專利名稱：抑制黑素瘤的方法
背景技術：
黑素瘤是一種主要位于皮膚表層的黑素細胞惡性瘤。黑素瘤主要發生在成人身上，一般由良性帶顏色的痣惡化而成。任何面積增大，顏色變化或發癢等癥狀都預示著可能發生了惡性變化。黑素瘤引起的死亡一般約占所有癌癥死亡中的1％。除在婦女中的肺癌外，黑素瘤的發病速度較其它瘤快。
黑素瘤的最大危險是其病毒通過淋巴管和血液循環轉移到人體深層部位。人體的任何器官都可能被轉移上，主要是轉移到肺和肝上。盡管采用深切技術有時能令患者存活一段時間，但已轉移到深層部位的黑素瘤很難用一般的治療方法治愈。長期以來，黑素瘤病人成了探索新的化學療法或改進生物技術療法的臨床試驗者。
目前，經過近20年的試驗，Dacarbazine(DTIC)被FDA認證為治療黑素瘤的唯一制劑，組合使用化療制劑，療效并不比單獨使用Dacarbazine療效好。但只有15～25％的患者用Dacarbazine后有反應，且僅有5％的人治愈。因此有必要尋找更有效的治療方式及另外的黑素瘤抑制劑。
發明概述本發明提供了抑制黑素瘤的方法，該方法包括給病人單獨服用有效量的通式(I)的化合物，
或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。式(I)中R1和R2為獨立H，-CH3，
或
其中Ar為任選取代的苯基；R2選自吡咯烷、六亞甲基氨和哌啶子基。
發明詳述本發明涉及發現了有抑制黑素瘤作用的2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(苯并噻吩類)，其通式為(I)。
本發明提供了有效抑制黑素瘤的方法給病人單獨服用有效量的通式I的化合物，或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。
“抑制”一詞本意包含阻止、預防、限制、減慢、停止或逆轉等，本發明中其意既包含藥物治療，又包含適當的預防作用。
本發明中raloxifene是化合物I的鹽酸鹽，R1和R3均為H，R2為1-哌啶基，它是一個核調節分子。已證明raloxifene結合在雌激素受體上，其作用是抗雌激素，因為它能阻礙雌激素激活子宮，誘發乳腺癌。事實上，在某些細胞中raloxifene確實阻礙了雌激素發揮作用，但在其它細胞中，雌激素能激活的基因，它也能激活，顯示出與雌激素相同的藥學特性，如治療骨質疏松、高血脂等。因此，raloxifene既有抗雌激素的性質，又有主動劑-拮抗劑的性質。raloxifene表現出與雌激素不同的特性，現在被認為是raloxifene-雌激素受體絡合物激活和/或抑制的基因，與雌激素-雌激素受體激活和/或抑制的基因不同。所以，盡管raloxifene與雌激素利用和競爭相同的受體，但二者對基因控制的藥學結果卻是難以預測，彼此也不相同。
一般該化合物加入賦形劑、稀釋劑或載體，壓縮成片劑，或酏劑或配制成溶液，以便患者口服，或肌肉或靜脈注射。該化合物可穿透皮膚，因而可制成緩釋劑等形式。
合成本發明中的化合物可參閱下列美國專利，專利號為4133814，4418068，4380635。一般以具有一個6-羥基和一個2-(4-羥基苯基)的苯并[b]噻吩為原料，經保護性酰化，去保護得到通式1的化合物。上面提到的美國專利提供了合成這些化合物的實例。選擇性取代的苯基包括苯基和一重或雙重取代的苯基，取代基分別為C1-C6烷基，C1-C4烷氧基，羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基。
本發明方法中的化合物與大量的有機和無機酸及堿反應，形成適合藥用的酸和堿加成鹽，及生理上可用的鹽，它們常用在藥物化學中。典型使用的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、碘化氫、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等、所用有機酸有脂肪族單羧酸、二羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基烷酸和羥基鏈烷雙酸、芳香酸、脂肪族磺酸及芳香族磺酸。適合藥用的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、O-乙酰基苯甲酸鹽、2-萘苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、脲酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽，苯酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、四鄰苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水揚酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯代苯磺酸鹽、乙基磺酸鹽、2-羥乙基磺酸鹽、甲基磺酸鹽、1-萘磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。最好是用鹽酸鹽。
適合藥用的酸及鹽主要由通式I的化合物與等量或過量的酸反應而得。反應物一般置于共溶溶劑，如乙醚或苯中混合。約1小時至10天內產物鹽從溶液中沉淀出來，過濾分離之或用常規方法除去溶劑，將鹽分離出來。
合成鹽常用的堿有氫氧化銨、堿金屬及堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽及伯、仲、叔脂肪族胺類、脂肪族二胺類。主要用的堿有氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、乙二胺及環己胺。
適于藥用的鹽的溶解性比其母體化合物的溶解性好，因而更適合于配制成液體或乳劑。
配制藥方已有成熟的技術。例如化合物與普通的賦形劑、稀釋劑或載體可制成片劑、膠囊、懸浮液、粉末等。適合于這類制劑的賦形劑、稀釋劑及載體包括填料和增容劑，如淀粉、糖、甘露糖醇及硅衍生物；粘合劑如羧甲基纖維素及其它纖維素衍生物，如藻酸鹽、明膠及聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑如甘油；粉碎劑如碳酸鈣和碳酸氫鈉；溶解抑制劑如石蠟；加速吸收劑如季銨鹽化合物；表面活性劑如十六烷醇、硬脂酸甘油單酯；吸附載體如高嶺土和膨潤土；潤滑劑如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂和固態聚乙烯醇。
這些化合物也可配制成酏劑，或方便的口服液，或適于非腸道使用的溶液，如肌肉，皮下或靜脈途徑。另外，化合物也適合配成緩釋片劑等。配制的制劑能在一段時間內僅在或優先在腸道的特定部位釋放活性組分。包膜、外殼、保護基質可用聚合物材料或蠟做成。
本發明介紹了利用通式I的化合物抑制黑素瘤，抑制方式和特殊劑量由醫生根據病人病情的嚴重程度，服用方式和其它因素來決定。一般來說，適用而有效的日劑量約為0.1至1000毫克，常用量為50至200毫克。病人每天服用一至三次，若需要可增加次數，這樣可在一段時間內充分有效地抑制黑素瘤。本發明還包括通式I的化合物與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。這類抑制劑包括Cisplatin、Dacarbazine和亞硝基脲氮芥。
通式I的化合物常以酸加成鹽的形式服用，如同慣常服用帶堿性基團如哌啶環的藥。那樣口服也有好處。為此口服劑量如下制劑下列制劑中的“活性組分”指通式I的化合物。制劑1膠囊利用下面的制劑制成硬膠囊組分 量(毫克/囊)活性組分 0.1-1000淀粉NF 0-650淀粉流動性粉末 0-650硅酮流體350厘沲0-15將各組分混合，過45目美國篩，填充進硬膠囊。含raloxifene的制劑實例如下制劑2raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 1淀粉NF 112淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑3raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 5淀粉NF 108淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑4raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 10淀粉NF 103淀粉流動性粉末 225.3硅酮流體350厘沲 1.7制劑5raloxifene膠囊組分量(毫克/囊)raloxifene 50淀粉NF 150淀粉流動性粉末 397硅酮流體350厘沲 3.0上面的制劑可根據合理的變化作調整。用下列組分配制的片劑制劑如下制劑6片劑組分 量(毫克/片)活性組分 0.1-1000纖維素微晶 0-650二氧化硅 0-650硬脂酸 0-15各組分混合后壓縮成片劑。另一含0.1至1000毫克活性組分的片劑制劑如下制劑7片劑組分 量(毫克/片)活性組分 0.1-1000淀粉 45纖維素微晶 35聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液) 4羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂 0.5滑石 1活性組分、淀粉和纖維素過45目美國篩，混合均勻。聚乙烯吡咯烷酮溶液與上述粉末混合，過14目美國篩，得到的粒劑在50～60℃烘干后過18目美國篩。羧甲基纖維素鈉、淀粉、硬脂酸鎂和滑石混合，過60目美國篩后與粒劑混合，在片劑機上被壓制成片劑。
每5毫升含0.1至1000毫克藥劑的懸浮液制劑如下制劑8懸浮液組分 量(毫克/5毫升)活性組分 0.1-1000毫克羧甲基纖維素鈉50毫克糖漿 1.25毫克苯甲酸溶液0.10毫升香料 適量顏料 適量純凈水5毫升活性組分過45目美國篩，與羧甲基纖維素鈉及糖漿混合成糊狀.苯甲酸溶液、香料及顏料用少許水稀釋，加入到上述糊狀物中，邊加邊攪加入足量的水定容。
試驗用細胞群繁殖法試驗通式I的化合物的活性。在試驗通式I的化合物短時間曝露在黑素瘤細胞上產生的作用時，將黑素瘤細胞的單細胞懸浮液，以每培養皿20000個細胞，培育到60毫米組織培養皿中(Corning，Corning NY)，允許它們接觸2至4小時。將化合物加入培養皿中，孵育1小時，然后用磷酸鹽緩沖鹽水(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)清洗三次，通過受胰蛋白作用收集細胞，再洗一次以除去藥物，重新懸浮到5毫升含0.3％瓊脂液的全培養液中(Difco，Detroit，MI)。懸浮液混合均勻，等分成三份，以每培養皿1毫升取樣到預制的培養皿中，底層有固化的1％瓊脂糖。室溫下固化，并在37℃、增濕5％二氧化碳的條件下孵育。5天以后對連續細胞線，或7至14天以后對初級細胞，計數出大于125微摩爾/升的細胞群。
在試驗通式I的化合物持續曝露在黑素瘤細胞上產生的作用時，以每毫升4000個細胞，將黑素瘤細胞懸浮于0.3％瓊脂液中(Difco，Detroit，MI)，從中取樣加入到含通式I的化合物和全培養液的試管里，如RPMI1640培養液(Irving Scientific，Santa Ana，CA)含10％胎牛血清(Hyclone，Logan，UT)、50微克/毫升慶大霉素(Gemini Bio-Products，Calabasas，CA)、2毫摩爾/升L-谷氨酰胺、10納摩爾/升氫化可的松、5微克/毫升胰島素、5微克/毫升轉鐵球蛋白、10納摩爾/升雌甾二醇和5納克/毫升硒(Sigma Chemical Co.，St.Louis，MO)，懸浮液混合均勻，等分成三份，以每培養皿1毫升取樣至預制的培養皿中，底層含固化的1％瓊脂糖。室溫下固化，在37℃、增濕5％二氧化碳的條件下孵育。5天以后對連續細胞線，或7至14天以后對初級細胞，計數出大于125微摩爾/升的細胞群。
上述試驗中至少有一個試驗表明化合物的活性可用于抑制黑素瘤。
權利要求
1.一種抑制黑素瘤的方法，包括給需要的病人單獨服用有效量的通式I的化合物，
或其藥用鹽或其溶劑化物，或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用，式(I)中R1和R3為獨立H，-CH3，
或
其中Ar為任選取代的苯基，R2選自吡咯烷、六亞甲基氨和哌啶子基。
2.權利要求1的方法，其中所說的化合物為其鹽酸鹽。
3.權利要求1的方法，其中所說的化合物是
或其鹽酸鹽。
4.權利要求1的方法，其中所說的化合物與一種或多種cisplatin、dacarbazine或亞硝基脲氮芥一起服用。
5.權利要求1的方法，其中所說的黑素瘤是轉移性的。
全文摘要
一種抑制黑素瘤的方法,包括給病人單獨服用有效量的通式(Ⅰ)的化合物,或單獨服用適合藥物的(Ⅰ)的鹽或其溶劑化合物,或與一種或多種黑素瘤抑制劑一起服用。(Ⅰ)中R
文檔編號A61K31/381GK1192141SQ96195876
公開日1998年9月2日 申請日期1996年6月6日 優先權日1995年6月6日
發明者R·A·斯維夫特 申請人:伊萊利利公司