專利名稱：：治療腺苷衰竭的方法
技術領域：
：本發明涉及通過服用亞葉酸或其藥用鹽治療腺苷衰竭(adenosinedepletion)的方法。本發明還涉通過服用脫氫表雄甾酮、其類似物或其藥用鹽治療哮喘的方法。腺苷是一種嘌呤，它對中間代謝有貢獻還參與各種哺乳動物組織生理活動的調節。腺苷參與許多局部調節機制，尤其是在中樞神經系統(CNS)突觸和外周神經系統中的神經效應器接點上。中樞神經系統中，腺苷抑制各種神經遞質的釋放，如乙酰膽堿、去甲腎上腺素、多巴胺、5-羥色胺、谷氨酸和GABA；抑制神經傳遞；降低神經元沖動導致脊柱痛覺缺失；還具有抗焦慮特性。見，A.Pelleg和R.Porter，藥物治療(Pharmacotherapy)10(2)，157(1990)；J.Daval等，生命科學(LifeSciences)491435(1991)。在心臟中，腺苷抑制起博點的活動，減慢AV傳導，具有抗心律不齊和致心律不齊的作用，調節自律控制，及激發前列腺素的合成和釋放。見，K.Mullane和M.William，腺苷和腺苷受體289頁(M.Willians編，Humana出版社，1990)。腺苷具有強血管擴張作用，能調節血管緊張性。見，A.Deuseen等，J.pflugersArch.406608(1986)。現今，腺苷在臨床上用于治療室性心動過速或其他心臟病。見，C.Chronister美國急診醫療雜志(AmericanJournalofCriticalCare)2(1)41-47(1993)。研究了一些腺苷類似物以用作抗驚厥、抗焦慮和神經保護藥物。見，M.Higgins等，藥學世界和科學(PharmacyWarld&Science)16(2)62-68(1994)。腺苷還被認為是支氣管哮喘癥狀的主要決定因子。它誘導支氣管收縮和氣道平滑肌收縮。見，J.Thorne和K.Broadley美國呼吸和急診醫學雜志(AmericanJournalofRespiratory&CriticalCareMedicine)149(2，pt.1)392-399(1994)；S.Ali等，藥劑和作用(Agents&Actions)37(3-4)165-167(1992)。腺苷在哮喘癥患者中引起支氣管收縮，而在非哮喘患者中則不然。見，Bjorck等，美國呼吸疾病綜述(AmericanReviewofRespiratoryDisease)145(5)1087-1091(1992)；S.Holgate等，紐約科學院年鑒(AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences)629227-236(1991)。從上易于看出(i)腺苷衰竭能導致許多有害病癥，而治療腺苷衰竭的方法可以是一種極其有用的治療方法；(ii)誘導腺苷衰竭的方法也可以用于治療諸如哮喘的病癥。因而，本發明的第一方面是在需要治療的主體中治療腺苷衰竭的方法。該方法包括給予所述主體治療腺苷衰竭有效量的亞葉酸或其藥用鹽。該方法適用于下列主體患有類固醇誘發的腺苷衰竭的主體，患有焦慮癥的主體，患有消耗性疾病的主體，或患有任何可歸因于腺苷衰竭的其他疾病的主體，或提高腺苷水平將對治療有利的情形。本發明的第二方面是亞葉酸或其藥用鹽在制備用于治療腺苷衰竭的藥物中的用途。本發明的第三方面是在需治療主體中治療哮喘的方法，包括給予主體治療哮喘有效量的脫氫表雄甾酮、其類似物或其藥用鹽。本發明的第四方面是脫氫表雄甾酮、其類似物或其藥用鹽在制備用于治療哮喘的藥物中的用途。亞葉酸是葉酸代謝的中間產物，由葉酸在體內轉化成的活性形式，抗壞血酸是這種轉化過程的必需因子。亞葉酸已用作葉酸拮抗劑(如氨甲蝶呤)的解毒藥，這些拮抗劑能阻斷葉酸向亞葉酸的轉化。另外亞葉酸已用作抗貧血劑(對抗葉酸缺乏)。見，默克索引(theMerckIndex)，專題No.4141(第11版，1989)。迄今還沒有人報道或暗示亞葉酸在患腺苷衰竭病人中的應用，或在提高腦或其他器官中腺苷水平的治療方法中的應用。本發明公開的腺苷衰竭治療方法可用于治療類固醇誘發的腺苷衰竭；刺激腺苷合成從而治療或控制焦慮癥(如治療經前綜合癥)；加快體重增長或治療消耗性疾病、或經給予亞葉酸治療其他腺苷相關疾病。因此，“腺苷衰竭”這一術語意在包含以下兩種情形即主體中腺苷水平比原腺苷水平低的情形；和腺苷水平與原始水平基本相同，但由于病人的其他條件或變化使得達到比原水平較高的腺苷水平將對治療有利的情形。本方法優選用于腺苷水平低于原始水平的病人中。本發明主要涉及人體的治療，但也可用于其他哺動物如狗和貓作為獸醫目的的治療。亞葉酸和其藥用鹽(以下有時稱為“活性化合物”)是已知的，可以按已知的方法步驟制備。見，默克索引，專題No.4141(第11版，1989)；美國專利No.2,741,608。藥用鹽應該同時是藥理上和藥物上可接受的。這種藥理上和藥物上可接受的鹽可以是亞葉酸羧基的堿金屬或堿土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。亞葉酸鈣鹽是優選的藥用鹽。優選以藥物組合物的形式給予主體活性化合物。用于本發明的藥物組合物包括那些適于吸入、口服、表皮使用(包括頰、舌下、皮膚和眼內)、非胃腸給藥(包括皮下、真皮內、肌肉內、靜脈內和關節內)和透皮給藥的那些。該組合物可以方便地呈劑量單位形式，可以按本領域熟知的任何方法制備。適于口服的組合物可以是分立的單位，如膠囊，扁囊劑、錠劑或片劑，每個單位含有預定量的活性化合物，呈粉末或顆粒、水性或非水性液體中的溶液或懸液、水包油或油包水乳液。這種組合物可用任何適宜的制藥方法制備，包括使活性化合物與適當載體結合的步驟。一般本發明的組合物是這樣制備的，將活性化合物與液體或研細的固體載體或兩者均勻地緊密地混合，然后需要時將形成的混合物成形。例如，將含有活性成分有或無一種或多種輔助成分的粉末或顆粒壓片或模制可制備片劑。呈自由流動形式，如粉末或顆粒的化合物選擇性地與粘合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、和/或表面活性劑/分散劑混合，在適當的機器中壓制可制得壓片。粉化的化合物用惰性粘合劑濕潤，在適當機器中模制可制得模制片劑。口服組合物可包含或不包含本領域已知的腸衣，后者防止該組合物在胃中崩解，而使得在小腸中釋放藥物。適于頰(舌下)給藥的組合物包括在調味基質(通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃嗜膠)中含活性化合物的錠劑；和在惰性基質如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠中含活性化合物的軟錠劑。適于胃腸外給藥的組合物包括活性化合物的滅菌水性或非水性注射液，該制劑優選與目的受體的血液等滲。這些制劑可以含有抗氧化劑、緩沖劑、制菌劑和使組合物與目的受體血液等滲的溶質。水性和非水性滅菌懸液可以含有懸浮劑和增稠劑。這些組合物可以存在于單位劑量或多劑量容器中，例如封口安瓿和小瓶中；也可以在冷凍干燥條件下保存，使用前只需加入無菌液態載體，例如鹽水或注射用水。當即注射的溶液和懸液可以從以上描述的各種無菌粉末、顆粒和片劑制得。適于表皮(優選皮膚)使用的組合物采取軟膏、霜劑、洗劑、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣溶膠或油劑形式。可以使用的載體包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇類、透皮增效劑，或其中兩種或多種的混合物。適于透皮給藥的組合物可采取獨立的補片形式，它適于長時間與受體表皮保持緊密接觸。適于透皮給藥的組合物還可以通過離子電滲法輸送(見，如《藥物研究》(PharmaceuticalResearch)3，318(1986))，一般采取活性化合物的緩沖(非必需)水溶液形式。劑量隨著主體的年齡、體重和狀況而變化。可以用低于最佳劑量的小劑量開始治療，然后加大劑量直至達到該條件下的最佳效果。一般，劑量可為1，5，10或20mg/kg體重，到100，200，500或1000mg/kg體重。目前，優選劑量為5到500mg/kg，更優選10-200mg/kg，最優選20-100mg/kg。一般，活性化合物優選以能產生有效結果而不引起不應有的傷害或有害副作用的濃度下給藥，可以按單一劑量單位給藥，或者需要時以一天內適當的次數給予適當的亞劑量單位。本發明還公開了一種治療哮喘(尤其是非類固醇依賴性哮喘)的方法，包括給予需要該治療的主體以抑制或控制哮喘有效量的脫氫表雄甾酮(DHEA)、其類似物或其藥用鹽。可用于實施該方法的DHEA和其類似物的例子由下式代表其中虛線代表雙鍵存在或不存在；R為氫或鹵原子；R1為氫或SO2OM，其中M為氫、M為鈉、M為硫苷脂基團M為磷脂基團其中R2和R3相同或不同，各自為1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或葡糖苷酸基團式I5-位的氫原子呈α或β構型或該化合物包括兩種構型的混合物。上述式(I)化合物的例子包括DHEA，其中R和R1各為氫，存在雙鍵；16-α-溴表雄甾酮，其中R為溴，R1為氫，雙鍵存在；16-α-氟表雄甾酮，其中R為氟，R1為氫，雙鍵存在；本膽烷醇酮，其中R和R1各為氫，雙鍵不存在；二氫表雄甾酮硫酸酯，其中R為氫，R1為SO2M，M為如上定義的硫苷脂基團，雙鍵不存在。式I化合物中，優選R為鹵原子(如溴、氯或氟)，R1為氫，雙鍵存在。更優選式I化合物為16-α-氟表雄甾酮。按照對本領域技術人員顯而易見的已知方法或其變異方法制備式I化合物。見，美國專利4,956,355，英國專利2,240,472，歐洲專利申請429,187，PCT專利申請91/04030；也見，M.Abou-Gharbia等，藥物科學雜志(J.Pharm.Sci)70，1154-1157(1981)，默克索引，專題No.7710(第11版，1989)。用于治療哮喘的化合物如上所述可以是化合物本身或呈藥用鹽形式(兩者都稱為“活性化合物”)，活性化合物鹽可以按上述方法系統給藥，或如下所述給予主體的肺中。一般，活性化合物的給藥劑量為1-3600mg/kg，更優選約5-1800mg/kg，最優選約20-100mg/kg。活性化合物可一天給藥一次或幾次。可用適當的方法將本發明活性化合物投藥至主體的肺中，但優選產生含可吸入顆粒的氣溶膠，該可吸收顆粒含活性化合物，主體吸入這種顆粒(即吸入給藥)。可吸收顆粒可以是液態或固態。實施本發明的含活性化合物顆粒應包括具有可吸入大小的顆粒，即，顆粒大小足夠小，當吸入時能通過口腔和喉進入支氣管和肺泡中。一般，約0.5-10μm大小(更優選小于約5μm大小)的顆粒是可吸入的。氣溶膠中的非可吸入顆粒將沉積在咽部并被吞咽，最好將氣溶膠中非可吸入顆粒的量減至最少。對于鼻內給藥，優選10-500μm的顆徑以保證在鼻腔中的保留。用于制備氣溶膠的活性化合物液態藥物組合物，通過將活性化合物與適當的載體如無菌無熱源水混合而制得。含可吸入的粉碎活性化合物干顆粒的固體組合物，通過將干燥活性化合物用研缽研磨制得，然后將此粉碎組合物通過400目的篩子以破壞或分出大的附聚物。含活性化合物的這種固體顆粒組合物可任選地含有助于形成氣溶膠的分散劑。適合的分散劑為乳糖，其可與活性化合物以適當比例混合(如1比1的重量比)。利用諸如噴霧器的任何適當方式可產生含活性化合物的液粒氣溶膠。見，如美國專利4,501,729。噴霧器是有市售的設備，它將活性成分的溶液或懸液轉變為治療用氣溶膠，這是通過在壓縮氣體(一般為空氣或氧氣)的加速下通過一窄的文丘里噴孔或借助于超聲震動實現的。適用于噴霧器的組合物是由液體載體中的活性成分組成的，其中活性成分最多可占組合物的40％w/w，但優選低于20％w/w，載體一般為水或稀醇水溶液，優選通過加入例如氯化鈉使其與體液等滲。可加可不加的添加劑包括防腐劑(如果組合物沒有無菌制備)如羥基苯甲酸甲酯，抗氧化劑，調味劑，揮發油，緩沖劑和表面活性劑。類似地，含活性化合物的固體顆粒氣溶膠可用任何固體顆粒藥物氣溶膠發生器制得。向主體投送固體顆粒藥物的氣溶膠發生器能產生可吸入性顆粒，以適于人體給藥的速度產生含預定劑量藥物的氣溶膠。這種氣溶膠發生器的例子包括計量吸入器和吹入器。在上述哮喘治療方法中，泛醌可與DHEA或其類似物聯合給藥。此處“聯合給藥”意指DHEA或DHEA類似物與泛醌(a)同時給藥(優選將兩種藥物配制在共同的藥物載體中)，或(b)在同一治療方案過程中的不同時間點分別給藥。在后一情形中，兩種化合物的給藥時間要足夠接近主體肺(和心臟)中泛醌-泛醌耗竭的時間，從而對抗給予DHEA或其類似物可能對肺(和心臟)功能造成的任何損害。此處“泛醌”指具有基于2，3-二甲氧基-5-甲基苯醌核的結構具有可變類貼酸鏈(含1-12個單不飽和反式類異戊二烯單元)的一類化合物。這種化合物在本領域中稱為“輔酶Qn”，其中n等于1-12。這些化合物可以是下式代表的化合物其中n＝1-10。在本發明的方法中，優選泛醌化合物是其中n＝6-10的上式化合物(即輔酶Q6-10)，最優選其中n＝10(即輔酶Q10)。當泛醌用藥用載體與DHEA、其類似物或其鹽分開配制時(例如，當DHEA、其類似物或其鹽投入主體肺中，而泛醌系統給藥)，可用如上所述的任何技術來配制泛醌。一般，泛醌的給藥量應該是在主體肺和心臟中抵消由DHEA、其類似物或其鹽引起的泛醌耗竭的有效量，該劑量隨主體狀況和給藥途徑而變化，優選泛醌給藥量為每天共約1-1200mg/kg體重，更優選約30-600mg/kg，最優選約50到150mg/kg。每天給藥一次或數次。現提供下列實施例以更全面地說明本發明；而不構成對本發明的限制。下列實施例中，DHEA指脫氫表雄甾酮，s表示秒，mg表示毫克，kg表示千克，KW表示千瓦，MHz表示兆赫，nmol表示納摩爾。實施例1和2亞葉酸和DHEA對體內腺苷水平的影響用管飼法每天一次給予年青成年雄性Fischer344大鼠(120克)羧甲基纖維素中的脫氫表雄甾酮(DHEA)(300mg/kg)或甲基睪酮(40mg/kg)共14天。每天腹膜內給予亞葉酸(50mg/kg)計14天。第15天，在腦顱部用微波脈沖(1.33kw，2450MHz，6.5s)處死動物，這樣就即刻將所有腦蛋白變性，防止腺苷進一步代謝。從動物中取出心臟，在死亡后10秒內于液氮中迅速冷凍。整體取出肝和肺，死亡后30秒內迅速冷凍。然后切下腦組織。提取組織腺苷，衍生化為1，N6-亞乙烯基腺苷，并按Clark和Dar的方法(神經科學方法雜志(J.ofNeuroscienceMethods)25243(1988))，用分光熒光法檢測用高效液相色譜法(HPLC)分析。這些實驗的結果列在表1中。結果用平均值±SEM表示，與對照組相比，χP＜0.05，與DHEA或甲基睪酮處理組相比，φP＜0.05。表1，DHEA、δ-1-甲基睪酮和亞葉酸對大鼠各組織中腺苷水平的影響。處理細胞內腺苷(nmol/mg蛋白)心臟肝肺腦對照10.6±0.6(n＝12)14.5±1.0(n＝12)3.1±0.2(n＝6)0.5±0.04(n＝12)DHEA(300mg/kg)6.7±0.5(n＝12)ψ16.4±1.4(n＝12)2.3±0.3(n＝6)ψ0.19±0.01(n＝12)ψ甲基睪酮(40mg/kg)8.3±1.0(n＝6)ψ16.5±0.9(n＝6)N.D.0.42±0.06(n＝6)甲基睪酮(120mg/kg)6.0±0.4(n＝6)ψ5.1±0.5(n＝6)ψN.D.0.32+0.03(n＝6)ψ亞葉酸(50mg/kg)12.4±2.1(n＝5)16.4±2.4(n＝5)N.D.0.72±0.09(n＝5)ψDHEA(300mg/kg)+亞葉酸(50mg/kg)11.1±0.6(n＝5)φ18.8±1.5(n＝5)φN.D.0.55±0.09(n＝5)φ甲基睪酮(120mg/kg)+亞葉酸(50mg/kg)9.1±0.4(n＝6)φN.D.N.D.0.60±0.06(n＝6)φ</table></tables>這些試驗的結果顯示用DHEA或甲基睪酮處理兩周的大鼠在多種器官中表現腺苷衰竭。這種衰竭在腦(用DHEA衰竭60％，用高劑量甲基睪酮衰竭34％)和心臟(用DHEA衰竭37％，用高劑量甲基睪酮衰竭22％)尤為顯著。同時給予亞葉酸則完全消除了類固醇介導的腺苷衰竭。單獨給予亞葉酸則使所有研究器官中腺苷水平提高。以上實施例用于說明本發明而非限制本發明。本發明由以下權利要求定義，這些權利要求的等價物包括在本發明中。權利要求1.一種治療腺苷衰竭的方法，包括給予需要這種治療的主體以治療所述腺苷衰竭有效量的亞葉酸或其藥用鹽。2.根據權利要求1的方法，其中所述主體患有類固醇誘發的腺苷衰竭。3.根據權利要求1的方法，其中所述主體患有焦慮癥，所述亞葉酸或其藥用鹽以治療焦慮癥有效的量給藥。4.根據權利要求1的方法，其中所述主體患有經前綜合癥，所述亞葉酸或其藥用鹽以治療經前綜合癥有效的量給藥。5.根據權利要求1的方法，其中所述主體患有消耗性疾病，所述亞葉酸或其藥用鹽以致使所述主體體重增長有效的量給藥。6.根據權利要求1的方法，其中所述給藥步驟是口服給藥。7.根據權利要求1的方法，其中所述給藥步驟是胃腸外的注射。8.根據權利要求1的方法，其中所述給藥步驟是皮下注射。9.根據權利要求1的方法，其中所述給藥步驟是透皮給藥。10.根據權利要求1的方法，其中所述給藥步驟是吸入給藥。11.一種治療哮喘的方法，包括給予需要這種治療的主體以治療哮喘有效量的式I化合物或其藥用鹽其中虛線代表雙鍵存在或不存在；R為氫或鹵原子；R1為氫或SO2OM，其中M為氫、M為鈉、M為硫苷脂基團M為磷脂基團其中R2和R3相同或不同，各自為1-14個碳原子的直鏈或支鏈烷基，或葡糖苷酸基團12.根據權利要求11的方法，其中R為鹵原子，R1為氫，存在雙鍵。13.根據權利要求11的方法，其中所述式I化合物選自脫氫表雄甾酮、16-α-溴表雄甾酮、16-α-氟表雄甾酮、本膽烷醇酮、脫氫表雄甾酮硫酸酯和其藥用鹽。14.根據權利要求11的方法，其中所述式I化合物是16-α-氟表甾酮或其藥用鹽。15.根據權利要求11的方法，其中所述給藥步驟是系統給藥。16.根據權利要求11的方法，其中所述給藥步驟吸入給藥。17.根據權利要求11的方法，其還包括聯合給予所述主體以抑制所述主體肺中泛醌耗竭有效量的泛醌。18.根據權利要求11的方法，其中所述哮喘是非類固醇依賴性哮喘。全文摘要公開了一種治療主體中腺苷衰竭的方法。該方法包括給予所述主體以治療腺苷衰竭有效量的亞葉酸或其藥用鹽。還公開了一種治療哮喘的方法,其包括給予所述主體以治療哮喘有效量的脫氫表雄甾酮、其類似物或其藥用鹽。文檔編號A61K31/12GK1175903SQ96192096公開日1998年3月11日申請日期1996年2月15日優先權日1995年2月24日發明者J·W·尼斯申請人:東卡羅來納大學