專利名稱：活疫苗的穩定劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于單價或多價活疫苗的穩定劑，還涉及含這些試劑的穩定的疫苗，以及用于制備所述疫苗的方法。
含活病毒，具體地說，減毒活病毒的疫苗對其制備和貯存條件非常敏感。在凍干步驟、貯存過程，以及培養后收集病毒的步驟中，損失了大部分病毒效價。由于病毒效價對于免疫效力的重要性，所以使用使病毒效價得到最大程度保護的穩定劑是必不可少的。穩定劑是可在疫苗制備的不同階段加入的化學的和/或生物的化合物，從而確保疫苗在使用時(有時可能在開始貯存之后數年)時有最大效力。
已經試驗了許多化合物對含減毒活病毒的不同疫苗的穩定能力。現有技術中已試驗的化合物(參見，例如US3783098、US3915794和EP028563)，第一種是SPGA，它主要含有牛或人血清白蛋白、或多或少水解的酪蛋白。或明膠，任選地是谷氨酸的堿金屬鹽、糖(葡萄糖、蔗糖或葡聚糖)、以及堿金屬的一金屬或二金屬磷酸鹽，或它們的一種混合物。EP065905描述了用于抗黃熱病疫苗的穩定化合物，所述化合物包括選自11種氨基酸中的一種或多種氨基酸、乳糖、山梨糖醇和磷酸鹽緩沖液(PBS)。
但是，所有這些組合物都有很大的缺陷。首先，它們含有具有潛在的生物學危險并且化學組成不確定的動物或人源的蛋白質或蛋白質水解產物(白蛋白等)。此外，本技術領域現有這些組合物未能使減毒活疫苗具有足夠的穩定性，這樣使貯存這樣一些疫苗的可能性受到限制，并且疫苗在貯存或運輸時，暴露于高溫下而變得很危險。因此，這些疫苗活性的損失會導致無效免疫接種，因而在實際感染時沒有保護作用。另外，當涉及穩定含不同病毒的多效價疫苗的不同效價時，已知組合物的效力是比較有限的。因此，四效價疫苗MMRV(麻疹/腮腺炎/風疹/水痘)是多效價疫苗的一個實例，但目前尚未有與四價相符的穩定劑。
本發明的穩定劑沒有上述缺陷。用于含一種或多種減毒活病毒的組合物，特別是疫苗的這些穩定劑含有選自下列的一種或多種組分氨基酸、二糖、多元醇和緩沖液，其條件是選自二糖的一種組分是蔗糖。在本發明的穩定劑中，選自二糖中的組分的比例可以是可以2至6％。有利地，選自二糖的一種或多種組分的比例可以是2.5％。
作為本發明穩定劑一種組分的多元醇，具體地說，包括山梨糖醇和甘露糖醇。本發明的穩定劑可以含有山梨糖醇和甘露糖醇。當本發明的穩定劑含有山梨糖醇時，山梨糖醇的比例優選地是2至6％。當本發明的穩定劑含有山梨糖醇時，山梨糖醇的比例有利地是3至5％。最佳地，山梨糖醇的比例可以是5％。當本發明的穩定劑含有甘露糖醇時，甘露糖醇的比例是1至2.5％。當本發明的穩定劑含有甘露糖醇時，甘露糖醇的比例優選地是1.5％。
作為本發明穩定劑組分之一的緩沖液，具體地說，可以包括磷酸鹽緩沖液和乙二胺四乙酸(EDTA)。優選地，本發明的穩定劑含有磷酸鹽緩沖液。本發明的穩定劑還可含有葡聚糖。當本發明的穩定劑含有葡聚糖時，葡聚糖的比例優選地是1至4％。當本發明的穩定劑含有葡聚糖時，葡聚糖的比例有利地是3％。
本發明的穩定劑還可含有脲、脲衍生物或其混合物。可以使用的脲衍生物的實例是烯丙基脲、乙酰胺、氨基甲酸甲酯或氨基甲酸丁酯。當本發明的穩定劑含有脲、脲衍生物或其混合物時，后者的比例是0.125-2％。當本發明的穩定劑含有脲、脲衍生物或其混合物時，后者的比例優選地是0.5％。
優選地，可根據待穩定的病毒顆粒調整本發明組合物的pH。將pH調到7是特別有利的。
可用本發明的穩定劑穩定許多組合物，特別是基本上含一種病毒株或種的單價疫苗，或含數種病毒株或種的多價疫苗。本發明還涉及用上述穩定劑穩定的組合物，特別是疫苗。
根據本發明穩定的這樣一些疫苗例如可含有皰疹病毒科的至少一種病毒。皰疹病毒科具體地說包括水痘病毒、巨細胞病毒和單純性皰疹病毒。與其它病毒相比，水痘病毒是特別脆弱并不耐熱的。因此，當涉及穩定象水痘病毒這樣不穩定的病毒時，本發明的穩定劑是特別適宜的。
可將本發明的穩定劑用于其它病毒，具體地說，這些病毒具體地選自副粘病毒科(麻疹病毒，包括麻疹、腮腺炎病毒、副流感病毒1、2、3和4型以及肺病毒)、披蓋病毒科(風疹)和流感(A、B和C)病毒。
可用本發明的穩定劑穩定從上述病毒或其它病毒得到的、并構成多價疫苗的混合物。可以列舉的并可想到的多價疫苗是麻疹-腮腺炎-風疹疫苗。在效價組合情況下，本發明的穩定劑有除上述優點外，還有有利的特性，特性在于穩定每種效價的能力使得可將這些效價組合起來。事實上，不同疾病的組合感染劑代表了一種經濟實用的進步，達到了通過一種預防處理即可抵御數種疾病的程度，這與單價疫苗的情況相反。但是，不同感染劑的共存提出了有關這些試劑相容性的實質性問題，這些問題使得很難同時完成有效的多種免疫接種。本發明的穩定劑提供了解決這些問題的辦法。由于三價組合有熱不穩定性，因此，用四價麻疹/腮腺炎/風疹/水痘疫苗的制備說明了疫苗組合的這些問題。使用本發明的穩定劑時，在四種效價的每一種效價的情況下，均穩定并保持了足夠的感染潛能。
再進一步改善最終疫苗的穩定性，如果可能的話，這些疫苗優選地是凍干的。在制備凍干的活疫苗時，優選地將所述疫苗與適當量的本發明穩定劑接觸。在收集所述病毒之前、之中或之后，將病毒與本發明的穩定劑接觸。有利地在收集所述病毒前，將病毒與本發明的穩定劑接觸。
在本說明書的以下部分將更詳細地描述本發明。我們選擇解釋如何制備穩定的單價水痘疫苗和制備穩定的多價麻疹/腮腺炎/風疹/水痘疫苗作為實施本發明的實施例，因為在這些情況下，穩定性和組合的問題特別突出。
實施例實施例1根據本發明制備的穩定的水痘疫苗用于制備本發明穩定的疫苗的減毒水痘株是OKA株。
用下列組分，以下列比例在注射用水中混合制備穩定劑-山梨糖醇，5％-甘露糖醇，2.5％-蔗糖，5％-葡聚糖，3％-氨基酸混合物，
-脲，0.5％-谷氨酸鈉，0.05％通過在該穩定劑中將細胞分裂(聲處理、剪切、高壓等)，或在穩定劑中自發破裂來從感染的細胞中收集或釋放病毒。用這種方法，在澄清后就可得到穩定的病毒懸浮液。
在通過稀釋調整效價后，將檢測樣品按等份放到小瓶中，然后按照適當的循環凍干。
所得疫苗的穩定性試驗將凍干的待測制品再水化并滴定。對于不同的試驗稀釋度，通過計數25 cm2平皿中產生的致細胞病變效應，用噬菌斑形成單位(pfu)數來確定活性。
所用的對照穩定劑是已知類型的傳統穩定劑，這些穩定劑相應于例如美國專利4147772描述的那種穩定劑。
在制備疫苗的不同階段穩定性比較
在上述表中，X是標準效價。
在不同貯存條件下，用本發明穩定劑達到的穩定性
上表中所示的值是三次試驗進行平均得到的。
本發明的穩定劑在制備疫苗的不同階段以及疫苗的貯存過程(在4種不同的溫度下試驗)中都能夠保持病毒效價。實施例2根據本發明制備穩定的麻疹/腮腺炎/風疹/水痘多效價疫苗將已經在低溫冷凍貯存的濃縮的麻疹、腮腺炎、風疹和水痘病毒產物融解，然后立即混合。然后將該混合物分配到不同的試驗樣品，所述試驗樣品補充了上述實施例1說明的本發明穩定產物。用該方法達到下列最終溶液比例麻疹1.5個體積；腮腺炎0.01個體積；風疹1.0個體積和水痘2.5個體積。這些實施例列出的，這些不同的比例可隨濃縮的病毒產物的效價而變化，并且不受限制。
將試驗樣品按等份放到小瓶中，然后按照標準循環凍干。通過將小瓶在37℃放置7天或在22℃放置21天，或在+4℃放置30個月來完成穩定性試驗。
在不同貯存條件下用本發明穩定劑得到的穩定性
未觀察到損失，這明顯不同于相應的單價疫苗的情況。
權利要求
1.用于組合物，具體地含有一種或多種減毒病毒的疫苗的穩定劑，其特征在于所述穩定劑含有一種或多種選自下列各組中的組分-氨基酸，-二糖，-多元醇，和緩沖液；其條件是選擇二糖的一種組分是蔗糖。
2.根據權利要求1所述的穩定劑，其特征在于選自二糖的一種或多種組分的比例是以2至6％。
3.根據權利要求2所述的穩定劑，其特征在于選自二糖的一種或多種組分的比例是2.5％。
4.根據權利要求1-3中任一權利要求所述的穩定劑，其特征在于所述多元醇包括山梨糖醇和甘露糖醇。
5.根據權利要求4所述的穩定劑，其特征在于它含有山梨糖醇和甘露糖醇。
6.根據權利要求4和5中的任一權利要求所述的穩定劑，其中山梨糖醇的比例是2至6％。
7.根據權利要求6所述的穩定劑，其中山梨糖醇的比例是5％。
8.根據權利要求4和5中任一權利要求所述的穩定劑，其中甘露糖醇的比例是1至2.5％。
9.根據權利要求8所述的穩定劑，其中甘露糖醇的比例是2.5％。
10.根據權利要求1至9中任一權利要求所述穩定劑，其特征在于緩沖液包括磷酸鹽緩沖液和乙二胺四乙酸。
11.根據權利要求10所述的穩定劑，其特征在于它含有磷酸鹽緩沖液。
12.根據權利要求1至11中的任一權利要求所述的穩定劑含有葡聚糖。
13.根據權利要求12所述的穩定劑，其中葡聚糖的比例是1至4％。
14.根據權利要求13所述的穩定劑，其中葡聚糖的比例是3％。
15.根據權利要求1至14中任一權利要求所述的穩定劑含有脲、一種脲衍生物或其混合物。
16.根據權利要求15所述穩定劑，其中脲、一種脲衍生物或其混合物的比例是0.125至2％。
17.根據權利要求16所述的穩定劑，其中脲、一種脲衍生物或其混合物的比例是0.5％。
18.根據權利要求1至17中任一權利要求所述的穩定劑，其中將pH調至7。
19.含有權利要求1-18中任一權利要求所述的穩定劑的穩定的、減毒的活病毒疫苗。
20.根據權利要求19所述的疫苗，它含有皰疹病毒科種的至少一種。
21.根據權利要求20所述的疫苗，其中皰疹病毒科含有水痘病毒、巨細胞病毒和單純性皰疹病毒。
22.根據權利要求21所述的疫苗，含有水痘病毒。
23.根據權利要求19所述的疫苗，它含有選自下列的至少一種病毒副粘病毒科(麻疹病毒，包括麻疹、腮腺炎病毒、副流感病毒1、2、3和4型以及肺病毒)、披蓋病毒科(風疹)和流感(A、B和C)病毒。
24.根據權利要求23所述的疫苗，它含有麻疹、風疹和腮腺炎病毒。
25.含減毒活病毒的穩定疫苗的制備方法，其特征在于優選地在凍干階段前，將所述疫苗組合物所用的病毒與適量的權利要求1至19中任一權利要求所述的穩定劑接觸。
26.根據權利要求25的方法，其特征在于在收集所述病毒前，將所述病毒與穩定劑接觸。
27.根據權利要求19至24中任一權利要求所述疫苗的制備方法，其特征在于優選地在凍干階段前，將所述疫苗組合物所用的病毒與適量的權利要求1至19中任一權利要求所述的穩定劑接觸。
28.根據權利要求27所述的方法，其特征在于在收集所述病毒前，將所述病毒與穩定劑接觸。
29.含權利要求1至18中任一權利要求所述穩定劑的穩定組合物。
全文摘要
本發明涉及活疫苗和減毒的單或多價活疫苗的穩定劑以及含有這些穩定劑的穩定的疫苗,和用于制備這樣一些疫苗的方法。用于含一種或多種減毒病毒的活疫苗的這些穩定劑包括一種或多種選自下列的組分:氨基酸、二糖、多元醇和緩沖液,其條件是選自二糖中的一個組分是蔗糖。
文檔編號A61K39/145GK1209067SQ96180039
公開日1999年2月24日 申請日期1996年12月20日 優先權日1995年12月22日
發明者B·范熱特, A·弗蘭肯 申請人:巴斯德梅里厄血清及疫苗公司