8位取代黃嘌呤作為選擇性腺苷受體藥物的制作方法

專利名稱：8位取代黃嘌呤作為選擇性腺苷受體藥物的制作方法
技術領域：
本發明涉及到一組化合物，它們是選擇性地作用于腺苷受體的黃嘌呤衍生物。
50多年以前第一次認識到腺苷強烈的降血壓作用，鎮靜作用，抗痙攣作用和舒血管作用。隨后，提出來的腺苷的一系列生物作用明顯增加。出現在許多細胞上的腺苷受體都與腺苷酸環化酶相聯系。近年來為了研究這些受體的功能已經引進了各種各樣的腺苷類似物。烷基黃嘌呤，例如咖啡因以及茶堿就是最熟悉的腺苷受體拮抗劑。
也許腺苷代表了一類普通調節的物質，這是因為沒有發現對它的形成專一負責的具體細胞類型或組織。在這方面，腺苷不同于許多內分泌激素。沒有任何證據表明腺苷是由神經細胞或其它細胞貯存或釋放的。因此，腺苷與各種神經遞質不同。
腺苷可以與生理調節劑前列腺素比較。在兩種情況下，包括在代謝形成中的酶都普遍存在，而且似乎都對細胞的生理狀況的改變負責。腺苷受體，象前列腺素受體一樣已被證明非常普遍。最后，前列腺素和腺苷似乎都與鈣離子的調節功能有關。當然，前列腺素來自于膜前體，而腺苷來自于胞液前體。
雖然腺苷可以影響各種生理功能，但多年來對于其可以導致臨床應用卻給予了特殊的重視。腺苷的心血管作用一直是優秀的，它可以導致舒張血管和降低血壓，但它也會導致心臟病。腺苷的抗脂肪分解作用，抗栓作用以及抗痙攣作用已經引起了人們的一些注意。腺苷刺激腎上腺細胞的甾類產生。這很可能又是通過苷腺酸環化酶的活化。腺苷有抑制神經傳遞作用和抑制中樞神經自發活性的作用。最后，腺苷的支氣管收縮作用以及黃嘌呤對它的拮抗作用代表了一個重要的研究領域。
現在已經認識到有不止一種而是至少有兩種細胞外受體與腺苷的作用有關系。這些受體中的一種對于腺苷具有高的親和力，并至少在一些細胞中它以抑制方式與腺苷酸環化酶偶聯。一些人稱這些受體為A-1受體。其它種類的受體對于腺苷具有較低的親和力，在許多細胞類型中以刺激的方式與腺苷酸環化酶相聯系。這些受體被稱為A-2受體。
現在用各種結構類似物表現腺苷受體的特性已經成為可能。腺苷類似物阻止代謝作用或者吸收作用的機制已經變得成為可能。這些都非常有價值，因為它們的明顯的效力已不受從有效系統中清除代謝的影響。在A-1和A-2腺苷受體上，腺苷類似物顯示不同級別的效力，從而提供了一種根據生理應答將腺苷受體性質分類的簡單方法。阻斷腺苷受體(拮抗作用)提供了另一種根據應答將腺苷受體分類的方法。應當注意開發對于A-1或A-2腺苷受體的特異性拮抗劑在這個研究領域代表一個重要進展，開發在動物身上具有特殊的生理作用的腺苷受體選擇性的藥物制劑同樣代表一個重要的突破。
本發明涉及到具有下述通式的化合物， 包括(R)和(S)對映異構體和它們的外消旋混合物以及它們的可以藥用的鹽，其中R1和R2是各自獨立為(C1-C4)低級烷基或(C2-C4)低級烯基，Z為 其中R3為氫，(C1-C3)低級烷基，硝基，氨基，羥基，氟，溴或氯，R4為(C1-C4)低級烷基，n為1或2。
用于本申請中的術語(C1-C3)低級烷基為甲基，乙基，正丙基或異丙基。用于本申請中的術語(C1-C4)低級烷基為甲基，乙基，正丙基、異丙基、正丁基，異丁基，仲丁基或叔丁基。
另外，用于本申請的術語(C2-C4)低級烯基為乙烯基、丙烯基，異丙烯基，丁烯基，異丁烯基等等。
用于本申請中的R3表示的取代基，可以在苯環2-6位任何一個位置上，或者是在1，2，3，4-四氫萘基環5-8位上，環上可有至多三種獨立的取代基，這些取代基不包括氫。
通常，本發明的化合物可以通過下述反應路線I和反應路線II詳細描述的步驟合成。
反應路線I 恰當的烷基取代的起始化合物1，6-氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮，其中R1和R2的定義同上。
6-氨基-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮懸浮在20％的醋酸水溶液中，分次加入亞硝酸鈉水溶液(1.5當量)，同時加入濃鹽酸保持溶液呈中等程度的酸性。懸浮液攪拌數小時。然后過濾，濾液用水洗，真空干燥，得到一個紫色的烷基取代的6-氨基-5-亞硝基-2，4-(1H，3H)-嘧啶二酮(2)。
然后將烷基取代的6-氨基-5-亞硝基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮懸浮在水中，用50％氫氧化銨調至強堿性(pH≈11)，加過量的連二亞硫酸鈉使紫色消褪。然后，反應液用氯仿萃取。合并有機相萃取液，用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。殘留物用閃式層折法純化(5％到10％甲醇氯仿溶液洗脫)。所得到的產物用10％異丙醇/己烷重結晶得到烷基取代的5，6-二氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(3)。見J.W.Daly，J.Med.Chem.，28，487，1985。
從反應路線I路線合成的化合物3按照反應路線II表示的路線反應。所有取代基按前所述定義。
反應路線II
R1′and R2′＝(C2-C4)低級烷基在反應路線II路線中，步驟A是將烷基取代的5，6-二氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(3)與結構(3a)所定義的適當取代的酸在本領域己知的條件下進行酰胺化反應，得到一個適當的結構式(4)描述的取代酰胺。
例如，一個適當的取代的酸(3a)溶解在合適的有機溶劑中，如溶解在四氫呋喃中。適當的取代酸的例子是3-苯基丁酸，1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸以及反式-2-苯基環戊羧酸。將一個當量的N-甲基嗎啉加入到上面的溶液中，然后冷至-20℃。加入一個當量的氯甲酸異丁酯，反應混合物攪拌大約20分鐘。將一個當量的烷基取代的5，6-二氨基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(3)溶解在合適的有機溶劑中，如二甲基甲酰胺，得到的溶液加至上面的反應液中，反應在-20℃攪拌大約3小時。然后反應液用適當的有機溶劑，如乙醚，稀釋，分別用飽和的碳酸氫鈉水溶液50或％飽和的氯化鈉水溶液洗，用無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到一個適當的取代酰胺(4)。
在反應路線II路線中，步驟B是在如Pect et al.，J.Med.chem.，33，3127，(1990)所描述的已知的技術條件下，將酰胺(4)進行的環化反應，得到一個適當取代的1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤，如結構(5)所描述。
例如，適當的取代的酰胺(4)溶解在合適的有機溶劑，如乙醇中，溶液用10％-20％的合適的堿溶液，如氫氧化鉀水溶液處理。然后反應液加熱，從40℃-60℃，加熱大約1到6小時。然后將反應液冷卻，用合適的酸如鹽酸酸化。用合適的有機溶劑，如乙醚將粗產品從水溶液中萃取出來。合并的有機相用水洗，飽和的氯化鈉水溶液洗，用無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。另一種做法是把沉淀的粗產品上述酸化的水溶液過濾來分離。殘留物或者收集的沉淀物用眾所周知的技術，如徑向層析方法純化，使用合適的洗脫劑，如乙酸乙酯/己烷混合溶劑洗脫，得到相應取代的1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤(5)。
在反應路線II路線中，任意的步驟C是1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤(5)氫化，其中1，3-二烷基取代基R1和R2是(C2-C4)低級烷烯基，得到相應取代的1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤(6)，其中1，3-二烷基取代基的R1’和R2’是(C2-C4)低級烷基。
例如，將相應取代的1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤(5)，如1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤溶解在適當的有機溶劑，如甲醇中，加入催化劑量的適當氫化催化劑，如鈀碳，反應置于氫氣流下攪拌大約30分鐘到4小時。然后反應用惰性氣體，如氮氣吹掃清洗，過濾，在真空下濃縮，殘留物用眾所周知的技術，如徑向層析法純化，使用適當的洗脫劑，如乙酸乙酯/環己烷，得到相應取代的1，3-二烷基-8-取代的黃嘌呤(6)。
下面列出根據本發明制備的化合物8-(2-苯丙基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮；1，3-二丙基-8-(1，2，3，4-四氫萘-2-基)-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮；以及8-(反式-2-苯基環戊基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮。
選擇性腺苷受體藥物的治療應用。
下表更詳細地說明本發明的選擇性腺苷受體藥物的潛在治療效用。
在心血管，肺和腎系統目標中，通過受體結合研究鑒定的設計化合物可以用體內試驗評價它的功能，體內試驗直接預示人的生理應答。M.Williams，Ann.Rev.pharmacol.Toxicol.，27，31(1987)對嘌呤受體的藥理性質和功能進行了詳細描述。在題為“腺苷受體調節劑的治療目標”這部分中，說明了腺苷激動劑作為抗高血壓藥是有效的，在戒除鴉片成癮的治療中，它是免疫能力的調節劑，是血管緊張肽原酶釋放的調節劑，也是精神抑制和催眠的調節劑。相反，拮抗劑可用作中樞興奮藥，影響肌肉收縮力藥，強心劑，抗應激反應藥，止喘藥以及治療呼吸系統疾病”。由腺苷受體藥物顯示的活性，既強調了它們對于治療的巨大潛在效力，又強調了對特異性藥物的廣泛需要。
腺苷通過作用于細胞表面受體而產生多種生物作用。這些腺苷受體有兩種類型A-1和A-2。A-1受體按動作特征定義為幾個N6-取代的腺苷類似物對其有作用的那些受體，如R-苯基異丙基腺苷(R-PIA)和環腺苷(CHA)比2-氯腺苷和N-5’-乙酰胺腺苷(NECA)更有效。在A-2受體上藥物的效力順序是NECA＞2-氯腺苷＞R-PIA＞CHA。
如上表所說明的，腺苷受體支配多種生理功能。已定義了兩類主要的腺苷受體。A-1腺苷受體抑制腺苷酸環化酶，A-2腺苷受體激動腺苷酸環化酶。A-1受體比A-2受體對于腺苷和腺苷類似物具有更高的親和力。腺苷和腺苷類似物的生理作用被下面的事實復雜化了，即非選擇性的腺苷受體藥物首先結合到幾乎無處不在的低親和力的A-2受體上，然后，當劑量增加時，它就令結合到高親和力的A-2受體上，最后，當劑量比較大時，它就結合到非常高的親和力的A-1腺苷受體上，見J.W.Daly，et al.，Subclasses ofAdenosine Receptors in the Central Nervous SystemInteraction withCaffeine and Related Methylxanthines，Cellular and Molecular Neuro-biology，3(1)，69-80(1983)。
通常，腺苷的生理作用既可以通過刺激腺苷酸環化酶，也可以通過抑制腺苷酸環化酶來介導。腺苷酸環化酶活化會增加細胞內CAMP的濃度，一般說來，CAMP被認為是細胞內的第二信使。因此，可以在培養細胞系時，通過測定使CAMP增加的能力，或者通過測定拮抗CAMP增加的能力來測量腺苷類似物的作用。這里提到的兩種重要的細胞系是VA13(WI-38VA132RA)，SV-40轉變的WI38人胎兒的肺成纖維細胞。已經知道它們傳送腺苷受體A-2亞型和脂肪細胞，已經知道后者傳送腺苷受體的A-1亞型，見R.F.Bruns，Adenosine Antagonism by purines，pteridines and Ben-zopteridines in Human Fibroblasts，Chemical Pharmacology，30，325-33，(1981)。
眾所周知，在體外研究中，羧酸的同類物8-苯基-1，3-二丙基黃嘌呤(XCC)是非選擇性的腺苷受體藥，它對腦膜中的A-1受體的Ki為58±3nM，與腦切片試樣中A-2受體結合的Ki為34±13nM。另一方面，8-苯基-1，3-二丙基一黃嘌呤的氨基同類物(XAC)對A-1腺苷受體(Ki為1.2±0.5nM)的親和力比其對腦切片中A-2受體的親和力(Ki為49±17nM)高40倍。另外，在腺苷類似物的拮抗作用中，XAC對心率的作用比對血壓的作用要強得多，因為普遍知道腺苷類似物誘導的對心臟的作用似乎是通過A-1受體介導的，而腺苷類似物誘導的對血壓的作用是通過A-2受體介導的，在體內條件下XAC的選擇性表明腺苷受體在體外的活性與腺苷受體在體內的活性有關，這種選擇性的結果可以區別專屬性的生理作用，見B.B.Fredholm，K.A.Jacobsen，B.Jonzon，K.L.Kirk，Y.O.Li，and J.W.Daly，Evidence That a Novel 8-phenyl-Substituted Xanthine Derivative is a Cardioselective Adenosine Recep-tor Antagonist In Vivo，Journal of cardiovascular pharmacology，9，396-400，(1987)，另見K.A.Jacobsen，K.L.Kirk，J.W.Daly，B.Jonzon，Y.O.Li，and B.B.Fredholm，Novel 8-phenyl-SubstitutedXanthine Derivative Is Selective Antagonist At Adenosine Receptors InVivo，Acta physiol.Scand.，341-42，(1985)。
也已經知道，腺苷引起顯著的血壓降低，血壓降低可能是依賴于A-2受體介導的外周阻力的減小。腺苷類似物也能降低心率，這個作用可能是通過腺苷受體A-1亞型介導。
因此，非常明顯，服用本發明的對腺苷受體具有選擇性作用的腺苷類似物將會導致選擇性地與A-2或者與A-1受體結合，這將分別導致或者降低血壓，或者減慢心率，例如，在體內分離了這兩種生理作用。這種腺苷受體選擇性藥物的選擇性可以用下述進一步描述的方法測定。測定對于腦腺苷A-2受體親和力的實驗下面描述的實驗用于測定被測化合物與配基[3H]5’-N-乙基-酰胺腺苷(NECA)對于從動物腦膜中制備的腺苷A-2受體競爭的能力，見R.R.Bruns，G.H.Lu，and T.A.Pugsley，Characteriza-tion of the A-2 Adenosine Receptor Labeled by[3H]NECA in RatStriatal Membranes，Mol.pharmacol.，29，331-346，(1986)。年輕的雄性大鼠(C-0種)(來自于charles河)斷頭處死，取腦。從鼠腦紋狀體中分離出用作配基結合的膜。該組織在20倍體積冰冷的50mMTris-Hel緩沖液(pH7.7)用polytron(放在6-20秒)制備勻漿攪勻，勻漿液在4℃，50,000×g離心10分鐘。小丸在polytron中用20倍體積的微沖液再一次制勻漿，并再如上所述離心一次。最后，將小丸懸浮在40倍50mM Tris-Hel(pH7.7)每克原物濕重組織中。
孵育管分成三分，都分別裝100μl的[3H]NECA(分析中用94nM)，100μl 1μM環己基腺苷(CHA)，100μl 100μM MgCl2，100μl的1IU/ml的腺苷脫氨酶，100μl用分析緩沖液(50mM Tris-hel，pH7.7)稀釋的10-10M—10-4M范圍內各種濃度的被測化合物和0.2μl的膜懸浮液(5mg濕重)，最后加50mM Tris-hel，pH7.7緩沖液至總體積為1ml。在25℃孵化60分鐘。每個管都分別用真空泵通過GF/B玻璃纖維濾器過濾，濾器用5ml冰-冷緩沖液清洗兩次。濾器上的腦膜轉移至閃爍小瓶中，往小瓶中加入8ml5％protsol的雙(鄰-甲基苯乙烯)苯。濾器用液閃儀計數。
在100μM2-氯腺苷的存在下超過空白運行的那部分定為[3H]NECA的特異性結合。膜結合的總放射活性大約是加到試管中的放射活性的2.5％。因為這個條件限制了總結合小于10％的放射活性，因而在測定結合率的過程中，游離配基的濃度不發生明顯改變。與膜的特異性結合大約是總結合的50％。膜懸浮液的蛋白含量可用下述辦法測定。見O.H.Lowry，N.J.Rosebrough，A.L.Farr and R.J.Rardall，Protein Measurements With Folin Phenol Reagent，J.Biol.chem.，193，265-275(1951)。
用被測化合物取代結合的[3H]NECA的15％或更多表明是與腺苷A-2作用點的親和。引起抑制50％配基結合的被側化合物的摩爾濃度是IC50，這個值在100-1000nM范圍內表示是一個高效力的化合物。
測定對于腦腺苷A-1受體結合部位親和力的實驗下面描述的實驗用于測定被測化合物與配基[3H]環腺苷競爭對鼠腦膜中制備的A-1腺苷受體的親和能力。雄性Sprague-Daw-ley大鼠斷頭處死，從整個動物腦中分離出膜。見R.Goodman，M.Cooper，M.Gavish，and S.Synder，Guanine Nucleotide and CationRegulation of the Binding of[3H]Diethylphenylxanthine to AdenosineA-1 Receptor in Brain Membrance，molecular pharmacology，21，329-335，(1982)。
分離到的膜用25倍體積的冰冷的50mM Tris-Hel緩沖液(pH7.7)均漿化(用polytron置在7至10秒鐘)。均漿在4℃離心10分鐘(19,000rpm)。用每毫升合2IU腺苷脫氨酶的25倍緩沖液再懸浮小丸以便洗滌，并在37℃培育30分鐘，勻漿再離心，最后，小丸再次懸浮在25倍體積的冰冷緩沖液中。
培育管分成三份，分別接收100μl的[3H]環己基腺苷在該分析中為0.8nM，200μl的用50nM Tris-Hel緩沖液(pH7.7)稀釋的10-10M至10-6M的各種濃度的被測化合物，0.2ml的膜懸浮液(8mg濕重)，最后加Tris緩沖液至總體積為2ml。25℃培育2小時，每一個管在減壓下于10秒種內通過GF/B玻璃纖維濾器終止培育，濾器上的膜轉移至閃爍小瓶中，濾器用液閃儀計數(在8ml含5％Protosal的雙(鄰-甲基苯乙烯)苯。
在10-5M的2-氯腺苷的存在下測得的超過空白的那部分即為[3H]環腺苷的特異性結合，膜結合的總放射活性大約是加到試管中放射活性的5％。對膜的特異性結合大約是總結合的90％。膜懸浮液中的蛋白含量可以用Lowry，et al.，Id.，265的方法測定。
被測化合物取代15％或更多結合的[3H]環己基腺苷顯示其對腺苷結合部位的親和力。用上述描述的實驗方法得到的腺苷受體結合親和力值下面是一個說明腺苷受體對于幾種化合物結合親和力的表。
腺苷受體結合親和力A1KiA2KiA2/A18-(2-苯基丙基)-1， 94.3nm1740nm183-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮1，3-二丙基-8-(1， 94.6nm10300nm1082，3，4-四氫萘-2-基)-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮8-(反式-2-苯基環戊 164.3nm2720nm10基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮三磷酸鳥苷(GTP)對于激動劑和拮抗劑結合到不同的神經遞質受體已經顯示了不同程度的影響。通常，在不伴有降低拮抗劑親和力的情況下，鳥嘌呤核苷降低激動劑對受體的親和力。因此，GTP顯示降低激動劑效應的能力而不降低作為抑制劑的腺苷拮抗劑[3H]3-二乙基-8-苯基黃嘌呤的桔抗作用。通常，GPT強烈減弱嘌呤激動劑的作用，而不減弱作為抑制劑的[3H]-苯基異丙基腺苷結合的拮抗作用，因此GTP是一個能夠區別激動劑和拮抗劑的有效試劑，見L.P.Davies，S.C.chow，J.H.Skerritt，D.J.Brownand G.A.R.Johnston，Pyrazolo[3，4-d]Pyrimidines as AdenosineAntagonists，Life Sciences，34，2117-28，(1984)。腺苷受體試劑的藥物制劑優選的給藥途徑是口服。對于口服，本發明的化合物可以制成固體或液體制劑，例如膠囊，丸劑，片劑，含錠，錠劑，觸熔劑，粉末，溶液，懸浮劑，或乳化劑。固體單元劑型可以是普通明膠的硬殼膠囊或軟殼膠囊，其中含有例如，表面活性劑，潤滑劑，隋性填料如乳糖，蔗糖，磷酸鈣和玉米淀粉。另一方面包含的本發明的化合物可以用常規基質做成片劑，基質有例如乳糖，蔗糖和玉米淀粉，并與粘合劑如阿拉伯膠，玉米淀粉，或明膠合用；使用崩解劑是為了幫助片劑在服用后崩解和溶解，常用的崩解劑有土豆淀粉，藻酸，玉米淀粉和瓜耳樹膠；使用潤滑劑是為了改善片劑顆粒的流動性，防止片劑物料粘連到壓片機的沖模和沖頭上，滑劑的例子有滑石粉，硬脂酸，硬脂酸鎂，硬脂酸鈣或硬脂酸鋅；還使用染料，著色劑和香味劑以便擴展片劑的美學性質，便它們更容易被病人接受。在口服液體劑型使用的適當的賦形劑包括稀釋劑如水和醇，如乙醇，芐醇和聚乙烯醇，可以加入也可以不加藥用的表面活性劑，懸浮劑或者乳化劑。
本發明的化合物也可以非腸道給藥，即皮下注射，靜脈給藥，肌肉注射或腹膜下給藥，本發明的化合物作為可以以注射的劑型給藥時用生理可以接受的可以藥用的載體，這類載體可以是無菌的液體或液體混合物，如水，生理鹽水，葡萄糖水溶液以及有關的糖溶液，醇類，如乙醇，異內醇，十六烷基醇，二醇類；如丙二醇，或聚乙二醇，甘油縮酮，如2，2-二甲基-1，3-二氧戊環-4-甲醇，醚類，如聚(乙二醇)400，油類，脂肪酸，酯肪酸酯或甘油酯或酰化的脂肪酸甘油酯，含有或不含外加的可以藥用的表面活性劑，如肥皂，或洗滌劑；懸浮劑如果膠，Carbomers，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素或羧甲基纖維素，或乳化劑以及其它的藥用輔料。本發明的可以用于非腸道方式給藥作為例證的油有，如石油，動物油，植物油，或合成來源的油，如花生油，大豆油，芝麻油，棉花種子油，玉米油，橄欖油，凡士林，以及礦物油。適合的脂肪酸包括油酸、硬脂酸和異硬脂酸。合適的脂肪酸酯有油酸乙酯，肉豆蔻酸異丙酯，合適的肥皂包括脂肪酸堿金屬鹽，銨鹽和三乙醇胺鹽，適合的洗滌劑包括陽離子洗滌劑，如鹵化二甲基二烷基銨，鹵化烷基吡啶；陰離子洗滌劑如磺酸烷基酯，磺酸芳基酯以及磺酸連烯酯，烷基鏈烯醚，硫酸甘油單酯和琥珀酸磺基酯，非離子洗滌劑有如氧化脂肪胺，脂肪酸鏈烷醇酰胺，以及聚氧乙烯基聚丙烯共聚物；兩性的洗滌劑有如，-β-氨基丙酸烷基酯，2-烷基酯，2-烷基咪唑啉季銨鹽，也可能是混合物。另外本發明的化合物可選擇用氣霧劑的方式服用使直接進入鼻腔，氣霧劑中含有合適的載體，或用本發明的化合物的溶液作為滴劑服用，使用適合的溶劑，可使直接進入鼻腔。
本發明的非腸道組合物典型地在溶液中含有大約0.5至25％重量的活性成份。用防腐劑和緩沖液是有利的。為了減小或消除注射部位的疼痛，這類組合物中可含有非離子表面活性劑，該表面活性劑具有大約從12至17的親水親油平衡(HLB)值。在這一劑型中，表面活性劑的量大約是5％至15％(重量百分數)，表面活性劑可以是具有上述的HLB值的單一成分，也可以是具有已經描述的期待的HLB值的兩種或多種組分的混合物。用于非腸道制劑的例證性的表面活性劑是聚乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯類，例如，單油酸脫脫水山梨醇酯以及高分子量的以及環氧乙烷與疏水堿的高分子量加合物和將環氧丙烷與丙二醇縮合劑得到的加合物。
使用的一種化合物或多種化合物的確切量，即一種或多種目標化合物的足以產生療效的量取決于多種因素，例如使用的化合物，給藥方式；動物的大小，年齡以及種類，給藥的途徑，給藥時間和頻率，以及期待的生理作用。在特殊情況下，服用的量可以在常規范圍內查找而確定。
化合物最好以組合物的形式給藥，該組合物中本發明的化合物與藥用載體混合成制劑服用，使用的載體對于活性化合物來說是化學隋性的載體，并且這些載體在使用的條件下沒有有害的付作用或毒性。在這類組合物中每毫升載體可含0.1μg或500mg以下的活性化合物至99％(重量比)活性化合物及可以藥用的載體。
化合物也可能摻入到任何隋性載體中，以便根據文獻中心已知方法用于常規血清分析，血液水平分析及尿水平分析情況等。
組合物可以是固體劑型，如片劑，膠囊，顆粒劑，飼料混合物，飼料添加劑和濃縮物，粉劑，顆粒或類似劑型；也有液體形式，如可注射的無菌懸浮液，口服的懸浮液或溶液。可藥用的載體可以包括賦形劑，如表面活性分散劑，懸浮劑，片劑的粘合劑，潤滑劑，香味劑以及著色劑。本發明適合的賦形劑可以在例如教科書中找到，見于Remington’s pharmaceutical Manufucturing，13Ed，Mach Pub-lishing Co.，Easton，Pennsylnaria(1965)。
下面的實施例代表了圖I和圖II描述的化合物的典型合成，這些例子僅僅是例證性的，而不是為了以任何方式限制本發明。使用的試劑和原料容易按常規技術制備。用于下述實施例中下列一系列術語的意義是“eq”為當量，“g”為克，“mg”為毫克，“mmol”為毫摩爾，“ml”為毫升，“℃”為攝氏度，“TLC”為薄層層析，“Rf”為保留因子，“δ”為以四甲基硅烷為內標的百萬分之幾。
實施例1
8-(2-苯基丙基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮的制備。
1，3-二正丙基-6-氨基尿嘧啶(30g)懸浮在有40ml的20％醋酸水溶液的1L水中，充分攪拌。將亞硝酸鈉(9.03g)溶在41ml水中，并分次加至上述溶液中，用12ml的濃鹽酸保持溶液的酸性。出現紫色沉淀。加料應在10分鐘內完成，懸浮液攪拌2小時。然后將溶液過濾，濾液用水洗、在真空中干燥得到46gl，3-二正丙基-5-亞硝基-6-氨基尿嘧啶。
1，3-二正丙基-5-亞硝基-6-氨基尿嘧啶(61.6g)懸浮于1L水中，該懸浮液加50％氫氧化銨調pH至11，并用100g連二硫酸鈉處理，連二硫酸鈉分次加入，直到紫色褪去。水溶液混合物用氯仿(8×200ml)萃取，加無水硫酸鎂干燥，過渡，濃縮。殘留物用閃式硅膠柱層析純化(5/10％甲醇/氯仿洗脫)，先用10％異丙醇的己烷溶液重結晶，再用10％異丙醇重結晶，得到37.29gl，3-二正丙基-5-6-二氨基尿嘧啶，m.p，127-128℃。
將3-苯丁酸(1.0g，6.1mmol)溶解在四氫呋喃(20ml)中，用N-甲基嗎啉(0.67ml，6.1mmol)處理，并冷至-20℃。加入氯甲酸異丁酯(0.79ml，6.1mmol)，攪拌20分鐘。然后加入1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶(1.4g，6.1mmol，溶解在5ml二甲基甲酰胺中)，攪拌，在-20℃反應3小時。加入400ml乙醚稀釋反應液，并分離乙醚層。有機層用飽和的碳酸氫鈉水溶液(200ml)，50％氯化鈉水溶液(2×200ml)洗，加無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮，得到N-(2-氨基-4，6-二氧代-3，5-二丙基環己-1-烯基)-3-苯基丁酰胺(2.23g)。
將N-(2-氨基-4，6-二氧代-3，5-二丙基-環己-1-烯基)-3-苯基丁酰胺(2.23g，6.2mmol)溶解在乙醇中(100ml)，加入100ml15％氫氧化鉀溶液，加熱至60℃反應3小時。冷卻后反應液加入22ml濃鹽酸酸化。用500ml乙醚萃取反應液。分別用水(200ml)，飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗滌有機相，加無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。用10％乙醚/己烷混合溶液研磨殘留物。收集固體，用徑向層析方法(50％乙酸乙酯/己烷，4mm板)純化，得到180mg標題化合物，m.p.136-137℃。
元素分析C20H26N4O2理論值C67.77；H7.39；N15.81。
實測值C67.66；H7.39；N15.74。
實施例2
1，3-二丙基-8-(1，2，3，4-四氫萘-2-基)-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮的制備，將1，2，3，4-四氫-2-萘甲酸(1.0g，5.67mmol)溶解在40ml四氫呋喃中。加入N-甲基嗎啉(0.62ml，5.67mmol)，冷至-20℃。加入氯甲酸異丁酯(0.73ml，5.67mmol)攪拌25分鐘。然后加入1，3-二正丙基-5，6-二氨基尿嘧啶(1.28g，5，67mmol)，溶解在5ml二甲基甲酰胺中)，反應液在-20℃攪拌5小時。反應液回溫至室溫，加入300ml乙醚稀釋。分離乙醚層，用200ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗，飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗，加入無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。殘留物用徑向層析法(2％至4％至6％甲醇/氯信洗脫，4mm板)純化，得以1，2，3，4-四氫萘-2-甲酸(2-氨基-4，6-二氧代-3，5-二丙基環己-1-烯基)酰胺(2.0g)，為泡泡糖狀。
將1，2，3，4-四氫萘-2-甲酸(2-氨基-4，6-二氧代-3，5-二丙基環己-1-烯基)酰胺(2.0g，5.2mmol)溶解在乙醇(50ml)中，加入50ml15％的氫氧化鉀溶液，加熱至70℃反應4小時。冷至0℃后，反應液加濃鹽酸(13ml)酸化。加水(100ml)，用抽濾法收集沉淀物。白色固體用閃式層析法(50％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，用5％乙醚/己烷研磨，在真空下干燥(120℃，3分鐘)，得到標題化合物(1.04g)，m.p.202-204℃。
元素分析C21H26N4O2理論值C68.83；H7.15；N15.29。
實測值C68.72；H7.11；N15.30。
實施例3 8-(反式-2-苯基環戊基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮的制備1，3-二烯丙基-6-氨基尿嘧啶(5g)懸浮在400ml水中置于一個1升園底燒瓶中徹底攪拌。加入醋酸(6.7ml的26％溶液)，接著以間歇方式加入2ml濃鹽酸和亞硝酸鈉溶液(1.53g溶解在7ml水中)。4小時后，該溶液過濾，用水洗滌，收集樣品并置于真空爐中在80℃干燥20小時，得4.54g的1，3-二烯丙基-5-亞硝基-6-氨基尿嘧啶，為紫色固體，m.p.170-180℃(87％收率)。
將1，3-二烯丙基-5-亞硝基-6-氨基尿嘧啶(4.5g)懸浮在150ml的乙酸乙酯中，加入連二硫酸鈉(23.6g連二硫酸鈉溶解在64ml水中)處理。1小時后分層，水相用乙酸乙酯(4×100ml)萃取。合并有機萃取液，加無水硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，殘留物用閃式層析法(10％甲醇的氯仿溶液洗脫)純化，得到4.4j1，3-二丙烯基-5，6-二氨基尿嘧啶。
反式-2-苯基-環己酸(1.0g，5.3mmol)(根據F.G.Bordwelland J.Almy，J.Org.chem.，38，571(1973)的方法制備)溶解在四氫呋喃(20ml)中，加N-甲基嗎啉(0.58ml，5.3mmol)。反應液冷至-20℃，加入氯甲酸異丁酯(0.69ml，5.3mmol)。反應液攪拌30分鐘，加入1，3-二烯丙基-5，6-二氨基尿嘧啶(1.2g，5.3mmol，溶解在4ml二甲基甲酰胺)，在-20℃攪拌3小時。回溫至室溫，加400ml乙醚稀釋反應液。分層，有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×200ml)洗，50％氯化鈉水溶液(2×300ml)洗，加無水硫酸鎂干燥，過濾；減壓濃縮。殘留物用徑向層析法(2％至5％甲醇/氯仿洗脫，2mm板)純化得到反式-2-苯基-環己酸(3，5-二烯丙基-2-氨基-4，6-二氧代-環己-1-烯基)酰胺(0.51g)。
反式-2-苯基環己酸(3，5-二烯丙基-2-氨基-4，6-二氧代-環己-1-烯基)酰胺(300mg，0.76mmol)溶解在100ml乙醇中，加100ml10％氫氧化鉀，反應加熱至60℃反應4小時。冷卻反應液，加200ml水稀釋。反應液，加濃鹽酸酸化，加400ml乙醚萃取。用200ml水，200ml飽和氯化鈉溶液洗滌有機萃取相，加無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓濃縮。殘留物用徑向層析法(40％至50％乙酸乙酯/己烷洗脫，2mm板)純化，得到5，7-二烯丙基-2-(2-苯基環戊基)-1，7-二氫苯并咪唑-4，6-二酮(149mg)。
5，7-二烯丙基-2-(2-苯基環戊基)-1，7-二氫苯并咪唑-4，6-二酮(139mg，0.37mmol)溶解在20ml甲醇中。加入催化劑量的10％鈀/碳，攪拌并通氫氣。45分鐘后完成氫化反應，用氮氣吹洗反應液，通過硅藻土過濾。減壓濃縮濾液，殘留物用徑向層析法(40％至50％乙酸乙酯/己烷洗脫)純化，得到標題化合物(98mg)，m.p.152-153℃。
元素分析C22H28N4O2理論值C69.45；H7.42；N14.72。
實測值C69.36；H7.56；N14.63。
權利要求
1.具有下面結構的化合物 包括(R)和(S)對映異構體以及它們的外消旋混合物，及它們的可以藥用的鹽，其中R1和R2是各自獨立的(C1-C4)低級烷基或(C2-C4)低級烯基，Z是 其中R3是氫，(C1-C3)低級烷基，硝基，氨基，羥基，氟、溴、或氯，R4為(C1-C4)低級烷基，n是1或2。
2.權利要求1的化合物，其為8-(2-苯基丙基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮。
3.權利要求1的化合物，其為1，3-二丙基-8-(1，2，3，4-四氫萘-2-基)-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮。
4.權利要求1的化合物，其為8-(反式-2-苯基環戊基)-1，3-二丙基-3，9-二氫嘌呤-2，6-二酮。
全文摘要
具有通式(I)的黃嘌呤衍生物，包括(R)和(S)對映異構體和它們的外消旋混合物，以及可以藥用的鹽，其中R本發明化合物的藥物制劑可基于這里所披露化合物的選擇性結合活性來制備，該化合物可增強一些生理作用而同時將其它作用降至最小，如在不降低心率下降低血壓。
文檔編號A61K31/52GK1122599SQ94192005
公開日1996年5月15日 申請日期1994年4月13日 優先權日1993年5月6日
發明者N·P·皮特, N·L·蘭茲 申請人:默里爾多藥物公司