專利名稱：胎盤肽口服液及其制造方法
技術領域：
本發明涉及保健品領域，特別適用于從健康產婦胎盤中提取生物活性肽、核苷酸等為主要成分的滋補保健品。
隨著人們生活水平的提高，對營養的需求提出了新的要求，在蛋白質、脂肪、糖三大營養要素供給富裕的情況下，人們把調節機體平衡、增進健康、防病治病、延緩衰老提到了重要位置，面要達到這一點，就需要有“生物活性物質”參與人體各種物質代謝過程，起到調節人體新陳代謝、促進生長發育、激活機體免疫功能、抑制和清除使人體細胞受損的“自由基”，達到延緩衰老的目的。
生物活性物質存在于不少動植物之中，而在胎兒的胎盤中蘊藏最為豐富。胎盤的滋補作用在我國的各種中醫學論著中早有記載，《本草綱目》、《醫林篡要》、《中國藥典》等均有對胎盤的記述，“味甘咸、溫無毒”、“入肝、肺、腎三經”有“大補元氣、理血分、益氣養血之功”、“治虛損、贏瘦、勞熱骨蒸、咳喘、盜汗、遺精、陽痿、婦女血氣不足、不孕少乳”等癥。民間早有將胎盤洗凈煮食作為滋補的做法。
目前市場上也有開發胎盤用作治療或保健品，如胎盤組織液、胎盤片、胎盤粉、宮寶等，這些產品均采用高溫、酸解、酶解等方法制取，其中的生物活性物質大多被破壞，喪失了治療的作用。
本發明的任務是改變傳統胎盤制劑如熱處理、破壞生物活性物的工藝流程，采用特殊制取方法，將胎盤中的活性物質及各種氨基酸等有效成分最大限度的提取出來，制成滅菌生物活性制劑，以達到治療和保健的作用。
本發明的技術方案是取健康產婦新鮮胎盤(肝功能與黃疸指數正常)經切碎勻漿、反復凍融并通過超濾法提取其有效成分、滅菌等工藝制備出以活性肽為主的生化制品。
制造胎盤肽口服液生產工藝中的關鍵技術一、將經編號的健康產婦胎盤取其組織血液檢測其轉氨酶、乙肝、丙肝均為正常值后放置到-18℃～-20℃的環境下保存不少于24小時。
二、經冷凍后的胎盤去除其臍帶、包膜、及母體面結締組織膜后的完整胎盤組織經稱重后切成細粒再次置于-18℃～-20℃的環境下24小時。
三、將經過冷凍的胎盤細粒加一倍量的生理鹽水后置于組織搗碎機中勻漿三分鐘(10000rpm/分鐘)間隔5分鐘再重復勻漿三分鐘。
四、將經勻漿后的液體置于-18℃～-20℃環境中冷凍24小時后取出，經水融解后再置于-18℃～-20℃環境中24小時，再取出水融解。這一凍融過程需反復進行8次。
五、將經過8次反復凍融的胎盤液體取出在4℃環境下置于離心機中，離心30分鐘(轉速3000rpm/分鐘)后取上清液置于-18℃～-20℃環境下保存24小時。
六、將經冷凍的上清液進行超濾(截留分子量為10000)，并收集經超濾后的液體置于-18℃～-20℃環境下保存。
七、取出經冷凍的濾液經水融解后將濾液溫度控制在2℃～4℃(使濾液中尚有少量冰塊存在的情況下)經4#沙芯漏斗抽濾去除沉淀物。
八、將濾液置于60℃環境下2小時，取出冷卻后再置于-18℃～-20℃環境下24小時，然后經水融解(濾液中尚有少量冰塊時)經4#沙芯漏斗抽濾。
九、對濾液進行質量檢測(檢測多肽含量、核糖含量、紫外線吸收比值)符合標準后按標準加生理鹽水稀釋，并經4#、6#沙芯漏斗除菌。
十、將除菌后液體用玻瓶按每支10ml封裝并放在4℃環境下保存，然后經60℃8小時滅菌(升降溫均需按0.3℃/分鐘緩慢進行)后，便可裝盒出廠。(常溫下滅菌后的口服液可保存18個月)。
本生產工藝有以下優點和效果1、選用組織勻漿、凍融、超濾法將胎盤組織細胞膜破壞，經鏡檢液體中不含完整的組織細胞，獲得的是全部細胞內含物。
2、選用該工藝后將獲得的細胞內含物通過截流分子量為10000的濾膜，使乙肝表面抗原(HBSAg分子量為22000～68000道爾頓，HBeAg分子量為20000道爾頓)不能通過濾膜，這就保證了濾出的液體中無肝炎病毒污染，同時胎盤組織中的高分子量激素如絨毛膜促性腺激素(HCG)胎盤泌乳素(HpL)與妊娠相關的血漿蛋白(PAPPS)和酶均不能通過濾膜。保存了小于10000分子量的生物活性成分多肽、氨基酸、核苷酸及各種微量元素。
胎盤肽口服液成品用6mol HCL 110℃水解24小時后上機，樣品含量為0.4mg蛋白質/ml，經運用Hitadi835-50型氨基酸自動分析儀對胎盤肽成品進行水解后測定其氨基酸含量如下表
胎盤肽口服液水解氨基酸含量
胎盤肽口服液經J-A1100真空型63道等離子發射光譜儀檢測，其微量元素如下表胎盤肽口服液元素含量分析
濃度單位PPM(IPPm＝1ug/mI)表中微量元素有鈷、鉻、銅、鐵、錳、鉬、釩、錫，在常量元素中以鈉、鉀、磷、鈣、鎂含量較高。
胎盤肽口服液紫外線吸收光譜情況用本品經1∶10稀釋在53WB紫外可見光光度計(上海光學儀器廠產品)檢測，在234nm有低吸收峰，260mm處有高吸收峰，260nm/280nm≥2.0紫外線光譜曲線如附圖
胎盤肽口服液理化性質如下胎盤肽口服液為無色微黃透明澄清液體，味鮮略成PH6.0-7.0用磺基水楊酸法檢測蛋白質呈陰性反應，Folin-loWrg酚試驗檢測呈陽性反應，表明該液體內含多肽類物質，其多肽含量為0.408mg/ml。
用orcinol法(C3.5-二羥基甲苯Fec13試劑)檢測呈陽性反應，表明液體內含有核糖，其核糖含量為81.21ug/ml。
胎盤肽口服液主要藥效試驗結果如下1、胎盤肽口服液對T淋巴細胞E受體的激活作用從新生兒臍帶血中分離出的淋巴細胞在胎盤肽口服液培育后T淋巴細胞E受體被激活，胎盤肽口服液兩個不同劑量組(A、B組)的E-RFC形成的百分率均顯著高于原始的E-RFCP＜0.01，說明該制劑能增強機體的細胞免疫功能。
2、胎盤肽口服液對實驗小鼠免疫抑制的調節作用用氫化考的松誘導實驗小鼠免疫抑制狀態，同時給服胎盤肽口服液，觀察其對小鼠免疫功能的調節作用，經分組試驗后證明胎盤肽口服液具有升高小鼠白細胞數淋巴細胞百分率的作用，并使脾重指數保持正常水平。
3、胎盤肽口服液對荷瘤小鼠脾臟細胞IL-2誘生水平和外周血TNF活性的影響。
應用CTLL2細胞短期培養3H-TdR摻入法和L929細胞結晶紫色法觀察NIH小鼠接種8180實體瘤細胞前后，分別日注射胎盤肽口服液0.5ml/鼠，連續20天，預防組與治療組小鼠脾細胞IL-2誘生水平(CPm值)分別為2128.72±164.42、3295.66±230.71較荷瘤對照組1260.43±145.57明顯提高，P＜0.001而外周血TNF活性(％)分別為45.00±5.18、52.29±5.21與荷瘤對照組25.83±5.32比較有非常顯著提高荷瘤小鼠脾細胞IL-2誘生水平和外周血TNF活性，且能抑制S180實體瘤細胞在小鼠體內的生長。
注IL-2(白細胞介素2)TNF(腫瘤壞死因子)4、胎盤肽口服液對老齡小鼠SOD活性和LPO水平的影響隨著年齡的增加，動物體內超氧化物歧化酶SOD逐漸下降，而過氧化脂質(LPO)增多，實驗觀察8-9月老齡鼠紅細胞內SOD活性明顯低于2月齡健康小鼠，而血清LPO水平明顯高于2月齡小鼠，給老齡鼠灌注或腹腔注入胎盤肽口服液后，其SOD水平明顯升高，(P＜0.05)接近于2月齡小鼠水平，LPO水平則顯著降低(P＜0.05)，證明胎盤肽口服液具有較好的抗衰老作用。
經以上試驗表明胎盤肽口服液性溫、味咸、入肝、肺、腎三經、溫腎補精、益氣養血，有激發和增強機體免疫功能，提高SOD活性降低LPO水平，對于病毒性感染(如帶狀皰疹、乙型肝炎)白細胞減少癥、支氣管哮喘、類風濕性關節炎、復發性口瘡，免疫缺陷及惡性腫瘤均有療效，對身體虛弱、精神不振、面色無華、久病虛損、中老年體弱多病者具有補氣、養血、益精、壯陽之功效，有調節人體陰陽平衡、延緩衰老、延年益壽的作用。
我國健康產婦胎盤資源豐富，若采用本工藝制造胎盤肽口服液，提供給人們服用，用于防治各種疾病，健體強身，不僅有很高的經濟價值也有很好的社會效益。
權利要求
1.一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于它是取健康產婦的胎盤進行切碎、冷凍、勻漿、反復凍融、離心取上清液，進行超濾、質檢、生物滅菌制成。
2.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于健康產婦胎盤是經過取其組織血液檢測其轉氨酶、乙肝均為正常值的胎盤置于-18℃～-20℃環境下不少于24小時。
3.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于切碎工藝是將冷凍后的胎盤去除其臍帶、包膜及母體面結締組織膜后的完整胎盤經稱重后切成細粒置于-18℃～-20℃環境下24小時。
4.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于勻漿工藝是將經冷凍的胎盤細粒加一倍量的生理鹽水后置于組織搗碎機中勻漿三分鐘(10000rpm/分)后間隔5分鐘，再重復勻漿三分鐘。
5.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于反復凍融是將勻漿后的液體置于-18℃～-20℃環境下24小時經水融解，再置于-18℃～-20℃環境下24小時，再水融解這一過程需反復進行8次。
6.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于離心取上清液是將反復凍融后的胎盤液體在4℃環境下置于離心機中離心30分鐘(轉速3000rpm/分鐘)取出上清液置于-18℃～-20℃環境下保存24小時。
7.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于超濾是將上清液置于截留分子量為10000的濾膜上，收集經超濾后的液體置于-18℃～-20℃環境下保存，然后進行水融解在2℃～4℃環境下使液體中(尚有少量冰決的情況下)經4#沙芯漏斗抽濾去除沉淀物，再將濾液置于60℃環境下2小時，取出冷卻后再置于-18℃～-20℃環境下保存24小時，再取出經水融解(至濾液中有少量冰塊時)再經4#沙芯漏斗抽濾除菌。
8.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液及其制造工藝，其特征在于質檢從本批液體中抽樣進行多肽含量、核糖含量、紫外線吸收比值等方面的檢測。
9.根據權利要求1的一種胎盤肽口服液，其特征在于滅菌是將檢測合格的液體用玻瓶按每支10ml封裝并放入4℃環境下保存，然后經60℃8小時滅菌，其升降溫過程按0.5℃/分鐘的升溫速度緩慢進行。
全文摘要
一種胎盤肽口服液，它選用健康產婦的胎盤，進行切碎、冷凍、勻漿、反復凍融、離心提取上清液、超濾、質檢、生物滅菌等工藝制成，最大限度的保存了胎盤組織中的活性物質、氨基酸、核糖等，對于增強人體免疫功能、調節人體陰陽平衡，健體強身抗衰老有明顯的作用。
文檔編號A61P37/02GK1145196SQ95110928
公開日1997年3月19日 申請日期1995年1月24日 優先權日1995年1月24日
發明者郭金剛, 范振青, 姜訓 申請人:郭金剛, 范振青, 姜訓