷基酯中。
所謂“環烷基”指的是包括3-12個碳原子的分支或未分支的環烴。
在本發明的優選的方面，Y選自-NH2和-NH-甲基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基或苯硫基，每一個可選被(X)m取代；(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；和
R1、R2、R5和R6是氫；或R2是甲基，及R1、R5和R6是氫；或R1是甲基，及R2、R5和R6是氫。
在本發明的另一些優選的方面，R1和R5獨立選自氫、低級烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、低級烷基和羥烷基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-，及Y是氫；R3獨立選自氫和低級烷基；n為1-6的整數；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、低級烷基和環烷基；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、低級烷基、羥基和-OCF3；m獨立為0-5的整數；Y為-NHR3，或當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y是氫；和其藥學上可接受的鹽和復合物，其條件為(a)當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則R5、R6和Y是氫；和(b)當R1和R2一起不為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y為-NHR3。
在另一個優選的方面，本發明的特征為治療患神經性疾病患者的方法，它包括給予式II化合物
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基和-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數；或給予式III化合物
其中X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數；或給予式IV和V化合物
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數；或式VI和VII化合物
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
更優選的方面是那樣一些實施例，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
特別優選的方面是那些實施例，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2、NH-甲基，每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
在優選的實施例中，所述治療方法包括給予選自化合物19-150的化合物或其藥學上可接受的鹽或復合物。優選所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤10μM，更優選≤2.5μM及最優選在NMDA受體上的IC50≤0.5μM。
在另一些優選的實施例中，所述治療方法包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤10μM的選自下列化合物組的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、101、102、103、105、106、107、108、109、111、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138(可能的前藥)、139、141、142、143、144、145、146、147、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
在更優選的實施例中，所述治療方法包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM的選自下列化合物組的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、70、75、76、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、100、101、102、103、105、106、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、136、137、138(可能的前藥)、139、142、144、145、146、147、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。在另一些實施例中，所述化合物選自下列化合物的組中54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138、139、142、144、145、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
在特別優選的實施例中，所述治療方法包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM的選自下列化合物組的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、30、31、32、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、91、93、94、95、96、97、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138(可能的前藥)、142、144、145、147、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
在更優選的實施例中，所述治療方法包括給予選自下列化合物組的化合物20、24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138(可能的前藥)、142、144、145、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
在特別優選的實施例中，所述治療方法包括給予選自下列化合物組的化合物20、33、50、60、119和144，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
在另一些特別優選的實施例中，所述治療方法包括給予選自下列化合物組的化合物33、50、60、119和144，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
本發明提供包括式I-VII的化合物的簡化的芳基烷基胺和如以上所提出的式I-VII的化合物的的所有優選的方面。
這類簡化的芳基烷基胺的實例包括(但不限于此)化合物19-150，其結構以上已經提供。優選所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤10μM。更優選所述化合物具有的IC50≤5μM，更優選≤2.5μM及最優選在NMDA受體上的IC50≤0.5μM。
在優選的實施例中，所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤10μM并選自下列化合物組中21、22、23、24、25、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、78、79、82、83、84、88、89、90、92、93、94、95、96、98、101、102、103、105、107、108、109、111、115、116、118、119、120、121、122、124、125、126、127、129、130、131、134、135、136、137、138(可能的前藥)、139、141、142、143、144、145、148、149和150。在另一些實施例中，所述化合物選自下列化合物的組中54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138、139、142、144、145、148、149和150。
在更優選的實施例中，所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM并選自下列化合物組中21、22、23、24、25、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138(可能的前藥)、139、142、144、145、148、149和150。
在特別優選的實施例中，所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM并選自下列化合物組中21、22、23、24、25、27、28、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、93、94、95、96、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138(可能的前藥)、142、144、145、148、149和150。
在優選的實施例中，所述化合物選自下列化合物組中24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
在特別優選的實施例中，所述化合物選自下列化合物組中20、33、50、60、119和144。
在更優選的實施例中，所述化合物選自下列化合物組中33、50、60、119和144。
排除在本發明組合物的成分之外的是其化學結構包括在上述通式內的已知的化合物。
作為本發明的一個方面，也提供用于治療神經性疾病患者的藥用組合物。以藥學上可接受的載體和適當的劑量提供所述藥用組合物。所述藥用組合物可以是以對本領域的技術熟練人員所熟知的藥學上可接受的鹽和復合物的形式。
所述藥用組合物包括式I-VII化合物和如以上所提出的式I-VII化合物的所有優選的方面。
優選的藥用組合物包括化合物19-150。優選所述化合物具有在NMDA受體上的IC50≤10μM。更優選所述化合物具有的IC50≤5μM，更優選≤2.5μM及最優選在NMDA受體上的IC50≤0.5μM。
在另一些優選的實施例中，所述藥用化合物包括具有在NMDA受體上的IC50≤10μM并選自下列化合物組中的化合物20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、101、102、103、105、106、107、108、109、111、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138(可能的前藥)、139、141、142、143、144、145、146、147、148、149和150。優選所述化合物選自下列化合物的組中21、22、23、24、25、26、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、78、79、82、83、84、88、89、90、92、93、94、95、96、98、101、102、103、105、107、108、109、111、115、116、118、119、120、121、122、124、125、126、127、129、130、131、134、135、136、137、138(可能的前藥)、139、141、142、143、144、145、148、149和150。
在另一些實施例中，所述化合物選自下列化合物組中54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、 82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138、139、142、144、145、148、149和150。
在更優選的實施例中，所述藥用組合物包括具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM并選自下列化合物組中的化合物20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、70、75、76、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、100、101、102、103、105、106、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、136、137、138(可能的前藥)、139、142、144、145、146、148、149和150。更優選所述化合物選自下列化合物組中21、22、23、24、25、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138(可能的前藥)、139、142、144、145、148、149和150。
在特別優選的實施例中，所述藥用組合物包含具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM的化合物并選自下列化合物組中20、21、22、23、24、25、27、28、30、31、32、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、91、93、94、95、96、97、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138(可能的前藥)、142、144、145、148、149和150。優選所述化合物選自下列化合物組中21、22、23、24、25、27、28、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、93、94、95、96、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138(可能的前藥)、142、144、145、148、149和150。
在更優選的實施例中，所述藥用組合物包含選自下列化合物組中的化合物20、24、25、33、50、60、66、69、103、111、116、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150。優選所述化合物選自下列化合物的組中24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
在最特別優選的實施例中，所述藥用組合物包含選自下列化合物組中的化合物20、33、50、60、119和144。
優選所述化合物選自由33、50、60、119和144組成的組中。
可以對所述化合物(例如20或60)做結構修飾，該修飾沒有顯著加入在此所介紹的結構-活性關系(SAR)。例如，成功的生物電子等排體置換或可選取代苯基取代，例如存在于化合物20或60中的可以使用其它的親脂性或半極性的芳族(例如萘基、萘氧基、芐基、苯氧基、苯硫基)、脂族(烷基例如異丙基)、脂環族(環烷基例如環己基)、雜環基[例如吡啶基、呋喃基、噻吩基(苯硫基)]或其它官能團或體系來完成的生物電子等排體置換或可選取代苯基取代(如在本領域熟知的)將提供具有在NMDA受體上類似的生物藥學性質和活性的臨床上有用的化合物(結構同系物、類似物和/或同種類的物質)(例如，參見化合物37、75、79、83、89、119-122、125、126、128、130、132、137、144和145)。例如所述置換或取代已用于極大地促進廣泛的臨床和工業上非常成功的合成藥物例如傳統的H1-抗組胺藥、抗膽堿能藥(抗毒蕈堿藥，例如抗帕金森綜合癥藥)、抗抑郁藥(包括三環化合物)和阿片類(opioid)止痛藥的其它取代基中的SAR的形成[見Foye etal.(Eds.)，Principles of Medicinal Chemistry，4th ed.，Lea andFebiger/Williams and Wilkins，Philadelphia，PA，1995，pp.233，265，281-282，340-341，418-427，and 430；Prous，J.R..，The Year’s Drug News，Therapeutic Targets-1995 Edition，Prous Science Publishers，Barcelona，Spain，1995，pp.13，55-56，58-59，74，89，144-145，152，296-297，and317]。類似地，對在例如化合物20或60的丙基主鏈中的亞甲基或次甲基用如氧、硫或氮等的電子等排體置換或取代，將提供具有類似的有用的生物藥學性質的臨床上有用的NMDA受體活性化合物，例如88(修飾的“傳統H1-抗組胺型”結構)，如本發明所述，通過制備如含有(雙)(3-氟苯基)基團的其相應的化合物，可以進一步優化其在NMDA受體上的活性。通過引入環體系(如在化合物102和111中)和/或不飽和度(例如雙鍵，如在化合物81、106、109和139中)，也可以成功地修飾化合物如20和60的丙基主鏈，以提供臨床上更有用的本發明的NMDA受體活性化合物(參見上述化合物)。
在相關的方面，本發明的特征為制備治療劑的方法，它包括通過確定所述治療劑在受體控制的鈣通道上是否有活性來篩選該治療劑，及以足夠以治療有效量提供給患者的量合成該治療劑等步驟。所述篩選可以使用對本領域普通技術人員所熟知的方法來進行，例如可以使用在此提出的方法來進行。本領域的技術熟練人員也熟悉用于以足夠提供有效治療量的量合成治療劑的方法。
在一個優選的方面，所述受體控制的鈣通道為NMDA受體。在更優選的方面，所述方法還包括將藥學上可接受的載體加入該治療劑中的步驟。在另一個優選的方面，所述治療劑包括在此提出的式I化合物。在另一個優選的方面，所述治療劑包括在此所述的式II、III、IV、V、VI或VII化合物。在特別優選的方面，所述治療劑包括具有選自由式I-VII組成的組中的結構，及在此所提出的所述各式的所有優選的方面的化合物。在更優選的方面，所述治療劑選自由化合物19-150組成的組中。在特別優選的方面，將所述治療劑提供給神經性疾病患者。在有關方面，所述篩選包括通過芳基烷基胺化合物1、化合物2和化合物3之一來確定結合在所述受體控制的鈣通道部位上的化合物的步驟。
從以下的對于本發明的優選實施例的介紹中及從本權利要求書中，本發明的其它的特征和優點是顯而易見的。
優選實施例的介紹以下詳細介紹可用于確定治療有用的化合物及使用其治療神經性疾病的方法和試驗。通過使用化合物1、化合物2或化合物3使所述試驗簡化，然而在所述試驗中也可以使用具有類似生物活性的其它化合物(如已知的)，以便改進所述試驗。導向化合物例如化合物1、化合物2或化合物3可以用作使用標準方法的分子模型，或者在天然產物文庫中的已知的或新的化合物可以通過下述方法篩選。
一個關鍵的方法為可以使用標準放射配基結合技術(放射性元素標記的芳基烷基胺結合測試)迅速篩選化合物，從而確定與化合物1、化合物2或化合物3結合在受體控制鈣通道上相同部位的化合物的方法。由所述放射配基結合研究的數據也證實所述化合物不通過在受體控制Ca2+通道的已知部位上(例如在NMDA受體-離子載體復合體上的谷氨酸結合部位、甘氨酸結合部位、MK-801結合部位、Zn2+結合部位、Mg2+結合部位、∑結合部位或多胺結合部位)的作用來抑制[3H]芳基烷基胺結合。該篩選試驗使大量的可能有用的化合物被鑒定并篩選出在其它測試中的活性。在本領域內的技術熟練人員會隆得用于檢測與受體控制Ca2+通道上所述芳基烷基胺部位結合的其它的快速測試方法可以被設計并用于本發明中。
其它試驗利用電生理學方法(膜片鉗法)以擴大使用上述放射配基結合測試所獲得的結果。該結果可以證實結合在所述芳基烷基胺部位上的化合物是具有下列與芳基烷基胺本身相同性質的，功能性的、非競爭性的受體控制Ca2+通道拮抗劑顯示為用途依賴性阻滯的開放通道阻滯，及電壓依賴性起始和阻滯逆轉。該結果也可以證實所述化合物在受體控制Ca2+通道上的前述部位(例如在NMDA受體-離子載體復合體上的谷氨酸結合部位、甘氨酸結合部位、MK-801結合部位、Zn2+結合部位、Mg2+接合部位、∑結合部位或多胺結合部位)不具有其主要的活性。
此外，可以使用重組DNA技術以便更快地進行該試驗。例如，使用標準方法，可以識別和克隆編碼新的芳基烷基胺結合部位(即受體)的基因。這可以用幾種方法之一來完成。例如，可以制備芳基烷基胺親和柱，并使來自含有芳基烷基胺受體的細胞或組織的溶解的膜經過該柱。所述受體分子與該柱結合，從而被分離。然后得到部分氨基酸序列資料，用于編碼所述受體的基因的分離。此外，構建cDNA表達文庫，檢驗該文庫的各分部分賦予通常不表達這類受體的細胞(例如，CHO細胞、小鼠L細胞、HEK293細胞或蟾蜍卵細胞)芳基烷基胺受體的能力。以此方式，識別含有編碼所述受體的克隆的所述文庫部分。活性文庫部分的序列的細分級和測試最終導致編碼所述芳基烷基胺受體的單一克隆。類似地，可以使用雜交捕獲(hybrid-arrest)或雜交缺失(hybrid-depleteon)克隆的方法。注射帶有來自合適的組織或細胞源(例如人腦組織)的mRNA的蟾蜍卵細胞。檢測作為例如NMDA-或谷氨酸-刺激的鈣流入(可以被化合物1、化合物2或化合物3阻滯)的芳基烷基胺受體的表達。當在注射進入蟾蜍卵細胞以前將cDNA或cRNA雜交成選擇的mRNA時，檢驗cDNA克隆阻滯該受體表達的能力。然后，通過上述方法分離起該作用的克隆。一旦分離出該受體基因，使用標準技術來識別足以用于結合芳基烷基胺(芳基烷基胺結合區)的多肽或其部分。另外，使用標準方法，通過重組技術可以表達整個受體或芳基烷基胺結合區。可以分離所述受體或結合區并用作生化試劑，從而除了使用以下例舉的競爭性測試方法外，可以使用簡單的直接結合測試方法。從而建立與新的芳基烷基胺受體結合的化合物的篩選方法。用該方法，例如通過流經含有新的芳基烷基胺受體或芳基烷基胺結合區的柱并對結合在該柱上的化合物進行分析，可以連續地篩選大量的化合物。
其它試驗利用分子生物技術(克隆NMDA、AMPA或煙堿膽堿能受體的表達)與膜片鉗法電生理學技術的綜合技術。尤其在上述受體-離子載體復合物的克隆和表達亞單位上，可以迅速篩選芳基烷基胺類似物。可以利用引導部位的誘變以便鑒別對于確定芳基烷基胺效力可能是重要的氨基酸殘基。
在哺乳動物的CNS中的受體控制鈣通道的效力和選擇性拮抗劑的測定藥物的所需的性質包括對于受體控制Ca2+通道的高親和力和選擇性，例如存在于NMDA、AMPA和煙堿膽堿能受體-離子載體復合物中的對于受體控制Ca2+通道的高親和力和選擇性(與由其它神經遞質受體、神經遞質受體控制的離子通道或電壓依賴性離子通道介導的應答相比)和所述受體控制的Ca2+通道的非競爭性拮抗作用。
所述NMDA受體-離子載體復合物被用作受體控制的Ca2+通道的實例。該NMDA受體的激活打開了陽離子選擇通道，以致使細胞外的Ca2+和Na+流入，導致[Ca2+]i的升高并使細胞膜去極化。[Ca2+]i的測定被作為檢測NMDA受體上芳基烷基胺化合物活性的主要檢測項目。在能測定谷氨酸受體活性的體外檢測方法中，檢測純化的芳基烷基胺、合成的芳基烷基胺和合成的芳基烷基胺的類似物的活性。存在于不同種類蜘蛛的毒素中的芳基烷基胺被選擇用于詳細的研究。在這些毒素中存在的芳基烷基胺在結構上不同，然而具有由化合物1-3所代表的類型的基本結構。其它更簡化的合成類似物一般由連接到烷基(多)胺部分(見以下化合物19-69)的適當取代的芳族發色團組成。
發現提供谷氨酸受體活性的官能團指標和容許大量篩選的主要的測試方法。使用攜帶熒光指示劑fura-2的鼠小腦粒細胞的主要培養物來測定由NMDA和其協同激動劑甘氨酸激發的[Ca2+]i的變化。該測定提供及其敏感和準確的NMDA受體活性的指標。由NMDA引起的[Ca2+]i的升高依賴于甘氨酸的存在和被細胞外的Mg2+或作用于谷氨酸、甘氨酸或MK-801結合部位的拮抗劑所阻滯。由NMDA/甘氨酸激發的[Ca2+]i的升高很容易與從由其不應性的去極化到由電壓-敏感Ca2+通道的阻滯劑的抑制導致的[Ca2+]i的升高區分開。[Ca2+]i的測定結果證實了通過電生理學和配基結合研究所得到的結果的精確性提示該測定結果接近地反應出NMDA受體-離子載體復合物的激活作用。
實施例1NMDA受體功能的有效的非競爭性抑制測定芳基烷基胺對NMDA受體-介導的在培養鼠小腦粒細胞中[Ca2+]i的升高的優先的抑制作用。在存在或不存在不同濃度的每種試驗化合物下，通過加入NMDA/甘氨酸(50μM/1μM)激發[Ca2+]i的升高。利用每個試驗化合物的2-8個獨立的試驗，得出每一個化合物的IC50值，其標準誤差低于每個化合物平均值的10％。
所有試驗的芳基烷基胺均阻滯由NMDA/甘氨酸激發的在小腦粒細胞中[Ca2+]i的升高。某些結構與化合物1或化合物2相似的芳基烷基胺與文獻中已知的優先阻滯NMDA受體的最有效的化合物MK-801(IC50＝34nM)幾乎同樣有效。化合物3具有的IC50＝2nM，即效力比MK-801強17倍。許多試驗的芳基烷基胺比競爭性的拮抗劑例如AP5(IC50＝15μM)的效力更強。通過增加NMDA或甘氨酸的濃度不能抵消所述芳基烷基胺的抑制作用。即觀察不到NMDA或甘氨酸的EC50值的變化。從而，所述芳基烷基胺為在NMDA受體-離子載體復合物上的非競爭性的拮抗劑，既不作用于谷氨酸結合部位也不作用于甘氨酸結合部位。
實施例2對抗紅藻氨酸和AMPA受體功能的活性在小腦粒細胞中的[Ca2+]i的測定結果也可以用于監測存在于該組織中的原始的紅藻氨酸和AMPA受體的活性。盡管由這些激動劑所引起的[Ca2+]i的升高其重要性要次于由NMDA/甘氨酸引起的[Ca2+]i的升高，其應答仍是很強的，并且可以用于準確地測定芳基烷基胺對藥學上確定的谷氨酸受體亞型作用的特異性。比較性的[Ca2+]i的測定結果揭示了在所述芳基烷基胺的受體特異性方面的明顯的區別。某些例如JSTX-3(Joro Spider toxin from the spider Niphila clavata)是由紅藻氨酸(100μM)或AMPA(30μM)激活的應答的更有效的拮抗劑。另一方面，發現在由化合物1和化合物2所定義的兩種結構類型中芳基烷基胺優先抑制由NMDA引起的應答(顯示在效力方面約100倍的差異)。從而，例如化合物1和化合物2的芳基烷基胺是在小腦粒細胞中NMDA受體-介導的應答的有效力的和選擇性的抑制劑。
實施例3膜片鉗法(Patch clamp)電生理學研究對分離的成年大鼠腦的皮質或海馬神經元的膜片鉗法電生理學研究已經提供對化合物1、化合物2和化合物3的作用機理另外的見解。這些研究揭示芳基烷基胺對于由NMDA受體介導的應答的有效力和選擇性的抑制作用。從而，化合物例如化合物1以毫微摩爾濃度阻滯對NMDA的應答，而不影響的紅藻氨酸的應答。這些結果(顯示在皮質或海馬神經元中芳基烷基胺的選擇性的抑制作用)表明所述芳基烷基胺以在哺乳動物的CNS中的不同區域的NMDA受體作為目標。此外，已發現這些化合物的抑制作用為用途-和電壓-依賴性的。這強烈暗示這些化合物阻滯所述開放通道，并通過該作用發揮非競爭性NMDA受體拮抗劑的作用。然而，重要的是可以將所述芳基烷基胺與Mg2+和MK-801區分開，尤其是對于其作用開始的電壓依賴性和作用的可逆性而言。
實施例4放射配基結合測試放射配基研究已經顯示芳基烷基胺例如化合物1和化合物2具有獨特的作用部位。盡管在某些方面(以上討論的非競爭性開放通道阻滯)它們與MK-801作用相似，在完全阻滯NMDA受體介導的應答的濃度下，它們不能置換[3H]MK-801的結合。例如這樣的測試也顯示所述芳基烷基胺對于在NMDA受體-離子載體復合物上的已知的MK-801、Mg2+或多胺結合部位不具有高親和力的結合。所述芳基烷基胺以阻滯NMDA受體介導的應答的濃度下，也不能直接與谷氨酸、甘氨酸或∑部位結合。合成了[3H]化合物2以用作結合研究的放射配基，從而進一步探索化合物2的作用機理，特別是用于大量的篩選，以便測試其它類似物的活性并發現新的導向結構。類似的研究采用[3H]化合物5。顯然像化合物1和化合物2的化合物以NMDA受體-離子載體復合物上的沒有其它已知的化合物存在的部位作為目標。所述芳基烷基胺在新部位上的以分子水平的作用轉化成稱為以行為水平的顯著的治療優點。正如以下所述，所述芳基烷基胺具有與其它非競爭性的NMDA受體拮抗劑完全不同的效果。
實施例5突觸傳遞研究以上發現顯示某些芳基烷基胺，尤其那些在結構上與化合物1和化合物2有關的芳基烷基胺，通過新的機理和作用部位發揮作用，有效地和選擇性地抑制來自不同的腦區域的神經元上的NMDA受體介導的應答。為進一步測定芳基烷基胺的選擇性抑制作用，測定其對于由NMDA和AMPA受體介導的突觸轉遞的作用。
在含有海馬的鼠腦的切片部分中測定在Schaffer側突和CA1錐狀細胞的突觸的谷氨酸介導的傳遞。該測定方法測定了由突觸前釋放谷氨酸所引起的電生理學上的突觸后去極化，并可以容易地區分由NMDA或AMPA受體介導的突觸傳遞。再次發現像化合物1、化合物2和化合物3的芳基烷基胺對于NMDA受體介導的應答具有優先的抑制作用，并只有在更高的濃度下才抑制由AMPA受體介導的應答。例如，化合物1具有對NMDA受體介導的應答的IC50為20μM，而對于AMPA受體介導的應答的IC50為647μM。這些結果顯示芳基烷基胺可以選擇性地抑制由NMDA受體介導的突觸傳遞。其它存在于Agelenopsis aperta的毒素中的天然芳基烷基胺同樣具有對在鼠海馬中的NMDA受體介導的應答的有效的和選擇性的作用。
總之，這些不同的研究結果相互補充并一起從結構上鑒定對于在哺乳動物的CNS中的NMDA受體上具有有效的和選擇性的抑制作用的新的類型化合物。另外，這些化合物以在NMDA受體-離子載體復合物上的獨特部位為目標。選擇化合物1、化合物2和化合物3作為各種體外和體內測試(模式治療上重要的最后結果)的另外的研究中。
神經保護劑活性神經保護劑藥物所需的性質包括下列性質(1)該藥物可以經口服或注射途徑給藥(即在胃、腸或血管體系中不顯著分解，從而以有效治療量到達待治療的組織)。這類藥物容易在哺乳動物身上試驗以確定其生物有效性。(2)當在局部缺血損害(突然發作、窒息)或創傷性損傷(腦損傷、脊髓損傷)后給藥，該藥物顯示神經保護活性。(3)該藥物沒有或具有最小的副作用例如識別損害、破壞運動行為、鎮靜或過度興奮、神經元空泡形成、心血管活性、PCP-樣濫用可能性或PCP-樣神經變性活性。
盡管谷氨酸是生理突觸遞質，慢性的暴露于谷氨酸導致神經元細胞的死亡。大部分由谷氨酸引起的神經變性似乎是由NMDA受體介導，并直接由細胞質的Ca2+水平的緩慢的提高所引起。已有深入的實驗支持這一觀點，即NMDA和AMPA受體在介導突然發作和其它局部缺血/缺氧癥以后的神經元的變性中起著重要的作用(Choi，Glutamateneurotoxicity and diseases of the nervous system.Neuron 1623，1988)。該證據的大部分是基于在體外和體內的突然發作的模型中有效地阻滯神經元細胞的死亡的NMDA和AMPA受體的競爭性或非競爭性拮抗劑的能力。從而，在設計用來檢測該活性的標準測定中檢驗了化合物1、化合物2和化合物4。
實施例6皮質神經元的保護作用為了測定體外芳基烷基胺的神經保護劑作用，將在培養基中生長的小鼠皮質神經元露置于NMDA下5分鐘，24小時后通過測定乳酸脫氫酶(LDH)(死亡細胞釋放的細胞質酶)的釋放來監測細胞死亡(Choiet al.，Glutamate neurotoxicity in cortical cells culture.J.Neurosci.7357，1987)。露置于NMDA下殺死80％的所述皮質神經元。化合物1或化合物2(包括與NMDA一道)防止細胞死亡的IC50值分別為70μM和30μM。所述芳基烷基胺的有效濃度高于其它非競爭性NMDA受體拮抗劑的有效濃度，然而，與競爭性拮抗劑的有效濃度類似。所述NMDA受體拮抗劑的有效濃度根據特定的實驗條件或所研究的細胞類型(皮質、海馬、紋狀體)而變化。所述神經保護劑作用可能是由這些化合物阻滯由NMDA受體觸發的細胞外Ca2+的流入的能力引起的。
確定可能的治療效力的更精確的試驗包括體內突然發作模型。在這些模型中，通過夾住腦的主動脈暫時阻滯血的供應。使用兩個這類的體內模型來確定化合物1、化合物2和化合物4防止神經元細胞損失的能力。
實施例7兩側頸總動脈閉塞第一個測定為在沙土鼠中所造成的前腦局部缺血的兩側頸總動脈閉塞模型(Karpiak et al.，Animal models for the study of drugs inischemic stroke.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.29403，1989；Ginsbergand Busto，Rodent models of cerebal ischemia.Stroke 201627，1989)。通過夾住所述頸動脈，使流向腦的血流中斷7分鐘。在使血流正常后30分鐘，腹膜內一次性給予所述試驗化合物。在所述試驗期間，使動物的中心體溫(core body)保持在37℃，以便防止任何高熱反應。已經顯示許多NMDA受體引起高熱，該作用可以解釋大多數的這類化合物的保護作用。在神經元細胞死亡4天后，通過腦的銀染色切片檢驗腦并通過形態測定法定量死亡的數量。在檢驗的腦的所有區域(海馬的CA1區、紋狀體和新大腦皮層)化合物2(20mg/kg)顯著保護神經元細胞免受死亡(p＜0.05)。在像1mg/kg一樣低的劑量提供紋狀體的完全的保護作用(98％)。將其保護程度與使用類似劑量的非競爭性NMDA拮抗劑MK-801所達到的程度相比較。
在其后的試驗中，化合物1(10mg/kg)在局部缺血后7天測定的沙土鼠海馬的CA1區中神經元死亡的數量降低23％，而化合物4(10mg/kg)提供90％的保護。
實施例8中間大腦動脈阻塞在大鼠中造成的突然發作的中間大腦動脈阻塞的模型(Karpiak etal.，Animal models for the study of drugs in ischemic stroke.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.29403，1989；Ginsberg and Busto，Rodent models ofcerebral ischemia.Stroke 201627，1989)不同于所述沙土鼠模型，因為其導致受到更多限制的腦阻塞，從而，接近不同種類的突然發作(灶性血栓形成的突然發作)。在使用該發作模型的第一個研究中，使用外科結扎永久性阻塞一根大腦動脈。在阻塞后30分鐘后，一次腹膜內(i.p.)注射給予所述試驗化合物。在所述試驗期間，保持動物的中心體溫在37℃以防止任何高溫反應。在神經元損失24小時后做腦的組織學測定。使用來自10個載玻片的組織灰白的面積計算梗塞體積。已發現單劑量的化合物1(30mg/kg)顯著(p＜0.05)保護神經元免于損失，與最高有效劑量(10mg/kg)的MK-801效果一樣(約15％的保護)。使用化合物2(20mg/kg)的初步研究顯示類似的趨勢。
在大鼠病灶性大腦局部缺血的第二個研究中，通過將小段的縫合線通過頸總動脈到達中腦頸總動脈的部位，永久性阻斷中腦動脈。保持中心體溫在37℃。在局部缺血一開始即給予10mg/kg i.p.的化合物4，產生在24小時后記錄到的腦梗塞體積的統計學上顯著地減少(20％)。
在大鼠的病灶性大腦局部缺血的第三個研究中，通過使用孟加拉玫紅染料的光致血栓形成方法產生局部缺血性梗塞。在局部缺血形成后30分鐘給予10mg/kg(i.p.)的化合物4，產生在該梗塞體積上的20％的降低，類似于使用非競爭性NMDA受體拮抗劑MK-801的作用。
在大鼠的病灶性大腦局部缺血的第四種模型中，通過將小段的縫合線通入頸動脈到達中腦頸總動脈，暫時性阻塞中腦頸總動脈。在局部缺血2小時后，抽出該縫合線。保持中心體溫在37℃。在局部缺血一開始立即給予10mg/kg(i.p.)的化合物4，在72小時后，產生在梗塞體積上統計學顯著的降低(37％)。
由這些體內試驗結果形成所述導向化合物的幾個重要的特征。第一的和最重要的是，化合物1、化合物2和化合物4顯示在突然發作的幾種不同的體內模型中的神經保護劑作用。所述沙土鼠測定為用于短暫的普遍大腦局部缺血和缺氧例如心博停止或產期缺氧的模型。大鼠測定為永久性和暫時性病灶性大腦局部缺血的模型。化合物1和化合物4在永久性病灶突然發作模型中具有神經保護性的發現使人感到震驚，因為藥物對于梗塞形成的部位的可及度受到半影區(一般不大)的限制。此外，化合物1和化合物4顯著(p＜0.05)限制損傷的程度。其次，在局部缺血發生后給予所述化合物時有效。這非常重要，因為據信在梗塞形成后有“機會的窗口”，在此期間藥物可以有效地阻止壞死損傷。這個時間在人體中究竟有多長還不確定，可能根據梗塞的類型而變化。然而，重要的觀察結果是一旦所述變性過程已經開始，所述化合物可以阻止神經元細胞死亡的漫延。最后，當非腸道給藥時，化合物1、2和4是有效的，表明它們可以通過血腦屏障。
抗驚厥劑活性抗驚厥藥物所需要的性質包括該類藥物可以經口服或注射途徑給藥，該類藥物顯示對幾種癲癇發作類型顯示有效的抗驚厥活性，包括(但不限于此)簡單的部分癲癇發作、復雜的部分癲癇發作、癲癇持續狀態和創傷導致的癲癇例如腦損傷后出現的情況，包括腦部手術；該類藥物沒有或具有最小的副作用例如識別損害、運動行為損害、鎮靜或過度興奮、神經元空泡形成、心血管活性、PCP-樣濫用可能性或PCP-樣擬精神病活性。
谷氨酸是腦部中的主要激動性遞質，因而在癲癇發作活性中可以起重要的作用，并且是癲癇的病因。支持谷氨酸受體在癲癇中起主要作用的大部分證據來自于藥理學研究的結果，該結果顯示谷氨酸受體激動劑誘發癲癇，及當體內給藥時，NMDA和AMPA受體拮抗劑為有效的抗驚厥劑。有許多體內模型涉及不同種類的癲癇和關于行為的作用，它們與癲癇不同的臨床形式有關。從而，在不同的模型上檢驗其作用是慎重的，因為假設將同樣的機理作為所有癲癇活性形式的基礎過于簡單。
實施例9抗驚厥劑阻滯活性在早期的研究中，觀察到芳基烷基胺阻滯由紅藻氨酸、印防己毒素或畢扣扣靈所誘發的癲癇發作的能力。這些抗驚厥劑的每一個通過不同的機理發揮作用，由紅藻氨酸所激發的癲癇發作從機制上不同于由印防己毒素或畢扣扣靈所激發的癲癇發作。在這些試驗中，在給予印防己毒素或畢扣扣靈前5分鐘和給予紅藻氨酸后5分鐘，靜脈(iv)給予含有幾種芳基烷基胺毒素的Agelenopsis aperta毒素的部分。所述芳基烷基胺降低了由所有這三種試劑誘發的癲癇發作。印防己毒素或畢扣扣靈的作用如此強，以致所有的19只對照動物在25分鐘內死亡。相反，預先接受芳基烷基胺處理的9只動物沒有一只死亡。實際上，只有一半的用芳基烷基胺處理的動物顯示稍有驚厥和其癥狀在1小時內減輕。這些結果顯示芳基烷基胺的明顯的抗驚厥劑的作用并促進使用純化的芳基烷基胺和其類似物做進一步的研究。
實施例10癲癇發作的刺激在第二組的研究中，開始使用三種不同的誘發癲癇發作的試驗范例，而且芳基烷基胺例如化合物1證明在其兩個范例中是有效的抗驚厥劑。頭兩個模型使用DBA/2小鼠，它們易于聽原性癲癇發作。由聲音(109dBs的鈴聲)或腹膜內內(i.p.)給予NMDA(56mg/kg)激發癲癇發作。在所述驚厥劑刺激前15-30分鐘給予所述試驗物質。在所述聽原性刺激后1分鐘或給予NMDA后15分鐘記錄陣攣性癲癇發作的次數。化合物1、化合物2和幾種其它的芳基烷基胺例如化合物3和化合物4抑制由這兩種刺激誘發的癲癇發作。例如，化合物2具有對于聽原性刺激的ED50為0.13mg/kg s.c.及對于NMDA刺激的ED50為0.083mg/kg s.c.。類似地，化合物4在所述聽原性癲癇發作模型中的ED50(0.08mg/kg)接近MK-801的ED50(0.02mg/kg)。相反，在降低由i.p.NMDA激發的CF-1小鼠的癲癇發作方面，在劑量高達50mg/kg s.c.下，化合物1和化合物2均無效。
在第二獨立的試驗系列中，發現化合物1和化合物4在反射性癲癇的另一個遺傳敏感的小鼠模型(Frings小鼠)中，在防止由聲音誘發的癲癇發作，在腹膜內內內注射給藥后的IC50值分別為14.3mg/kg和約15mg/kg。這些化合物在大腦室內[intracerebroventricular(i.c.v.)]注射后，具有對抗Frings小鼠中聽原性癲癇發作的非常大的效力，其IC50值分別為0.63μg(化合物1)和4.77μg(化合物4)。也發現化合物1在劑量為4μgi.c.v.時，有效地對抗由在CF1小鼠上的最大的電休克誘發的癲癇發作。
在使用反射性癲癇的遺傳敏感的小鼠模型(Frings小鼠)的另一些研究中，通過i.c.v.注射給予化合物9、化合物12和化合物14，防止由聲音誘發的癲癇發作，其IC50值分別為4.77μg、12.2μg和13.9μg。
這些共同的發現顯示芳基烷基胺例如化合物1、化合物2和化合物4在防止癲癇聽原性的和非癲癇的(化學驚厥劑)癲癇發作方面有效。這種一般化的活性形式提示芳基烷基胺具有用于臨床上控制癲癇的活性。此外，化合物1、化合物2及尤其化合物4在癲癇活性的體內模型中顯示當以低劑量非腸道給藥時，這些化合物可以具有在治療上恰當的作用，及當直接給藥于大腦室時，效力尤其顯著。
止痛活性止痛藥的所需性質包括該類藥物可以經口服或注射途徑給藥，該藥物顯示止痛活性，該類藥物沒有或具有最小的副作用例如識別損害、運動行為損害、鎮靜或過度興奮、神經元空泡形成、心血管活性、PCP-樣濫用可能性或PCP-樣擬精神病活性。
谷氨酸和NMDA介導的應答可以在某些類型的痛感方面(Dickenson，A cure for wind upNMDA receptor antagonists as potentialanalgesics.Trends Pharmacol.Sci.11302，1990)起作用。因而，檢驗了化合物1、化合物2、化合物3和化合物4的可能的止痛作用。
實施例11扭曲應答試驗在第一系列試驗中，給予動物可誘發扭曲應答(腹部伸展)的不適刺激(2-苯基-1，4-苯醌，PBQ)。一般記錄在5分鐘的觀察期內出現的扭曲次數。傳統的止痛藥例如嗎啡可以有效地降低PBQ-誘發的扭曲的數目(以4mg/kg i.p.，100％阻滯所述扭曲應答)。非甾體抗炎藥同樣對該模型有效。在PBQ以前30分鐘給藥s.c.或i.p.時，化合物1(2mg/kg)化合物2(2mg/kg)和化合物3(1mg/kg)抑制扭曲應答在95％以上。這些結果顯示化合物1、化合物2和化合物3緩解內臟疼痛。
在類似的系列試驗中，發現化合物1和化合物4在i.p.注射后，抑制乙酸誘發的小鼠的扭曲，其IC50分別為10mg/kg和1mg/kg。
實施例12熱板試驗在另一個測試中測定化合物1的止痛活性。在該止痛活性模型中，在置于熱板上(50℃)以前30分鐘，給予小鼠試驗物質s.c.。測定舔腳或從板上跳下的時間作為止痛活性的指標，有效的止痛劑增加了舔腳或跳下的潛伏期。嗎啡(5.6mg/kg)增加跳下潛伏期的765％。化合物1在該試驗中同樣有效，在劑量為4和32mg/kg分別增加舔腳潛伏期136％和跳下潛伏期360％。
值得注意的是化合物1在所述熱板測試中的止痛作用并不伴隨在翻轉網柵(inverted grid)測試(見以下介紹)中降低的行為。這顯示從熱板跳下的潛伏期的增加并不簡單地反映損傷的運動能力。總之，這些數據提示化合物1具有顯著的止痛活性。
在其后的系列試驗中，化合物1和化合物4顯示當通過鞘內(i.th.)途徑給藥時，在大鼠上具有顯著的止痛活性。在這些試驗中，使用52℃的熱板作為感受傷害的刺激。化合物1(0.3-3nmol)和化合物4(0.3-3nmol)產生劑量和時間依賴性的抗感受傷害的作用；在效力和功效方面，這些芳基烷基胺類似于嗎啡(0.3-3nmol)。在另一方面，NMDA受體拮抗劑MK-801在該測試中無效(3-30nmol)。
實施例13快速甩尾試驗在該標準試驗中，熱感受傷害的刺激為52℃的熱水，測定快速甩尾或抽出的潛伏期作用指標。在i.th.給藥后，化合物1(0.3-3nmol)和化合物4(0.3-3nmol)產生劑量和時間依賴性的止痛作用。在效力和功效方面，這些芳基烷基胺類似于嗎啡(0.3-3nmol)。在另一方面，NMDA受體拮抗劑MK-801在該測試中無效(3-30nmol)。
實施例14福爾馬林試驗在接受左后爪注射50μl稀的福爾馬林(5％)以前，使雄性Sprague-Dawley大鼠適應觀察室至少1小時。在鼠爪的背側s.c注射福爾馬林后立即通過該動物顯示畏縮的次數，監測行為應答。在福爾馬林注射后，監測其行為至少50分鐘，并記錄作為早期應答(給予福爾馬林后0-10分鐘)和晚期應答(給予福爾馬林后20-50分鐘)。在福爾馬林(預處理)前10分鐘或在福爾馬林(后處理)后10分鐘，鞘內(i.th)注射5μl的各化合物。
足底內(intraplantal)給予福爾馬林產生畏縮行為的雙向應答，通常稱作早期和晚期應答。作為對于福爾馬林的預治療劑，鞘內給予化合物1(0.3-10nmol)和化合物4(0.3-10nmol)有效地抑制早期或晚期畏縮行為。使用所述芳基烷基胺的預治療的效果類似于使用嗎啡(1-10nmol)或MK-801(1-30nmol)的預治療效果。
在給予福爾馬林后，給予化合物1(0.3-10nmoli.th.)產生后期畏縮的一定的抑制作用，盡管只有在10nmol劑量才能達到顯著性。在福爾馬林后給予化合物4(0.3-10nmol i.th.)產生對后期畏縮的顯著抑制，其顯著性的劑量為3和10nmol。芳基烷基胺的止痛活性類似于福爾馬林后給予嗎啡(1-10nmol)的活性；然而，福爾馬林后給予MK-801(1-30nmol)不影響晚期畏縮。
總而言之，使用熱板法、快速甩尾法和福爾馬林法的測試所獲得的結果顯示芳基烷基胺例如化合物1和化合物4在急性疼痛的幾種哺乳動物模型上具有顯著的止痛活性。所述福爾馬林測試還顯示芳基烷基胺對于慢性疼痛的動物模型有效。重要的是，所述芳基烷基胺具有在福爾馬林刺激后給藥時，具有顯著的止痛活性。其活性明顯可以將芳基烷基胺與標準的NMDA受體拮抗劑例如MK-801區分開。
芳基烷基胺的副作用假定NMDA受體在多種腦功能中起著重要的作用，發現該受體的拮抗劑一般與某些不受歡迎的副作用相連系就不使人感到驚奇。實際上，正是這種性質為發現以NMDA受體作為目標的治療劑造成障礙。其特征在于既有競爭性的又有非競爭性的拮抗劑的主要的副作用包括PCP-樣擬精神病活性、運動行為損害、鎮靜或過度興奮、識別能力損害、神經元空泡形成或心血管作用(Willetts et al.，The behavioralpharmacology of NMDA receptor antagonists.Trends Pharmacol.Sci.11423，1990；Olney et al.，Pathological changes induced in cerebrocorticalnrurons by phencyclidine and related drugs.Science 2441360，1989)。與NMDA受體介導的應答的抑制有關的擬精神病的作用被概括在作為對于苯環己哌啶(PCP)或作為MK-801結合部位的“angel dust”的應答中。識別能力的損害與NMDA受體在學習和記憶中一般所起的重要作用有關。
對于AMPA受體拮抗劑的副作用知道得較少。然而，顯然這類化合物也激發運動損傷、共濟失調和深度的鎮靜。
在表明運動損傷、鎮靜和擬精神病的活性動物模型中以及體外和體內的學習和記憶模型中檢驗芳基烷基胺的活性。
(a)PCP-樣擬精神病活性在哺乳動物中NMDA受體的競爭性和非競爭性拮抗劑產生特征為機能亢進、搖頭和共濟失調的PCP-樣的刻板癥的行為(Willetts et al，The behavioral pharmacology of NMDA receptor antagonists.TrendsPharmacol.Sci.11423，1990；Snell and Johnson，InExcitatory AminoAcids in Health and Disease，John Wiley & Sons，p.261，1988)。我們研究了是否芳基烷基胺將激發這些行為。此外，我們也研究了是否在受訓區別PCP和鹽水的大鼠中所述芳基烷基胺將取代PCP(Willetts et al.，The behavioral pharmacology of NMDA receptor antagonists.TrendsPharmacol.Sci.11423，1990)及是否所述芳基烷基胺將激發PCP-樣神經元的空泡形成(Olney et al.，Pathological changes induced incerebrocortical nrurons by phencyclidine and related drugs.Science2441360，1989)。
實施例15運動活性第一個測試只須在末梢(s.c.或i.p.)給予試驗物質后的第一個小時內監測運動活性。小鼠在被置于活動室前15分鐘接受一定劑量的化合物1。通過在60分鐘內，在光電管網柵中計數休息的次數來使活性定量。在該測試中，MK-801(0.25mg/kg p.o.)引起運動活性上2-3倍的增加。然而，化合物1甚至以32mg/kg s.c.試驗時，不激發機能亢進，實際上趨向于使其抑制。在小鼠中使用純化的芳基烷基胺的該結果補充了由大鼠上所獲得的早期的結果，在所述早期的結果中，來自Agelenopsis aperta的包含芳基烷基胺的全組分當靜脈注射時不激發PCP樣的行為綜合癥，然而似乎產生溫和的鎮靜作用。
實施例16運動損害一般化的運動損害的第一步測試中，在翻轉網柵測試(inverted gridassay)中檢驗化合物1。在該測試中，將動物置于懸掛在可以翻轉的轉動的金屬棒上的帶孔的金屬網柵上。然后，就動物爬到所述網柵的頂端或懸掛在網柵上的能力給動物打分。該測試提供了可以由共濟失調導致的“行為損傷”、喪失翻正反射、鎮靜或肌肉松弛的信息。在這些試驗中，化合物1(以32mg/kg s.c.給藥)不降低當將所述網柵翻轉時，DBA/2小鼠使自己翻轉過來的能力(p＞0.05)。同樣，化合物2當以20mg/kg劑量s.c.給藥時，不影響DBA/2小鼠的運動行為(p＞0.05)。這些劑量顯著高于用于防止DBA/2小鼠上聲音誘發的癲癇發作所需的劑量(見以上實施例10)。
在急性運動損傷的第二個測試是旋轉測試。在該測試中，給Frings和CF1小鼠注射試驗化合物并置于以6rpm速度旋轉的帶隆起的棒上。測定所述小鼠長期保持平衡的能力；那些在三次試驗中的一次，在1分鐘的旋轉中不能保持平衡的小鼠被認為受到損傷。化合物1在Frings小鼠中產生的運動損傷的TD50(在50％的試驗動物中產生運動毒性的劑量)為16.8mg/kg i.p.。該劑量類似于防止Frings小鼠上聲音誘發的癲癇發作所需的劑量(見以上實施例10)。然而，當將化合物1經i.c.v.給藥時，在化合物1的有效劑量和毒性劑量之間非常明顯的分開。在該情況下，直到化合物1的劑量超出1.56μgi.c.v.(大于0.63μg的ED50二倍)時，才有明顯的運動毒性。最后，在經i.c.v.給予4μg的化合物1才能觀察到在CF1小鼠上的運動損害。
通過i.c.v.注射給予Frings小鼠化合物4、化合物9、化合物12和化合物14，并測定急性運動損害。就化合物4、9、12、和14的TD50值分別為8-16μg、14.8μg、30.2μg和30.8μg。這些TD50值高于作為抗驚厥劑效力的有效的IC50值的2-3倍(見以上實施例10)；在有效劑量和毒性劑量之間可以觀察到明顯的分開。
實施例17PCP區分在該試驗中，已經訓練食物強化的使用杠桿(lever press)的大鼠必須選擇其籠內的兩個杠桿哪一個是正確的。它們所具有的選擇正確的杠桿的唯一的刺激物是檢測是否它們接受了PCP或注射溶媒的它們的能力。在訓練2個月后，大鼠已經非常善于區分PCP與注射溶媒，然后，可以試驗其它藥物以便確定是否它們識別PCP。當在該過程中進行試驗時，用其它已知的產生PCP樣毒性的藥物代替PCP。這些藥物包括各種PCP的類似物例如氯胺酮和非競爭性NMDA受體拮抗劑MK-801。
化合物1(1-30mg/kg i.p.)沒有取代PCP，從而，完全沒有PCP樣的區分激動作用。在i.p.30mg/kg劑量，在7只試驗動物中只有1只真正對任一杠桿有反應。從而，顯然評價了化合物1的行為上的有效的劑量范圍。因為據認為試驗化合物在大鼠身上產生PCP樣作用的能力可以預測其在人體上產生PCP樣的擬精神病的活性和濫用責任的能力，所以這些結果強烈的提示所述芳基烷基胺例如化合物1在人體上沒有這類有害的副作用。
實施例18給予大鼠像PCP和MK-801這樣的化合物產生稱為神經元空泡形成的神經毒性作用。在一次性給予這類化合物后，在特定的中樞神經元特別是帶狀(cingulate)皮質和后夾肌(retrosplenial)皮質的神經元中發現空泡。在用化合物1(100mg/kg i.p.的一次性的高劑量)治療的大鼠中不存在這類空泡的形成。
總之，在運動活性、運動損害、PCP區分和神經元空泡的形成方面的結果強烈提示芳基烷基胺在人體中沒有PCP樣的副作用。
(b)識別損害假定NMDA受體在記憶和學習中的作用的主要理由之一來自于在大鼠海馬中的長期強化(LTP)方面的細胞的研究。LTP是在由短暫然而強烈的突觸刺激產生的突觸應答的數量方面的長期持續的增加。由于這一現象的發現，它已經成為在脊椎動物腦中優越的學習的細胞模型(Teyler and Discenna，Long-term potentiation.Annu.Revl Neurosci.10131，1987)。在由Schaffer側突形成的突觸到CA1錐狀細胞的傳遞是受NMDA和AMPA受體介導的。在短暫的強直性刺激后，總體峰(突觸傳遞的測量)的大小極大增加并保持數小時。已經顯示NMDA受體的所有已知的競爭性和非競爭性拮抗劑阻滯大鼠海馬中的LTP，而非NMDA受體的拮抗劑沒有該作用(Collingridge and Davis，InTheNMDA Receptor，IRL Press.p.123，1989)。這支持NMDA受體在記憶和學習中的作用。
實施例19LTP的測定就對大鼠海馬的切片中的LTP的影響而言，檢驗選擇的芳基烷基胺和文獻標準物的作用。如預先所考慮，所有常規的競爭性(AP5和AP7)和非競爭性(MK-801和芐哌酚胺)的NMDA受體拮抗劑抑制在所述海馬中的LTP的誘發。在轉遞由3次訓練(間隔500毫秒)組成的強直性刺激(100Hz，每次1秒)以前，用試驗化合物使大鼠海馬的切片過冷達30-60分鐘。在強直后，再監測應答幅度15分鐘。所述引起平均95％的強直性刺激增加突觸應答的幅度。所述LTP的誘發被競爭性(AP5和AP7)和非競爭性(MK-801和芐哌酚胺)的NMDA受體拮抗劑顯著抑制(p＜0.05)。十分令人驚訝的是，所試驗的芳基烷基胺(化合物1、化合物2、化合物3和其它化合物)中沒有一個化合物阻滯LTP的誘發(p＞0.05)，甚至當以引起某些控制應答的抑制的高濃度(100-300μg)用藥時也是如此。
這些結果也使芳基烷基胺的另一個獨特和重要的特征變得顯著。芳基烷基胺是第一類，而且是目前唯一的一類作為不阻滯LTP誘發的NMDA受體的選擇性和有效的拮抗劑。這可能反應了芳基烷基胺的新的機理和作用部位，并提示以NMDA受體上的新部位作為目標的藥物同樣沒有對LTP的作用。因為LTP是哺乳動物CNS中學習和記憶的主要細胞模型，它還提示這類藥物對于識別行為沒有有害的作用。
實施例20學習試驗在體內的學習方案中使用更有效的合成芳基烷基胺類似物之一化合物3的初步試驗顯示這些藥物沒有對識別行為的作用。在該試驗中，以食物獎勵，培訓大鼠在T迷宮中選擇轉彎處。使用MK-801作為對照物。在試驗前15分鐘，i.p.給予試驗化合物。對照組動物選擇正確率約為80％。MK-801劑量的提高逐漸降低正確選擇的次數，在行為上的減少伴隨著機能亢進。相反，化合物3不損害動物做出正確選擇的能力(p＞0.05)。在試驗的最高劑量下，化合物3引起運動活性的降低，正好與使用MK-801觀察的相反的作用。
盡管MK-801在增加運動活性的同時，降低了學習性能，在哺乳動物和靈長類中使用不同范例的其它研究已經顯示對于學習和運動的影響之間沒有明顯的聯系。從而，以不引起任何明顯的運動行為方面變化的劑量下，競爭性和非競爭性NMDA受體拮抗劑均不損害學習性能。這表明常規的NMDA受體拮抗劑除了其它的副作用以外，損害學習性能。T-迷宮測試的結果顯示化合物3和其它的芳基烷基胺甚至在引起運動活性的某些降低的劑量下不損害學習性能。
另外的一個觀察來自于這些學習試驗。所述動物對于第二天的試驗的最初應答是隨意的，因而它不依賴于前一天試驗的最后的應答。從而，對照動物做出最初選擇的正確率是50％。MK-801對該最初的選擇沒有作用。然而，在前一天給予化合物3的動物做出最初選擇的正確率通常相當高。不同于對照動物，給予化合物3的動物表現出似乎它們記住了前一天的最后的選擇。
在第二個系列試驗中，評價化合物4對于在Morris水迷宮任務中學習的影響。在該試驗中，將隱蔽的平臺置于在一個圓形的鋼槽中的固定位置上，并浸入水下2厘米。每只大鼠每天進行三次試驗(兩次試驗的間隔為10分鐘)，進行5天。在三個預先確定的位置之一開始試驗，將大鼠置于水中，鼻子朝向槽壁。每天變化開始位置的次序。以游到所述平臺所需時間的減少測定學習性能。如果試驗開始后60秒鐘內，動物沒有找到所述平臺，用手引導該鼠到平臺。在從所述槽內移出以前，使動物在所述平臺上滯留10秒鐘。在第5天，在最后一次培訓試驗后10分鐘，所述動物接受探索試驗。在所述第一次試驗任務中移動所述平臺，引導動物游60秒以便估計所述平臺位置的空間誤差。在這次任務中記錄兩次測量值第一次橫渡所述平臺所在區域的潛伏期和總的橫渡次數。給每只大鼠總共注射5次化合物4。在第一系列的試驗中，每天以10mg/kg i.p.給予化合物4，共計5天。該處理的樣本損害學習性能；然而，隨著重復給予化合物4的這些試驗動物表現出顯著的體重減少和反常的行為信號(“戰栗”、運動損害、游泳困難)。在其后的研究中，6只動物在訓練的頭4天接受1mg/kgi.p.，而2只動物在此期間接受5mg/kg i.p.。在訓練的最后一天，兩組均接受10mg/kg。所述給予1mg/kg和5mg/kg的動物均未顯示出任何在記住所述隱蔽平臺位置方面的損害，最后的10mg/kg劑量也未產生在所述動物完成已經記住的任務方面的任何有害的損害。
這些學習任務的結果使人感到鼓舞。它們提示芳基烷基胺沒有其它NMDA受體拮抗劑所具有的使學習和記憶降低的作用。實際上，所述芳基烷基胺甚至可以是nootropic(記憶增強劑)。
(c)心血管作用使用某些芳基烷基胺的體內研究顯示這些化合物的低血壓作用，尤其在高劑量時。根據這些研究結果，進行了芳基烷基胺對心血管功能的影響的系統的研究。
實施例21Ca2+通道抑制作用我們已經發現某些芳基烷基胺是十分有效的電壓敏感性Ca2+通道，尤其對二氫吡啶抑制敏感的Ca2+通道(L-型通道)的抑制劑。預計對血管平滑肌的這些作用使血管膨脹并引起血壓降低，從而產生低血壓。
檢測在小腦粒細胞和大鼠主動脈平滑肌細胞系A7r5細胞中芳基烷基胺抑制對二氫吡啶敏感的Ca2+通道的能力。在小腦粒細胞中，化合物2以高于阻滯對NMDA應答阻滯所需的濃度100倍的濃度抑制[Ca2+]i增加誘發的去極化作用(IC50值分別為24μM和161nM)。總之，我們已經觀察了抑制電壓敏感性Ca2+通道的廣泛的效力，它與抑制NMDA受體的效力無關。這強烈地提示基于所述芳基烷基胺分子化學修飾的進一步的結構-活性的工作將導致發現為具有低的抑制電壓敏感性Ca2+通道的效力的非常有效的NMDA受體拮抗劑的化合物。化合物1(具有抑制小腦粒細胞中NMDA受體介導的應答的IC50為102nM)確實是較差的在小腦粒細胞中電壓敏感性Ca2+通道的抑制劑(IC50＝257μM)并且實際上對在A7r5細胞中電壓敏感性Ca2+流入沒有作用(IC50＝808μM)。
然而，芳基烷基胺不是電壓敏感性Ca2+通道的無差別的阻滯劑。例如，它們不影響在小腦Purkinje細胞中電壓敏感性的Ca2+通道(P-型通道)或那些被認為包括在神經轉道質釋放的通道(N-通道)。確實阻滯電壓敏感性Ca2+通道的芳基烷基胺表現出其目標尤其對著L-型Ca2+通道。
實施例22體內心血管研究芳基烷基胺化合物1和化合物2以在體內發作模型中有效的劑量(10-30mg/kg s.c.)，產生在麻醉大鼠中平均動脈血壓(MABP)的適度降低(20-40mmHg)。化合物4的低血壓的作用已經被詳細評價。當以10mg/kg i.p.的劑量給藥時，化合物4激發平均動脈壓的顯著降低(4mmHg)，它持續約90-120分鐘；正是在這同一組大鼠中，化合物4提供在中腦動脈梗塞的縫合模型中顯著的神經保護作用(見以上實施例8)。類似的結果在大鼠的研究中獲得，其中化合物4顯示在病灶性局部缺血突然發作的孟加拉玫紅光致血栓形成模型中的神經保護劑活性(見以上實施例8)。使用刺毀腦脊髓的大鼠試樣的進一步研究強烈提示化合物4的低血壓活性是末梢介導作用。由化合物4產生的低血壓和心博徐緩在用阿托品預處理的大鼠中被維持，提示這些作用受膽堿能的機理介導。類似地，化合物4在化學上交感神經切除的大鼠(用神經節阻滯劑)中激發低血壓和心博徐緩，提示這些作用是經交感神經系統被介導的。
根據這些發現，預期通過(1)加強芳基烷基胺攝入腦中，以致需要降低的劑量用于神經保護，和(2)增加芳基烷基胺對受體控制Ca2+通道超過電壓敏感Ca2+通道的選擇性(效力比)的化學的努力將近可能地減少心血管的副作用。
實施例23化合物19和類似物的生物學活性化合物19-139具有高的抑制NMDA誘發的在培養基中生長的大鼠大腦粒細胞[Ca2+]i增加的作用(表1)。化合物19對于NMDA應答的抑制作用為非競爭性的。化合物19-147抑制[3H]MK-801在由大鼠海馬和皮質組織的膜的結合(表1)。
化合物19具有另外的以下生物活性i.p.給藥后(ED50＝26.4mg/kg和TD50(rotorod)＝43.8mg/kg)，具有抑制在小鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著(與對照相比p＜0.05)抗驚厥活性；在口服(p.o.)給藥后(ED50＝35mg/kg)，具有抑制在小鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性，然而在30mg/kg具有運動損害；以16mg/kg i.p.給藥，在熱板和PBQ-誘發的扭曲測試中，具有顯著的止痛活性；以劑量多至30mg/kg的行為活性劑量(i.p.)給藥，在PCP區分性測試中沒有一般化到PCP。化合物19在拮抗由在大鼠大腦粒細胞中KCl的去極化濃度所激發的[Ca2+]i增加方面具有顯著較低的效力(IC50＝10.2μM)及當以多至100mg/kg劑量在大鼠中s.c.給藥時，對血壓無影響。然而，化合物19當以100μM試驗時，不阻滯誘導在大鼠海馬切片中的LTP。
化合物20具有另外的以下生物活性i.p.給藥后(ED50＝20.1mg/kg和TD50(rotorod)＝20.6mg/kg)，具有抑制在小鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性；在以劑量多至30mg/kg口服(p.o.)給藥后，不具有抑制在小鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性，而且在30mg/kg具有運動損害；在i.p.(ED50＝2.1mg/kg和TD50＝19.9mg/kg)和口服(ED50＝9.7mg/kg和TD50＝21.8mg/kg)給藥后，在普遍接受的反射性癲癇發作的小鼠模型中(Frengs小鼠)具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性；在口服給藥后，具有抑制在大鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性，其ED50值為33.64mg/kg和TD50值為55.87mg/kg；如以劑量為10mg/kg i.p.，在小鼠中由i.v.Metrazol試驗所表明的，癲癇閾值提高；在大鼠的短暫病灶性局部缺血的模型中具有顯著的神經保護劑活性[在2次劑量的1mg/kg i.p.后，第一次在中部大腦動脈梗塞后立即給藥及第二次為6小時后給藥，梗塞體積降低51％；在2次劑量的1mg/kg i.p.給藥后，第一次在中部大腦動脈梗塞后2小時給藥(即在重復灌注的時)及第二次為6小時后給藥，梗塞體積降低43％]；在梗塞后30分鐘給藥及在4小時再次給藥1mg/kg i.p.后，在大鼠的持久病灶性局部缺血的模型中具有顯著的神經保護活性(在梗塞體積上降低24％)；在梗塞后15分鐘給藥、3小時給藥及在6小時再次給藥10mg/kgi.p.后，在大鼠的病灶性局部缺血的光致血栓模型中具有顯著的神經保護活性(在梗塞體積上降低50％)；以25mg/kg i.p.劑量，在大鼠的52℃熱板試驗或大鼠尾巴搖動試驗中，無顯著的止痛活性；以10mg/kg i.p.劑量，在大鼠的福爾馬林試驗中，顯著的止痛活性不受阿片受體拮抗劑納洛酮的阻滯；以10mg/kg i.p.劑量，在抑制小鼠中由乙酸誘發的腹部強直的顯著的止痛活性不受納洛酮的阻滯；以劑量多至行為活性劑量的10mg/kgi.p.給藥，在大鼠中的PCP區分測試中沒有一般化到PCP；當以10和30mg/kg i.p.劑量給藥時，在大鼠中沒有神經元空泡形成；以劑量多至15μM/kg i.v.或10mg/kg i.p.給藥，在麻醉大鼠中沒有顯著的心血管活性；以劑量0.3或1mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團(bolus)注射]在有意識的beagle狗中不具有顯著的心血管活性；以3mg/kg i.v.劑量在有意識的beagle狗中在平均動脈壓和心率方面短暫地增加，及以10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量觀察到較大的較常時間的作用；以3mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中增加運動活性、激動和焦慮、輕微震顫、添嘴、晃動、和排尿；以10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量在有意識的beagle狗中瞳孔膨脹、全身顫抖、共濟失調、添嘴、流延、呼吸困難、迅速眨眼、晃動、焦慮、癲癇發作和死亡；以2和4mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中無行為作用；以4mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮和增加對觸摸的反應性；以16和32mg/kgi.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮、Straub尾巴、震顫、刻板癥、低溫和瞳孔擴大；以128和256mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中驚厥和死亡；以2mg/kg i.v.劑量，在有意識的雄性Wistar大鼠中無行為的作用；以4-16mg/kgi.v.劑量范圍，在有意識的雄性Wistar大鼠中排尿、刻板癥、增加對觸摸的反應性、增加肌緊張和震顫；以32mg/kg i.v.劑量，在有意識的雄性Wistar大鼠中Straub尾巴、驚厥和死亡。
化合物21具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝3.41mg/kg和TD50(運動損害)＝15.3mg/kg/kg)。
化合物33(化合物21的對應體)具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝4.6mg/kg和TD50(運動損害)＝27.8mg/kg)；以劑量25mg/kg口服給藥后，在大鼠中的抑制最大電休克誘發的癲癇發作方面具有顯著的抗驚厥活性，在該劑量下，沒有明顯的運動毒性；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg i.p.和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg i.p.，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中具有神經保護活性；以25mg/kg i.p.劑量，在大鼠的52℃熱板試驗或大鼠48℃尾巴搖動試驗中，無顯著的止痛活性；在i.th.給予劑量范圍在15-80μg的藥物后，在大鼠的慢性神經病的疼痛模型中具有顯著的止痛活性；在i.p.給予劑量為3-10mg/kg的藥物后，在大鼠的慢性神經病的疼痛模型中具有顯著的止痛活性；當以30mg/kg i.p.劑量給予大鼠時，無神經元空泡的形成；以劑量多至3mg/kgi.v.，在麻醉的大鼠上無顯著的心血管活性；以0.3mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中無顯著的心血管活性；以1mg/kg i.v.劑量在有意識的beagle狗中在平均動脈壓方面短暫地增加，及以3和10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量觀察到較大的和較常時間的作用；以3mg/kgi.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中添嘴；以10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量在有意識的beagle狗中瞳孔膨脹、全身顫抖、共濟失調、添嘴、流延、呼吸困難；以多至10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中的ECG中無顯著的藥物誘發的變化；以2和4mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中無行為作用；以8mg/kgi.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮和增加對觸摸的反應性和低溫；以16和32mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮、Straub尾巴、震顫、跳躍、刻板癥、低溫和瞳孔擴大；以64mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中驚厥；以128和256mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中驚厥和死亡。
化合物34(化合物21的對應體)具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝22mg/kg和TD50(運動損害)在10-15mg/kg之間)；以2mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中顯示低溫；以4mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中無行為作用；以8mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮和增加對觸摸的反應性和低溫；以16和32mg/kgi.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中興奮、Straub尾巴、震顫、跳躍、刻板癥、低溫和瞳孔擴大；以64mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中驚厥；以128和256mg/kg i.p.劑量，在有意識的雄性NMRI小鼠中驚厥和死亡。
化合物22具有另外的下列生物活性在i.p.(ED50＝4.9mg/kg和TD50(反轉網柵)＝26.8mg/kg)和口服(ED50＝5.1mg/kg和LD50＝18.3mg/kg)給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型中(Frengs小鼠)具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性；在口服給藥后，具有抑制在大鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性；和以劑量多至15μM/kg(4.47mg/kg)i.v.，在麻醉的大鼠上無顯著的心血管活性。
化合物50(化合物22的對應體)具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝2.7mg/kg和TD50(運動損害)＝17.4mg/kg)；在p.o.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝9.0mg/kg和TD50(運動損害)＝18.9mg/kg)；以口服給藥后，在大鼠中的抑制最大電休克誘發的癲癇發作方面具有顯著的抗驚厥活性，其ED50＝28mg/kg和TD50＝20mg/kg；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中具有顯著的神經保護活性；以25mg/kg i.p.劑量，在大鼠的52℃熱板試驗或大鼠48℃尾巴搖動試驗中，無顯著的止痛活性；以劑量多至5mg/kg i.v.，在麻醉的大鼠中沒有顯著的心血管活性。
化合物51(化合物22的對應體)具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝9.1mg/kg和TD50(運動損害)＝13.6mg/kg)。
化合物24具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝5mg/kg和TD50(運動損害)＝16mg/kg)；以口服給藥后，在大鼠中的抑制最大電休克誘發的癲癇發作方面具有顯著的抗驚厥活性，其ED50＝46mg/kg和TD50＝51mg/kg；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中無顯著的神經保護活性及以劑量多至10mg/kg i.v.，在麻醉的大鼠中沒有顯著的心血管活性。
化合物25具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在小鼠中的抑制最大電休克誘發的癲癇發作方面具有顯著的抗驚厥活性，其ED50＝12.47mg/kg和TD50＝32.18mg/kg；以口服給藥后，在大鼠中的抑制最大電休克誘發的癲癇發作方面具有顯著的抗驚厥活性，其ED50＝46.43mg/kg和TD50在163-236mg/kg之間。
化合物31具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝6mg/kg和TD50(運動損害)在10-20mg/kg之間)。
化合物46具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝25mg/kg和TD50(運動損害)在18-21mg/kg之間)；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中無顯著的神經保護活性。
化合物57具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝1mg/kg和TD50(運動損害)在6-8mg/kg之間)。
化合物58具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝0.9mg/kg和TD50(運動損害)＝14.5mg/kg)；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg后，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中無顯著的神經保護活性；及以劑量多至2mg/kg i.v.，在麻醉的大鼠中沒有顯著的心血管活性。
化合物59具有另外的下列生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝2.7mg/kg和TD50(運動損害)＝7.8mg/kg)；如以劑量為11.7mg/kg i.p.在小鼠中由i.v. Metrazol試驗所表明的，癲癇閾值降低；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg后，在大鼠的病灶性局部缺血發作的模型中無顯著的神經保護活性及以劑量多至10mg/kg i.v.，在麻醉的大鼠中沒有顯著的心血管活性。
化合物60具有另外的以下生物活性在i.p.給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝4.4mg/kg和TD50(運動損害)＝9.2mg/kg)；在口服給藥后，在遺傳上易受影響的反射性癲癇發作的小鼠模型(Frings小鼠)中，具有抑制聲音誘發的癲癇發作的顯著的抗驚厥活性(ED50＝10mg/kg和TD50(運動損害)＝25.6mg/kg)；i.p.給藥后，具有抑制在小鼠中的最大的電休克誘發的癲癇的顯著抗驚厥活性(ED50＝8.17mg/kg和TD50(rotorod)＝17.30mg/kg)；如以劑量為1和4mg/kg i.p.在小鼠中由i.v.Metrazol試驗所表明的，對癲癇閾值無影響；如以劑量為8和17mg/kg i.p.在小鼠中由i.v.Metrazol試驗所表明的，癲癇閾值降低；在血管閉塞以前30分鐘給予2mg/kg和在血管閉塞以后3小時給予2mg/kg后，在大鼠的短暫病灶性局部缺血發作的模型中具有顯著的神經保護活性；在血管閉塞后2小時給予1mg/kg和在血管閉塞以后8小時再給予1mg/kg(i.p.或i.v.)后，在大鼠的短暫病灶性局部缺血發作的模型中具有顯著的神經保護劑活性；在血管閉塞后2小時給予1mg/kg i.v.后，在大鼠的短暫病灶性局部缺血發作的模型中具有顯著的神經保護劑活性；在梗塞后15分鐘給藥、3小時給藥及在6小時再次給藥10mg/kg i.p.后，在大鼠的病灶性局部缺血的光致血栓模型中無顯著的神經保護活性；當以20mg/kg i.p.或10mg/kg i.v.劑量給藥時，沒有神經元空泡形成；以劑量0.3mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]在有意識的beagle狗中不具有顯著的心血管活性；以1和3mg/kg i.v.劑量在有意識的beagle狗中在平均動脈壓方面短暫地增加，及以10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量觀察到較大的和較常時間的作用；以3和10mg/kgi.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中心率短暫增加；以0.3和1mg/kgi.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中無行為作用；以3mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中呼吸頻率略有增加；以10mg/kg i.v.[60秒鐘的集合藥團注射]劑量，在有意識的beagle狗中瞳孔膨脹、全身顫抖、流延和排尿；以多至4mg/kg i.v.劑量，在有意識的雄性Wistar大鼠中無行為的作用；以8mg/kg i.v.劑量，在有意識的雄性Wistar大鼠中排尿、刻板癥、增加對觸摸的反應性、增加肌緊張和震顫；以16mg/kg i.v.劑量，在有意識的雄性Wistar大鼠中Straub尾巴、驚厥和死亡。
總之，使用這些示范性的合成的芳基烷基胺所獲得的結果提示這類示范性的分子不像化合物1、2和3一樣，與受體控制的Ca2+通道上的芳基烷基胺結合部位發生特定的相互作用。特別是化合物19-147在濃度約高于拮抗NMDA受體-離子載體復合物的濃度1-400倍下，與由[3H]MK-801標記的部位結合。然而，化合物19-147在治療劑量下，一般不產生PCP樣的刻板癥行為、在藥物區分性測試中不替代PCP或不激發神經元空泡形成的事實提示這類化合物可用作神經性疾病的導向化合物或候選藥物。已經報道具有與由[3H]MK-801標記的部位低的親和力(與MK-801比較)可能具有治療用途并與高親和力的拮抗劑例如MK-801本身比較，具有更有利的副作用(Rogawski，Therapeuticpotential of excitatory amino acid antagonistschannel blockers and 2，3-benzodiazepines.Trends Pharmacol.Sci.14325，1993)。在化合物19-147組中某些化合物具有的對由[3H]MK-801標記的部位低的親和力(與MK-801比較)可以將這些化合物歸于這樣的總的一類低親和力的非競爭性拮抗劑。
在受體控制低的鈣通道上新的調節部位的鑒定盡管已經鑒定了具有以上定義的治療上有用性質的芳基烷基胺，現在可以鑒定作用在受體控制的Ca2+通道上的重要的芳基烷基胺結合部位上(例如在NMDA、AMPA和煙堿膽堿能的受體-離子載體復合物中的接合部位)的化合物。
合適的試驗的實施例如下實施例24在大鼠皮質或小腦中的放射配基結合下列測試可以被用作以篩選產物文庫(例如在主要制藥公司的天然產物文庫和化合物檔案)的大量測試中，以鑒定具有在該獨特的芳基烷基胺部位上具有活性的新的類型化合物。然后，這些新類型的化合物被用作目標為受體控制的Ca2+通道上的芳基烷基胺結合部位的藥物發展計劃的化學導向結構。通過所述測試鑒定的化合物為神經性疾病的治療提供新的手段。這類化合物的實例包括以上述化學通式提供的化合物。可以進行常規試驗以鑒定具有所需性質的那些化合物。
根據Williams等人的方法制備大鼠腦膜(Effects of polyamines onthe binding of[3H]MK-801 to the NMDA receptorPharmacologicalevidence for the existence of a polyamine recognition site.Molec.Pharmacol.36575，1989)，并做如下變動用斷頭術處死體重為100-200g的雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan Laboratories)。將20只大鼠的皮質或小腦洗凈并解剖。使用在最低檔的polytron勻漿器，于4℃，在含有5mM K-EDTA的300ml的0.32M的蔗糖溶液中(pH7.0)勻化所形成的腦組織。將所述勻化物以1000xg離心10分鐘并除去上清液，以30000×g再離心30分鐘。將所形成的顆粒(pellet)再懸浮在250ml的5mM K-EDTA(pH7.0)的溶液中，在冰浴中攪拌15分鐘，然后，以30000×g離心30分鐘。將所述顆粒再懸浮在300ml的5mM K-EDTA(pH7.0)的溶液中并在32℃培養30分鐘。然后，將所述懸浮液以100000×g離心30分鐘。用500ml的5mM K-EDTA(pH7.0)的懸浮液洗大鼠腦膜，并于32℃培養30分鐘，以100000×g離心30分鐘。重復所述洗滌過程(包括30分鐘培養)。將最終的顆粒再懸浮在60ml的5mM K-EDTA(pH7.0)中，并于-80℃分量儲存。設計用在該測試中的廣泛的洗滌方法，以便近可能地降低存在于所述膜制品中的谷氨酸和甘氨酸(對于NMDA受體-離子載體復合物的助激動劑)的濃度。
為完成使用[3H]芳基烷基胺的結合測試，使分量的SPMs(Synaptic Plasma Membranes)融化，并再懸浮在30ml的30mM EPPS/1mM K-EDTA(pH7.0)中，以100000xg離心30分鐘。將SPMs再懸浮在緩沖液A中(30mM EPPS/1mM K-EDTA，pH7.0)。將[3H]芳基烷基胺加入該反應混合物中。在聚丙烯試管中進行結合測試。其最終的培養體積為500μl。在100μM非放射活性芳基烷基胺的存在下，測定非特異性結合。將復制樣品于0℃培養1小時。通過加入3ml冰冷卻的緩沖液A來終止測試，然后經在0.33％聚乙烯亞胺(PEI)中預浸漬的玻璃纖維濾器(Schleicher & Schuell 30號)過濾。用另外的3×3ml緩沖液A洗滌所述濾器，并通過對3H效率為35-40％的條件下的閃爍計數來測定結合所述濾器的放射活性。
為了驗證上述的測試，也進行下列的試驗(a)使500μl的含有不同濃度的[3H]芳基烷基胺的緩沖液A通過預浸漬的玻璃纖維濾器，來測定[3H]芳基烷基胺的非特異性結合所述濾器的量。用另外的4×3ml的緩沖液A洗滌所述濾器，并通過對3H效率為35-40％的條件下的閃爍計數來測定結合所述濾器的放射活性。在未用0.33％PEI處理的濾器中，發現87％的3H-配體與所述濾器結合。用0.33％PEI預浸漬降低所述非特異性結合到加入的總配體的0.5-1.0％。
(b)通過在緩沖液A中再懸浮SPMs來做出飽和曲線。所述測試緩沖液(500μl)含有60μg的蛋白質。使用范圍在1.0nM-400μM半對數單位(half-log)濃度的[3H]芳基烷基胺。由所述數據做出飽和曲線，通過Scatchard分析(Scatchard，The attractions of proteins for small moleculesand ions.Ann.N.Y.Acad.Sci.51660，1949)測定表觀KD值和Bmax值。通過繪制Hill圖(Hill，A new mathematical treatment of changes of ionicconcentrations in muscle and nerve under the action of electric currents，with a theory to their mode of eweitation.J.Physiol.40190，1910)來測定[3H]芳基烷基胺的結合協同性(cooperativity)。
(c)通過在緩沖液A中再懸浮SPMs來測定結合蛋白(受體)濃度的依賴性。所述測試緩沖液(500μl)含有與其KD值相當的濃度的[3H]芳基烷基胺及增加的蛋白質濃度。所述[3H]芳基烷基胺的特異性結合與存在的蛋白質(受體)的量成線性關系。
(d)通過在緩沖液A中再懸浮SPMs來測定配體-受體結合的時程。所述測試緩沖液(500μl)含有與其KD值相當的濃度的[3H]芳基烷基胺及100μg的蛋白質濃度。于0℃培養復制樣品不同長度的時間；測定達到平衡的時間，并一般將時點用在所有的其后的測試中。
(e)通過競爭性試驗可以分析藥理學的結合位置。在這類試驗中，盡管試驗(競爭性)藥物的濃度是變化的，使[3H]芳基烷基胺的濃度及蛋白質的量保持恒定。該測試容許測定所述競爭性藥物的IC50和表觀KD值(Cheng and Prusoff，Relationship between the inhibition constant(K1)andthe concentration of inhibitor which causes 50 percent inhibition(IC50)ofan enzymatic reaction.J.Biochem.Pharmacol. 223099，1973)。通過Hill圖分析來測定競爭性藥物的結合協同性。
所述[3H]芳基烷基胺的特異性結合代表了與受體控制的Ca2+通道上的新部位例如在NMDA-、AMPA-和煙堿膽堿能的受體-離子載體復合物中的部位的結合。如此，其它芳基烷基胺應該以競爭性方式與[3H]芳基烷基胺結合，并且其在該測試中的效價應該與其在受體控制的Ca2+通道拮抗作用(例如，在大鼠小腦粒細胞培養中抑制NMDA受體控制的[Ca2+]i的增加)的功能測試中的抑制效價相關。相反，在受體控制的Ca2+通道的其它已知部位上具有活性的化合物(例如MK-801、Mg2+、多胺)不應該以競爭性方式替換[3H]芳基烷基胺結合。相反，[3H]芳基烷基胺結合的復雜的變構調節(表明非競爭性的相互作用)預計可以出現。在初步的試驗這中，以多至100μM濃度，MK-801不替換[3H]芳基烷基胺結合。
(f)通過測定使[3H]芳基烷基胺達到平衡(見以上(d))后[3H]芳基烷基胺的結合進行估計分離動力學的研究并將大大過量的非放射活性的競爭性藥物加入所述反應混合物中。然后，以不同的時間間隔測試所述[3H]芳基烷基胺的結合。借助該測試，測定[3H]芳基烷基胺結合的結合和分離率(Titeler，Multiple Dopamine ReciptorsReceptor Binding Studies inDopamine Pharmacology.Marcel Dekker，Inc.，New York，1983)。其它試驗包括改變反應溫度(0℃-37℃)，以便獲得溫度對該參數的依賴性。
實施例25在小腦粒細胞中放射配體結合由出生8天的大鼠獲得小腦粒細胞的初步培養物，并置于涂有聚-L-賴氨酸的Aclar塑料方格上。將所述方格置于24穴的培養板上，每個穴中加入約7.5×105個粒細胞。在加入胞嘧啶阿拉伯糖苷(10μM，最終濃度)前，將培養物保持在含有25mM Kcl、10％牛胚胎血清(HyClone Laboratories)、2mM的谷氨酰胺、100μg/ml的慶大霉素、50U/ml的青霉素和50μg/ml的鏈霉素的Eagles’培養基(HyCloneLaboratories)中，于37℃，在含有5％CO2的潮濕空氣中，培養24小時。直到在接種后6-8天，將所述細胞用于受體結合研究為止，不使培養基發生改變。
為進行[3H]芳基烷基胺的結合測試，在所述24穴板的每一個穴中的所述反應混合物由200μl的緩沖液A(20mM K-HEPES，1mM K-EDTA，pH7.0)組成。將所述[3H]芳基烷基胺加入該反應混合物中。在100μM非放射活性芳基烷基胺存在下測定非特異性結合。將三份樣品在0℃培養1小時。通過手工自Aclar塑料方格中刮出所述細胞并將其置于聚丙烯試管中。將用該方法在所有細胞中制備的膜懸浮于10ml的冰冷卻的緩沖液A中，并經預浸漬在0.33％的PEI中的玻璃纖維濾器(Schleicher&Schuell第30號)過濾。所述濾器用另外的3×3ml的緩沖液A洗滌，并通過對3H效率為35-40％的條件下的閃爍計數來測定所述濾器的放射活性。通過離心而不是過濾可以終止所述測試，以便近可能減小非特異性結合。
必須進行上述表明和驗證所述測試的特定的試驗，除非使用細胞代替用于開始結合的膜。所述結合測試用于確定如Scatchard分析(Theattractions of proteins for small molecules and ions.Ann.N.Y.Acad.Sci.51660，1949)所述的競爭性藥物的IC50值和表觀KD。通過Hill圖分析(A new mathematical treatment of changes of ionic concentrations inmuscle and nerve under the action of electric currents，with a theory to theirmode of ewcitation.J.Physiol.40190，1910)來測定所述競爭性藥物的結合協同性。所述[3H]芳基烷基胺的特異性結合代表與受體控制的鈣通道上新部位的結合。
實施例26重組受體結合測試以下為本發明的有用的化合物的迅速篩選測試的一個實施例。在該測試中，使用標準方法獲得自適合的有機體如人類的編碼所述芳基烷基胺結合部位(受體)的cDNA或基因。使所述克隆的不同的片斷在合適的表達媒介物中表達，以便產生自保留與化合物1、化合物2或化合物3結合能力的受體所獲得的最小的多肽。用此方式，可以鑒定包括這些化合物的新的芳基烷基胺受體的多肽。通過使用表達芳基烷基胺受體的穩定的轉染哺乳動物細胞株(例如HEK 293細胞)可以有助于這類試驗。
另外，所述芳基烷基胺受體可以在化學上與化學改性的化合物1、化合物2或化合物3以這樣一種方式反應，即接觸(或鄰近)所選擇化合物的芳基烷基胺受體的氨基酸殘基被改性，從而是可鑒定的。然后，可以使含有被確定與化合物1、化合物2或化合物3相互作用的并且足以與所述分子結合的那些氨基酸的芳基烷基胺受體的片斷如上所述，使用標準的表達媒介物重組表達。
使用標準的化學方法，可以使具有所需要的結合性質的重組多肽結合到固相載體上。然后，使該固相或親和力基質與化合物1、化合物2或化合物3接觸，以便識別可以從所述固相移去所述化合物的條件。然后，使用大的化合物文庫重復該過程，以便確定那些化合物可以與親和力基質結合，然后，以類似于化合物1、化合物2或化合物3的方式可以被釋放。然而，可以使用選擇性的結合和釋放條件，以便獲得能夠在不同于芳基烷基胺結合所用的條件下結合的化合物(例如，尤其在病理學狀態所遇到的更好的模仿生理條件)。從而，那些結合的化合物可以從非常大量的存在于液體培養基或提取物中的化合物中選取。
一旦能與上述芳基烷基胺結合多肽結合的化合物被鑒定，然后，那些化合物可以容易地在上述不同的測試中被檢驗，以便確定是否它們或其簡單地衍生物為治療上述神經性疾病的有效的化合物。
在一個選擇性的方法中，可以將原始的芳基烷基胺受體結合在柱上或其它固相單體上。然后，可以識別那些未受到結合在所述受體的其它部位的反應劑競爭的化合物。這類化合物定義所述受體上新的結合部位。不受其它已知的化合物競爭的化合物因而與已知的部位結合或與覆蓋已知的結合部位的新的部位結合。無論如何，這類化合物可以在結構上不同于已知的化合物，從而可以定義可以用作治療劑的新的化學類型的激動劑或拮抗劑。總之，可以使用競爭性測試以鑒別本發明的有效的化合物。
實施例27膜片鉗法電生理學測試進行用于在上述放射配基結合測試中作為以高效力和競爭性的方式，在受體控制的Ca2+通道上的新的芳基烷基胺結合部位(例如存在于NMDA-、AMPA-或煙堿膽堿能的受體-離子載體復合物中存在的那些結合部位)的相互作用鑒定的選擇性的化合物的下列測試。該膜片鉗法測試提供另外的關于所述預先選擇的化合物的作用機理和部位的相應數據。特別是利用NMDA受體-離子載體復合物作為受體控制的Ca2+通道的實例，測定的在所述芳基烷基胺結合部位上相互作用的化合物的下列藥理學和生理學性質阻滯NMDA受體介導的離子流的效力和功效，對于谷氨酸和甘氨酸的非競爭性阻滯，作用的用途依賴性，作用的電壓依賴性，對于開始和反向的阻滯，阻滯和非阻滯(反向)的動力學及阻滯的敞開通道機理。該數據證實在芳基烷基胺結合部位的相互作用的化合物保留所述芳基烷基胺的獨特的生物學性能，而且它們在所述NMDA受體-離子載體復合物上的已知的部位(谷氨酸結合部位、甘氨酸結合部位、MK-801結合部位、Mg2+接合部位、Zn2+結合部位、∑結合部位、多胺結合部位)不具有其最初的活性。
利用標準的方法進行哺乳動物神經元(海馬、皮質、小腦粒細胞)的膜片鉗法 記錄(Donevan et al.，Arcaine blocks N-methyl-D-aspartatereceptor responses by an open channel mechanismwhole-cell and single-channel recording studies in cultured hippocampal neurons.Molec.Pharmacol.41727，1992；Rock and Macdonald，Spermine and relatedpolyamines produce a voltage-dependent reduction of NMDA receptorsingle-channel conductance.Molec.Pharmacol.42157，1992)。
膜片鉗法試驗可以選擇性地在蟾蜍卵細胞上或在表達受體控制的Ca2+通道的的特定亞單位的穩定轉染的哺乳動物細胞系(例如HEK 293細胞)上進行。例如，在該方法中，可以測定不同谷氨酸受體亞單位(例如NMDAR1、NMDAR2A-NMDAR2D、GluR1-GluR4)上的效力和功效。通過使用針對受體的誘變可以獲得關于在這些谷氨酸受體上的芳基烷基胺作用部位的進一步的資料。
實施例28芳基烷基胺的合成通過標準方法合成芳基烷基胺例如化合物1、化合物2和化合物3(Jasys et al.，The total synthesis of argiotoxins 636，659 and 673.Tetrahedron Lett.296223，1988；Nason et al.，Synthesis of neurotoxicNephila spider venomsNSTX-3 and JSTX-3.Tetrahedron Lett.302337，1989)。芳基烷基胺類似物4-18合成的特殊實例在公開未決的申請美國登記號08/485038(1995年6月7日)和公開未決的國際專利申請PCT/US94/12293(以WO95/21612公開，在1994年10月26日申請)中被提供，在此結合到本發明中作為參考。
實施例29范例芳基烷基胺的合成如下完成化合物20的合成。
用氰甲基磷酸二乙酯(8.86g，50mmol)處理氰化鈉(1.21g，50mmol)的二甲氧基乙烷溶液，并將反應物在室溫下攪拌4小時。將在DME中的3，3’-二氟二苯酮(10g，46mmol)加入其中。將反應物在室溫下攪拌24小時，用水驟冷，使其在乙醚和水中分配。所述醚部分經硫酸鈉干燥和濃縮。該物質的GC/MS顯示所述產物A為90％及原料二苯酮為10％。
用催化量的Pd(OH)2于55psi氫氣下，室溫使該物質的乙醇溶液氫化4小時。過濾反應物并用乙醇(3倍)洗滌所述催化劑。合并所述濾液和洗液并濃縮。該物質的GC/MS顯示所述產物B為90％及原料二苯酮為10％。
用70ml 1M的B2H6(70mmol)的THF溶液處理該物質的THF溶液，并回流1小時。在冷卻后，用6N HCl(50ml)處理該反應物并再回流1小時。在使反應物冷卻后，用10N氫氧化鈉將其堿化到pH14并用醚平衡。轉移醚層并用10％鹽酸(3倍)洗滌。合并酸洗液，用10N氫氧化鈉堿化到pH14，用二氯甲烷提取(3倍)。合并有機洗液，經硫酸鈉干燥，濃縮產生油狀物。該物質的GC/MS顯示為100％的化合物20。GC/EI-MS(Rt＝7.11min)m/z(相對強度)247(M+，31)，230(100)，215(30)，201(52)，183(63)，134(23)，121(16)，101(21)，95(15)，77(15)。在乙醚中的該物質經過濾并用35ml 1M鹽酸醚溶液處理。收集沉淀物，干燥和經水-乙醇重結晶，產生1.045g化合物20的鹽酸鹽。1H-NMR(CDCl3)d 8.28(3H，br s)，7.28-7.17(2H，m)，7.02-6.86(6H，m)，4.11(1H，t，J＝8Hz)，2.89(2H，br t，J＝8Hz)，2.48(2H，br t，J＝7Hz)；13C-NMR(CDCl3)d 164.6，161.3，144.8，144.7，130.4，130.3，123.3，123.2，114.7，114.5，114.1，113.8，47.4，38.4，32.7.
化合物21、化合物33和化合物34的合成完成如下。將在30ml的THF中的化合物1(2.43g，10mmol)加入帶有攪拌棒、間隔(septa)和氬氣源的100ml圓底燒瓶中。將該溶液冷卻到-78℃并滴加11ml雙(三甲基甲硅烷基)氨化鋰(1M在THF中)(11mmol)。將所述反應物在-78℃攪拌30分鐘并滴加過量的碘甲烷(3.1ml，50mmol)。于-58℃攪拌反應物30分鐘。來自所述反應的等分試樣的GC/EI-MS分析顯示消耗的原料腈1。用水使反應驟冷，用乙醚稀釋并轉移到分液漏斗中。用10％HCl(3倍)、鹽水(1倍)洗滌所述醚層，用無水硫酸鎂干燥，并濃縮成棕色油狀物。減壓蒸餾該物質(Kugilrohr，100℃)產生1.5g澄清的油。該物質的GC/EI-MS顯示其含有目的產物2。
(Rt＝7.35min)m/z(rel.int.)257(M-，3)，203(100)，183(59)，170(5)，133(4)，109(3)；1H-NMR(CDCl3)d7.4-6.9(8H，m)，4.01(1H，d，J＝10Hz)，3.38(1H，dq，J＝7，10Hz)，1.32(3H，d，J＝7Hz)；13C-NMR(CDCl3)d19.4，30.5，54.2，114.5，114.6，114.7，114.9，115.0，115.3，123.3，123.4，123.6，123.7，130.5，130.6，131.7.
通過以95∶5乙醇∶氫氧化鈉水溶液(2當量)，在60psi氫氣下，用Raney鎳催化還原2合成產物3。
GC/EI-Ms(Rt＝7.25min)m/z(rel.int.)261(M+，20)，244(35)，229(16)，215(17)，201(80)，183(100)，133(42)，115(27)，109(47)，95(20)；2H-NMR(CDCl3)d7.3-6.8(8H，m)，3.62(1H，d，J＝10Hz)，2.70(1H，M)，2.40(2H，m)，1.73(2H，m)，0.91(3H，d，J＝7Hz).注意，在反應程序中化合物3相當于化合物21。
產物2在10％IPA-己烷(100mg/ml)中經層析，以500μl分量，經Chiral Gel OD(2.0×25cm)，使用10％IPA-己烷以10ml/min在254nm測定光密度。可提供兩種光學純的對映異構體4和5(如使用分析型手性HPLC測定；注意，這兩個化合物的立體化學此時還未確定)。這兩個化合物在其GC/EI-MS和1H-NMR中證明與化合物2相同(數據如上)。
按下列方式使用二甲基硫硼烷復合物分別還原對映體4和5中的每一個。將化合物(4或5)的THF溶液加熱到回流，并用過量的(2當量)的1M(在THF中)二甲基硫硼烷復合物處理，使所述反應物回流30分鐘。此后，將反應物冷卻到0℃并用6N鹽酸處理。使反應物回流30分鐘。此后，將所述反應物轉移到分液漏斗中，用10N氫氧化鈉堿化到pH＞12，并提取該產物(6或7)進入醚中。用鹽水洗滌所述醚層，經無水硫酸鎂干燥并濃縮成油狀物。使用5％的甲醇-氯仿，經制備薄層層析純化所述產物。發現在其GC/EI-MS和1H-NMR中證明每一個對映體(6和7)與化合物3相同(數據如上)。注意，在該反應程序中產物6和7相當于化合物33和34。化合物33的鹽酸鹽mp＝260-270℃(分解)，[α]36526＝+6.6(c1.0乙醇)，[α]D26＝+0.4(c1.0乙醇)。化合物34的鹽酸鹽[α]36523＝-6.1(c1.0乙醇)，[α]D23＝-0.1(c1.0乙醇)。化合物33的氫碘酸鹽將化合物33的游離堿溶于醇中并加入47％的氫碘酸(1.1當量)。減壓蒸發溶劑，并經庚烷/乙酸乙酯重結晶所形成的固體氫碘酸鹽兩次(緩慢蒸發)mp＝195-197℃。使用Siemens R3m/V衍射儀(3887觀察反射率)，通過單晶(無色單斜針晶0.50×0.05×0.03mm)X-射線衍射測定化合物33的氫碘酸鹽的絕對構型為R型。
如同下述完成化合物22的合成。以類似方式完成化合物23的合成。
將膦酰基乙酸三乙酯(17.2g，76.8mmol)緩慢加入氰化鈉(3.07g，76.8mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(350ml)的懸浮液中。15分鐘后，將3，3’-二氟二苯酮(15.2g，69.8mmol)加入該溶液中并再攪拌18小時。用水驟冷該反應混合物，并在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥。減壓蒸發溶劑，產生黃色油狀的19.7g的3，3-雙(3-氟苯基)丙烯酸乙酯。
將在炭上的氫氧化鈀(3.5g)加入3，3-雙(3-氟苯基)丙烯酸乙酯(19.7g，68.4mmol)在200ml乙醇的溶液中。將所述混合物在60psi的氫氣下振搖3小時，然后過濾并真空蒸發，產生19.5g無色油狀的產物A。
通過與50ml 10N的氫氧化鈉攪拌6天，使乙酯A(19.2g)水解。然后，將反應混合物用50ml的水稀釋并用濃鹽酸酸化到pH0。用醚提取所述含水混合物3次并經硫酸鎂干燥所述醚層，蒸發產生白色粉末狀的3，3-雙(3-氟苯基)丙酸。
將3，3-雙(3-氟苯基)丙酸(13g，49.6mmol)溶于50ml(685mmol)的亞硫酰氯中，并于室溫攪拌過夜。在旋轉蒸發儀上減壓除去過量的亞硫酰氯產生13.7g黃色油狀的產物B。
將乙酰丙酮鐵(III)(0.52g，1.47mmol)加入溶于100ml干燥的THF中的B的酰基氯(13.7g，49mmol)中。然后，通過注射器用1小時加入氯化甲基鎂(16.3ml，49mmol)。再攪拌所述反應物1小時，然后，通過倒入醚/5％HCl中驟冷。分離醚層，用5％HCl和飽和氯化鈉洗滌，經硫酸鈉干燥。真空蒸發溶劑，產生黃色油狀的4，4-雙(3-氟苯基)-2-丁酮。使用庚烷/乙酸乙酯作為流動相在硅膠上純化所述粗品油。
將吡啶(1.91g，24.1mmol)和鹽酸甲氧胺(2.01g，24.1mmol)加入在25ml乙醇中的4，4-雙(3-氟苯基)-2-丁酮(5.7g，21.9mmol)中。于室溫攪拌反應物過夜，然后倒入醚/5％HCl中。分離醚層，用5％HCl和飽和氯化鈉洗滌，經硫酸鈉干燥。真空蒸發溶劑，產生6.26g的4，4-雙(3-氟苯基)-2-丁酮O-甲肟。將四氯化鋯(6.31g，27.1mmol)緩慢加入在15ml的THF中的硼氫化鈉(4.1g，108.3mmol)中。攪拌該混合物15分鐘，然后用5分鐘加入在6ml的THF中的所述肟(6.26g，21.7mmol)。于室溫下攪拌3小時后，通過緩慢地加入50mM的氫氧化鈉，然后醚處理所述反應物。含水層用醚提取4次，經硫酸鈉干燥合并后的醚提取物。真空蒸發溶劑產生5.3g的化合物22。
如下述完成化合物24的合成。按照類似的方法，制備化合物25-29，52-53，65，76-78，83，90，96-97，115和135-136。
通過注射器用1-溴-3-氟苯(6.83g，39.2mmol)滴加處理在150ml無水乙醚中的鎂屑(0.95g，39.2mmol)的懸浮液。在1.5小時后，經套管將所述溶液轉移到于0℃，含有在100ml無水乙醚中的O-茴香醛(5.0g，36.7mmol)的燒瓶中并攪拌2小時。用水使反應混合物驟冷并在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥，產生7.90g(93％收率)的產物A。
將重鉻酸吡啶鎓(16.0g，42.5mmol)加入在二氯甲烷(100ml)中的所述醇A(7.90g，34.0mmol)的溶液中，將所述反應物攪拌12小時。將乙醚(300ml)加入所述反應混合物中，并使該黑色的溶液經硅膠塞柱(30cm)過濾并再用500ml醚洗滌。在真空蒸發溶劑后，使所述固體經丙酮重結晶，產生7.45g(95％收率)的產物B。
將氰甲基磷酸二乙酯(7.0g，39.5mmol)緩慢加入氰化鈉(1.58g，39.5mmol)在100ml的N，N-二甲基甲酰胺的懸浮液中。30分鐘后，將所述酮B加入該溶液中并再攪拌2小時。用水驟冷所述反應混合物，并使其在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥。真空蒸發溶劑產生淡黃色的油狀物。
在玻璃耐壓瓶(bomb)中，將所述油狀物溶解在100ml乙醇和20ml10N氫氧化鈉中。將懸浮在水中的催化量的Raney鎳[約15％(mol)]加入該溶液中。利用Parr氫化器，在60psi氫氣下，振搖所述反應混合物達12小時。在濾去過量的Raney鎳后，用氯仿提取該溶液。用鹽水洗滌合并后的有機層并經無水硫酸鎂干燥。在過濾后，使所述油狀物在氯仿和甲醇中經過硅膠柱。真空蒸發溶劑，產生淡黃色油狀物。GC/EI-MS(Rt＝8.10min)m/z(相對強度)259(100)，242(44)，213(48)，183(42)，136(50)，109(54)，91(60)，77(25)。然后，用鹽酸酸化乙醚中的上述油。蒸發醚產生淡黃色固體，在熱的乙腈中重結晶產生3.45g(42.1％收率)的化合物24鹽酸鹽的針晶。
按照一般方式，通過用三氟化硼裂解化合物25和24的O-甲基醚，分別由化合物25和24合成化合物101和103。
如同下述完成化合物30的合成。按照類似的方法制備化合物31。
通過注射器用1-溴-3-氟苯(6.85g，39.1mmol)滴加處理在150ml無水乙醚中含有鎂屑(0.95g，39.1mmol)的懸浮液。在1.5小時后，經套管將所述溶液轉移到于0℃，含有在100ml無水乙醚中的3-氯苯甲醛(5.0g，35.6mmol)的燒瓶中并攪拌2小時。用水使反應混合物驟冷并在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥，產生8.40g(＞99％收率)的產物A。
將氯鉻酸吡啶鎓(15.0g，39.8mmol)加入在二氯甲烷(100ml)中的所述醇A(8.40g，35.5mmol)的溶液中，并攪拌18小時。將乙醚(300ml)加入所述反應混合物中，并使該黑色的溶液經硅膠塞柱(30cm)過濾并再用500ml醚洗滌。在真空蒸發溶劑后，使所述固體經丙酮重結晶，產生6.31g(76％收率)的產物B。
將氰甲基磷酸二乙酯(5.2g，29.6mmol)緩慢加入氰化鈉(1.2g，29.6mmol)在100ml的N，N-二甲基甲酰胺的懸浮液中。30分鐘后，將所述酮B加入該溶液中并再攪拌6小時。用水驟冷所述反應混合物，并使其在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥。真空蒸發溶劑產生黃色的油狀物。
在玻璃耐壓瓶中，將所述油狀物溶解在100ml乙醇和20ml10N氫氧化鈉中。將懸浮在氧化鋁上的催化量的銠[約35％(mol)]加入該溶液中。利用Parr氫化器，在60psi氫氣下，振搖所述反應混合物達24小時。在濾去過量的催化劑后，用氯仿提取該溶液。用鹽水洗滌合并后的有機層并經無水硫酸鎂干燥。在過濾并真空蒸發所述溶劑后，在四氫呋喃(100ml)中處理該油狀物。加入乙硼烷(23.4ml，1.0M)并使該溶液回流1.5小時。真空蒸發溶劑，并小心加入6N鹽酸(50ml)。將溶液回流1小時。在冷卻后，用10N的氫氧化鈉堿化所述混合物到pH14并使其在二氯甲烷和水中分配。經無水硫酸鎂干燥合并后的有機層并過濾。在蒸發溶劑后，使所述黃色油狀物在氯仿和甲醇中經過硅膠柱。真空蒸發溶劑，產生黃色油狀物。GC/EI-MS(Rt＝8.15min)m/z(相對強度)263(17)，246(21)，211(84)，196(33)，183(100)，165(19)，133(19)。然后，用鹽酸酸化乙醚中的上述油。蒸發醚產生0.96g白色固體狀的化合物30鹽酸鹽。
如同下述完成化合物35的合成。按照類似的方法制備化合物36-37。
通過注射器用在四氫呋喃(THF)中的3.0M的氯化乙基鎂(12.7ml，25.4mmol)處理于0℃在150ml乙醚中的3-氟苯甲醛(3.0g，24.2mmol)。在4小時后，用水使反應混合物驟冷并在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥，產生4.25g的產物A。
將氯鉻酸吡啶鎓(6.53g，30.3mmol)加入A的二氯甲烷(100ml)溶液中并攪拌18小時。將乙醚(300ml)加入所述反應混合物中，并使該黑色的溶液經硅膠塞柱(30cm)過濾并再用500ml醚洗滌。在真空蒸發溶劑后，使所述固體經丙酮重結晶，產生3.05g的產物B。真空蒸發溶劑產生淡黃色的油狀物。
將氰甲基磷酸二乙酯(4.7g，26.4mmol)緩慢加入氰化鈉(11g，26.4mmol)在100ml的N，N-二甲基甲酰胺的懸浮液中。30分鐘后，將所述酮B加入該溶液中并再攪拌6小時。用水驟冷所述反應混合物，并使其在水和醚中分配。用鹽水洗滌合并的有機層并經無水硫酸鎂干燥。真空蒸發溶劑產生黃色的油狀物。
在玻璃耐壓瓶中，將所述油狀物溶解在100ml乙醇和20ml10N氫氧化鈉中。將懸浮在水中的催化量的Raney鎳[約15％(mol)]加入該溶液中。利用Parr氫化器，在60psi氫氣下，振搖所述反應混合物達24小時。在濾去過量的催化劑后，用氯仿提取該溶液。用鹽水洗滌合并后的有機層并經無水硫酸鎂干燥。在過濾后，使所述油狀物在氯仿和甲醇中經過硅膠柱。真空蒸發溶劑，產生淡黃色油狀物。GC/EI-MS(Rt＝3.45min)m/z(相對強度)167(4)，150(63)，135(58)，109(100)，96(53)，75(48)。然后，用鹽酸酸化乙醚中的上述油。蒸發醚產生淡黃色固體，在熱的乙腈中重結晶產生2.2g化合物35鹽酸鹽。
如下所述完成化合物38的合成。
于-70℃，用5分鐘經注射器將丁基鋰(在4.25ml己烷中，6.8mmol)加入在250ml THF中的3，3-雙(3-氟苯基)丙腈(1.5g，6.17mmol)中。攪拌所述溶液5分鐘，然后用1分鐘加入碘甲烷(1.75g，12.3mmol)。然后，將所述反應混合物溫熱到室溫。通過用醚稀釋和用5％HCl和水洗滌。醚層用硫酸鈉干燥并蒸發產生1.5g黃色油狀的甲基化腈。
于0℃，用10分鐘經注射器將二異丁基氫化鋁(1.02ml，5.7mmol)加入在50ml二氯甲烷中的3，3-雙(3-氟苯基)-2-甲基丙腈(1.46g，5.7mmol)中。將所述反應物于0℃攪拌30分鐘，然后在室溫下再攪拌2小時。通過加入200ml 10％鹽酸處理所述反應物并于40℃攪拌30分鐘，然后，用二氯甲烷提取所述產物。所述有機層經硫酸鈉干燥并蒸發產生1.36g的產物A。
于0℃，將溴化甲基鎂(.5.23ml，醚中，5.23mmol)加入所述醛A(1.36g，5.23mmol)在40ml醚的溶液中。于室溫攪拌所述反應物3小時，然后用稀鹽酸結束反應。分離醚層，經硫酸鈉干燥并蒸發產生1.48g的4，4-雙(3-氟苯基)-3-甲基丁-2-醇。
將氯鉻酸吡啶鎓(1.2g，5.58mmol)加入所述醇(1.4g，5.07mmol)在300ml二氯甲烷的溶液中并攪拌混合物過夜。然后，用100ml醚稀釋該反應物并經硅膠塞柱過濾。蒸發溶劑產生1.39g的產物B。
將酮B(1.3g，4.9mmol)加入鹽酸甲氧胺(0.45g，5.38mmol)和吡啶(0.44ml，5.38mmol)在30ml乙醇的溶液中，并攪拌過夜。然后，蒸發乙醇，在醚和10％鹽酸中處理其殘余物。然后，分離醚層，用10％鹽酸洗滌1次，經硫酸鈉干燥并蒸發產生1.4g的O-甲基肟。
將四氯化鋯(1.35g，5.8mmol)緩慢加入在5ml THF的硼氫化鈉(0.87g，23.1mmol)懸浮液中。攪拌該溶液15分鐘，然后再加入5mlTHF。然后加入在5ml的THF中的所述O-甲基肟(1.4g，4.6mmol)并攪拌過夜。通過真空蒸發除去THF，并用10％氫氧化鈉處理該殘余物。在停止發泡后，加入醚并分層。含水層用醚提取4次，經硫酸鈉干燥合并后的醚提取物。蒸發醚產生1.25g的化合物38。
按照如上所述的標準方法合成化合物32和化合物39-53。
制備分別用作制備化合物32、115、20和25的合成中間體的化合物107、116、139和143。
使用下述手性合成方法也制備化合物50。
用10分鐘經注射器將丁基鋰(2.5M在已烷中)(37.5ml，93.8mmol)加入N-芐基-(S)-a-甲基芐胺(18.0g，85.2mmol)的THF(75ml)冰冷的溶液中(以該速度加料是為了使反應溫度保持在10℃以下)。然后，將反應物于0℃攪拌15分鐘。在干冰/異丙醇浴中將所述反應物冷卻到-78℃，然后用45分鐘滴加丁烯酸芐酯(15.0g，85.2mmol)在THF(100ml)中的溶液。將所述反應物在-78℃攪拌15分鐘，然后加入飽和氯化銨(50ml)。然后，迅速將反應混合物轉移到含有飽和氯化鈉(500ml)和醚(200ml)的分液漏斗中。使分層，用醚(200ml)提取水層。干燥合并的有機層，蒸發并經硅膠層析(50mm×30cm)(己烷/乙酸乙酯[20∶1])產生21.0g(63.7％)的產物A。1H-NMR顯示所述反應的非對映選擇性＞90％。
將鎂(2.58g，106mmol)、THF(200ml)和1-溴-3-氟苯(18.60g，106.3mmol)回流45分鐘。仍保持回流狀態下，用2分鐘經注射器加入產物A(16.45g，42.45mmol)及THF(25ml)。使反應物回流1小時，然后冷卻到室溫。加入飽和氯化銨水溶液(200ml)。然后，將反應混合物轉移到含有飽和氯化鈉水溶液(500ml)和醚(200ml)的分液漏斗中。使分層用醚(200ml)提取水層。用硫酸鈉干燥合并的有機層，蒸發產生黃色液體狀的21.41g的產物B。
將產物B(20.02g，42.45mmol理論值)溶于乙酸(120ml)和硫酸(30ml)中。將所述反應物在90℃攪拌1小時。旋轉蒸發乙酸產生棕色沉淀物。將該物質置于冰浴中并加入冷水(400ml)。產物立即析出沉淀。向反應物中緩慢加入氫氧化鈉(10N，150ml)到中性pH。將乙醚(200ml)加入該混合物中。振搖所述混合物直到沒有不溶物為止。分離該醚層，用水(2×100ml)洗滌，硫酸鈉干燥并旋轉蒸發產生13.14g(基于酯的68.2％)粘稠的棕色油狀物。將該油用醚吸收并用醚中的氯化氫轉化為其鹽酸鹽產生黃白色固體狀的產物C。
將產物C(7.17g，14.6mmol)吸收在無水乙醇(200ml)中。加入Pearlman’s催化劑(Pd(OH)2/C；2.00g)。于70℃，在70psi氫氣下振搖所述反應物20小時，所述反應混合物經Celite過濾。其濾液經旋轉蒸發產生3.54g淡黃色的玻璃狀物。將該物質吸收在乙醚(100ml)中并用氫氧化鈉(1N，25ml)堿化。用水(1×25ml)洗滌所述醚層，經硫酸鈉干燥，旋轉蒸發產生2.45g淡黃色油狀物。將該物質經Kugelrohr蒸餾(90-100℃，1mmHg)產生1.17g無色液體。將該物質吸收在乙醚中并用醚制的氯化氫使其轉化為鹽酸鹽。在旋轉蒸發后，用0.12N鹽酸(200mg/ml)重結晶該鹽。過濾所述結晶并用冷的0.12N鹽酸洗滌產生0.77g(18％)的銀白色結晶狀的化合物50鹽酸鹽。
使用N-芐基-(R)-α-甲基芐胺作為手性原料，以與化合物50同樣的方式合成化合物51。
如下所述合成化合物54。
將異丙醇鈦(16.9ml，57.25mmol)加入3，3’-二氟二苯酮(5g，22.9mmol)和氰基乙酸甲酯(3.4g，34.4mmol)在15ml醚的溶液中。在室溫下，攪拌該溶液6天，然后，用在300ml水中的0.5mol鹽酸終止反應。用100ml醚稀釋所述混合物，分離該醚層。用5％鹽酸和飽和鹽水洗滌所述醚層，然后經硫酸鈉干燥。真空蒸發溶劑產生8g產物A。
將化合物A溶解在50ml異丙醇中，然后加入少量的溴甲酚綠。同時加入氰基硼氫化鈉(1.52g，24.2mmol)后，立即滴加濃鹽酸，滴加速度以保持該溶液為黃色為度。2小時后，通過在醚和水間分配處理所述反應物。用水和飽和鹽水洗滌所述醚層，經硫酸鈉干燥并濃縮產生產物B。
用30秒鐘將在2ml THF中的產物B(1g，3.04mmol)加入氫化鋰鋁(30.4ml，30.4mmol)在THF的溶液中。于室溫攪拌該溶液過夜，然后加入20ml乙酸乙酯終止反應。真空蒸發溶劑，并將形成的油狀物溶解在鹽酸和乙腈水溶液中。然后，使產物經C-18柱，采用0.1％鹽酸至乙腈梯度洗脫純化產生82mg化合物54鹽酸鹽。EI-MS m/z(相對強度)277(M+，100)，260(2.4)，242(8.6)，229(28)，215(11.7)，204(16)，183(12)，133(9.5)，124(14)，109(6.8)，30(22)。
除了在烷基化步驟中使用碘乙烷外，類似于化合物21的方法合成化合物55。GC/EI-MS(Rt＝7.43min)m/z(豐度)273(M+，100)，258(66)，229(63)，204(57)，201(72)，183(84)，134(57)，124(68)，l09(98)，72(72)。
如下所述完成化合物56的合成。
如在合成化合物24中關于產物A所述，由3-氟溴苯和3-氟-2-甲基苯甲醛合成所述醇A。
將所述醇A(8.4g，36.2mmol)與二氧化鎂(12.6g，144.8mmol)在100ml的二氯甲烷中攪拌4天。然后，用醚稀釋所述反應混合物并經0.2微米聚四氟乙烯膜濾器過濾。濃縮其濾液產生7.6g所述酮B。
如在化合物20合成中關于產物A所述合成取代丙烯腈C。
將炭上的2g 10％的二氫氧化鈀加入在240ml乙醇中的所述腈化合物C(4g，15.7mmol)中。于60-40psi下，氫化所述混合物3天。然后過濾所述反應混合物并濃縮。將所形成的油狀物溶于氯仿中并經硅膠層析(30％甲醇/5％異丙胺氯仿液)產生所述胺。將該胺化合物溶于鹽酸水溶液/乙腈中并經HLPC在C-18上純化(10％乙腈/0.1％鹽酸-50％乙腈/0.1％鹽酸，60分鐘)，然后凍干產生800mg化合物56鹽酸鹽。
GC/EI-MS(R＝7.39min)m/z(relativeintensity) 261(M+，64)，244(56)，229(57)，215(100)，203(53)，183(21)，133(39)，122(31)，109(32)。
如下所述合成化合物57。
將3-氟苯基溴化鎂(46ml，40mmol)和氰化酮(I)(0.072g，0.8mmol)加入5-氟-2-甲基苯基腈(5g，37mmol)在50 THF的溶液中。將該溶液回流4小時，然后倒入醚/20％鹽酸中并再攪拌2小時。分層，并用水和飽和鹽水洗滌所述醚層。使所述溶液經硫酸鈉干燥并濃縮。將所述粗品油狀物經硅膠純化(己烷-50％二氯甲烷的己烷溶液，用60分鐘)產生6.7g所述酮A。如關于化合物56所述，將所述酮A轉化成化合物57。
GC/EI-MS(Rt＝7.35min)m/z(relative intensity)261(M-，52)，244 (41)，229 (67)，215(100)，203 (42)，201 (42)，183(21)，133(45)，122(28)，109(26).
如下所述合成化合物58。
將乙酰丙酮鐵(III)(0.16g，0.44mmol)加入溶于10ml干燥的THF中的5-氟-2-甲基苯甲酰氯(2.24g，13mmol)的溶液中。然后，將該溶液冷卻到0℃并通過注射器用30分鐘加入5-氟-2-甲基苯基溴化鎂(20ml，15.5mmol)的THF溶液。再攪拌所述反應物30分鐘，然后，緩慢倒入醚/5％HCl中。分離醚層，用飽和鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥。真空蒸發產生3.2g所述酮A。
將干燥的THF(30ml)冷卻到-78℃，然后加入丁基鋰(5.85ml，14.6mmol，2.5M的己烷溶液)。然后用2分鐘加入乙腈(0.76ml，14.62mmol)，然后使其于-78℃攪拌15分鐘。將在5ml THF中的酮A(3g，12.2mmol)加入該溶液中。于-78℃攪拌該溶液30分鐘，然后使其溫熱到室溫并攪拌過夜。將所述反應混合物在醚和5％鹽酸間分配。分離醚層，用飽和鹽水洗滌，經硫酸鈉干燥并濃縮產生2.2g所述腈B。
將所述腈B(1g，3.48mmol)溶解在30ml乙醇和3ml 10N的氫氧化鈉中。加入1g 50％的Raney鎳水溶性淤漿，并用20小時在60psi下氫化所述混合物。將反應物過濾并濃縮成白色固體。將該殘余物稀釋入醚/水中并分出醚層。經硫酸鈉干燥所述醚溶液并濃縮產生0.96g羥胺C。
將所述羥胺C(0.96g，3.3mmol)吸收在濃鹽酸中并加熱到70℃，它引起暫時溶解，然后析出鏈烯烴D沉淀。通過過濾收集所述鏈烯烴并溶解在30ml乙醇和1ml濃鹽酸中。將炭上的二氫氧化鈀(0.4g)加入該溶液中，于60psi，用24小時氫化該混合物。通過濾去所述催化劑分離產物，并蒸發溶劑。將所述殘留物溶于0.1％鹽酸和乙腈中，并經C-18純化(15％乙腈/0.1％鹽酸-乙腈)產生0.6g化合物58的鹽酸鹽。
GC/EI-MS(Rt＝7.82min)m/z(relative intensity)275(M-，100)，258(20)，243(74)，229(38)，214(65)，201(31)，196(32)，183(20)，148(35)，138(42)，133(48)，122(69)，109(41).
如下所述，合成化合物59。
將化合物20(2.0g，7.05mmol)溶于無水乙醇(200ml)中，并在冰浴上冷卻到5-10℃。加入乙醛(0.395ml，7.05mmol，冷卻到-4℃)，然后加入鎳-鋁合金(200mg，Fluka Chemika)并用2小時，用Parr設備，在50psi下氫化所述反應物。GC/MS顯示所述產物收率為75％及有2％的N，N-二乙基副反應產物。將所述反應混合物經矽藻土過濾，減壓蒸發其濾液。將所述粗品產物溶于異丙醇(5ml)/乙醚(60ml)/醚制的氯化氫(1M)中，然后加入己烷(5ml)到濁點。通過濾紙過濾該混濁的混合物，然后加入己烷(10ml)到濁點，并再過濾該溶液。塞住所述濾液，于室溫使產物結晶。收集結晶并干燥提供0.325g(14.8％收率的)化合物59的鹽酸鹽無色針晶。
如下所述合成化合物60。以類似的方式，分別從化合物33、50、32、60、25和119開始可以合成化合物66、69、108、123、142和145。
將化合物20(游離堿)(1.0g，4.0mmol)在甲酸乙酯(150ml)中回流2小時。然后，在減壓下除去溶劑，提供1.1g(收率99％)的無色油狀的甲酰胺A。GC/MS顯示所述產物的純度為100％，并不經過進一步純化用于下列步驟中。
將所述甲酰胺A(1.1g，4.0mmol)溶于干燥的THF(100ml)中，并加熱到回流狀態(無冷凝器)。用3分鐘，將甲硼烷-二甲硫復合物(1.2ml，12mmol，10.5M)滴加到該回流溶液中。保持回流狀態約15分鐘，敞口，直到所述反應物體積減少到約30ml。然后將所述反應物在冰浴中冷卻，小心加入冰(5g，小碎塊)，然后加入水(25ml)和濃鹽酸(25ml)。將所述酸性溶液回流30分鐘。然后，將所述反應混合物在冰浴中冷卻，用氫氧化鈉(10N)堿化，用醚(3×100ml)提取，干燥(無水硫酸鈉)，并在減壓下蒸發。將所述粗品溶于醚(10ml)/己烷(50ml)中，并滴加醚制氯化氫(1M)析出其鹽酸鹽沉淀。收集所述鹽并經異丙醇(3ml)/醚(40ml)重結晶提供0.5g化合物60鹽酸鹽。
另外，按照下列4步反應順序，由市場上可以買到的原料合成化合物60。通過N-芐基甲胺共軛加成到丙烯酸乙酯上，制備在該合成途徑中的第一個中間體N-芐基-N-甲基-3-氨基丙酸乙酯。然后，使第一個中間體的酯官能度與2當量的Grignard試劑(由1-溴-3-氟苯制備)反應提供N-芐基-N-甲基-3-羥基-3-(雙-3-氟苯基)丙胺。然后，使Grignard反應產物在6N鹽酸/乙酸混合物中脫水產生N-芐基-N-甲基-3-(雙-3-氟苯基)-2-丙胺。以鹽酸鹽形式的該物質在乙醇中經Pearlman’s催化劑[Pd(OH)2/C]催化氫化，在經乙酸乙酯重結晶后，提供無色、針晶狀的化合物60的鹽酸鹽。
在帶有溫度計、回流冷凝器和125ml加料漏斗的500ml的三頸燒瓶[已加有丙烯酸乙酯(88.3ml，81.5g，0.815mol)]中加入N-芐基甲胺(100ml，94.0g，0.776mol)。用80分鐘將所述丙烯酸乙酯滴加到攪拌的反應混合物中。于室溫下，攪拌18小時后，真空蒸發所述產物并在78-95℃(0.12-0.25mmHg)收集含有產物的餾份(138g，80％的收率)。
Bp78-95℃(0.12-0.25mm Hg)；TLC，Rf＝0.23[hexane-EtOAc(5∶1)]，Rf＝0.57[MeOH-CHCl3(100∶5)]；GC，tR＝ 6.06min；MS，221(M-)，206(M-CH3)，192(M-C2H5)，176(M-OC2H5)，144(M-C6H5)，134[CH2N(CH3)CH2Ph]，120[N(CH)CHPh]，91(CH)，77(CH)，42(CH2CH2N)；1H NMR(游離堿 CDCl3)d1.25ppm(t，J＝7.1，3H，CN2CH3)，2.20(s，3H，NCH3)，2.51(t，J＝7.3，2H，COCH2)，2.74(t，J＝7.2，2H，CH2N)，3.51(s，2H，NCH2Ph)，4.13(q，J＝7.1，2H，OCH2CH3)，7.18-7.35(m，5H，ArH)；13CNMR(游離堿，CDCl3)d 15.2(CH2CH3)，34.0(COCH2)，42.9(NCH3)，53.8(NCH2)，61.4(OCH2CH3)，63.1(CH2Ph)，128.0(CH)，129.2(CH)，130.0(CH)，139.9(q)，173.7(q).
將鎂[51.5g，2.12mol，鎂屑，用THF(2×300ml)洗滌]和THF(2L)置于處于氮氣環境中的5L四頸圓底燒瓶中。在加料漏斗中加入1-溴-3-氟苯(凈料，392.8g，2.24mol)。將1/20的所述溴化物加入該鎂的懸浮液中，然后加入一個碘結晶。在引發所述Grignard反應后，用50分鐘將剩余的1-溴-3-氟苯加入所述回流混合物中。使所述反應物再回流45分鐘。用20分鐘，將N-芐基-N-甲基-3-氨基丙酸乙酯(187.5g，0.847mol)在THF(100ml)中的溶液加入所述Grignard試劑的回流溶液中。在所述酯加料已完成后，將所述反應物回流1小時。然后，將所述反應物在冰浴中冷卻。加入飽和氯化銨(400ml水溶液)和水(400ml)并將所述混合物轉移到分液漏斗中。分出有機層，并用THF(400ml)提取所述含水層一次。用飽和氯化鈉(2×200ml，水溶液)洗滌合并后的有機層，干燥(無水硫酸鈉)，經濾紙過濾，并經旋轉蒸發產生281.6g(90％)的桔黃色粘稠油狀的粗品。將該物質(281.6g，0.766mol)溶解在乙腈(1.4L)中。將濃鹽酸(65.0ml，0.786mol，12N)加入所述攪拌下的濾液中。然后，將所述結晶的混合物冷卻到-20℃達17小時。收集其產物，用冷的乙腈(800ml)洗滌并干燥，提供235.6g(以酯計算收率為69％)的白色固體。為了進行分析，將該鹽酸鹽進一步用乙腈重結晶純化。
Mp194-197℃(uncorr.)；TLC，Rf＝0.23[hexane-EtOAc(5∶1)]，Rf＝0.85[MeOH-CHCl3(100∶5)]，Rf=0.72[MeOH-CHCl3(100∶3)]；GC，t；＝10.93min；MS，367(M+)，272(M-C6H4F)，258(M-CH2Ph-H2O)，219[(C6H4F)2CH]，148[CH2CH2N(CH3)CH2Ph]，134[CH2N(CH3)CH2Ph]，91(C7H7)，42(CH2CH2N)；1H NMR(游離堿，CDCl3)d 2.18(s，3H，NCH3)，2.41(m，2H，CHCH2)，2.58(m，2H，CH2N)，3.42(s，2H，CH2Ph)，6.86(dt，J1＝8.5；J2＝1.8，2H，Ar-H)，7.18-7.30(m，10H，Ar-H)，8.33(bs，1H，OH)；13C NMR(游離堿 CDCl3)d 35.6(CHCH2)，41.5(CH3，NCH3)，54.3(CH2，CH2N)，62.6(CH2，CH2Ph)，113.1(d，J＝23，CH，Ar-C5.5)，113.5(d，J＝23，CH)，121.2(d，J ＝3，CH)，127.5(CH)，128.5(CH)，129.2(CH)，129.5(CH)，129.6(CH)，137.0(q)，150.2(q)，162.8(d，J＝243，q，Ar-C3.3).
將N-芐基-N-甲基-3-羥基-3-雙(3-氟苯基)丙胺鹽酸鹽(225.4g，0.559mol)、6N鹽酸(1392ml)和冰醋酸(464ml)加入帶頂部機械攪拌器、回流冷凝器和溫度計的5L三頸反應瓶中。在水浴(80-85℃)上加熱所述懸浮液并攪拌18小時。在加熱18小時后，在冰/甲醇浴中冷卻所述反應混合物。將乙酸乙酯(500ml)加入該冷卻的反應混合物中。然后，用25分鐘將氫氧化鈉(10N，1.7L)加入所述冷卻的混合物中，以該滴加速度是為了將其溫度控制在40℃以下。將所述混合物轉移到6L的分液漏斗中。分出所述有機層并用乙酸乙酯(2×500ml)提取水層。用飽和氯化鈉(2×100ml，水溶液)洗滌合并后的有機層，用硫酸鈉(250g)干燥，旋轉蒸發，然后真空干燥，提供185.6g(95％的收率)的流體狀的棕色油形式的游離堿。
將上述物質與己烷(1.5L)一起攪拌。所形成的溶液經濾紙過濾。在攪拌下，用5分鐘，將在二氧六環(146ml)中的4M的氯化氫滴加到所述濾液中。然后，自該淡黃色的半固體的沉淀物中傾出半透明的溶劑。將所述粗品鹽酸鹽溶解在回流狀態的乙酸乙酯(600ml)中，并過濾。然后，將所述濾液在冰浴中完全冷卻，并在劇烈攪拌下，緩慢加入己烷(110ml)。在冰浴上冷卻2小時后，所述整個燒瓶中充滿白色結晶固體。在過濾漏斗上收集該物質，并用冰冷的己烷/乙酸乙酯[(1∶4)，400ml]洗滌，并干燥產生128.7g(59.7％)的白色固體。在靜止所述母液過程中，沉淀出另一個14.8g的灰白色的固體。總收率為128.7g+14.8g＝143.5g(67％)。
Mp141-142℃(uncorr.)；TLC，Rf＝0.20[hexane-EtOAc(5∶1)]，Rf＝0.75[MeOH-CHCl3(100∶5)]，Rf＝0.49[MeOH-CHCl3(100∶3)]；GC，tR＝10.40min；MS，349(M+)，330，301，281，258(M-CH2Ph)，240，229[M-N(CH3)CH2Ph]，201，183，146，133，109，91(CH2C6H5)，65，42(CH2NHCH3)；1H NMR(游離堿 CDCl3)d 2.20ppm(s，3H，NCH3)，3.08(d，J＝6.8，2H，CH2N)，3.47(d，J＜1，2H，CH2Ph)，6.29(t，J＝6.8，1H，CH)，6.85-7.04(m，6H，ArH)，7.19-7.35(m，7H，ArH).
將N-芐基-N-甲基-3-雙(3-氟苯基)烯丙基胺鹽酸鹽(120.0g，0.311mol)溶解在無水乙醇中(1250ml)。加入Pd(OH)2/木炭(10.0g，～20％Pd，Fluka Chemical)。在穩定的氫氣流下，于25℃(大氣壓下)，攪拌所述反應混合物18小時。然后，將所述混合物經Celite/熔結玻璃過濾，用乙醇(2×50ml)洗滌所述催化劑，并減壓除去溶劑產生95.4g(收率為103％)的粗品。在劇烈攪拌下，將該物質溶于回流的乙酸乙酯(300ml)中并過濾。將所述燒瓶于25℃靜置2小時，在此期間，所述鹽酸鹽開始析出針狀結晶。然后，冷卻該燒瓶，收集所述產物，用冰冷的乙酸乙酯(20ml)洗滌，并干燥產生73.7g(收率為80％)的化合物60白色結晶固體。
Mp123-130℃；UV/Vis，e＝2.1×103L·mol-1·cm-1(264nm，EtOH，25℃，linear range0.05-0.20mg/mL)；TLC，Rf＝0.00[hexane-EtOAc(5∶1)]，Rf＝0.07[MeOH-CHCl3(100∶5)]，Rf＝0.19[MeOH-CHCl3-NH4OH(100∶5∶1)]；GC，tR＝7.45min；MS，261(M+)，229，215，201，183，164，150，138，122，101，83，75，57，42[CH2NHCH3]；1H NMR(HCl salt，CDCl3+1gtt MeOD)δ2.56(m，2H，NCH2)，2.60(s，3H，NCH)，2.85(t，J＝8.0，2H，CHCH2)，4.11(t，J＝8.0，1H，CH)，6.87-6.98(m，4H，ArH)，7.06(d，J＝7.7，2H，Ar2.2，H)，7.25(dd，J1＝6，J2＝8，ArH)；13C NMR(HCl salt，CDCl3+1gt MeOD)δ30.9(CH2，CHCH2)，32.7(CH3，NCH3)，47.6(CH，CHCH2)，47.8(CH2，CH2N)，113.9(J＝21，ArC2.2，or ArC4.4，)，114.5(d，J＝22，ArC2.2，or ArC4.4，)，123.2(d，J＝3，Ar-C6.6，)，130.3(d，J＝9，Ar-C5.5，)，144.7(d，J＝7，Ar-C1.1，)，162.9(d，J＝245，Ar-C3.3，)；IRKBr pellet(cm-1)，3436.9，2963.4，2778.5，2453.7，1610.6，1589.3，1487.0，1445.3，1246.0，764.5；溶解度2g/mL(H2O)，1g/mL(EtOH)；計算值C16H17NF2.HCl(Karl Fischer0.26％H2O)C，64.37；H，6.11；N，4.69；實測值C，64.14；H，6.13；N，4.69.
通過Pd/C的催化氫化，經選擇性還原其相應的鏈烯烴制備化合物105。
按照關于化合物24的所述內容，由2-溴-4-氟茴香醚和3-氟苯甲醛制備化合物61。GC/EI-MS(Rt＝9.22min)m/z(相對強度)277(M+，74)，260(46)，245(35)，23l(44)，229(34)，217(24)，203(28)，201(31)，183(28)，154(24)，133(19)，109(100)。
按照關于化合物24的所述內容，由2-溴茴香醚和2-甲氧基苯甲醛制備化合物62。GC/EI-MS(Rt＝9.30min)m/z(相對強度)271(M+，100)，254(17)，240(23)，225(40)，223(45)，207(22)，181(32)，165(31)，136(48)，121(98)，91(83)。
如下所述完成化合物63的合成。
按照關于化合物24合成的產物A的所述內容，由3-氟苯甲醛得到醇A。
將1.6g 10％Pd/C和1ml濃鹽酸加入在200ml乙醇中的醇A(10.257g，47mmol)中。于60psi，氫化該混合物3小時，然后過濾并濃縮產生二苯基甲烷B。將產物B(2.01g，9.86mmol)溶解在20ml的THF中并冷卻到-78℃。通過注射器緩慢加入丁基鋰(4.4ml，10.8mmol，2.5M的己烷溶液)，然后，于-78℃再攪拌該反應物30分鐘。環戊烯氧化物(0.9ml，10.3mmol)加入該桔黃色的溶液中。將所述反應物攪拌3小時，同時緩慢溫熱到室溫。用10％鹽酸(150ml)使反應物驟冷，并用醚提取3次。用硫酸鈉干燥所述醚層并濃縮產生2.5g所述醇C。
將在5ml THF中的三苯基磷(1.37g，5.2mmol)和在5ml THF中的對硝基苯甲酸(0.87g，5.2mmol)加入在10ml干燥THF中的所述醇C(1g，3.5mmol)中。將該溶液冷卻到0℃，然后加入DEAD(0.82ml，5.2mmol)，并攪拌過夜。將所述反應物在水和醚中分配。真空除去醚并將所形成的油狀物經硅膠層析(己烷/乙酸乙酯)產生365mg的所述順式酯。使用碳酸鉀在甲醇中攪拌過夜，使所述酯水解。除去甲醇后，殘留物用乙醚吸收，用水洗滌，經硫酸鈉干燥并濃縮產生250mg的所述順式醇D。
將在5ml THF中的三苯基磷(342mg，1.3mmol)和在5ml THF中的鄰苯二甲酰亞胺(191.3mg，1.3mmol)加入在5ml干燥THF中的所述醇D(.25g，0.9mmol)中。將該溶液冷卻到0℃，然后加入DEAD(0.205ml，1.3mmol)，并攪拌過夜。將所述反應物在水和醚中分配。真空除去醚并將所形成的油狀物經硅膠層析(己烷/乙酸乙酯)，產生100mg的所述鄰苯二甲酰亞胺E。將8.8mg水合肼加入所述鄰苯二甲酰亞胺E(100mg)在20ml乙醇的溶液中。將該溶液回流5小時，然后于室溫攪拌過夜。通過加入1ml濃鹽酸吸收該反應物并濾去白色固體。將所形成的溶液濃縮至干并將所述固體吸收在醚和氫氧化鈉水溶液中。經硫酸鈉干燥所述醚層并濃縮產生白色固體。將其吸收到少量的醚中，并用10滴1M氯化氫的醚溶液處理。攪拌過夜后，通過過濾收集該白色固體并干燥，產生50mg化合物63鹽酸鹽。
GC/EI-MS(Rt＝9.22min)m/z(relativeintensity)287(M+，45)，270(12)，201(63)，183(81)，133(38)，109(43)，83(44)，56(100)，43(37)。
如同關于化合物63的所述內容，完成化合物64的合成，除了省略轉化步驟(化合物C-D)，以便得到作為終產物的所述順式胺化合物。GC/EI-MS(Rt＝8.28min)m/z(相對強度)287(M+，15)，270(4)，201(13)，183(15)，133(11)，109(16)，84(43)，56(100)，43(32)。
如下所述完成化合物65的合成。
類似于化合物24合成中的酮B，使用2-甲苯基溴化鎂和2-甲基苯甲醛作為原料合成所述酮A。使用用于化合物58的方法將該酮轉化為其最終產物。
GC/EI-Ms(Rt＝7.84min)m/z(relative intensity)239(M+，88)，222(14)，207(100)，193(46)，178(71)，165(60)，130(39)，120(40)，115(51)，104(40)，91(38)，77(21)，
使用市場上可以買到的反式-3-氟肉桂酸開始經七步反應順序合成化合物119。該反應途徑從概念上類似于文獻[美國專利4313896(1982)]中報道的用于相關類似物的途徑。然而，使用與所報道顯著不同的反應順序完成三個最終的步驟。在三個步驟中，將所述肉桂酸還原并氯化成相應的3-(3-氟苯基)氯丙烷。用NBS(N-溴代琥珀酰亞氨)使該化合物溴化，然后，使所形成的三鹵化物與3-氟苯酚反應。使用Gabriel合成法，將所形成的醚轉化為最終產物。
將反式-3-氟肉桂酸(25.0g，150.4mmol)溶解在無水乙醇中并在60psig，50℃，在Parr設備上經10％Pd/C(2.5g)氫化1小時(氫的吸收計算值245psig；實際值260psig)。將該反應混合物過濾并蒸發產生結晶化合物(23.0g，收率89％)。GC.tR＝4.43min；MS168(M+)。
在干燥的氮氣流下，于0-10℃，用15分鐘，將在THF(100ml)中的3-氟氫化肉桂酸(22.0g，131mmol)溶液滴加到氫化鋰鋁(4.23g，111mmol)在THF(200ml)中的懸浮液中。將反應物加熱到回流狀態達1小時，然后根據Fieser & Fieser’s Reagents for Organic Synthesis(第一卷，1967)處理，提供白色固體(20.1，收率99％)。GC.tR＝3.74min；MS154(M+)。
使3-(3-氟苯基)-1-丙醇(15.0g，97.4mmol)和三苯基磷(36.0g，137.3mmol)在四氯化碳(150ml)中的溶液回流19小時。用24小時，定時地加入另外的三苯基磷(3×3.0g，3×11.4mmol)。通過過濾除去形成的沉淀并用己烷洗滌該固體。在減壓下蒸發其濾液并將殘余物懸浮在己烷(200ml)中，然后過濾。蒸發所述濾液產生16.0g(95.1％)的粗品，并經硅膠快速層析純化，用己烷洗脫，產生14.7g(87％)的無色液體。GC.tR＝3.63min；MS 172/174(M+)。
將上述氯化物(12.0g，69.5mmol)、N-溴代琥珀酰亞氨(17.3g，97.2mmol)和過氧化二苯甲酰(0.06g)在四氯化碳(75ml)中的溶液回流1小時。然后，將所述反應混合物在冰浴中冷卻，過濾并用己烷洗滌所述固體。將濾液蒸發，產生17.9g(100％)產物。GC.tR＝5.21min；MS251/253(M+)。
將懸浮在丙酮(80ml)中的3-溴-3-(3-氟苯基)-1-氯丙烷(4.0g，15.9mmol)、3-氟苯酚(1.98g，17.7mmol)和碳酸鉀(2.65g，19.2mmol)的混合物回流15小時。然后，減壓除去揮發物，并將形成的殘留物懸浮在己烷(200ml)和氫氧化鈉(0.1N，100ml)的混合物中。使其分層，并用0.1N的氫氧化鈉(100ml)和水(100ml)洗滌有機層，干燥(無水硫酸鈉)并真空蒸發。將所形成的殘余物經硅膠層析，用己烷，然后己烷/乙酸乙酯[100∶1]，然后[40∶1]洗脫，產生1.64g(37％)的無色油狀產物。GC.tR＝7.28min；MS281/283(M+)；TLCrf＝0.3，己烷/乙酸乙酯[40∶1]。
在氮氣環境下，將3-(3-氟苯基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氯丙烷(1.52g，5.38mmol)和鄰苯二甲酸鉀(1.20g，6.48mmol)在DMF(30ml)中的溶液加熱到90℃達2小時。然后，將所述反應混合物冷卻并倒入水(100ml)中。用乙醚(2×100ml)提取所形成的溶液。用飽和氯化鈉溶液(100ml)和水(2×100ml)洗滌該有機提取物，干燥(無水硫酸鈉)并減壓蒸發產生2.17g粗品。將該物質經硅膠層析純化，用己烷/乙酸乙酯[40∶1]-[20∶1]洗脫，蒸發后產生1.81g(86％)的玻璃狀的產物。
將N-鄰苯二甲酰基-3-(3-氟苯基)-3-(氟苯氧基)-1-丙胺(1.74g，4.42mmol)和無水肼(1.43g，44.6mmol)在無水乙醇(30ml)中的溶液回流1小時。將該反應物冷卻并真空蒸發。將所形成的物質懸浮在乙醚(75ml)中并用0.2N氫氧化鈉(2×25ml)洗滌。干燥(無水硫酸鈉)所述有機層，并真空蒸發產生1.04g(89.3％)產物，經反相層析[Vydac Prep.C18；264nm；50ml/min；ACN/0.1％鹽酸水溶液，10％-50％梯度洗脫20分鐘；rf＝17.4min]純化，產生0.89g(67％)的吸濕性化合物119的鹽酸鹽。
以類似于用于制備化合物119的方法制備化合物118、120-122和137。
在三步反應中，由市場上可以買到的4，4-二苯基環己酮合成化合物113。首先，通過催化氫化還原原料中的鏈烯烴。然后使用標準方法還原形成甲氧基胺。
如上所述，通過對本領域技術熟練人員所周知的標準方法合成化合物67-68，70-75，79-82，84-89，91-95，98-100，102，104-106，109-114，117，124-134，138和140-150。
簡化性的芳基烷基胺的氣相層析在帶有5971系列質譜檢測器的Hewlett-Packard 5890系列II氣相層析儀[Ultra-2Ultra-Performance毛細管柱(膠聯5％苯基甲基硅酮)；柱長25m，柱直徑0.20mm；流速60ml/min；進樣器溫度250℃；梯度升溫程序自125℃至325℃，20℃/min，10分鐘，然后于325℃保持恒溫6分鐘]上獲得氣相層析和質譜數據。
化合物19.(Rt ＝7.40min)，m/z(rel.int.)211(M+，13，195(16)，194(100)，193(73)，180(8)，179(33)，178(19)，168(24)，167(50)，166(23)，165(72)，164(8)，153(10)，152(31)，117(13)，116(38)，115(26)，106(14)，104(14)，103(24)，102(8)，91(11)，78(14)，77(29)，63(9)，51(17)化合物 20.(Rt＝7.34min)，m/z(rel.int.)247(M+，27)，231(16)，230(100)，229(45)，215(29)，214(14)，204(43)，203(37)，202(13)，201(47)，184(14)，183(58)，181(8)，151(9)，135(13)，134(31)，133(25)，124(18)，122(16)，121(19)，109(15)，101(29)，96(18)，95(11)，83(11)，75(20)，57(10)，42(9)化合物21.(Rt＝7.53min)，m/z(rel.int.)261(M+，69)，262(13)，245(17)，244(100)，230(11)，229(42)，216(11)，215(15)，214(14)，204(45)，203(35)，202(16)，201(63)，184(12)，183(61)，148(11)，136(9)，135(27)，133(36)，124(21)，115(16)，109(43)，83(12)，74(8)，58(14)，57(11)化合物22.(Rt＝7.37min)，m/z(rel.int.)261(M+，4)，244(14)，229(7)，204(10)，203(16)，201(12)，183(16)，138(4)，133(5)，109(4)，101(7)，75(4)，58(8)，57(4)，44(100)，42(7)化合物24.(Rt＝8.21min)，m/z(rel.int.)259(M+，122)，260(23)，242(44)，241(15)，228(15)，227(49)，216(15)，213(56)，212(16)，211(55)，199(32)，196(22)，185(34)，184(19)，183(67)，171(16)，170(38)，165(44)，151，(20)，150(16)，146(13)，136(46)，134(17)，133(37)，123(15)，121(22)，120(13)，109(100)，91(34)，77(29)，51(15)化合物25.(Rt＝8.49min)，m/z(rel.int.)259(M+，39)，243(16)，242(95)，241(25)，227(27)，217(15)，216(100)，215(27)，212(13)，211(50)，201(14)，200(11)，199(15)，196(15)，185(20)，184(19)，183(50)，171(24)，170(28)，165(15)，146(10)，136(11)，134(12)，133(23)，121(21)，77(9)化合物26.(Rt＝8.69min)，m/z(rel.int.)259(M+，11)，243(17)，242(100)，241(69)，227(10)，215(31)，212(11)，211(52)，184(14)，183(31)，172(13)，171(35)，170(23)，165(13)，147(21)，146(12)，134(19)，133(23)，121(13)，91(11)，77(10)化合物27.(Rt＝8.80min)，m/z(rel.int.)243(M+，54)，226(36)，212(12)，211(69)，200(14)，199(16)，198(20)，197(100)，196(39)，185(35)，184(30)，183(50)，179(13)，178(14)，165(13)，134(15)，133(19)，120(29)，117(16)，115(27)，104(13)，101(11)，91(23)，77(13)化合物28.(Rt＝8.77min)，m/z(rel.int.)243(M+，25)，227(15)，226(85)，225(26)，212(19)，211(100)，200(22)，195(17)，197(18)，196(29)，185(46)，164(35)，183(64)，179(9)，165(11)，134(19)，133(23)，121(12)，120(18)，117(14)，115(24)，101(12)，91(25)，77(12)，65(11)，51(9)
化合物29.(Rt＝7.89min)，m/z(rel.int.)243(M+，12)，227(9)，226(52)，225(17)，212(19)，211(100)，199(13)，197(12)，196(21)，185(19)，184(24)，183(43)，179(7)，134(11)，133(15)，120(9)，117(10)，115(17)，91(14)化合物30.(Rt＝8.36min)，m/z(rel.int.)263(M+，21)，246(26)，220(13)，212(17)，211(100)，197(10)，196(25)，185(43)，184(30)，183(69)，181(9)，165(12)，133(18)，115(14)，101(15)，75(15)化合物31.(Rt＝9.31min)，m/z(rel.int.)279(M+，18)，281(11)，262(10)，236(10)，229(33)，228(17)，227(100)，203(9)，201(33)，199(15)，192(15)，178(19)，166(18)，165(53)，164(13)，163(16)，140(12)，115(13)，103(9)化合物32.(Rt＝7.30min)，m/z(rel.int.)229(M+，21)，213(16)，212(100)，211(61)，197(33)，196(19)，194(14)，186(26)，185(30)，184(19)，183(69)，170(17)，166(16)，165(77)，134(25)，133(23)，116(17)，115(17)，103(18)，102(11)，78(13)，77(23)，75(13)，51(18)，43(13)，42(13)化合物33.(Rt＝7.56min)，m/z(rel.int.)261(M+，68)，245(18)，244(100)，229(43)，215(16)，214(15)，204(57)，203(43)，202(15)，201(64)，184(14)，183(73)，148(16)，136(13)，135(46)，133(60)，124(51)，115 (27)，111(14)，109(96)，107(16)，96(14)，83(27)，75(20)，58(96)，57(33).56(23)，41(35)
化合物34.(Rt＝7.39min)，m/z(rel.int.)261(M+，72)，262(14)，245(18)，244(100)，229(42)，216(9)，215(15)，214(14)，204(52)，203(38)，202(14)，201(54)，184(12)，183(62)，181(10)，148(13)，136(9)，135(31)，133(40)，124(30)，115(18)，109(57)，107(9)，83(13)，58(21)，57(11)化合物35.(Rt＝4.45min)，m/z(rel.int.)181(M+，8)，165(10)，164(76)，138(48)，136(11)，135(63)，133(12)，123(22)，122(22)，121(11)，110(21)，109(100)，101(13)，96(27)，83(14)，75(11)，56(15)，45(21)，44(40)，42(9)，41(15)化合物37.(Rt＝4.87min)，m/z(rel.int.)196(M+，4)，195(17)，178(76)，163(20)，152(41)，150(22)，137(12)，136(29)，135(60)，133(19)，124(13)，123(20)，122(49)，121(17)，110(78)，109(100)，101(17)，96(29)，83(17)，75(12)，56(29)，55(12)，45(53)，44(45)，43(39)，41(30)化合物38.(Rt＝7.68min)，m/z(rel.int.)275(M+，.1)，203(5)，201(6)，183(8)，135(4)，133(4)，109(8)，71(3)，45(3)，44(100)，42(4)化合物39.(Rt＝7.67min)，m/z(rel.int.)289(M+，6)，203(3)，201(5)，183(6)，135(2)，133(3)，109(7)，85(3)，70(3)，59(4)，58(100)化合物40.(Rt＝7.63min)，m/z(rel.int.，289(M+，19.，203(6)，201(13)，183(17)，152(5)，135(6)，133(8)，109(15)，85(5)，70(4)，58(100)化合物41.(Rt＝7.93min)，m/z(rel.int.)275(M+，23)，258(20)，203(27)，202(14)，201(52)，184(9)，183(59)，181(10)，150(11)，149(18)，147(11)，135(24)，134(14)，133(40)，124(12)，123(19)，109(76)，107(9)，103(10)，83(15)，75(10)，72(100)，71(12)，57(18)，56(21)，55(41)化合物43.(Rt＝9.18min)，m/z(rel.int.)293(M+，11)，276(10)，243(11)，241(31)，236(11)，235(16)，201(18)，199(22)，179(11)，176(25)，176(10)，166(16)，165(70)，164(19)，163(24)，103(9)，102(9)，75 (11)，44(100)，43(11)，42(15)化合物46.(Rt＝9.34min)，m/z(rel.int.)293(M+，46)，295(28)，276(16)，243(24)，242(15)，241(75)，237(12)，236(18)，201(33)，199(31)，178(26)，176(13)，166(31)，165(100)，164(32)，163(43)，152(11)，151(13)，149(12)，140(30)，129(11)，129(12)，127(20)，125(31)，117(26)，116(26)，115(64)，91(12)，89(17)，77(13)，75(22)，63(14)，58(51)，57(15)，56(19)，41(19)化合物50.(Rt＝7.37min)，m/z(rel.int.)261(M+，2)，244(9)，229(4)，204(7)，203(11)，201(8)，163(11)，102(5)，58(7)，44(100)，42(7)
化合物51.(Rt＝7.30min)，m/z(rel.int)261(M+，5)，244(20)，229(9)，204(14)，203(23)，202(6)，201(20)，183(27)，133(7)，121(6)，101(9)，75(6)，58(7)，44(100)，43(6)，42(11)化合物52.(Rt＝7.24min)，m/z(rel.int.)247(M+，56)，231(13)，230(81)，229(47)，216(12)，215(32)，214(16)，204(29)，203(31)，202(16)，201(63)，196(21)，184(20)，183(100)，182(11)，181(15)，170(13)，151(13)，150(11)，135(13)，134(29)，133(25)，124(14)，122(20)，121(21)，109(13)，101(27)，96(21)，75(23)，43(14)，42(15)化合物53.(Rt＝7.21min)，m/z(tel.int.)247(M+，98)，248(17)，231(13)，230(84)，229(56)，215(38)，214(16)，203(33)，202(16)，201(68)，196(26)，184(16)，183(100)，161(15)，151(21)，150(15)，135(14)，134(35)，133(24)，124(19)，122(23)，121(25)，111(13)，101(31)，96(19)，75(19)化合物55.(Rt＝7.86min)，m/z(rel.int.)275(M+，98)，276(20)，258(59)，229(58)，216(31)，215(22)，214(19)，204(49)，203(41)，202(21)，201(82)，184(18)，183(100)，181(14)，150(21)，135(33)，133(55)，124(41)，115(13)，109(90)，101(15)，83(20)，75(16)，72(23)，57(13)，56(24)化合物56.(Rt＝7.79min)，m/z(rel.int.)261(M+，67)，262(12)，244(54)，229(56)，218(27)，217(16)，216(19)，215(100)，214(45)，203(50)，202(32)，201(51)，197(16)，195(26)，183(24)，138(17)，135(20)，134(17)，133(39)，122(26)，121(13)，109(30)，101(17)，96(14)，83(16)，75(13)化合物57.(Rt＝7.65min)，m/z(rel.int.)261(M+，62)，244(50)，229(50)，218(24)，217(13)，216(18)，215(100)，214(36)，203(42)，202(19)，201(33)，197(14)，196(19)，183(17)，138(19)，135(16)，134(12)，133(29)，122(29)，109(25)，101(13)化合物58.(Rt＝8.15min)，m/z(rel.int.)275(M+，134)，276(26)，258(23)，244(19)，243(100)，232(25)，229(53)，217(51)，216(23)，215(67)，214(97)，201(44)，197(21)，196(43)，183(23)，148(38)，147(21)，138(46)，135(46)，134(18)，133(64)，125(25)，123(28)，122(81)，115(27)，109(54)，107(17)，83(27)，44(19)，43(19)化合物59.(Rt＝7.61min)，m/z(rel.int.)275(M+，27)，204(8)，203(10)，201(19)，183(25)，109(8)，101(7)，58(100)，57(8)，56(8)，44(9)化合物60.(Rt＝7.34min)，m/z(rel.int.)261(M+，55)，262(10)，204(16)，203(15)，201(31)，183(35)，133(11)，122(11)，121(10)，109(9)，101(16)，96(11)，75(10)，57(9)，44(100)，42(11)化合物61.(Rt ＝6.07min，，m/z(rel.int.)277(M+，68)，278(13)，260(31)，246(11)，245(25)，234(12)，231(32)，229(26)，217(20)，203(23)，201(24)，188(12)，183(22)，154(24)，151(15)，150(10)，133(18)，124(10)，109(100)，95(11)，44(14)化合物62.(Rt＝8.93min)，m/z(rel.int.)271(M+，115)，272(22)，254(16)，239(22)，225(36)，223(40)，181(33)，165(34)，153(13)，152(24)，136(39)，132(13)，131(16)，123(20)，122(13)，121(89)，119(13)，115(23)，105(17)，91(100)，77(22)化合物63.(Rt＝8.47min)，m/z(rel.int.)287(M+，31)，241(9)，204(27)，203(20)，202(9)，201(30)，183(38)，150(13)，133(20)，109(27)，84(45)，83(43)，82(11)，57(18)，56(100)，43(25)化合物64.(Rt＝ 8.57min)，m/z(rel.int.)287(M+，63)，288(13)，270(14)，242(16)，241(17)，215(17)，214(18)，204(35)，203(27)，202(18)，201(70)，183(86)，150(18)，147(16)，146(17)，135(16)，133(45)，109(45)，84(32)，83(38)，82(13)，75(15)，57(21)，56(100)，43(44)化合物65.(Rt＝8.18min)，m/z(rel.int.)239(M+，88)，240(17)，222(12)，208(18)，207(100)，195(24)，193(48)，192(11)，181(33)，180(32)，179(57)，178(72)，166(16)，163(60)，152(13)，130(36)，129(17)，120(40)，117(34)，116(14)，115(53)，107(20)，105(19)，104(42)，103(11)，92(37)，77(20)，65(17)
化合物66.(Rt＝7.46min)，m/z(rel.int.)275(M+，7)，201(5)，183(6)，133(3)，109(6)，71(3)，45(3)，44(100)，42(3)化合物67.(Rt＝7.56min)，m/z(rel.int.)225(M+，24)，194(8)，193(12)，179(6)，168(10)，167(12)，166(6)，165(20)，152(9)，120(8)，116(6)，115(7)，103(7)，77(8)，51(5)，44(100)化合物68.(Rt＝7.85min)，m/z(rel.int.)239(M+，22)，194(5)，193(10)，168(10)，167(12)，166(6)，165(19)，152(9)，134(6)，116(5)，115(7)，91(7)，77(6)，59(5)，58(100)，44(8)
化合物69.(Rt＝7.35min)，m/z(rel.int.)275(M+，11)，203(24)，202(7)，201(23)，183(35)，122(6)，121(6)，101(9)，58(100)，57(8)，56(10)化合物72.(Rt＝7.90min)，m/z(rel.int.)253(M+，25)，238(9)，193(7)，168(8)，167(14)，165(17)，152(9)，115(7)，91(11)，73(8)，72(100)，58(45)，56(7)，44(6)，43(9)，42(8)化合物73.(Rt＝7.29min)，m/z(rel.int.)239(M+，9)，240(2)，167(2)，165(5)，152(2)，115(2)，77(2)，59(5)，58(100)，44(3)，42(5)化合物74.(Rt＝8.01min)，m/z(rel.int.)267(M+，7)，167(3)，165(6)，152(3)，91(4)，87(7)，86(100)，72(13)，58(10)，56(4)，42(4)化合物79.(Rt＝7.89min)，m/z(rel.int.)230(M+，37)，214(15)，213(100)，212(62)，201(26)，200(72)，198(21)，195(12)，188(17)，187(85)，186(46)，185(42)，184(9)，157(12)，135(9)，133(24)，109(10)，107(20)，106(62)，80(14)，79(32)，78(9)，51(20)化合物81.(Rt＝7.40min)，m/z(rel.int.)209(M+，89)，210(14)，208(100)，193(17)，192(56)，191(42)，189(12)，178(20)，166(11)，165(45)，152(12)，132(86)，131(10)，130(53)，117(22)，115(48)，106(22)，105(10)，104(12)，103(16)，91(16)，77(22)，51(15)化合物82.(Rt＝7.93min)，m/z(rel.int.)275(M+，124)，276(25)，232(33)，215(12)，214(16)，204(14)，203(100)，201(24)，196(8)，183(20)，150(14)，138(9)，136(14)，135(44)，133(26)，125(9)，124(71)，123(29)，121(14)，115(14)，111(72)，110(9)，109(84)，101(14)，83(9)，75(8)化合物83.(Rt＝7.22min)，m/z(rel.int.)235(M+，10)，219(17)，218(100)，217(62)，203(20)，192(10)，191(38)，190(7)，189(14)，185(17)，183(7)，171(9)，165(8)，147(10)，146(11)，134(12)，133(17)，121(8)，109(8)，97(8)，45(7)化合物85.(Rt＝7.73min)，m/z(rel.int.)239(M+，7)，222(15)，179(8)，178(9)，168(16)，167(33)，166(12)，165(43)，161(9)，152(20)，146(17)，129(7)，120(15)，118(7)，117(19)，115(25)，91(25)，77(7)，72(9)，44(100)，42(6)化合物86.(Rt＝7.66min)，m/z(rel.int.)239(M+，3)，222(4)，168(4)，167(11)，166(4)，165(14)，152(7)，120(6)，117(6)，115(8)，91(9)，72(5)，44(100)，42(3)化合物87.(Rt＝7.33min)，m/z(rel.int.)239(M+，4)，222(9)，179(9)，178(11)，168(11)，167(27)，166(13)，165(48)，161(7)，152(22)，146(14)，128(7)，120(11)，115(8)，117(21)，115(31)，91(29)，77(9)，72(8)，51(7)，44(100)，42(9)
化合物88.(Rt＝7.4min)，m/z(rel.int.)227(M+，.0)，183(10)，168(18)，167(100)，166(32)，165(83)，164(10)，163(6)，153(6)，152(35)，139(6)，115(8)，105(9)，77(12)，51(7)，45(23)化合物89.(Rt＝8.74min)，m/z(rel.int.)260(M+，220)，261(39)，259(89)，242(18)，203(17)，202(16)，201(61)，183(58)，165(100)，150(20)，148(25)，138(24)，137(61)，122(73)，121(31)，111(47)，101(23)，96(16)，75(16)，44(17)，43(29)化合物90.(Rt＝7.32min)，m/z(rel.int.)235(M+，9)，219(16)，218(100)，217(42)，206(17)，205(9)，204(7)，203(21)，202(8)，193(12)，192(71)，191(62)，190(9)，189(19)，185(13)，171(14)，159(9)，147(14)，146(16)，134(10)，133(17)，121(14)，109(11)，101(8)，97(17)，45(15)化合物91.(Rt＝10.67min)，m/z(rel.int.)329(M+，6)，301(20)，300(81)，167(18)，166(6)，165(18)，152(10)，132(5)，120(45)，119(21)，118(11)，117(9)，115(11)，106(6)，105(5)，104(12)，103(5)，92(8)，91(100)，77(10)，41(6)
化合物92.(Rt＝10.37min)，m/z(rel.int.)337(M+，30)，338(7)，204(7)，203(7)，201(7)，183(10)，133(6)，121(8)，120(70)，106(6)，92(9)，91(100)化合物93.(Rt＝10.25min)，m/z(rel.int.)351(M+，28)，352(7)，337(9)，336(39)，203(10)，201(11)，183(17)，135(6)，134(20)，133(6)，132(6)，120(11)，118(5)，109(18)，106(12)，105(100)，104(13)，103(8)，91(14)，79(11)，77(12)化合物94.(Rt＝10.48min)，m/z(rel.int.)365(M+，2)，337(25)，336(100)，203(8)，201(8)，183(14)，133(5)，132(6)，120(14)，119(13)，118(9)，115(5)，109(20)，106(5)，104(10)，91(52)化合物95.(Rt＝6.68min)，m/z(rel.int.)283(M+，59)，284(11)，267(11)，266(71)，265(19)，251(24)，250(9)，241(14)，240(100)，239(48)，237(30)，232(10)，220(17)，219(65)，199(9)，152(12)，151(18)，142(20)，140(13)，139(20)，127(22)，119(24)，114(12)，101(10)，63(10)，44(9)化合物96.(Rt＝6.93min)，m/z(rel.int.)265(M+，46)，249(16)，248(100)，247(34)，233(27)，232(11)，223(9)，222(65)，221(39)，220(10)，219(36)，202(14)，201(54)，152(15)，151(14)，133(9)，124(12)，119(9)，109(9)，101(14)，75(9)
化合物97.(Rt＝8.10min)，m/z(rel.int.)241(M+，101)，242(18)，224(50)，223(19)，210(11)，209(37)，197(12)，196(10)，195(55)，194(16)，193(60)，181(29)，178(20)，167(38)，166(16)，165(52)，153(12)，152(36)，136(27)，133(12)，132(14)，116(12)，115(25)，103(13)，91(100)，77(18)化合物98.(Rt＝6.69min)，m/z(rel.int.) 232(M+，3)，204(11)，203(37)，202(30)，201(100)，188(9)，184(14)，183(84)，182(10)，181(15)，170(9)，109(17)，107 (10)，83(10)，75(8)，57(7)化合物99.(Rt＝ 6.75min)，m/z(rel.int.)233(M+，2)，204(12)，203(68)，202(26)，201(100)，200(6)，188(9)，184(13)，183(86)，182(8)，181(14)，170(9)，133(6)，109(15)，107(11)，83(11)，81(7)，75(7)，57(9)化合物100.(Rt＝7.66min)，m/z(rel.int.)261(M+，150)，262(29)，217(11)，216(70)，215(28)，214(11)，203(30)，202(31)，201(100)，196(10)，184(15)，183(90)，181(11)，133(20)，124(12)，122(20)，109(39)，101(14)，83(10)，75(10)，45(43)化合物101.(Rt＝7.72min)，m/z(rel.int.)245(M+，20)，229(16)，228(100)，227(36)，213(21)，211(22)，202(57)，201(30)，199(21)，183(50)，181(14)，171(15)，170(26)，165(12)，152(21)，134(19)，133(35)，122(28，120(19).120(13)，119(12)，109(20)，107(20)，106(18)，101(15)，94(15)，91(20)，77(18)，74(15)，65(20)，63(14)，55(14)，51(15)，44(27)，43(17)，42(14)化合物102.(Rt＝8.33min)，m/z(rel.int.)273(M+，19)，204(16)，203(16)，201(15)，183(18)，177(9)，133(8)，109(13)，70(41)，69(100)，68(20)，43(25)，42(5)，41(5)化合物103.(Rt＝8.59min)，m/z(rel.int.)245(M+，118)，246(20)，229(15)，228(100)，227(85)，213(27)，211(23)，209(15)，207(12)，202(19)，201(32)，200(17)，199(84)，196(10)，183(38)，181(15)，171(13)，170(23)，152(19)，151(15)，150(10)，134(18)，133(32)，131(12)，122(36)，119(15)，109(24)，107(10)，106(12)，91(19)，77(12)化合物104.(Rt＝7.72min)，m/z(rel.int.)261(M+，94)，262(17)，217(15)，216(92)，215(18)，204(12)，203(86)，202(25)，201(100)，184(10)，183(69)，146(12)，133(13)，122(8)，109(26)，101(9)，83(8)，45(33)化合物105.(Rt＝10.24min)，m/z(rel.int.)351(M+，7)，201(5)，183(7)，135(9)，134(79)，133(4)，109(5)，92(8)，91(100)，65(8)，42(7)化合物106.(Rt＝7.52min)，m/z(rel.int.)259(M+，77)260(14)，258(31)，244(30)，228(13)，227(28)，214(14)201(24)，165(12)，164(100)，162(29)，133(56)，109(44)75(13)，44(80)，42(56)化合物107.(Rt＝7.45min)，m/z(rel.int.)227(M+，101)，228(16)，226 (100)，211(22)，210(68)，209(49)，207(13)，196 (22)，184(15)，183(62)，150(50)，148(31)，133(44)，132(53)，130(45)，117(15)，115(29)，106(14)，77(18)，75(13)，51(14)化合物108.(Rt＝7.46min)，m/z(rel.int.)243(M+，34)，244(6)，212(6)，211(9)，197(6)，186(12)，185(10)，184(5)，183(19)，165(15)，133(6)，120(6)，103(5)，77(6)，44(100)，42(6)化合物109.(Rt＝6.68min)，m/z(rel.int.)285(M+，110)，286(22)，284(27)，256(16)，228(37)，227(27)，225(10)，220(11)，207(15)，201(27)，191(14)，190(100)，163(11)，162(85)，161(10)，147(11)，146(11)，133(32)，109(20)，83(12)，82(36)化合物110.(Rt＝8.66min)，m/z(rel.int.)285(M+，91)，286(16)，284(100)，243(16)，227(26)，225(11)，221(10)，220(17)，214(12)，207(15)，201(23)，147(25)，146(16)，133(17)，109(20)，42(15)化合物111.(Rt＝8.81min)，m/z(rel.int.)287(M+，29)，214(9)，204(15)，203(18)，202(9)，201(34)，183(42)，135(9)，133(28)，109(28)，84(47)，83(100)，82(19)，75(8)，70(16)，68(13)，57(18)，56(28)，44(16)，43(25)，42(14)化合物112.(Rt＝8.85min)，m/z(rel.int.)287(M+，141)，288(29)，286(22)，202(21)，201(62)，183(64)，133(23)，109(27)，84(100)，83(18)，82(31)，57(14)，56(58)，55(53)，43(14)，42(35)化合物113.(Rt＝9.08min)，m/z(rel.int.)251(M+，27)，180(38)，179(36)，178(39)，174(15)，173(100)，166(11)，165(53)，158(12)，152(10)，132(9)，115(28)，91(31)，82(18)，77(16)，56(45)，51(9)，43(23)化合物114.(Rt＝8.71min)，m/z(rel.int.)237(M+，197)，238(37)，236(67)，193(15)，179(30)，178(40)，165(41)，159(43)，158(26)，132(24)，132(16)，116(17)，115(37)，106(21)，103(34)，91(50)，77(48)，57(68)，56(100)，51(32)，43(50)，42(34)化合物115.(Rt＝9.45min)，m/z(rel.int.)271(M+，34)，255(12)，254(67)，253(14)，239(23)，229(16)，228(100)，227(18)，224(16)，223(68)，213(9)，212(10)，211(10)，197(34)，196(17)，195(11)，181(18)，169(10)，165(22)，153(19)，152(27)，146(16)，145(13)，141(12)，139(10)，136(22)，134 (11)，133(41)，122(16)，121(31)，115(30)，91(18)，77(15)，65(11)，63(10)，44(10)化合物116.(Rt＝9.50min)，m/z(rel.int.)269(M+，41)，268(32)，254(8)，253(21)，252(100)，251(14)，238(23)，237(18)，221(10)，209(9)，178(8)，165(19)，162(22)，160(19)，152(18)，147(11)，146(8)，145(18)，139(9)，130(11)，115(10)化合物117.(Rt＝7.64min)，m/z(rel.int.)212(M+，13)，183(16)，182(100)，180(7)，167(7)，152(3)，104(27)，91(7)，78(4)，77(41)，51(13)化合物118.(Rt＝7.46min)，m/2(rel.int.)245(M+，4)，153(8)，152(43)，150(9)，135(6)，133(10)，124(5)，123(36)，122(38)，121(17)，109(16)，101(14)，96(24)，95(16)，94(100)，93(7)，83(7)，77(21)，75(11)，66(15)，65(30)，63(10)，51(14)，50(6)化合物119.(Rt＝7.39min)，m/z(rel.int.)263(M+，7)，171(14)，170(14)，152(74)，151 (13)，150(20)，141(55)，135(10)，133(23)，123(20)，122(100)，121(49)，120(11)，113(9)，112(92)，111(9)，109(41)，107(12)，103(13)，102(11)，101(40)，97(9)，96(66)，95(51)，94(9)，84(28)，83(88)，82(8)，81(16)，77(14)，75(54)，74(10)，70(10)，69(10)，64(10)，63(23)，57(62)，56(13)，51(15)，50(12)，42(8)化合物120.(Rt＝8.48min)，m/z(rel.int.) 279(M+，4)，159(16)，157(49)，153(11)，152(100)，150(12)，133(11)，130(27)，128(73)，123(12)，122(57)，121(23)，111(10)，109(25)，101(23)，99(16)，96(26)，95(10)，83(9)，75(28)，72(10)，65(12)，64(11)，63(22)，51(9)，50(8)化合物121.(Rt＝8.30min)，m/z(rel.int.)275(M1，2)，152(15)，125(8)，124(100)，122(14)，121(7)，109(35)，96(7)，95(10)，81(14)，77(9)，65(7)，52(11)化合物122.(Rt＝7.39min)，m/z(rel.int.)263(M+，1)，170(12)，152(66)，151(10)，150(18)，141(68)，135(10)，133(19)，123(16)，122(76)，121(39)，112(100)，111(18)，109(36)，107(11)，103(11)，102(9)，101(33)，96(56)，95(32)，92(11)，83(96)，81(13)，77(13)，75(43)，64(25)，63(26)，57(61)，56(14)，51(14)，50(11)化合物123.(Rt＝5.88min)，m/z(rel.int.)275(M+，46)，276(9)，202(6)，201(30)，183(28)，133(8)，109(9)，101(9)，71(9)，59(12)，58(100)，44(8)，42(26)化合物124.(Rt＝7.05min)，m/z(rel.int.)229(M+，15)，213(15)，212(89)，211(13)，198(20)，197(100)，196(24)，186(12)，185(21)，184(29)，183(87)，179(7)，178(8)，177(13)，176(5)，171(7)，170(18)，169(4)，166(5)，165(20)，152(5)，133(7)，75(4)，63(4)，57(9)，56(4)化合物125.(Rt＝7.54min)，m/z(rel.int.)225(M+，57)，226(13)，209(13)，208(75)，193(13)，180(14)，179(21)，178(20)，165(22)，130(34)，117(59)，115(28)，105(18)，104(94)，103(45)，91(100)，78(30)，77(38)，65(36)，63(13)，51(20)，45(17)化合物126.(Rt＝7.81min)，m/z(rel.int.)261(M+，12)，244(31)，152(27)，151(17)，150(9)，136(11)，135(100)，133(21)，122(24)，115(9)，110(13)，109(90)，107(6)，96(7)，83(27)，56(7)化合物127.(Rt＝7.93min)，m/z(rel.int.)225(M+，23)，208(20)，207(6)，193(13)，181(7)，180(37)，179(100)，178(36)，167(9)，166(12)，165(36)，152(9)，134(30)，130(26)，129(9)，117(18)，115(22)，104(6)，91(38)，77(7)，65(7)化合物128.(Rt＝7.42min)，m/z(rel.int.)211(M+，83)，212(15)，194(36)，193(18)，182(62)，181(20)，180(17)，179(53)，178(60)，176(11)，167(57)，166(44)，165(100)，152(24)，120(39)，116(12)，115(28)，104(22)，103(15)，91(46)，89(16)，78(10)，77(20)，65(15)，63(12)，51(12)化合物129.(Rt＝7.39min)，m/2(rel.int.)229(M+，104)，230(19)，212(28)，211(14)，201(13)，200(85)，199(22)，198(14)，197(50)，196(58)，185(73)，184(45)，183(100)，179(43)，178(55)，177(17)，176(17)，170(18)，165(33)，152(12)，133(22)，120(57)，115(17)，109(44)，104(23)，103(17)，91(32)，89(16)，83(20)，78(12)，77(22)，63(16)，51(13)
化合物130.(Rt＝7.38min)，m/z(rel.int.)229(M+，133)，230(24)，212(27)，211(14)，200(54)，199(17)，198(16)，197(53)，196(64)，185(49)，184(43)，183(100)，179(28)，178(29)，177(14)，170(19)，165(26)，133(22)，120(35)，115(19)，109(32)，104(17)，103(18)，91(38)，89(17)，83(18)，77(24)，63(16)化合物131.(Rt＝7.40min)，m/z(rel.int.)229(M+，146)，230(26)，212(48)，211(23)，200(51)，199(17)，198(16)，197(61)，196(70)，185(50)，184(43)，183(100)，179(28)，178(28)，170(20)，165(23)，133(21)，120(35)，115(20)，109(59)，104(25)，103(17)，91(27)，89(17)，83(22)，77(22)化合物132.(Rt＝7.03min)，m/z(rel.int.)0(M+，.0)，185(14)，184(100)，183(23)，181(17)，165(18)，155(12)，153(14)，152(12)，120(85)，119(67)，115(10)，106(16)，91(19)，89(14)，78(12)，77(25)，51(16)化合物133.(Rt＝7.09min)，m/z(rel.int.)211(M+，13)，195(16)，194(100)，181(27)，180(70)，179(31)，178(28)，166(25)，165(40)，152(9)，120(14)，119(14)，118(12)，115(10)，104(26)，103(53)，102(12)，91(62)，89(10)，78(13)，77(42)，65(17)，51(13)化合物134.(Rt＝7.45min)，m/z(rel.int.) 211(M-，14)，183(15)，182(100)，181(14)，179(13)，178(18)，167(27)，166(18)，165(46)，152(10)，115(8)，104(8)，103(6)，92(29)，89(7)，78(5)，77(7)，65(7)化合物135.(Rt＝8.60min)，m/z(rel.int.)273(M+，34)，257(14)，256(76)，231(16)，230(100)，228(18)，227(57)，213(14)，211(37)，202(30)，201(40)，199(26)，184(13)，183(50)，181(12)，171(17)，170(20)，152(15)，150(19)，134(15)，133(31)，122(14)，121(29)，109(16)，107(13)，106(17)，91(12)，65(12)化合物136.(Rt＝9.26min)，m/z(rel.int.)275(M+，44)，277(15)，260(28)，259(19)，258(81)，257(13)，243(15)，234(33)，233(19)，232(100)，231(13)，229(15)，227(42)，224(15)，223(86)，208(13)，197(45)，196(26)，155(13)，182(14)，181(33)，179(11)，178(18)，166(22)，165(60)，164(12)，163(10)，153(32)，152(55)，151(18)，149(10)，139(11)，137(17)，136(19)，121(13)，115(25)，102(11)，91(16)，77(17)
化合物137.(Rt＝7.42min)，m/z(rel.int.)245(M+，1)，153(8)，152(7)，141(64)，135(10)，134(100)，132(11)，117(6)，115(12)，112(56)，105(15)，104 (55)，103(32)，95(8)，91(16)，84(8)，83(15)，78(24)，77(24)，75(9)，65(6)，63(8)，57(10)，51(9)化合物138.(Rt＝9.24min)，m/z(rel.int.)289(M+，77)，290(16)，230(20)，229 (21)，215(15)，203(22)，201(32)，183(36)，134(10)，133(13)，124(10)，121(9)，109(10)，101(10)，73(100)，43(23)化合物139.(Rt＝7.25min)，m/z(rel.int.)245(M+，92)，246(15)，244(67)，229(16)，228(63)，227(46)，225(10)，224(15)，214(13)，201(39)，183(13)，151(13)，150(100)，149(14)，148(58)，135(22)，133(54)，124(14)，122(12)，109(18)，101(15)，75(13)化合物140a.(Rt＝8.64min)，m/z(rel.int.)271(M+，72)，272(14)，270(37)，255(21)，254(100)，242(19)，227(14)，226(63)，225(50)，199(19)，197(30)，196(25)，183(32)，176(27)，170(20)，150(44)，148(34)，146(14)，133(32)，131(14)，121(11)化合物140b.(Rt＝8.68min)，m/z(rel.int.)271(M+，57)，272(10)，270(33)，255(20)，254(100)，242(15)，227(12)，226(54)，225(40)，209(8)，199(14)，197(22)，196(19)，183(25)，176(21)，170(16)，150(33)，148(22)，146(9)，133(20)，131(10)化合物141.(Rt＝8.44min)，m/z(rel.int.)257(M+，48)，258(8)，256(36)，241(21)，240(100)，239(19)，226(22)，225(20)，209(11)，197(14)，196(18)，183(25)，170(16)，162(19)，160(10)，150(28)，148(26)，147(9)，146(8)，145(13)，133(20)，130(8)，121(10)化合物142.(Rt＝8.47min)，m/z(rel.int.)273(M+，14)，217(5)，216(31)，215(5)，183(8)，170(4)，150(5)，121(4)，58(5)，45(5)，44(100)化合物143.(Rt＝9.39min)，m/z(rel.int.)273(M+，47)，275(16)，274(19)，272(36)，258(39)，257(26)，256(100)，255 (17)，242(25)，241(15)，221(23)，178(25)，177(11)，176(14)，168(14)，167(11)，166(54)，165(34)，164(34)，163(16)，162(45)，160(19)，152(28)，151(22)，149(19)，147(18)，145(24)，139(11)，136(15)，131(15)，130(35)，121(15)，115(14)，111(11)，103(13)，102(19)，89(11)，77(16)，75(14)，63(16)，51(12)化合物148.(Rt＝8.43min)，m/z(rel.int.)261(M+，3)，170(14)，169(5)，168(44)，153(4)，151(4)，140(6)，139(4)，138(15)，132(6)，125(7)，123(40)，115(6)，103(24)，102(8)，101(5)，95(7)，94(100)，89(5)，77(22)，75(6)，66(8)，65(16)，63(7)，51(10)，50(4).
化合物149.(Rt＝9.28min)，m/z(rel.int.)295(M+，4)，170(32)，169(12)，168(100)，166(8)，159(22)，157(66)，152(11)，140(16)，139(11)，138(41)，132(11)，130(32)，129(8)，128(82)，127(10)，125(16)，115(12)，111(15)，103(55)，102(18)，101(15)，99(19)，89(10)，77(26)，76(8)，75(27)，73(11)，65(11)，64(10)，63(22)，51(11).
化合物150.(Rt＝8.32min)，m/z(rel.int.)279(M+，4)，171(9)，170(37)，169(13)，168(100)，166(8)，142(8)，141(88)，140(19)，139(12)，138(42)，132(12)，130(7)，125(16)，115(12)，113(10)，112(89)，111(11)，104(8)，103(60)，102(19)，101(12)，95(14)，89(11)，84(11)，83(24)，77(29)，76(6)，75(24)，63(13)，57(17)，51(11).
實施例30合成芳基烷基胺的生物學性質檢驗如實施例28和實施例29所述合成的化合物在所述實施例中的詳細的各種生物學性質。
表1
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。(括號中的#表示試驗次數)。
bTFA鹽。
c洗滌結合在大鼠皮質/海馬中的[3H]MK-801的膜制劑的抑制作用(見實施例4)。
dIC50研究未完成。在所述濃度下抑制率％。
比較在RCGC測試中的IC50值與在[3H]MK-801結合測試中的IC50值的結果(表1)表明本發明的芳基烷基胺通過不同于結合所述MK-801結合部位的機理抑制NMDA受體活性；抑制NMDA受體功能的化合物的濃度低于在[3H]MK-801標記部位的競爭濃度幾個數量級。這類化合物以高于在所述大鼠小腦粒細胞測試中拮抗NMDA受體介導功能的濃度約1-400倍的濃度與[3H]MK-801標記部位結合。
公開的部分所述簡化的芳基烷基胺具有類似于其它被用作如抗膽堿能藥、抗震顫麻痹藥、抗組胺藥、抗抑郁藥、鈣通道阻滯劑、動脈血管舒張藥、阿片類似物和抗心率失常藥的部分結構特征。然而，當就NMDA受體拮抗劑效能對這類化合物中的一些進行評價時(實施例1)，如從表2中所見，沒有一個檢驗的化合物(除(R)-和(S)-苯乙二苯丙胺和愈苯丙胺之外)具有的IC50值低于1μM。這些數據歸納于表2中。
表2
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
b表4中的化合物2在Marcusson等的Inhibition of[3H]paroxetinebinding bv various serotonin uptake inhibitiorsstructure-activityrilationships.(Europ.J.Pharnacol.215191-198，1992)一文中被介紹。
c化合物17在Jakobsen等的Aryloxy-phenylpropylamines and theircalcium overload blocking compositions and methods of use.(美國專利第5310756，1994年5月10日)一文中被介紹。
d化合物25在Jakobsen等的Aryloxy-phenylpropylamines and theircalcium overload blocking compositions and methods of use.(美國專利第5310756，1994年5月10日)一文中被介紹。
使用化合物19作為先導結構開始結構-活性關系的研究。側鏈的檢驗顯示丙基側鏈對于NMDA受體拮抗劑效能是最佳的(表3)。使用化合物20作為先導結構驗證了這一發現(表3)。
表3
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
進一步的SAR研究驗證苯環取代的最佳形式。初步的研究顯示在間位上的鹵素(氟或氯)取代對于NMDA受體拮抗劑效能來說是最佳的取代位置(表4)。增加氟取代基的數目導致效能的表觀降低(表4)。
表4
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
用甲基、甲氧基或羥基替換一個苯環上的氟取代基之一導致體外NMDA受體拮抗劑效能上無變化或降低。其鄰位是所述甲基、甲氧基或羥基的最佳位置，對于該取代的效能排序為甲基＞甲氧基＞羥基(表5)。也在表5中介紹的是具有在其苯環上帶其它甲基或甲氧基取代的3，3-雙(3-氟苯基)部分的化合物(常導致NMDA受體拮抗劑效能的增加)。表5也介紹了具有代替3，3-雙(3-氟苯基)部分的3，3-雙(2-甲基苯基)或3，3-雙(2-甲氧苯基)部分的化合物；盡管注意到在效能方面的降低，這些取代均可接受。
表5
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
以下系列的SAR試驗研究了烷基側鏈取代(支鏈形式)對于體外NMDA受體拮抗劑效能的影響。在所述丙基側鏈的α或β位加入甲基分別導致效能上降低或無變化(表6)。
表6
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
以下系列SAR試驗研究在所述丙基鏈中加入雙鍵對于體外NMDA受體拮抗劑效能的影響(表7)。如同在表7中所見，加入雙鍵以一致的方式降低效能。
表7
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
以下系列SAR試驗研究將所述丙胺鏈加入環狀結構中對于體外NMDA受體拮抗劑效能的影響(表8)。
表8
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
以下系列SAR試驗研究在所述氮原子上的簡單烷基取代對于體外NMDA受體拮抗劑效能的影響(表9)。
表9
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
選擇某些簡化的芳基烷基胺化合物用于評價在一系列神經遞質受體結合測試中的活性，和抑制L-型鈣通道和延遲矯正器(rectifier)鉀通道的活性。所述化合物在下列測試中為非活性的(在濃度高達10μM，抑制率低于50％)非選擇性α2腎上腺素能受體(結合在大鼠皮質中的[3H]RX 821002)、H1組胺受體(結合在牛小腦中的[3H]吡拉明)、非選擇性∑受體(結合在豚鼠腦中的[3H]DTG)、非選擇性阿片受體(結合在大鼠前腦的[3H]納洛酮)、單胺氧化酶(MAO)活性，包括MAO-A(在大鼠肝線粒體中的[14C]5-羥色胺代謝)和MAO-B(在大鼠肝線粒體中的[14C]苯基乙胺代謝)。
如同在表10中所見，在下列測試中，幾種化合物在濃度低于10μM下具有活性L-型鈣通道、延遲矯正器鉀通道、中樞毒蕈膽堿能受體結合和單胺(多巴胺、去甲腎上腺素和5-羥色胺)攝入結合測試。其對于所述簡化的芳基烷基胺的化學結構而言，在中樞毒蕈膽堿能受體和單胺攝入結合測試中所顯示的活性意料之中的(參照上表2)。然而，除了化合物19在所述5-羥色胺攝入結合測試中的活性以外，化合物34在多巴胺攝入結合測試中顯示活性，化合物50在5-羥色胺攝入結合測試顯示活性，化合物63和64在多巴胺攝入結合測試中顯示活性，及化合物60在多巴胺和5-羥色胺攝入結合測試中顯示活性，所述簡化的芳基烷基胺化合物對于NMDA受體最為有效。
表10
a對于NMDA/甘氨酸誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用(見實施例1)。
b對于KCl去極化誘導的在培養的大鼠小腦粒細胞(RCGC’s)中細胞內鈣增加的抑制作用；估計的IC50值以μM為單位。
c對于在培養的N1E-115成神經細胞瘤細胞中延遲矯正器鉀通道的抑制作用；估計的IC50值以μM為單位。
d對于[3H]二苯乙醇酸奎寧環酯(QNB)與大鼠皮質膜結合的抑制作用，以μM為單位的所示濃度表示的百分抑制率。
e對于[3H]WIN-35428與豚鼠紋狀體膜的結合的抑制作用(多巴胺攝入結合測試)，對于[3H]去甲丙咪嗪與大鼠皮質膜結合的抑制作用(去甲腎上腺素攝入結合測試)或對于[3H]氰酞氟苯胺與大鼠前腦膜結合的抑制作用(5-羥色胺攝入結合測試)；百分抑制率以μM為單位的所示濃度表示或以IC50(如能得到)表示。
f多巴胺攝入結合測試。
g去甲腎上腺素攝入測試。
h5-羥色胺攝入結合測試。
本發明的芳基烷基胺化合物的有利的性質可以通過如下事實說明，即抑制NMDA受體介導的濃度突觸傳導不抑制LTP。此外，盡管化合物例如化合物9和11在大鼠全身給藥后，產生低血壓反應，由這些化合物產生的低血壓作用相對短暫(約30分鐘)。此外，化合物12和14在劑量分別高達37.3μM/kg i.v.和15μM/kg i.v.時，沒有心血管作用。
表11
a抑制NMDA受體介導的突觸傳導的濃度(見實施例5)。b不阻滯LTP導入的濃度(見實施例19)。c給予大鼠化合物產生的系統性血壓下降(見實施例22)。
制劑和給藥如本說明書所述，本發明的有用的化合物及其藥學上可接受的鹽可以用于治療神經性疾病。盡管這些化合物一般用于人的疾病，然而它們也可以用來治療其它脊椎動物例如其它靈長類動物、農畜例如豬、牛和家禽及用來從事體育活動的動物和寵物例如馬、狗和貓。
在治療和/或診斷的用途中，可以將本發明化合物配制成各種給藥形式包括全身性和局部性給藥。技術和制劑可以在Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.，Easton PA)中找到。
藥學上可接受的鹽為本領域普通技術人員所熟知的鹽，可以包括(但不限于)如乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯磺酸鹽(besylate)、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒食酸氫鹽、依地酸鈣、對磺酸樟腦、碳酸鹽、檸檬酸鹽、依地酸鹽、乙二磺酸鹽、丙酸酯十二烷硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡萄糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰阿散酸鹽、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、hydrabamine、氫溴化物、氫氯化物、羥基萘酸鹽、碘化物、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、mucate、萘磺酸鹽、硝酸鹽、對-4，4’-亞甲基-雙(3-羥基-2-萘酸鹽)(embonate)、泛酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽(disphosphate)、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒食酸鹽、或teoclate。其它藥學上可接受的鹽可以見例如Remington’s Pharmaciutical Sciences[MackPublishing Co.，Easton，PA(18th ed，1990)]。
優選的藥學上可接受的鹽包括例如乙酸鹽、苯甲酸鹽、溴化物、碳酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、氫溴化物、氫氯化物、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、萘磺酸鹽、對-4，4’-亞甲基-雙(3-羥基-2-萘酸鹽)(embonate)、磷酸鹽、水楊酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽或酒食酸鹽。
本發明的有用的化合物也可以是藥學上可接受的復合物形式。藥學上可接受的復合物為本領域的普通技術人員所熟知，包括(但不限于)8-chlorotheophyllinate(teoclate)。
準確的制劑、給藥途徑和劑量可以由每個醫生根據病情選擇(例如見Fingl et al.，in The Pharmacological Basis of Theraputics，1975，Ch.lp.1)。
應該注意，臨床醫生應了解由于毒性或器官機能障礙如何和何時終止、中斷或調整給藥。相反，如果臨床反應達不到要求(毒性除外)，臨床醫生也懂得如何調整治療到更高的水平。在控制病情當中的給藥劑量的掌握隨著治療疾病的嚴重性和給藥途徑而變化。所述病情的嚴重性例如可以部分通過標準的診斷評價方法來評價。此外，劑量及或許給藥次數也將根據每個患者的年齡、體重和反應而變化。以上所討論的可比方案也可以用于獸醫學中。
根據治療的具體病情，該藥物可以配制成液體或固體劑型，全身或局部給藥。該藥物可以為本領域技術熟練人員所熟知的如定時或緩釋形式給藥。制劑和給藥技術可以見Remington’s PharmaciuticalSciences[Mack Publishing Co.，Easton，PA]。適合的給藥途徑可以包括口腔、頰、舌下、直腸、透皮、鞘、透粘膜、鼻或腸給藥；胃腸外給藥包括肌內、皮下、髓內注射以及鞘內、直接心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內或眼內注射，僅列出一部分。
就注射而言，本發明的藥物可以配制成水溶液，優選在生理上相容的緩沖液中，例如Hank’s溶液、Ringer’s溶液或生理鹽水緩沖液。就所述透粘膜給藥而言，在制劑中使用適合透過屏障的滲透劑。該滲透劑為本領域所周知的。
在本發明范圍內，使用藥學上可接受的載體以便將在此所公開的作為實施本發明的化合物配制成適合全身給藥的劑型。通過合適地選擇載體和適當的制備工藝，可以將本發明的組合物尤其配制成溶液的組合物通過胃腸外例如通過靜脈內注射給藥。使用在本領域內熟知的藥學上可接受的載體可以容易地將所述化合物配制成適合口服給藥的劑型。這類載體使得本發明化合物可以配制成如片劑、丸劑、膠囊、液體劑、凝膠、糖漿、淤漿、懸浮液等，供患者口服用藥。
可以使用為本領域內普通技術人員所熟知的技術將所要用的藥物細胞內給藥。例如，可以將所述藥物包囊成為脂質體，然后如同上述給藥。脂質體為具有含水內部成分的球形的脂質雙分子層。在脂質體形成的同時，在水溶液中的所有分子均混入該含水內部成分中。使得脂質體的內容物免受外部微環境的干擾，并且因為脂質體與細胞膜融合，使得脂質體的內容物充分進入胞質內。此外，由于其疏水性，小的有機分子可以直接細胞內給藥。
適合用在本發明中的藥用組合物包括其中含有用于達到治療目的有效量的活性成分的組合物。有效劑量的確定在本領域技術熟練人員的能力范圍內(尤其在參照本說明書提供的內容后)。
除了所述活性成分以外，這些藥用組合物可以含有適合的藥學上可接受的載體，包括賦形劑和輔助劑，它們有助于加工所述活性化合物成為可以在藥學上使用的制劑。配制成的供口服的制劑可以是片劑、膠囊或糖衣錠劑形式。
本發明的藥用組合物可以按照其本身已知的方法例如通過常規混合、溶解、制粒、制糖衣錠劑、研磨、乳化、包囊、包合(entrapping)或凍干加工而成。
用于胃腸外給藥的藥用制劑包括以水溶性形式的活性成分的水溶液。此外，所述活性成分懸浮液可以制成合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載體包括脂肪油例如芝麻油或合成脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯或脂質體。含水的注射懸浮液可以含有增加所述懸浮液粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。所述懸浮液也可選包括合適的穩定劑或增加所述化合物的溶解度的試劑，以便使得所述制劑具有高的濃度。
通過將所述活性化合物與固體賦形劑混合，可選將所形成的混合物研磨及如需要在加入合適的輔助劑后，加工成顆粒混合物，以便得到片劑或包糖衣錠劑的素片來制備供口服的藥用制劑。合適的賦形劑尤其為填料例如糖包括乳糖、蔗糖、甘露糖或山梨醇；纖維素制劑例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、西黃耆膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉(CMC)和/或聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或海藻酸或其鹽例如海藻酸鈉。
提供包糖衣錠劑素片合適的包衣。為此目的，使用濃的糖溶液，它可選含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、carbopol凝膠、聚乙二醇(PEG)和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。可以將染料或顏料加入所述片劑或錠劑包衣中以便鑒別或表示活性化合物劑量的不同組合物。
可以口服使用的藥用制劑包括由明膠制備的裝填式(push-fit)膠囊以及由明膠和增塑劑例如甘油或山梨醇制備的密封軟膠囊。所述裝填式膠囊可以含有所述活性成分與填料例如乳糖、粘合劑例如淀粉和/或潤滑劑例如滑石粉或硬脂酸鎂和可選穩定劑的混合物。在軟膠囊中，可以將所述活性化合物溶解或懸浮在合適的液體例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇(PEGs)中。此外，可以加入穩定劑。
其它的實施例在下列權利要求書的范圍內。
權利要求
1.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予式I的化合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中所述化合物在NMDA受體上顯示活性
其中R1和R5獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、烷基和羥烷基；或R2和R6一起為亞氨基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；n為0-6的整數，然而只有1n可以是0；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基和環烷基；X獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；m獨立為0-5的整數；Y為-NR3R3，除非當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-時，則Y是氫。
2.權利要求1的方法，其中Y選自-NH2和-NH-甲基；R4為噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基或苯硫基，每一個可選被(X)m取代；(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；和R1、R2、R5和R6是氫；或R2是甲基，及R1、R5和R6是氫；或R1是甲基，及R2、R5和R6是氫。
3.權利要求1的方法，其中R1和R5獨立選自氫、低級烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、低級烷基和羥烷基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-，及Y是氫；R3獨立選自氫和低級烷基；n為1-6的整數；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、低級烷基和環烷基；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、低級烷基、羥基和-OCF3；m獨立為0-5的整數；Y為-NHR3，或當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y是氫；和其藥學上可接受的鹽和復合物，其條件為(a)當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則R5、R6和Y是氫；和(b)當R1和R2一起不為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y為-NHR3。
4.權利要求1的方法，其中所述化合物具有式III的結構
其中X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
5.權利要求1的方法，其中所述化合物具有式II的結構
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基和-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數；
6.權利要求1的方法，其中所述化合物具有式IV或V的結構
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
7.權利要求1的方法，其中所述化合物具有式VI或VII的結構
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
8.權利要求1的方法，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
9.權利要求1的方法，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
10.權利要求4的方法，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
11.權利要求4的方法，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
12.權利要求5的方法，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
13.權利要求5的方法，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
14.權利要求6的方法，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
15.權利要求6的方法，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
16.權利要求7的方法，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
17.權利要求7的方法，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
18.權利要求1的方法，其中所述神經性疾病包括突然發作、頭部創傷、脊髓損傷、脊髓局部缺血、局部缺血或缺氧導致的神經細胞損傷、癲癇、疼痛、焦慮、由于局部缺血或缺氧例如在心肺分流術下的心臟手術所經常造成的情況下的神經精神病學的或識別的缺陷、Alzheimer’s病、Huntington’s病、Parkinson’s病或肌萎縮性的側索硬化癥。
19.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤10μM的選自下列化合物組中的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、101、102、103、105、106、107、108、109、111、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、141、142、143、144、145、146、147、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
20.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM的選自下列化合物組中的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、70、75、76、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、100、101、102、103、105、106、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、136、137、138、139、142、144、145、146、147、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
21.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM的選自下列化合物組中的化合物19、20、21、22、23、24、25、27、28、30、31、32、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、91、93、94、95、96、97、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138、142、144、145、147、148、149和150及其藥學上可接受的鹽和復合物。
22.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予選自下列化合物組中的化合物20、24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150，及其藥學上可接受的鹽和復合物。
23.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物20及其藥學上可接受的鹽和復合物。
24.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物33及其藥學上可接受的鹽和復合物。
25.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物50及其藥學上可接受的鹽和復合物。
26.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物60及其藥學上可接受的鹽和復合物。
27.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物119及其藥學上可接受的鹽和復合物。
28.治療神經性疾病患者的方法，它包括給予化合物144及其藥學上可接受的鹽和復合物。
29.式I的化合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中所述化合物在NMDA受體上顯示活性
其中R1和R5獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、烷基和羥烷基；或R2和R6一起為亞氨基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；n為1-6的整數；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基和環烷基；X獨立選自氫、溴、氯、氟、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；m獨立為0-5的整數；Y為-NR3R3，除非當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-時，則Y是氫。
30.權利要求29的化合物，其中Y選自-NH2和-NH-甲基；R4為噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基或苯硫基，每一個可選被(X)m取代；(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；和R1、R2、R5和R6是氫；或R2是甲基，及R1、R5和R6是氫；或R1是甲基，及R2、R5和R6是氫。
31.權利要求29的化合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中R1和R5獨立選自氫、低級烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、低級烷基和羥烷基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-，及Y是氫；R3獨立選自氫和低級烷基；n為1-6的整數；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、低級烷基和環烷基；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、低級烷基、羥基和-OCF3；m獨立為0-5的整數；Y為-NHR3，或當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y是氫；其條件為(a)當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則R5、R6和Y是氫；和(b)當R1和R2一起不為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y為-NHR3。
32.權利要求29的化合物具有式III的結構
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
33.權利要求29的化合物具有式II的結構
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
34.權利要求29的化合物具有式IV或V的結構
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫和烷基；及m獨立為0-5的整數。
35.權利要求29的化合物具有式VI或VII的結構
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
36.權利要求29的化合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
37.權利要求29的化合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
38.權利要求32的化合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
39.權利要求32的化合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH和N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
40.權利要求33的化合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
41.權利要求33的化合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH和N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
42.權利要求34的化合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
43.權利要求34的化合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH和N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
44.權利要求35的化合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
45.權利要求35的化合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH和N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
46.具有在NMDA受體上的IC50≤10μM的化合物選自化合物21、22、23、24、25、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、78、79、82、83、84、88、89、90、92、93、94、95、96、98、101、102、103、105、107、108、109、111、115、116、118、119、120、121、122、124、125、126、127、129、130、131、134、135、136、137、138、139、141、142、143、144、145、148、149和150。
47.具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM的化合物選自化合物21、22、23、24、25、27、28、29、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、76、82、83、88、89、90、92、93、94、95、96、101、102、103、105、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、129、130、131、135、136、137、138、139、142、144、145、148、149和150。
48.具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM的化合物選自化合物21、22、23、24、25、27、28、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、93、94、95、96、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
49.選自下列化合物組的化合物24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
50.包括化合物20的化合物。
51包括化合物33的化合物。
52.包括化合物50的化合物。
53.包括化合物60的化合物。
54.包括化合物119的化合物。
55.包括化合物144的化合物。
56.藥用組合物，它包括式I化合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中所述化合物在NMDA受體上顯示活性
其中R1和R5獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、烷基和羥烷基；或R2和R6一起為亞氨基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；n為0-6的整數，然而只有1n可以是0；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基和環烷基；X獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；m獨立為0-5的整數；Y為-NR3R3，除非當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-時，則Y是氫。
57.權利要求56的藥用組合物，其中Y選自-NH2和-NH-甲基；R4為噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基或苯硫基，每一個可選被(X)m取代；(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；和R1、R2、R5和R6是氫；或R2是甲基，及R1、R5和R6是氫；或R1是甲基，及R2、R5和R6是氫。
58.權利要求56的藥用組合物和其藥學上可接受的鹽和復合物，其中R1和R5獨立選自氫、低級烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、低級烷基和羥烷基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-，及Y是氫；R3獨立選自氫和低級烷基；n為1-6的整數；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、低級烷基和環烷基；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、低級烷基、羥基、-OCF3；m獨立為0-5的整數；Y為-NHR3，或當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y是氫；其條件為(a)當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-時，則R5、R6和Y是氫；和(b)當R1和R2一起不為-(CH2)n-N(R3)-時，則Y為-NHR3。
59.權利要求56的藥用組合物，具有式III的結構
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基、(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
60.權利要求56的藥用組合物，具有式II的結構
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
61.權利要求56的組合物，具有式IV或V的結構
其中，，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
62.權利要求56的組合物，具有式VI或VII的結構
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
63.權利要求56的藥用組合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和笨氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
64.權利要求56的藥用組合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
65.權利要求59的藥用組合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
66.權利要求59的藥用組合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
67.權利要求60的藥用組合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
68.權利要求60的藥用組合物，其中；(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
69.權利要求61的藥用組合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
70.權利要求61的藥用組合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
71.權利要求62的組合物，其中(X)m獨立選自間位氟、間位氯、鄰位低級烷氧基、鄰位甲基、鄰位氟、鄰位氯、間位低級烷氧基、間位甲基、鄰位羥基和間位羥基；NR3選自NH、N-甲基和N-乙基；NR3R3選自NH2、NH-甲基和NH-乙基；每個R1獨立選自氫和甲基；每個R2獨立選自氫和甲基；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
72.權利要求62的藥用組合物，其中(X)m為間位氟；NR3選自NH、N-甲基；NR3R3選自NH2和NH-甲基；每個R1和R2為氫；及R4選自苯基、芐基和苯氧基，其中每一個可選被(X)m取代。
73.藥用組合物包括具有在NMDA受體上的IC50≤10μM的選自下列化合物組中的化合物20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、75、76、77、78、79、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、100、101、102、103、105、106、107、108、109、111、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、141、142、143、144、145、146、148、149和150。
74.藥用組合物包括具有在NMDA受體上的IC50≤2.5μM的選自下列化合物組中的化合物20、21、22、23、24、25、27、28、29、30、31、32、33、34、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、70、75、76、81、82、83、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、100、101、102、103、105、106、108、109、111、115、118、119、120、121、122、125、126、127、128、129、130、131、132、133、135、136、137、138、139、142、144、145、146、148、149和150。
75.藥用組合物包括具有在NMDA受體上的IC50≤0.5μM的選自下列化合物組中的化合物20、21、22、23、24、25、27、28、30、31、32、33、38、39、43、44、46、47、49、50、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、69、82、83、89、90、91、93、94、95、96、97、103、111、118、119、120、122、126、135、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
76.藥用組合物包括選自下列化合物組中的化合物20、24、25、33、50、60、66、69、103、111、118、119、120、122、136、137、138、142、144、145、148、149和150。
77.包括化合物20的藥用組合物。
78.包括化合物33的藥用組合物。
79.包括化合物50的藥用組合物。
80.包括化合物60的藥用組合物。
81.包括化合物119的藥用組合物。
82.包括化合物144的藥用組合物。
83.用于制備治療劑的方法，它包括通過確定所述治療劑是否在受體控制的鈣通道上具有活性篩選所述治療劑，并以足夠提供治療有效量給患者的量合成該治療劑的步驟。
84.權利要求83的方法，其中所述受體控制的鈣通道為NMDA受體。
85.權利要求84的方法，其中所述治療劑包括式I化合物
其中R1和R5獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2和R6獨立選自氫、烷基和羥烷基；或R2和R6一起為亞氨基；或R1和R2一起為-(CH2)n-或-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；n為0-6的整數，然而只有1n可以是0；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、氫、烷基和環烷基；X獨立選自苯基、芐基和苯氧基(每一個可選被(X)m取代)、氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；m獨立為0-5的整數；和Y為-NR3R3，除非當R1和R2一起為-(CH2)n-N(R3)-(CH2)n-時，則Y是氫。
86.權利要求84的方法，其中所述的治療劑包括式II化合物
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基和-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
87.權利要求84的方法，其中所述治療劑包括式III化合物
其中，X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R1獨立選自氫、烷基、羥烷基、羥基、烷氧基和酰氧基；R2獨立選自氫、烷基和羥烷基或兩個R2一起為亞氨基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
88.權利要求84的方法，其中所述治療劑包括式IV或V化合物
其中，n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；及m獨立為0-5的整數。
89.權利要求84的方法，其中所述治療劑包括式VI或VII化合物
其中n是1-6的整數；X獨立選自氫、溴、氯、氟、碘、-CF3、烷基、羥基、-OCF3、烷氧基和酰氧基；R3獨立選自氫、烷基、2-羥乙基和烷基苯基；R4選自噻吩基、吡啶基、苯基、芐基、苯氧基和苯硫基(每一個可選被(X)m取代)、烷基和環烷基；及m獨立為0-5的整數。
90.權利要求84的方法，其中所述治療劑選自包括化合物19-150的組中。
91.權利要求84的方法，其中提供所述治療劑給精神性疾病的患者。
92.權利要求84的方法還包括將藥學上可接受的載體加入該治療劑中的步驟。
93.權利要求83的方法，其中所述篩選包括鑒別在所述芳基烷基胺化合物1、化合物2和化合物3之一結合部位上與所述受體控制鈣通道結合的化合物的步驟。
全文摘要
用于治療患有突然發作、頭部創傷、脊髓損傷、脊髓局部缺血、局部缺血或缺氧導致的神經細胞損傷、癲癇、焦慮、由于局部缺血或缺氧例如在心肺分流術下的心臟手術所經常造成的情況下的神經精神病學的或識別的缺陷或神經變性的疾病例如Alzheimer’s病、Huntington’s病、Parkinson’s病或肌萎縮性的側索硬化癥(ALS)的患者的方法和組合物。
文檔編號A61K31/295GK1192679SQ96196042
公開日1998年9月9日 申請日期1996年6月7日 優先權日1995年6月7日
發明者A·L·慕勒爾, S·T·莫伊, M·F·巴蘭林, E·G·德爾馬, B·C·范瓦格仁, L·D·阿爾特曼, R·M·巴爾莫雷, D·L·史密斯 申請人:Nps藥物有限公司