專利名稱：4-脫氧-4-表鬼臼毒素衍生物的制備方法
技術領域：
本發明涉及具有抗腫瘤活性并作為抗腫瘤劑而有用的新的4—脫氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其藥學上所允許的鹽。
具有抗腫瘤作用的鬼臼毒素衍生物早為已知，作為其代表性的化合物可以舉出鬼臼毒素的半合成衍生物如表鬼臼毒吡喃葡糖甙、表鬼臼毒噻吩糖苷等。但是這些化合物具有減少白血球、減少血小板、脫發、惡心、嘔吐等較強的副作用，臨床上存在著問題，尚未得到特別滿意的化合物。
鑒于上述現有技術中存在的問題，本發明者們反復進行精心研究，結果發現，以下述通式(I)表示的新的4—脫氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其藥學上允許的鹽具有很強的抗腫瘤活性，并可用作藥物，從而完成了本發明。
也就是說，本發明提供了由通式(I)表示的4—脫氧—4—表鬼臼毒素衍生物或其藥學上允許的鹽。
由通式(I)表示的本發明化合物具有優異的抗腫瘤活性，能有效地治療各類腫瘤。
因此，本發明提供一種含有有效量的上述通式(I)化合物或其藥學上允許的鹽和藥物載體的抗腫瘤劑。
另外，本發明提供將上述通式(I)化合物或其藥學上允許的鹽給藥于哺乳動物，以此治療哺乳動物腫瘤的方法。
在上述通式(I)中，以R1表示的低級烷酰基可以是碳原子數為2—5的直鏈或支鏈的鏈烷酰基，如乙酰基、丙酰基、丁酰基、異丁酰基、戊酰基、異戊酰基、三甲基乙酰基等，作為鹵素原子可以例舉氟原子、氯原子、溴原子、碘原子。以Rx，Ry，Rz，R2，R3，Ra，Rb，Rc及Rd表示的低級烷基可以是碳原子數為1—6的直鏈或支鏈的烷基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基等。以R表示的低級鏈烯基可以是碳原子數為2—6的直鏈或支鏈的鏈烯基，如乙烯基、1—丙烯基、異丙烯基、烯丙基、2—丁烯基、2—甲基—2—丁烯基、3—戊烯基、4—己烯基等。具有羥基的低級烷基可以是具有1或2個羥基的碳原子數為1—6的直鏈或支鏈烷基，如羥甲基、2—羥乙基、2—羥丙基、3—羥丙基、2，3—二羥基丙基、2，3—二羥基丁基、2，3—二羥基戊基、2，3—二羥基己基等。具有酮醛基的低級烷基可以是具有α—或β—酮醛基的碳原子數為1—6的烷基，如2—氧代—2—甲酰基—1—乙基、2—氧代—3—甲酰基—1—丙基、3—氧代—3—甲酰基—1—丙基、3—氧代—4—甲酰基—1—丁基等。
另外在上述通式(I)中，以R2及R3表示的低級烷氧基可以是碳原子數為1—6的直鏈或支鏈烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基，正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。環烷基可以是碳原子數為3—6的環烷基，如環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。六員含氮雜環基可以舉例如吡啶基、1—哌啶基、嗎啉代基等雜環基。R2和R3相互結合形成環狀結構并在此環狀結構中進一步含有氧原子或氮原子的環狀結構可以舉例如吡咯烷、哌啶、嗎啉、哌嗪等。
作為本發明的4—脫氧—4—表鬼臼毒素衍生物的藥學上允許的鹽可以舉出，例如甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、酒石酸、蘋果酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、草酸等有機酸的鹽，及鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸等無機酸的鹽。
在上述通式(I)化合物中較好的化合物是R1為氫原子或芐氧基羰基，R為—(CH2)nNR2R3所表示的化合物。
此外更好的化合物中，R1為氫原子，R為—(CH2)nNR2R3基，其中n表示2或3，R2及R3可以相同或不同，表示氫原子，—N(Ra)(Rb)基(Ra及Rb表示相同或不同的低級烷基，或Ra和Rb也可以相互結合形成低級烷基取代的哌嗪基)，被六員含氮雜環基或—N(Rc)(Rd)基(Rc及Rd可以相同或不同，表示低級烷基)取代的低級烷基，或也可以R2和R3相互結合形成環狀結構，并在此環狀結構中進一步含有氧原子或氮原子，在此環狀結構上也可以進一步具有低級烷基或1—哌啶基。
以通式(I)表示的本發明化合物可以按照例如下列反應流程式1制備。
<反應流程式1> 下面對上述反應流程式中各步驟進行說明。
<A步驟>
將通式(II)表示的已知的4—表鬼臼毒素與通式(III)表示的低級鏈烯基硅烷，在適當的溶劑中在路易斯酸存在下進行反應，得到通式(I)中R為低級鏈烯基的可以通式(Ia)表示的衍生物。對于溶劑沒有特殊限制，只要其不參與反應。例如，可以使用二氯甲烷、氯仿、1，2—二氯乙烷等鹵化烴類，四氫呋喃、二噁烷等醚類的非質子性溶劑。可以使用的路易斯酸如四氯化鈦、三甲基硅烷三氟甲磺酸鹽、溴化鋅、三氟化硼乙基醚等。所使用的反應物比例最好是，通式(III)化合物的用量為通式(II)化合物用量的1—5倍摩爾量，路易斯酸用量為通式(II)化合物用量的0.5—3倍摩爾量。而且，反應溫度為—100～100℃，最好是—20—20℃。
<B步驟>
將由A步驟所得的以通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶劑中進行氧化，得到通式(I)中R為具有羥基的低級烷基的可用通式(Ib)表示的目的衍生物。可將例如四氯化碳、乙腈、乙酸、水、吡啶等單獨或混合使用作為溶劑。可以使用氧化釕、高碘酸鈉、四氧化鋨等作為氧化劑。所使用的反應物比例最好是，對于通式(Ia)化合物為0.1—2倍摩爾量的氧化劑。反應溫度為—10—80℃，較好的為0—20℃。
<C步驟>
將由A步驟所得的以通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶劑中同時進行氧化還原，得到通式(I)中R為具有—(CH2)mCHO基或酮醛基的低級烷基的可用通式(Ic)表示的目的衍生物。可將例如四氯化碳、二氯甲烷、乙酸、水、四氫呋喃、吡啶等單獨或混合使用作為溶劑。可以使用例如硼烷—二甲基硫、硫戊基硼烷—二甲基硫等作為還原劑，可以使用例如鉻酸、氯化鉻酸吡啶鎓等作為氧化劑。所使用的反應物比例最好是，對于通式(Ia)化合物為0.5—2倍摩爾量的還原劑，1—3倍摩爾量的氧化劑。反應溫度為—10—50℃，較好的是0—20℃。
<D步驟>
將由B步驟所得的以通式(Ib)表示的衍生物在惰性溶劑中進行氧化，也可以得到通式(I)中R為具有—(CH2)mCHO基或酮醛基的低級烷基的可用通式(Ic)表示的目的衍生物。可將例如四氯化碳、二氯甲烷、乙酸、四氫呋喃、乙醚、苯等單獨或混合使用作為溶劑。可以使用高錳酸鉀、四乙酸鉛、氯化鉻酸吡啶鎓等作為氧化劑。所使用的反應物比例最好是，對于通式(Ib)化合物為0.8—3倍摩爾量的氧化劑。反應溫度為0—50℃，較好的是0—20℃。
<E步驟>
將由C步驟或D步驟所得的以通式(Ic)表示的衍生物，在惰性溶劑中在催化劑存在下進行還原，可以得到通式(I)中R為—(CH2)mCHO基的由通式(Id)表示的目的衍生物。對于溶劑沒有特殊限制，只要其不參與反應，例如可將乙酸乙酯、甲醇、四氫呋喃等單獨或混合使用。可以使用例如鈀黑、白金等作為催化劑。氫氣為常壓至3個大氣壓，較好的是常壓至2個大氣壓。反應溫度為0—40℃，較好的是室溫。
<F步驟>
將由E步驟所得的以通式(Id)表示的衍生物，在惰性溶劑中在堿存在下與酰化劑或硅烷基化劑進行反應，可以得到由通式(Ie)表示的目的衍生物。對于溶劑沒有特殊限制，只要其不參與反應，例如可將四氯化碳、二氯甲烷、四氫呋喃、苯、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等單獨或混合使用。可以使用例如吡啶、二甲基氨基吡啶、吡唑等作為堿。可以使用的酰化劑如乙酸酐、丙酸酐、丁酸酐、異丁酸酐、戊酸酐、氯乙酸酐等酸酐、乙酰氯、丙酰氯、正己酰氯、氯乙酰氯、二氯乙酰氯、三氯乙酰氯、芐氧羰基氯等酰基鹵，等等。可以使用的硅烷基化劑如叔丁基二甲基氯硅烷、三異丙基氯硅烷、叔丁基三苯基氯硅烷等。所使用的反應物比例最好是，對于通式(Id)化合物為0.01-7倍摩爾量的堿，1—5倍摩爾量的酰化劑或硅烷基化劑。反應溫度為0—50℃，較好的是0—20℃。
<G步驟>
將由C步驟或D步驟所得的以通式(Ic)表示的衍生物與以通式(Iv)表示的胺化合物，在惰性溶劑中進行還原胺化，可以得到通式(I)中R為—(CH2)nNR2R3基的由通式(If)表示的目的衍生物。對于溶劑沒有特殊限制，只要其不參與反應。例如可將甲醇、乙醇等醇類，四氫呋喃、二噁烷等醚類，乙酸、甲酸等有機酸、水等單獨或混合使用。可以使用例如硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉等作為還原劑。所使用的反應物比例最好是，對于通式(Ic)化合物為0.9—3倍摩爾量的通式(Iv)表示的胺化合物，1—3倍摩爾量的還原劑。反應溫度為0—50℃，較好的是0—20℃。
<H步驟>
將由G步驟所得的以通式(If)表示的衍生物在惰性溶劑中在催化劑存在下進行接觸還原，可以得到由通式(Ig)表示的目的衍生物。對于溶劑沒有特殊限制，只要其不參與反應，例如，可將乙酸乙酯、甲醇、四氫呋喃、乙腈等單獨或混合使用。可以使用鈀黑、白金等作為催化劑。氫氣壓力為常壓至3個大氣壓，較好的是常壓至2個大氣壓。反應溫度為0—40℃，較好的是室溫。
另外，用已知的方法將上述反應所得的本發明化合物與上述有機酸或無機酸，在如二氰甲烷、1，2—二氯乙烷、四氫呋喃、乙酸乙酯等溶劑中。在室溫左右的溫度下進行反應，可以形成鹽。
由上述步驟得到的化合物(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)及(Ig)可以通過本領域中所用的濃縮、過濾、重結晶、各種色譜法等方法進行分離、提純。
當將本發明化合物作為包括人在內的哺乳動物的惡性腫瘤的治療劑使用時，根據目的可以采用各種給藥方式，例如口服劑、注射劑、栓劑等任一種形式。而這些給藥形式可以通過為本領域技術人員公知的常規配制方法進行制備。
制備口服用固態制劑時，在本發明化合物中加入賦形劑，并根據需要加入粘合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、調味劑、除臭劑等后，按照常規方法可以制成錠劑、被覆錠劑、顆粒劑、散劑、膠囊劑等。所使用的這類添加劑可以是本領域中通常使用的添加劑，例如，用作賦形劑的可以有乳糖、白糖、氯化鈉、葡萄糖、淀粉、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸等；用作粘合劑的可以有水、乙醇、丙醇、單糖漿、葡萄糖液、淀粉液、明膠液、羧甲基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基淀粉、甲基纖維素、乙基纖維素、紫膠、磷酸鈣、聚乙烯吡咯烷酮等；用作崩解劑的可以有干燥淀粉、褐藻酸鈉、瓊脂粉末、碳酸氫鈉、碳酸鈣、月桂基硫酸鈉、硬脂酸甘油單酸酯、乳糖等；用作潤滑劑的可以有精制滑石、硬脂酸鹽、硼砂、聚乙二醇等；用作調味劑的可以有白糖、橙皮、檸檬酸、酒石酸等。
制備口服用液體制劑時，在本發明化合物中添加調味劑、緩沖劑、穩定劑、除臭劑等，并可按照常規方法制成內服液劑、糖漿劑、甘油香酒劑等。在此所用的調味劑可以是上面列舉的調味劑，而作為緩沖劑可以舉出檸檬酸鈉等，作為穩定劑可以舉出西黃蓍膠、阿拉伯樹膠、明膠等。
制備注射劑時，在本發明化合物中添加PH調節劑、緩沖劑、穩定劑、等滲透劑、局部麻醉劑等，并可按照常規方法制成皮下、肌內、靜脈內用的注射劑。用作該情況下的PH調節劑及緩沖劑的可以是檸檬酸鈉、乙酸鈉、磷酸鈉等。用作穩定劑的可以是焦亞硫酸鈉、EDTA、巰基乙酸、巰基乳酸等。用作局部麻醉劑的可以是鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因等。
制備栓劑時，在本發明化合物中加入本技術領域公知的制劑用載體，例如聚乙二醇、含水羊毛脂、可可油脂、脂肪酸甘油三酸酯、ゥィテッブゾ-ル(注冊商標)等，根據需要加入ッィ-二(注冊商標)類的表面活性劑等之后，可按常規方法進行制備。
在上述給藥單位形式中應配入的本發明化合物的量，隨著適用該藥的患者的病情或藥的劑型而變化，但通常就單位給藥形式而言，口服劑為約1—1000mg，注射劑為約0.1～500mg，栓劑為約5～1000mg較為理想。具有上述給藥形式的藥劑的一日給藥量，根據患者的癥狀，體重，年齡，性別等而不同，不能一概而定，通常成年人的1日量為0.1～5000mg，較好為1～1000mg，并可將其1次或分2～4次左右給藥比較好。
下面闡述實施例、藥理試驗以及制劑例并進一步詳細說明本發明。
實施例14—脫氧—4—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素(化合物1)的合成。
在1g(1.87mmol)4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—表鬼臼毒素的15ml二氯甲烷溶液中，加入426mg(3.73mmol)的三甲基烯丙基硅烷，并在-10—0℃下冷卻。在該溶液中加入0.6ml三氟化硼乙醚，并攪拌1小時。反應后加入0.6ml吡啶，在冷的稀鹽酸中用乙酸乙酯萃取。干燥后餾去有機層，并用柱色譜法(二氧化硅50g，展開溶劑氯仿)純化，用乙醚結晶，得到1g4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素(化合物1)(收率95.7％)。熔點135-137℃[α]20D＝-70.03°(C＝1.30，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm
7.30-7.43(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.72(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.31(2H，s，2′位，6′位H)、5.94(1H，d，J＝1.5Hz，-OCH2O-)、5.93(1H，d，J＝1.5Hz，-OCH2O－)、5.80(1H，d-d-t，J＝17，10.
5，6.5Hz，-CH2CH＝CH2)、5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、5.12(1H，d-d-t，J＝17，2，1.5Hz，-CH2CH=CH2)、5.11(1H，d-q，J＝10.5，1.5Hz，-CH2CH＝CH2)、4.58(1H，d，J＝5Hz，1位H)、4.25(2H，m，11位H)、3.68(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.27(1H，m，4位H)、3.07(1H，d-d，J＝14.5，5Hz，2位H)、2.93(1H，m，3位H)、2.57(1H，m,-CH2CH＝CH2)、2.42(1H，m，-CH2CH＝CH2)實施例24—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2，3—二羥基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物2)的合成在實施例1得到的1g(1.79mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素的2ml吡啶溶液中加入455mg(1.79mmol)的四氧化鋨，并在室溫攪拌1小時。反應后，加入0.80g亞硫酸氫鈉的吡啶水溶液，攪拌30分鐘。用乙酸乙酯萃取反應混合物，用稀鹽酸、水洗滌之后，進行干燥。濃縮有機層后，將所得的殘余物用柱色譜法(二氧化硅50g，展開溶劑；氯仿∶甲醇＝20∶1)純化。將濃縮所得的殘余物，用乙醚結晶，得到1.0g4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2，3—二羥基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物2)(收率94.2％)。熔點170.5-172℃[α]20D＝-62.25°(C＝0.66，DMSO)1H-NMR(DMSO-d6)δppm7.40(5H，s，-OCOOCH2Ph)、6.94，6.84(1H，s，5位H)、6.44(1H，s，8位H)、6.34，6.32(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(2H，s，-OCH2O-)、5.23(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.78(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、4.58(1H，d，J＝6.0Hz，1位H)、4.52(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、4.35(1H，m，11α位H)、4.17(1H，m，11β位H)、3.62(6H，s，3′位，5′位－OCH3)、3.17-3.69(4H，m，-CH2CH(OH)CH2OH，4位H)、2.94-3.02(1H，m，2位H)、2.19(1H，m，3位H)、1.67(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)、1.24-1.32(1H，m，-CH2CH(OH)CH2OH)
實施例34—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物3)的合成在實施例2得到的1g(1.69mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2，3—二羥基—1—丙基)-4-表鬼臼毒素的80ml苯溶液中，加入795mg(1.79mmol)四乙酸鉛，并在室溫攪拌30分鐘。反應后進行過濾，將濾液濃縮后得到殘余物，用柱色譜法(二氧化硅70g，展開溶劑∶氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，用乙醚結晶，得到934mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表熔點180-182℃[α]20D＝-71.04°(C＝1.32，DMSO)1H—NMR(DMSO-d6)δppm9.73(1H，s，-CHO)、7.39(5H，s，-OCOOCH2Ph)、6.88(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.35(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(2H，s，-OCH2O-)、5.23(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.54(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、3.96-4.32(1H，m，11α位H)、3.63(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.48-3.92(1H，m，11β位H)、2.56-3.40(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2CHO)實施44—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物4)的合成在實施例1得到的4g(7.17mmol)的4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素的40ml四氫呋喃熔液中，在冰冷下滴入2M的硼烷—二甲基硫化物的4.3ml(8.6mmol)四氫呋喃溶液后，在室溫下反應1小時，將濃縮反應液所得的殘余物溶解于80ml二氯甲烷中，并加入3.0g(13.9mmol)氯化鉻酸吡啶鎓，在室溫下進行攪拌。反應后加入100ml乙酸乙酯，并用硅藻土進行過濾。將濾液進行濃縮，并把所得的殘余物用柱色譜法(二氧化硅50g，展開溶劑∶己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)進行純化，用乙醚結晶，得到1.85g4—脫氧-4′-脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物4)(收率44.9％)。熔點153-155℃[α]20D＝-69.09°(C＝0.38，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.83(1H，s，-CHO)、7.4O(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.83(1H，s，5位H)、6.45(1H，s，8位H)、6.28(2H，s，2′位，6′位H)、 5.94(2H，s，-OCH2O-)、5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.58(1H，d，J＝4.6Hz，1位H)、4.37(1H.m.11α位H)、4.11(1H，m，11β位H)、3.67(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.04-3.10(1H，m，4位H)、2.86-3.00(2H，m，2位，3位H)、2.49-2.67(2H，m，-CH2CHO)、1.83-2.21(2H，m，-CH2CH2CHO)實施例54—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物5)的合成在實施例3得到的100mg(0.178mmol)的4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的10ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中加入30mg 5％鈀/碳，并在氫氣流中(1大氣壓)進行接觸還原。反應后，濾去5％鈀/碳，在減壓下濃縮濾液。將所得的殘余物用乙醚結晶，得到75mg4—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物5)(收率98.9％)。熔點237-239℃[α]20D＝-110.12°(C＝0.38，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.72(1H，s，-CHO)、8.22(1H，s，4′-OH)、6.86(1H，s，5位H)、6.43(1H，s，8位H)、6.21(2H，s，2′位，6′位H)、5.96，5.94(2H，s，-OCH2O-)、4.41(1H，d，J＝5.28Hz，1位H)、4.15(1H，d-d，J＝7.9，3.9Hz，11α位H)、3.66-3.73(1H，m，11β位H)、3.62(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.56-3.40(5H，m，2位，3位，4位H，—CH2CHO)。
實施例64—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—氧代—2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物6)的合成在實施例2得到的1 00mg(0.17mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2，3—二羥基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素的5ml二氯甲烷溶液中，加入73mg(0.34mmol)氯化鉻酸吡啶鎓，并在室溫下攪拌1小時。反應后加入乙酸乙酯，用稀鹽酸、飽和食鹽水洗滌之后，用硫酸鎂干燥。蒸餾除去溶劑后，用柱色譜法(二氧化硅20g，展開溶劑氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，用乙醚結晶，得到45mg 4—脫氧—4′—脫甲基—4′-0-芐氧羰基—4—(2—氧代—2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物6)(收率45.0％)。1H-NMR(CDCl3)δppm9.85(1H，s，-CH2COCHO)、7.38(5H，m，-OCOOCH2Ph)、6.61(1H，s，5位H)、6.45(1H，s，8位H)、6.31(2H，s，2′位，6′位H)、5.93(2H，s，-OCH2O-)、 5.25(2H，s，-OCOOCH2Ph)、4.55(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、4.12-4.4O(1H，m，11α位H)、3.48-4.00(1H，m，11β位H)、3.68(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.60-3.08(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2COCHO)實施例74—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物7)的合成在實施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml四氫呋喃溶液中，加入50mg(0.292mmol)氯乙酸酐和10mg(0.08lmmol)甲胺基吡啶，并在室溫下攪拌1小時。反應后蒸餾除去溶劑，將所得的殘余物分別用薄層柱色譜法(展開溶劑氯仿∶甲醇＝30∶1)純化。將洗脫得到的殘余物用乙酸乙酯—正己烷結晶后，進行濾集分別得到50mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—氯乙酰—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物7)(收率90.0％)。熔點119-121℃[α]20D＝-85.21°(C＝0.399，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.64(1H，s，-CHO)、6.40(1H，s，5位H)、6.25(1H，s，8位H)、6.10(2H，s，2′位，6′位H)、5.73(1H，s，-OCH2O-)、5.72(1H，s，-OCH2O-)、4.36(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、4.12(2H，s，ClCH2CO-)、4.06(1H，d，J＝7.2Hz，11α位H)、3.61(1H，m，11β位H)、3.46(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.37(1H，t，J＝1O.5Hz，2位H)、2.51-2.85(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)實施例84—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—三氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物8)的合成在由實施例5得到的4.26g(10mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的50ml二氯甲烷溶液中，加入2.36g(13mmol)三氯乙酰氯和1.58g(13mmol)二甲胺基吡啶，并在室溫下攪拌過夜。反應后餾去溶劑，將所得的殘余物用柱色譜法(展開溶劑乙酸乙酯∶正己烷＝1∶1)純化。將洗脫所得的殘余物，用甲醇結晶后，濾集，分別得到4.10g 4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—三氯乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物8)(收率71.7％)。[α]20D＝-68.96°(C＝0.58，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.88(1H，s，-CHO)、6.63(1H，s，5位H)、6.47(1H，s，8位H)、6.35(2H，s，2′位，6′位H)、5.96(1H，s，-OCH2O-)、4.61(1H，d，J＝5.2Hz，1位H)、4.30(1H，t，J＝8.9Hz.11α位H)、3.80(1H，m，11β位H)、3.72(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.60(1H，t，J＝9.6Hz，2位H)、2.70-3.10(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)實施例94—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物9)的合成在由實施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml四氫呋喃溶液中，加入50mg(0.49mmol)乙酸酐和10mg(0.081mmol)二甲胺基吡啶，在室溫下攪拌過夜。反應后餾去溶劑，并將所得的殘余物分別用薄層色譜法(展開溶劑氯仿∶甲醇＝30∶1)純化。將洗脫得到的殘余物用正己烷結晶后，濾集得到40mg 4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—乙酰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物9)(收率73.0％)。熔點130-133℃[α]20D＝-88.40°(C＝0.5，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.55(1H，s，-CHO)、6.30(1H，s，5位H)、6.16(1H，s，8位H)、5.99(2H，s，2′位，6′位H)、5.63(1H，s，-OCH2O-)、5.62(1H，s，-OCH2O-)、4.27(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、3.98(1H，t，J＝.8.2Hz，11α位H)、3.51(1H，m，11β位H)、3.37(6H.s，3′位，5′位-OCH3)、3.28(1H，t，J＝9.9Hz，2位H)、2.42-2.75(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)、1.97(3H，s，-OCOCH3)實施例104—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—叔丁基二苯基甲硅烷基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物10)的合成在由實施例5得到的50mg(0.117mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素的5ml二甲基甲酰胺溶液中，加入33mg(0.12mmol)叔丁基二苯基甲硅烷基氯和79mg(0.64mmol)二甲基吡啶，并在室溫下攪拌過夜。反應后，加入乙酸乙酯一水，并進行萃取、干燥。然后蒸餾除去溶劑，將所得的殘余物分別用薄層色譜法(展開溶劑氯仿∶甲醇＝30∶1)純化，將洗脫得到的殘余物在減壓下進行干燥得到35mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—叔丁基二苯基甲硅烷基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物l0)(收率37.4％)。1H-NMR(CDC13)δppm9.71(1H，s，-CHO)、7.71(4H，m， 、7.38(6H，m，-Si 、6.50(1H，s，5位H)、6.38(1H，s，8位H)、6.06(2H，s，2′位，6′位H)、5.87(2H，s，-OCH2O-)、4.40(1H，d，J＝4.9Hz，1位H)、4.16(1H，t，J＝7.5Hz，11α位H)、3.70(1H，m，11β位H)、3.43(1H，t，J＝9.5Hz，2位H)、3.28(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、2.47-2.84(4H，m，3位，4位H，-CH2CHO)、1.05(9H，s，-Si-t-Bu)實施例114—脫氧—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物11)的合成在500mg(1.2mmol)4—表鬼臼毒素的10ml二氯甲烷溶液中，加入274mg(2.4mmol)三甲基烯丙基硅烷，并在-10～0℃下冷卻。向該溶液中加入0.35ml三氟化硼乙醚，并攪拌4小時。反應后，加入0.35ml吡啶，并用乙酸乙酯萃取。干燥后餾去有機層，用柱色譜法(二氧化硅50g，展開溶劑乙酸乙酯∶己烷＝1∶2)純化后，用乙醚、己烷結晶，并濾集，得到4—脫氧—4—烯丙基—4—表鬼臼毒素450mg(收率81.1％).然后在200mg(0.46mmol)的該化合物的4ml吡啶溶液中，加入116mg(0.46mmol)四氧化鋨，并在室溫攪拌1小時。反應后，加入0.1g亞硫酸氫鈉的吡啶水溶液，攪拌30分鐘。用乙酸乙酯萃取反應混合物，用稀鹽酸、水洗滌之后，進行干燥。將濃縮有機層后得到的殘余物，用柱色譜法(二氧化硅50g，展開溶劑氯仿∶甲醇＝20∶1)純化。將濃縮所得的殘余物用乙醚、己烷結晶，濾集，得到194mg4—脫氧—4—(2，3—二羥基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(收率89.3％)。熔點144—145℃[α]20D＝-73.42°(C＝0.52，CHCL3)然后在100mg(0.21mmol)該化合物的10ml苯溶液中加入113mg(0.25mmol)四乙酸鉛，在室溫攪拌20分鐘。反應后進行過濾，將濃縮濾液得到的殘余物用柱色譜法(二氧化硅20g，展開溶劑，氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，并用乙醚∶己烷(1∶1)結晶，得到90mg4—脫氧—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素(化合物11)(收率97.4％)。熔點157—159℃[α]20D＝-105.82°(C＝1.253，DMSO)1H-NMR(CDCl3)δppm9.84(1H，s，-CHO)、6.29(1H，s，5位H)、6.46(1H，s，8位H)、6.28(2H，s，2′位，6′位H)、5.93(2H，s，-OCH2O-)、4.52(1H，d，J＝3.6Hz，1位H)、4.12-4.36(1H，m，11α位H)、3.79(3H，s，4′位-OCH3)、3.74(6H，s，3′位，5′位-OCH3)、3.40-3.92(1H，m，11β位H)、2.56-3.24(5H，m，2位，3位，4位H，-CH2CHO)實施例124—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物12)的合成在0.1ml50％二甲胺水溶液、3ml甲醇的混合液中先加入0.1ml乙酸和35mg(0.56mmol)氰基硼氫化鈉，然后加入由實施例4得到的300mg(0.52mmol)4—脫氧—4′—0—芐氧羰基—4—(2—甲酰基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素，在室溫下反應1小時。反應后，在反應液中加入30ml氯仿之后，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水洗滌、再用硫酸鎂干燥。將餾去溶劑而得到的殘余物用柱色譜法(二氧化硅20g，展開溶劑氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，得到245mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物12)(收率78％)。
實施例134—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物13)的合成在15mg(0.167mmol)的50％二甲胺水溶液，5ml甲醇的混合液中，先加入0.1ml乙酸和10mg(0.19mmol)氰基硼氫化鈉，然后加入由實施例3得到的100mg(0.178mmol)4—脫氧—4—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室溫下反應1小時。反應后，在反應液中加入100ml乙酸乙酯之后，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水洗滌，再用硫酸鎂干燥。將餾去溶劑而得到的殘余物用薄層色譜法(展開溶劑氯仿∶甲醇＝5∶1)純化，得到60mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物13)(收率57.2％)。
實施例144—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—N—甲基—N—環己胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物14)的合成在180mg(1.81mmol)環己胺的10ml甲醇溶液中，先加入0.1ml乙酸和85mg(1.35mmol)氰基硼氫化鈉，然后再加入由實施例3得到的500mg(0.9mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室溫下反應1小時。反應后，在反應液中進—步加入0.1ml37％甲醛水溶液后，在室溫下反應1小時。在反應液中加入氯仿，用飽和碳酸氫鈉水溶液、水洗滌，并用硫酸鎂干燥。將餾去溶劑得到的殘余物用柱色譜法(二氧化硅20g，展開溶劑氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，得到470mg4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—N—甲基—N—環己胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物14)(收率79％)。
實施例154—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物15)的合成在38mg(0.53mmol)二乙胺，10ml甲醇的混合液中加入0.1ml乙酸和52mg(0.82mmol)氰基硼氫化鈉，然后加入由實施例3得到的300mg(0.53mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—甲酰甲基—4—表鬼臼毒素，在室溫下反應1小時。反應后，在反應液中加入氯仿，用飽和碳酸氫鈉、水洗滌，并用硫酸鎂干燥。將餾去溶劑得到的殘余物用柱色譜法(二氧化硅20g，展開溶劑氯仿∶甲醇＝20∶1)純化，得到175mg 4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物15)(收率53.5％)實施例16～27用實施例12—15同樣的方法合成表1所示的化合物16—27。
表1
實施例284—脫氧—4′—脫甲基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素(化合物28)的合成在由實施例12得到的230mg(0.38mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4—0—芐氧羰基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素的4ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中，加入50mg 10％鈀—碳，在1大氣壓的氫氣流中在室溫下反應4小時。濾去催化劑之后，將餾去溶液所得的殘余物用柱色譜法(二氧化硅5g，展開溶劑；氯仿∶甲醇＝20∶1)進行純化，進一步在2ml二氯乙烷中溶解，并加入0.2ml4N—鹽酸/乙酸乙酯。將減壓下濃縮所得的殘余物用乙醚結晶，得到110mg4—脫氧—4′—脫甲基—4—(3—N，N—二甲胺基—1—丙基)—4—表鬼臼毒素鹽酸鹽(化合物28)(收率61.5％)。
實施例294—脫氧—4′—脫甲基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物31)的合成在由實施例15得到的160mg(0.25mmol)4—脫氧—4′—脫甲基—4′—0—芐氧羰基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素的20ml乙酸乙酯∶甲醇(1∶1)溶液中加入20mg 10％鈀—碳，在1大氣壓的氫氣流中，并在室溫下反應10小時。過濾除去催化劑之后，將在減壓下濃縮而得的殘余物用乙醚結晶，得到102mg4—脫氧—4′—脫甲基—4—(2—N，N—二乙胺基—1—乙基)—4—表鬼臼毒素(化合物31)(收率84.3％)。
實施例30～53
用實施例28及29相同的方法合成表2中所示的化合物29，30，32～53。
表2
藥理試驗1將P388小鼠白血病細胞，以每孔1×103個細胞(Cells/well)接種于96孔平板上，并培養24小時。將試驗化合物溶解于二甲基甲酰胺之后，用媒介物稀釋成各種濃度，并添加于各孔中繼續進行培養。接觸三天之后，將平板以戊二醛進行固定，并通過結晶紫染色法計測細胞數。使控制的細胞數減少50％作為藥劑濃度(ED50)表示各化合物的殺菌效果。結果示于表3。
表3
藥物試驗2將L1210小鼠白血病細胞以每只鼠1×105個細胞(Cells/mouse)移植于7周齡的雄CDF1小鼠(一群6只)的腹腔內。將試驗化合物以下表4中所示的量溶解在含有3.5％的二甲亞砜和6.5％的司本80的生理鹽水中，之后從移植的第二天起5天內，在腹腔內共給藥5次。將只給于含有3.5％的二甲亞砜和6.5％的司本80的生理鹽水而控制的情況與之相比，求出壽命延長增加率。結果示于表4。
表4
下面舉出用本發明化合物的制劑例。
制劑例1錠劑用下面的配合比例，根據常法制備錠劑。
化合物34 100mg乳糖 47mg玉米淀粉 50mg結晶纖維素50mg羥基丙基纖維素15mg滑石 2mg硬脂酸鎂 2mg乙基纖維素30mg不飽合脂肪酸甘油酯 2mg二氧化鈦 2mg每1錠300mg
制劑例2顆粒劑以下面的配合比例，用常法制備顆粒劑。
化合物35 200mg甘露糖醇 540mg玉米淀粉 100mg結晶纖維素 100mg羥基丙基纖維素 50mg滑石10mg每1包 1000mg制劑例3細粒劑以下面的配合比例，根據常法制備細粒劑。
化合物43 200mg甘露糖醇 520mg玉米淀粉 100mg結晶纖維素 100mg羥基丙基纖維素 70mg滑石10mg每1包 1000mg制劑例4 膠囊劑以下面的配合比例，根據常法制備膠囊劑。
化合物45 100mg乳糖50mg玉米淀粉47mg結晶纖維素 50mg
滑石 2mg硬酯酸鎂 1mg每1膠囊250mg制劑例5 注射劑以下面的配合比例，根據常法制備注射劑。
化合物47 100mg注射用蒸餾水適量每1管中 2ml制劑例6 栓劑以下面的配合比例，根據常法制備栓劑。
化合物53 100mgゥィテップゾ-ルS—55 1400mg(從月桂酸 至硬脂酸的飽和脂肪酸的單一，二一甘油酯混合物，ダィナスィトノ-ベル社制)每1個 1500mg
權利要求
1.一種通式(Ic)表示的衍生物的制備方法 式中，R4表示甲基、芐氧基、也可是有鹵原子的低級烷酰基、或-Si(Rx)(Ry)(Rz)基(其中，Rx、Ry和Rz相同或不同，表示低級烷基或苯基)，R7表示-(CH2)mCHO基(其中m為1或2)，所述方法的特征在于，使通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶劑中同時進行氧化還原，由此制得通式(Ic)表示的衍生物，通式(Ia)為 式中，R4的定義同上，R5表示低級鏈烯基。
2.一種通式(Ic)表示的衍生物的制備方法， 式中，R4和R7的定義同上，所述方法的特征在于，將通式(Ia)表示的衍生物在惰性溶劑中進行氧化，由此得到通式(Ib)表示的衍生物，使所得的(Ib)表示的衍生物在惰性溶劑中進行氧化，藉此可制得通式(Ic)表示的衍生物，通式(Ia)為 式中R4定義同上，R5表示低級鏈烯基，通式(Ib)為 式中，R4定義同上，R6表示有羥基的低級烷基。
全文摘要
本發明涉及式(Ic)所示衍生物的兩種制法。其一是使式(Ia)所示衍生物在惰性溶劑中同時進行氧化還原制取(Ic)。其二是使式(Ia)所示衍生物在惰性溶劑中進行氧化制得(Ib)，然后使(Ib)衍生物在惰性溶劑中進行氧化制取(Ic)。(Ic)衍生物用于制備(Ig)表示的4-脫氧-4-鬼臼毒素衍生物。后者可作抗腫瘤劑的有效成分。上述通式中各符號含義參見說明書。
文檔編號A61K31/357GK1126723SQ9510339
公開日1996年7月17日 申請日期1995年5月18日 優先權日1991年1月25日
發明者寺田忠史, 藤本勝彥, 野村誠, 山下純一, 武田節夫, 小武內尚, 山口秀夫, W·康斯坦蒂 申請人:大鵬藥品工業株式會社