神經激肽的新偽肽化合物，其制備方法和含有它們的藥物組合物的制作方法

專利名稱：神經激肽的新偽肽化合物，其制備方法和含有它們的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及神經激肽的新偽肽化合物，它們的制備方法和含有它們的藥物組合物。
神經激肽為一類在C—末端具有類似Phe—x—Gly—Leu—Met的結構的神經肽。這些神經肽P物質(SP)，神經激肽A(NKA)和神經激肽B(NKB)誘導平滑肌纖維的快速收縮，相反緩激肽產生慢收縮。SP、NKA和NKB的內源性激動作用分別通過具有優勢親和性的特異性受體NK1、NK2、NK3產生，它們廣泛分布在人體中，特別是中樞神經系統和外周神經系統中。它們參與許多生理或病理生理過程，如傷害、血管通透性、平滑肌纖維收縮、分泌過多和免疫調節(OTSUKA M.等，Physiol.Rev.73，229—308，1993)。
文獻中已描述了大量作為神經激的拮抗劑的肽，例如專利EP333174和EP394989或WO9222569中描述的化合物。
本發明目的是這樣一些偽肽，它們不僅是新的，而且由于其強藥理特性證明它們特別有價值。它們對神經激肽受體，更特別是對NK1受體具有選擇性和強拮抗特性。
這些特性使它們可以特別用于治療疼痛、各種起因的炎癥、胃腸疾病、氣喘、變態反應、泌尿科疾病、偏頭痛和中樞神經系統疾病。
本發明更具體涉及式(I)化合物 其中R代表萘基、5，6，7，8—四氫萘基、1，2，3，4—四氫萘基、噻吩基、苯基(由一個或多個鹵原子或直鏈或支鏈(C1—C6)烷基、直鏈或支鏈(C1—C6)烷氧基、羥基或三鹵甲基任意取代)或(C3—C7)環烷基，n代表1≤n≤8的整數，它們的對映異構體、非對映異構體和差向異構體以及與藥用酸或堿的加成鹽。
藥用酸的非限定性例子可提及鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、草酸、甲磺酸和樟腦酸等。
藥用堿的非限定性例子可提及氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、叔丁胺等。
本發明還涉及式(I)化合物的制備方法，其中式(II)的保護的羥基脯氨酸(已任選分離了其異構體)。 其中Fmoc代表9—芴基甲氧羰基，tBu代表叔丁基，在4—二甲氨基吡啶和N，N—二環己基碳化二亞胺存在下，用苯甲醇處理，得到式(III)化合物 其中Fmoc和tBu同上所定義，在吡啶介質中將其胺官能團脫保護，得到(IV)化合物其中tBu同上所定義， 式(IV)化合物與吲哚—3—羧酸反應，得到式(V)化合物 其中tBu同上所定義，通過催化氫化將其羧酸官能團脫保護，得到式(VI)化合物 其中tBu同上所定義，式(VI)化合物與式(VII)保護的氨基酸(任選已分離了其異構體)反應 其中R同式(I)中的定義，產生式(VIII)化合物 其中tBu和R同上所定義，式(VIII)化合物在硫酸氫化四丁基銨存在下與式(IX)的保護的四唑反應 其中Trt代表三苯甲基，得到式(X)化合物 其中tBu、R和Trt同上所定義，其在三氟乙酸介質中脫保護，得到式(I)化合物，—適當時，它可按常規純化技術純化，—適當時，其異構體可按常規分離技術分離，—需要時，與藥用堿轉化成其加成鹽。
式(VII)化合物可這樣得到按照如W.KONIG和R.GEIGER(Ber.，103，788，1970)所描述的常規肽偶聯反應，式(XI)的保護的氨基酸 其中R同式(I)中所定義，Boc代表叔丁氧羰基，與N—甲基芐胺反應，得到式(XII)化合物 其中Boc和R同上所定義，其在鹽酸介質中脫保護，得到式(VII)化合物。
式(IX)化合物按如下方法制得式(XIII)的腈Cl—(CH2)n—CN(XIII)其中n同上式(I)中所定義，在惰性氣氛下在氯化鋁存在下與疊氮化鈉反應，得到式(XIV)化合物 其中n同式(I)中的定義，此化合物在三乙胺存在下與三苯甲基氯反應，得到式(XV)化合物 其中n和Trf同上所定義，它然后用碘化鈉處理，得到相應的碘化的式(IX)化合物。
本發明化合物具有很有價值的藥理特性。它們為神經激肽受體的特異性配體，特別是對NK1受體有特別強的拮抗特性。NK1受體被認為更具體地參與疼痛傳遞調節、由血管通透性增加產生的水腫、氣管支氣管和胃腸水平的分泌現象、流涎、通氣控制和血管緊張控制、及活化參與炎癥過程的細胞。另外，不象某些作為P物質拮抗劑的偽肽化合物，這些化合物對肥大細胞沒有脫粒作用。
本發明的另一目的是僅含有作為活性成分的至少一種式(I)化合物，或還含有一種或多種無毒惰性賦形劑或載體的藥物組合物。
本發明的藥物組合物中，更具體可提及適于口服、非胃腸道給藥或鼻內給藥的組合物，如簡單片劑或糖衣片劑、舌下含片、明膠膠囊、錠劑、栓劑、霜劑、軟膏、皮膚膠等。
所用劑量根據病人的年齡和體重、疾病性質和嚴重程度以及給藥途徑變化。給藥途徑可為口服、鼻內、直腸或非胃腸道給藥。一般地，單位劑量在0.2—100mg間變化，每24小時1—3劑。
下列實施例說明但不限制本發明。
所用起始物為已知物或按已知方法制得的物質。制備例A和B不產生本發明的化合物，而是合成了在制備式(I)化合物中有用的中間體。在下述實施例和制備例中，縮寫以大寫字母開頭的氨基酸為L構型，其縮寫以小寫字母開頭的氨基酸為D構型。
在實施例和制備例中使用的縮寫如下Nal—NMeBzl代表下式(L)—N—甲基芐基氨基—萘—2—基丙氨酸殘基 Tna—NMeBzl代表下式(L)—N—甲基芐基氨基—5，6，7，8—四氫萘—2—基丙氨酸殘基 Thn—NMeBzl代表下式的(L)—N—甲基芐基氨基—1，2，3，4—四氫萘—2—基丙氨酸殘基 Thi—NMeBzl代表下式的(L)—N—甲基芐基氨基—噻吩—2—基丙氨酸殘基 Phe代表苯丙氨酰殘基，Cha—NMeBzl代表下式的(L)—N—甲基芐基氨基—環己基丙氨酸殘基 Boc代表叔丁氧基羰基，Hyp代表下式(R)—4—羥基—L—脯氨酰殘基 Fmoc代表9—芴基甲氧基羰基，tBu代表叔丁基，H—Hyp(tBu)—OBzl代表下式的殘基 制備例AH—Hal—NMeBzl鹽酸鹽A步(L)—Boc—Nal—NMeBzl將12.6mmol(L)—Boc—Nal—OH、13.9mmol 2—(1H—苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基脲翁四氟硼酸鹽，和12.6mmolN—甲基芐基胺相繼加入到30cm2二氯甲烷中。向混合物中加入27.7mmol N，N—二異丙基乙基胺，并在冰浴上保持攪拌。在0℃攪拌1小時后，將混合物調節至室溫，攪拌20小時。濃縮后，殘余油用乙酸乙酯溶解。用碳酸氫鈉、再用5％檸檬酸溶液、最后用氫化鈉飽和溶液洗滌。干燥并蒸發有機相，得到油狀目標化合物。B步H—Nal—NMeBzl鹽酸鹽通過在乙酸乙酯中用6N鹽酸處理上步所得產品計90分鐘，來得到目標產品。蒸發溶劑后，用乙醚再用戊烷溶解所得固體。過濾沉淀并干燥，得到目標產物。制備例B5—(4—碘丁基)—1—三苯甲基—1H—四唑A步5—(4—氯丁基)四唑在惰性氣氛下，將100mmol 5—氯戊腈加到冰浴上的100ml無水四氫呋喃中。每次少量分批加入445mmol疊氮化鈉，再加入100mmol氯化鋁。加熱反應混合物至80℃，并使其在攪拌下回流16小時。然后形成的復合物通過滴加150cm35％鹽酸來水解。得到的水相用乙酸乙酯萃取，然后用水、氯化鈉和溶液洗滌有機相，干燥并蒸發，殘余物回收在戊烷中。過濾形成的沉淀得到目標產物。B步5—(4—氯丁基)—1—三苯甲基—1H—四唑將68mmol三乙胺和68mmol三苯甲基氯相繼加入到含68mmol上步所得化合物的80ml氯仿中。在室溫下攪拌此溶液15小時。蒸發后，殘余油用乙酸乙酯溶解。該溶液用5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液依次洗滌。干燥并蒸發后，用戊烷溶解、過濾并干燥后，得到固狀目標產物。C步5—(4—碘丁基)—1—三苯甲基—1H—四唑向含25mmol上步所得化合物的100ml無水丙酮中加入25mmol碘化鈉。加熱混合物至60℃，并回流15小時。過濾沉淀后，真空濃縮濾液，得到目標產物。實施例1{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽A步Fmoc—Hyp(tBu)—OBzl向用冰浴冷卻的、含61mmol Fmoc—Hyp(tBu)—OH、6.5m-mol芐氯和27mmol 4—二甲氨基吡啶和150ml二氯甲烷的混合物中加入65mmolN，N—二環己基碳化二亞胺。在0℃下一小時后，調節混合物至室溫，攪拌18小時。濾出二環己基脲沉淀，蒸發濾液。殘余油用乙酸乙酯溶解。該溶液用5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液依次洗滌。干燥、蒸發后，得到油狀目標產物。B步H—Hyp(tBu)—OBzl上步所得油用240ml 20％呲啶乙醚溶液處理2小時30分鐘。濃縮后，殘余油在硅膠柱上用乙酸乙酯作為洗脫液純化，得到油狀目標產物。C步(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—OBzl向冰浴冷卻的、在80mmol二氯甲烷中含50mmol上步所得產物、65mmol吲哚—3—羧酸和75mmol溴—三吡咯烷基—鏻六氟磷酸鹽的混合物中，加入100mmol N，N—二異丙基乙胺。在0℃下30分鐘后，調節混合物至室溫，并攪拌17小時。蒸發后，殘余油用乙酸乙酯溶解。溶液用5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液依次洗滌。目標產物結晶，過濾分離。D步(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—OH加熱下，將23mmol上步所得產物溶解在1升無水甲醇中。恢復到室溫后，在惰性氣氛下，加入50ml冰醋酸和1g 1％鈀碳。該懸液在常溫常壓下氫化20小時。過濾催化劑，用甲醇洗，蒸發濾液。殘余物用乙酸乙酯溶解，結晶并過濾后得到目標產物。E步(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—Nal—NMeBzl向冰浴冷卻下的、在50ml二氯甲烷中含9.5mmol上步產品、10.5mmol制備例A中描述的化合物，10.5mmol 2—(1H—苯并三唑—1—基)—1，1，3，3—四甲基脲翁四氟硼酸鹽、10.5mmol羥基苯并三唑的混合物中，加入21mmol N，N—二異丙基乙胺、在0℃下一小時后，調節混合物至室溫，并攪拌16小時。濃縮后，用乙酸乙酯溶解殘余物。該溶液用5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液洗滌。目標產物結晶、過濾。F步{1—〔4—(4—三苯甲基—1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp(tBu)—Nal—NMeBzl將19mmol研成細小顆粒的氫氧化鈉加入到在70ml二氯甲烷中含4.76mmol上步化合物和0.05mmol硫酸氫化四丁銨的溶液中。攪拌該懸液5分鐘，加入14.3mmol制備例B中所得化合物。攪拌整個混合物24小時。蒸去溶劑后，殘余物用乙酸乙酯溶解。此溶液依次用5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液洗滌。干燥并蒸發后，殘余物在柱膠硅上用乙酸乙酯為洗脫液進行純化，得到粉狀目標產物。G步{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl3.01mmol上步化合物在室溫下用500ml三氟乙酸/二氯甲烷混合物(50/50)處理3小時。濃縮后，殘余油用乙醚/戊烷混合物處理，過濾得到的沉淀用制備性HPLC純化C18反相柱，溶劑為水/乙腈系統，其中乙腈的百分比在1小時內從30％變到40％。純化后冷干得到目標產物。H步{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽向在水/乙腈混合物中含有1.89mmol上步化合物的冷溶液中，加入2.08mmol 0.1N氫氧化鉀，得到上步產物的鉀鹽。然后將此鹽冷凍干燥。元素分析C％H％N％理論值60.205.8913.96實測值59.825.5813.61實施例2{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Tna—NMeBzl，鉀鹽，和實施例3{1—(4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Thn—NMeBzl，鉀鹽A步(L)—Boc—Tna—NMeBzl和〔(L，L)＋(L，D)〕—Boc—Thn—NMeRzl
向在20cm3甲醇中含7.17mmol的(L)—Boc—Nal—NMeBzl的溶液中，相繼加入10滴冰醋酸和1.5g鈀碳。混合物在常溫常壓下氫化3天。過濾除去催化劑后，蒸發溶劑，得到無色油狀目標產物，比例為(L)—Boc—Tna—NMeBzl/(L，L)—Boc—Thn—NMeBzl/(L，D)—Boc—Thn—NMeBzl60/20/20。B步H—Tna—NMeBzl三氟醋酸鹽＋H—Thn—NMeBzl三氟醋酸鹽上步油用100cm3三氟醋酸/二氯甲烷混合物(50/50)處理，并在室溫下攪拌2小時。真空濃縮后在戊烷中研制，得到油狀脫保護的混合物。C步(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—Tna—NMeBzl＋(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—Thn—NMeBzl將4.4mmol N，N—二異丙基乙胺加到在10ml二氯甲烷中含2mmol(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—OH、2mmol上步B所述化合物，2.2mmol BTUT.2.2mmol HOBt的混合物中。攪拌此溶液8小時，然后用乙酸乙酯溶解。用水、5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和飽和氯化鈉溶液洗滌有機相后，干燥并真空濃縮，得到的結晶泡沫在硅膠上用100％乙酸乙酯為洗脫劑純化。
在C18反相柱上用洗脫劑A水/三氟乙酸0.1％；B乙腈/三氟乙酸0.1％(其中90分鐘內從35％B到65％B的梯度)進行制備性HPLC來純化，可以將分別含Tna或Thn的兩種衍生物分離。另外，在這些條件下不可能將Thn加合物的兩種非對映異構體分離。實施例2{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Tna—NMeBzl，鉀鹽按照實施例1的步驟F、G和H，從上步C中得到的(吲哚—3—基)羰基—Hyp(fBu)—Tna—N4eBzl，制備目標產物。元素分析C％H％N％理論值64.846.1215.12實測值65.325.8814.46FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝741實施例3{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Thn—NMeBzl，鉀鹽按照實施例1的步驟F、G和H，從上步C中得到的(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—Thn—NMeBzl，制備目標產物。FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝741實施例4{1—〔(1H—四唑—5—基)甲基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽按照與實施例1的相同步驟，用按制備例B從氯乙腈得到的5—碘甲基—1—三苯甲基—1H—四唑制備此化合物。元素分析C％ H％ N％理論值63.965.0816.13實測值63.575.0115.93FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝695實施例5{1—〔2—(1H—四唑—5—基)乙基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽A步〔1—(2—氰基乙基)吲哚—3—基〕羰基—Hyp(tBu)—Nal-NMeBzl將1.58mmol氫化鈉小批量加到在10ml無水四氫呋喃中含0.79mmol(吲哚—3—基)羰基—Hyp(tBu)—Nal—NMeBzl(實施例1的E步)和0.87mmol 3—溴丙腈的溶液中。室溫攪拌24小時后，真空除去溶劑，殘余物溶解在乙酸乙酯中。形成的溶液用水、5％碳酸氫鈉、5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液洗滌，用Na2SO4干燥。蒸發溶劑后，混合物在硅膠上用洗脫劑二氯甲烷/丙酮80/20快速層析純化。真空濃縮流份，得到白色粉狀目標產物。B步{1—〔2—(1H—四唑—5—基)乙基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp(tBu)—Nal—NMeBzl將1.75mmol三甲基甲硅烷基疊氮化物和0.09mmol二丁基錫氧化物加入在10ml甲苯中含有0.44mmol上步所得肽的溶液中。在80℃下攪拌反應混合物24小時，然后蒸去甲苯。殘余物用甲醇溶解兩次，真空濃縮，并用乙酸乙酯溶解。該溶液用5％檸檬酸和氯化鈉飽和溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮，得到白色粉狀目標產物。C步{1—〔2—(1H—四唑—5—基)乙基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl0.35mmol上步得到的化合物用20ml三氟乙酸/二氯甲烷混合物(50/50)在室溫下處理5小時。濃縮后，形成的油用乙醚處理，得到沉淀，過濾沉淀并在C18反相柱上進行制備性HPLC而純化，洗脫劑水/乙腈系統，其中乙腈的百分比在30分鐘內由35％變到50％。純化得到該產物，然后冷干。D步{1—〔2—(1H—四唑—5—基)乙基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽向冷卻的在水/乙腈混合物中含0.110mmol上步所得化合物的溶液中，加入0.111mmol 0.1N氫氧化鉀，得到上步所述產物的鉀鹽。然后將此鹽冷干。
元素分析C％H％ N％理論值64.395.2615.81實測值63.755.0015.26FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝709實施例6{1—〔3—(1H—四唑—5—基)丙基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽按照與實施例1相同的步驟，用如制備例B中所述從4—氯丁腈得到的5—(3—碘丙基)—1—三苯甲基—1H—四唑制得此化合物。元素分析C％ H％ N％理論值64.805.4415.50實測值64.785.2415.27FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝723實施例7{1—〔5—(1H—四唑—5—基)戊基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl，鉀鹽按照與實施例5的化合物的相同步驟，從6—溴己腈開始制備了該產品。元素分析C％ H％ N％理論值65.585.7714.92實測值64.855.6114.38FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝751從按照制備例A中步驟得到的起始物，按照實施例1中描述的步驟制備了實施例8—11。實施例8{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Thi—NMeBzl，鉀鹽元素分析C％ H％ N％理論值59.025.2416.20實測值59.025.1215.68FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝655實施例9{1—〔4—1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—(4—氯)Phe—NMeBzl，鉀鹽FAB質譜〔M＋H〕+m/z譜721實施例10{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp(3，4—二甲氧基)Phe—NMeBzl，鉀鹽FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝747實施例11{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Cha—NMeBzl，鉀鹽FAB質譜〔M＋H〕+m/z＝693實施例12與人NK1和NK2受體的親和性與人NK1和NK2受體的親和性的研究是在如D.G.PAYAN等(J.Biol.Chem.1986，261，14321—14329)所述的、特異地表達NK1受體的人成淋巴細胞上和在基于“Cellphect transfection”試劑盒(pharmacia)的用NK2受體轉染的CHO—K1細胞上進行的。
本發明化合物顯示對NK1受體特異的優良親和性。結果示于下表中
實施例13對分離的平滑肌的試驗為了評價本發明化合物作為神經激肽拮抗劑的功能活性，使用了三種從平滑肌分離的標本兔腔靜脈(RVC)、無內皮的兔肺動脈(RPA)和大鼠門靜脈(RatPV)，如D.JUKIC等(Life Sci.1991，49，1463—1469)所指出的那樣，它們的收縮反應分別由NK1、NK2和NK3受體介導。
本發明化合物的拮抗能力用O.ARUNLAKSHANA和H.O.SCHILD(Brit.J.Pharmacol.1959，14，48—58)所定義的pA2形式表示。
本發明化合物顯示對NK1受體的強拮抗活性，而對NK2和NK3受體的拮抗活性低。實施例1、2和3的化合物所得結果示于下表中
實施例14抗傷害能力的研究—小鼠Eddy試驗因為傷害傳遞在脊柱水平有P物質參與(M.OTSUKA和S.KONISHI，TINS，6，3l7—320，1983)。特別是熱致疼痛中(A.W.DUGGAN等，Brain Research，1987，403，345—349)，所以本發明化合物的體內藥理活性的研究在小鼠中用N.B.EDDY等(J.Phar-macol.Exp，Ther，1953，107，385—393)最先描述的熱痛覺過敏試驗進行。該試驗是測量對熱的反應時間，這是由將小鼠(CDI雄性，Ch.River，25—30g)置于加熱至55℃的金屬板上至小鼠
后肢的時間決定的。
動物在被置于熱板上之前10分鐘，靜脈給予本發明化合物。
每組給藥動物(每批12只小鼠)得到的平均反應時間與相應的對照組的平均值比較。結果用ED50表示．它相當于反應時間增加50％時的劑量。
脊柱內施用P物質減小了動物的反應時間，而靜脈注射本發明化合物增加了反應時間。例如．實施例1的化合物的ED50為0.0l8mg/kg(置倍區間p＝0.05∶0.001—0.322)，嗎啉的ED50為0.30mg/kg(0.03—2.90)。與嗎啉相反，本發明化合物的活性不被納洛酮所拮抗。實施例15抑制豚鼠中P物質誘導的血漿外滲的研究按照C.GARRET等描述的對大鼠的方法(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA1991，88，10208—20212)，以豚鼠膀胱評價本發明化合物對靜脈注射P物質引起的血漿外滲的作用。用丙酮萃取色素后，用分光光度計對與P物質同時及處死前10分鐘靜脈注射的Evans藍的膀胱集累進行定量。在給予物質前5分鐘靜脈給藥后，這些化合物的抑制活性用與對照組相比的抑制百分數(％)，表示(每組8只動物)。例如，實施例1的化合物劑量為0.1mg/kg時活性為56％。實施例16抑制豚鼠中P物質誘導的支氣管收縮的研究用平均重量為300—400g的雄性Hartley豚鼠進行研究。使用三乙碘化三(β—二乙氨乙氧基)苯箭毒化(0.2mg/kg，iv)的麻醉動物(碳酸乙酯1.5g/kg)，以每分鐘60次及標準體積10ml/kg通氣。動物用吡拉明(1mg/kgiv)、萘心安(1mg/kg，iv)預處理動物。
支氣管收縮的評價標準是以2nM/kgiv劑量靜脈注射P物質所誘導的氣管注氣壓力(TIP)的增加，每只動物作為自身的對照。相對時間T0注射進行試驗物質的注射。
結果表示為P物質誘導的支氣管收縮抑制百分比，按下式計算該比例(給藥前ΔTIP—給藥后ΔTIP)/給藥前ΔTIP(以百分數表示)。結果列于下表中<
>實施例17體外肥大細胞脫粒研究用雄性Sprague—Dauley大鼠的腹膜肥大細胞進行研究，大鼠平均重為350—400g，通過吸入CO2進行安死術處死。用20ml緩沖液(NaCl 150mM，KCl 2.7mM，CaCl20.9mM，Na2HPO43mM，KH2PO43.5mM，葡萄糖5.6mM，牛血清白蛋白1mg/ml，pH6.8)進行腹腔灌洗。將灌洗液在4℃下400g離心10分鐘，回收在一緩沖液中，密度為2×104肥大細胞/ml。試驗化合物以遞增濃度孵育20分鐘。將管置于冰中停止反應，4℃，700g離心10分鐘。與鄰苯二甲醛縮合后，用熒光測定法檢測上清液和顆粒。如此測得的細胞釋放到上清液中的組胺用細胞的組胺總含量的百分比表示。在此試驗中，實施例1的化合物在濃度高達10-4M時不引起肥大細胞脫粒。實施例18片劑制備1000片含2mg劑量的片劑的配方實施例1的化合物2g羥丙基纖維素 2g小麥淀粉 10g乳糖 100g硬脂酸鎂 3g滑石 3g
權利要求
1.式(I)的化合物，它們的對映異構體、非對映異構體和差向異構體以及它們與藥用酸或堿的加成鹽 其中R代表萘基、5，6，7，8—四氫萘基、1，2，3，4—四氫萘基、噻吩基、苯基(被一個或多個鹵原子或直鏈或支鏈(C1—C6)烷基、直鏈或支鏈(C1—C6)烷氧基、羥基或三鹵甲基任意取代)或(C3—C7)環烷基，n代表1≤n≤8的整數。
2.權利要求1的式(I)化合物，其中n等于4。
3.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表萘基。
4.權利要求3的式(I)化合物，其中R代表2—萘基。
5.權利要求1的式(I)化合物，它為{1—〔4—(1H—四唑—5—基)丁基〕吲哚—3—基}羰基—Hyp—Nal—NMeBzl及其相應的鉀鹽。
6.權利要求1的式(I)化合物的制備方法，其中式(II)的保護的羥基脯氨酸(任選已分離了其異構體) 其中Fmoc代表9—芴基甲氧羰基，tBu代表叔丁基，在4—二甲氨基呲啶和N，N—二環己基碳化二亞胺存在下，用苯甲醇處理，得到式(III)化合物 其中Fmoc和tBu同上所定義，在吡啶介質中將其胺官能團脫保護，得到(IV)化合物 其中tBu同上所定義，式(IV)化合物與吲哚—3—羧酸反應，得到式(V)化合物 其中tBu同上所定義，通過催化氫化將其羧酸官能團脫保護，得到式(VI)化合物 其中tBu同上所定義，式(VI)化合物與式(VII)保護的氨基酸(任選已分離了其異構體)反應 其中R同式(I)中的定義，產生式(VIII)化合物 其中tBu和R同上所定義，式(VIII)化合物在硫酸氫化四丁基銨存在下與式(IX)的保護的四唑反應 其中Trt代表三苯甲基，得到式(X)化合物 其中tBu、R和Trt同上所定義，其在三氟乙酸介質中脫保護，得到式(I)化合物，—適當時，它可按常規純化技術純化，—適當時，其異構體可按常規分離技術分離，—需要時，與藥用堿轉化成其加成鹽。
7.藥物組合物，它僅含有作為活性成分的至少一種權利要求1—5任一項要求的化合物，或與一種或多種藥用的無毒惰性賦形劑或載體結合。
8.權利要求7的藥物組合物，它含有權利要求1—5任一項所要求的至少一種活性成分，該組合物在疼痛、炎癥、胃腸或泌尿系統疾病、氣喘、變態反應、偏頭痛和中樞神經系統疾病中的治療中用作P物質拮抗劑。
全文摘要
公開了式(I)化合物、它們的對映異構體、非對映異物體和差向異構體以及它們與藥用酸或堿的加成鹽，式中R代表萘基、5，6，7，8-四氫萘，1，2，3，4-四氫萘、噻吩、任意取代的苯基或(C
文檔編號A61P37/08GK1120548SQ9510505
公開日1996年4月17日 申請日期1995年4月27日 優先權日1994年4月28日
發明者J·L·福奇爾, N·庫查茲科-吉特里, J·帕拉迪諾, J·伯尼特, E·卡內特, G·比勒爾 申請人:阿迪爾公司