預防和治療癌性疾病的藥物組合物及其制備方法

專利名稱：預防和治療癌性疾病的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及預防和治療癌性疾病的藥物組合物及其制備方法。
在癌癥治療中最常用的方法是外科手術、照射療法和化學療法[The Pharmacological Basis of Therapeutics，PergamonPress，Inc.，New York，pp.1202-1263(1990)；Harrison’sPrinciples of Internal Medicine，12th ed.，InternationalEdition，McGraw-Hill，Inc.，New York，Vol.2，pp.1587-1599(1991)；Scientific American Medicine，ScientificAmerican，Inc.，New York，Vol.2，12(V)，pp.1-14(1984)]。在照射療法中，除了廣泛使用離子療法外，光線療法和局部高溫療法與照射療法和化學療法結合用于一些特殊情況例如皮膚癌。在化學療法的用藥中，按其作用、來源和結構分類，也可以使用烷基化劑，植物生物堿、抗菌素、抗代謝物，其它藥物(如天冬酰胺酶)以及常用的各種激素。在化學療法中最新應用的對策如下結合化學療法；為減少毒性長期少劑量靜脈或動脈輸注化學療法的藥物；為克服藥物抗性的高劑量化學療法以及這種療法與自身骨髓移植結合；化學療法藥物與生物應答調節劑結合；大量使用佐劑和新佐劑的化學療法。最常用的生物應答調節劑是干擾素、腫瘤壞死因子、淋巴因子如白細胞介素-2以及單克隆抗體。各種飲食療法，稍經處理的血清制劑和運用心理作用的Simonton方法也是目前用于治療腫瘤疾病的方法，但其效果沒有證實。
在上面參考文獻中詳述的目前所用的方法的最顯著缺點是毒性、顯著的副作用、低的腫瘤特異性、產生抗藥性和局限的有效范圍。用于癌癥治療的大多數細胞毒性藥物不能區別形成腫瘤的細胞和正常的增生細胞；因此，為了避免對重要的宿主組織(例如骨髓、腸)的任何不可逆損傷，藥物必須以通常證明不足以殺死所有存在的形成腫瘤的細胞的劑量給藥[Pharmac Ther.，49，43-54(1991)]。照射療法可引起放射損傷而且同時對缺氧細胞和某些類型的腫瘤無效。在化學療法中所用的藥物也具有各種毒副作用。它們可損害中樞神經系統、造血器官、胃和腸的粘膜以及所有的增生細胞。另外它們還可損害肝、腎、肺和心肌。幾乎所有有效的抗腫瘤劑都是免疫抑制劑[Proc.Roy.Soc.Med.，63，1063-1066(1970)]。它們中的大多數具有致畸或致癌作用，有時它們可能引起不育癥或增加腫瘤復發的頻率。通過化學療法對60-70％腫瘤產生影響是非常困難的或者是不可能的，而且在治療中還會產生抗藥性或交叉抗藥性。
令人遺憾地，利用生物體的自身防御機制使用生物應答調節劑治療具有同樣的缺點，因為現已發現它們僅對一些類型的腫瘤有效并且也具有毒副作用[Harrison’s Principles of InternalMedicine，12th ed.，International Edition，McGraw-Hill，Inc.，New York，Vol.2，pp.1587-1599(1991)]。干擾素也有許多嚴重的副作用，其中包括例如心臟中毒[Chest，99，557-561(1991)]。同樣使用單克隆抗體的希望也沒有實現[Eur.J.Cancer，27，936-939(1991)]。盡管自1980年以來已完成了四百多登記的免疫療法的臨床試驗，但至今還沒有一種方法被引入治療任何一種類型的癌癥[J.R.Soc.Med.，84,321(1991)]。
PCT公開號WO86/025555涉及用于治療癌性疾病的藥物，它包括L-半胱氨酸、L-甲硫氨酸、L-組氨酸、L-苯丙氨酸、L-賴氨酸、L-色氨酸、L-纈氨酸、L-亮氨酸、L-蘇氨酸、L-蘋果酸和L-抗壞血酸。L-蘋果酸和L-抗壞血酸作為活化劑緩沖并穩定氨基酸的酸形式，因此它們在低于6.8的酸度范圍內使血液的pH值發生變化。在此公開文獻中，沒有證明惡性腫瘤生長停止或甚至被抑制的數據。
公開的日本專利申請號62-135421涉及含有除L-異亮氨酸之外的特定氨基酸的氨基酸輸液，它表現出能抑制腫瘤繁殖的作用。該制劑的可能的但未被證實的作用是建立在一種氨基酸如異亮氨酸的缺乏之上。
本發明的目的是制備含有天然物質的藥物組合物，它消除了用于腫瘤治療的已知組合物和方法的缺點如毒性、低特異性和局限的有效范圍。
本發明是建立在對不同生物體中腫瘤細胞的被動防御系統[下文稱為被動抗腫瘤防御系統(PADS)]的認識上。該系統能破壞產生的和已經存在的腫瘤細胞。參與PADS的物質是存在于循環系統中的內源的和外源的天然物質，即氨基酸、維生素、核堿、糖類以及細胞代謝產物。已經認識到一起使用這些物質中的至少三種(這些物質是循環系統中的成份并且因此可達到和進入所有細胞)能協同增加彼此的作用，因此能夠破壞腫瘤細胞。
本發明進一步建立在對由于協同作用而使正常細胞和腫瘤細胞參與PADS行為具有顯著的不同性質從而這兩種細胞能區分開來的認識上。盡管因為腫瘤細胞與正常細胞外部不同，經典的免疫系統能識別并選擇性地破壞腫瘤細胞，但由于其內部不同，新識別的被動抗腫瘤防御機理同樣能做到。
本發明進一步建立在對由于循環系統中其成份濃度增加到對腫瘤細胞供應過度的程度，上述成份選擇性地引起癌細胞中致命的代謝壓力的認識上。
本發明最后是建立在根據所用劑量和施用途徑對不同腫瘤細胞可達到的預防或抗腫瘤作用的認識上。對于以不同程度不同于正常細胞的各種類型的腫瘤，最有效的混合物的成份的性質和用量可以用協同作用作為標準來確定。
基于上述認識，本發明涉及預防和治療癌性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包括至少三種存在于循環系統中的活性化合物至少一種氨基酸，至少一種維生素以及至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物，其條件是如果組合物除含有氨基酸外僅含蘋果酸和一種維生素，那么維生素不是抗壞血酸。該組合物還包括藥學中常用的載體、稀釋劑和/或其它助劑。
本發明的組合物可包括L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽作為氨基酸和d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5＇-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸、乳清酸和/或其鹽作為維生素。
本發明的優選組合物包括L-色氨酸、L-抗壞血酸，至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-葡糖胺和/或其可藥用鹽的化合物。
本發明的另一優選組合物包括L-精氨酸、核黃素-5＇-磷酸、至少一種選自D-甘露糖、蘋果酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物。
本發明的另一優選組合物包括30-44％(質量)的L-精氨酸、27-35％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、38-62％(質量)的蘋果酸和/或其可藥用鹽。
本發明的另一優選組合物包括0.002-70％(質量)的至少一種選自L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽的化合物作為氨基酸，0.0004-80％(質量)的至少一種選自d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5＇-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸、乳清酸和/或其鹽的化合物作為維生素以及0.003-80％(質量)的至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物。
本發明的另一優選組合物包括0.9-25％(質量)的L-甲硫氨酸、0.8-19％(質量)的L-色氨酸、1.1-48％(質量)的L-精氨酸、0.9-46％(質量)的d-生物素、1.2-16％(質量)的吡哆素、0.03-42％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.05-18％(質量)的D-葡糖胺、0.5-60％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.7-68％(質量)的蘋果酸、0.6-40％(質量)的D-甘露糖和/或其可藥用鹽。
本發明的一種非常有效的組合物包括0.005-34％(質量)的L-甲硫氨酸、0.002-25％(質量)的L-色氨酸、0.02-23％(質量)的L-酪氨酸、0.04-30％(質量)的L-苯丙氨酸、0.04-50％(質量)的L-精氨酸、0.03-34％(質量)的L-組氨酸、0.05-22％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、0.01-60％(質量)的d-生物素、0.01-20％(質量)的吡哆素、0.0004-45％(質量)的核黃素、0.0005-45％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.003-70％(質量)的L-抗壞血酸、0.004-15％(質量)的硫辛酸、0.01-17％(質量)的乳清酸、0.001-10％(質量)的腺嘌呤、0.01-63％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.08-42％(質量)的D-甘露糖、0.05-20％(質量)的D-葡糖胺、0.01-80％(質量)的蘋果酸、0.02-60％(質量)的草乙酸、0.001-10％(質量)的三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽。
本發明的另一目的是制備上述組合物的方法，該方法包括使存在于循環系統中的活性化合物中的至少一種氨基酸，至少一種維生素以及至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。藥學上常用的載體、稀釋劑和/或其他助劑也可以以補充組合物的質量至100％所必需的量與活性組合物混合。
本發明方法的優選實施方案包括將L-色氨酸、L-抗壞血酸、至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-葡糖胺和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
本發明方法的另一優選實施方案包括將L-精氨酸、核黃素-5＇-磷酸、至少一種選自D-甘露糖、蘋果酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
本發明方法的另一優選實施方案包括將30-44％(質量)的L-精氨酸、27-35％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、38-62％(質量)的蘋果酸和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
本發明方法的另一優選實施方案包括將0.002-70％(質量)的至少一種選自L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽的化合物作為氨基酸，0.0004-80％(質量)的至少一種選自d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5＇-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸、乳清酸和/或其鹽的化合物作為維生素和0.003-80％(質量)的至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
本發明方法的另一優選實施方案包括將0.9-25％(質量)的L-甲硫氨酸、0.8-19％(質量)的L-色氨酸、1.1-48％(質量)的L-精氨酸、0.9-46％(質量)的d-生物素、1.2-16％(質量)的吡哆素、0.03-42％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.05-18％(質量)的D-葡糖胺、0.5-60％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.7-68％(質量)的蘋果酸、0.6-40％(質量)的D-甘露糖和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
本發明方法的高度優選的實施方案包括將0.005-34％(質量)的L-甲硫氨酸、0.002-25％(質量)的L-色氨酸、0.02-23％(質量)的L-酪氨酸、0.04-30％(質量)的L-苯丙氨酸、0.04-50％(質量)的L-精氨酸、0.03-34％(質量)的L-組氨酸、0.05-22％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、0.01-60％(質量)的d-生物素、0.01-20％(質量)的吡哆素、0.0004-45％(質量)的核黃素、0.0005-45％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.003-70％(質量)的L-抗壞血酸、0.004-15％(質量)的硫辛酸、0.01-17％(質量)的乳清酸、0.001-10％(質量)的腺嘌呤、0.01-63％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.08-42％(質量)的D-甘露糖、0.05-20％(質量)的D-葡糖胺、0.01-80％(質量)的蘋果酸、0.02-60％(質量)的草乙酸、0.001-10％(質量)的三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
為治療使用，本發明的組合物可按下述方法適宜地配制成藥物組合物，即為了經腸或腸胃外給藥將它們與無毒惰性的固體或液體載體、稀釋劑、粘合劑和/或在藥物工業中常用的其它添加劑混合后，將它們轉化為一種常用的藥物制劑。適合于上述要求的載體、稀釋劑和粘合劑是例如水、明膠、乳糖、蔗糖、淀粉、果膠、硬脂酸、硬脂酸鎂、滑石、各種植物油以及二元醇類如丙二醇或聚乙二醇。藥物添加劑和助劑是例如防腐劑如4-羥基苯甲酸甲酯、各種天然或合成的乳化劑、分散劑、濕潤劑、著色劑、調味劑、緩沖劑以及促進崩解或溶解的試劑、以及提高所需作用的其他物質。
常用的藥物制劑是用上述藥物添加劑制備的口服組合物，這些組合物可以是固體形式如片劑、膠囊劑、粉劑、糖錠劑、丸劑或顆粒劑，或液體形式如糖漿劑、溶液、乳液或懸浮液；另外常用的藥物制劑為直腸給藥組合物如栓劑以及腸胃外給藥組合物如注射液或輸注液。
本發明的組合物的優選日劑量取決于幾種因素，如所治療的疾病的性質、病人的狀況、治療的方法等。優選的日劑量為30-3000mg/kg體重。因此，合適每日給藥1-4個各含有0.2-3g活性組合物的片劑、膠囊或糖錠劑，或0.5-3L含有10-200g/L活性組合物的輸注液。
本發明另外涉及預防和治療癌性疾病的方法，該方法包括給需要治療的患者施用治療有效量的本發明組合物。
用下列表、圖和實施例更詳細地說明本發明。在下列試驗中使用的細胞得自“American Type Culture Collection”(Rockville，MD，USA)。
表1表示分別含有4種和5種活性成份的實施例1-20的組合物的成份對Sp2/0-Ag14骨髓瘤細胞(ATCC CRL 1581)的殺死腫瘤細胞作用和協同作用。
表2表示當加入另外成份時含有5種活性成份的實施例21-37組合物對Sp2/0-Ag14細胞作用的增加。


圖1表示分別含有4種和5種活性成份的實施例1-20組合物的成份的作用和協同作用。
圖2表示含有5種活性成份的實施例102-106組合物和含有21種活性成份的實施例107-111組合物對Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞的體外作用與相應的對比混合物比較。
圖3表示含有21種活性成份的實施例107組合物對Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞的作用(為時間的函數)并與未處理的細胞和合適的對比混合物比較。
圖4表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物對K-562人紅白血病細胞(ATCC CCL 243)的體外作用與相應的對比混合物比較。
圖5表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物對HeLa人上皮樣癌子宮頸細胞(ATCC CCL 2)的體外作用與相應的對比混合物比較。
圖6表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物對HEp-2人表皮樣癌喉細胞(ATCC CCL 23)的體外作用與相應的對比混合物比較。
圖7表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物對正常的Vero African綠猴(green monkey)腎細胞(ATCC CCL 81)的體外作用與相應的對比混合物比較。
圖8表示含有21種活性成份的實施例112組合物對BALB/c小鼠通過腹膜內注射Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞產生的腫瘤的體內作用與相應的對比組比較。
圖9表示含有21種活性成份的實施例112組合物對BALB/c(nu/nu)小鼠皮下注射HeLa人上皮樣癌子宮頸細胞在皮下產生的固體腫瘤的體內作用與相應的對比組比較。
為了試驗使用下列介質對于Sp2/0-Ag14和K-562細胞使用RPMI 1640介質(Sigma Chemie GmbH，D-8024 Deisenhofen，Germany，產品號R6504)，對于HEp-2、HeLa和Vero細胞使用MEM介質(Sigma Chemie GmbH，產品號M4655)。
實施例1-37向裝有攪拌器的裝置中稱量加入表1和2中所示的給定量的活性試劑，然后向所得粉狀混合物中加入表1和2給定量的、為中和酸類成份所必需的碳酸氫鈉。在繼續攪拌下向混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用可參見表1和2以及圖1。
實施例38-67按實施例1-37的方法，不同的是用適量的碳酸氫鉀代替碳酸氫鈉中和酸類成份。按此方法制備的溶液的作用與表1和2以及圖1分別所示的實施例1-37的溶液的作用沒有明顯的不同。
實施例68-97按實施例1-37的方法，不同的是用適量的碳酸鈣代替碳酸氫鈉中和酸類成份。按此方法制備的溶液的作用與表1和2以及圖1分別所示的實施例1-37的溶液的作用沒有明顯的不同。
實施例98-101按實施例23、24、27和28的方法，不同的是用0.053％(質量)的L-精氨酸鹽酸鹽、0.052％(質量)的L-組氨酸鹽酸鹽、0.009％(質量)的L-甲硫氨酸鹽酸鹽和0.025％(質量)的L-酪氨酸鹽酸鹽分別代替實施例23、24、27和28中分別所用的L-精氨酸、L-組氨酸、L-甲硫氨酸和L-酪氨酸。在每種情況下相應的碳酸氫鈉用量為0.054％(質量)。按此方法制備的溶液的作用與表2中所示的實施例23、24、27和28的溶液的作用沒有明顯的不同。
實施例102向裝有攪拌器的裝置中稱量加入0.01％(質量)的L-色氨酸、0.034％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.003％(質量)的腺嘌呤、0.065％(質量)的蘋果酸、0.007％(質量)的L-抗壞血酸和0.091％(質量)的碳酸氫鈉。然后在繼續攪拌下向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2中100％組合物所示。
實施例103按實施例102的方法，不同的是每種成份僅稱量加入80％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2中80％組合物所示。
實施例104按實施例102的方法，不同的是每種成份僅稱量加入60％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2中60％組合物所示。
實施例105按實施例102的方法，不同的是每種成份僅稱量加入40％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2中40％組合物所示。
實施例106按實施例102的方法，不同的是每種成份僅稱量加入20％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2中20％組合物所示。
實施例107向裝有攪拌器的裝置中稱量加入0.011％(質量)的L-甲硫氨酸、0.01％(質量)的L-色氨酸、0.036％(質量)的L-酪氨酸、0.041％(質量)的L-苯丙氨酸、0.044％(質量)的L-精氨酸、0.039％(質量)的L-組氨酸、0.089％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、0.007％(質量)的L-抗壞血酸、0.012％(質量)的d-生物素、0.010％(質量)的吡哆素、0.0004％(質量)的核黃素、0.0006％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.0006％(質量)的硫辛酸、0.017％(質量)的乳清酸、0.003％(質量)的腺嘌呤、0.034％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.090％(質量)的D-甘露糖、0.053％(質量)的D-葡糖胺、0.065％(質量)的蘋果酸、0.040％(質量)的草乙酸、0.0015％(質量)的三磷酸腺苷以及0.087％(質量)的碳酸氫鈉。然后在繼續攪拌下向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2、3、4、5、6和7中100％組合物所示。
實施例108按實施例107的方法，不同的是每種成份僅稱量加入80％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2、3、4、5、6和7中80％組合物所示。
實施例109按實施例107的方法，不同的是每種成份僅稱量加入60％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2、3、4、5、6和7中60％組合物所示。
實施例110按實施例107的方法，不同的是每種成份僅稱量加入40％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2、3、4、5、6和7中40％組合物所示。
實施例111按實施例107的方法，不同的是每種成份僅稱量加入20％量。然后向該混合物中加入合適的介質以便補充組合物的質量至100％。按此方法制備的溶液的作用如圖2、3、4、5、6和7中20％組合物所示。
實施例112向裝有攪拌器的裝置中稱量加入1.47％(質量)的L-甲硫氨酸、1.01％(質量)的L-色氨酸、0.036％(質量)的L-酪氨酸、1.63％(質量)的L-苯丙氨酸、1.71％(質量)的L-精氨酸、1.53％(質量)的L-組氨酸、0.18％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、1.94％(質量)的L-抗壞血酸、1.21％(質量)的d-生物素、2.02％(質量)的吡哆素、0.038％(質量)的核黃素、0.05％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.02％(質量)的硫辛酸、0.09％(質量)的乳清酸、0.068％(質量)的腺嘌呤、1.32％(質量)的2-脫氧-D-核糖、1.8％(質量)的D-甘露糖、1.1％(質量)的D-葡糖胺、1.32％(質量)的蘋果酸、0.040％(質量)的草乙酸、0.11％(質量)的三磷酸腺苷、1.34％(質量)的碳酸氫鈉和0.04％(質量)的碳酸氫鉀。在繼續攪拌下，向該混合物中加入含有0.02％(質量)的KH2PO4和0.3％(質量)的Na2HPO4的83.168％(質量)的緩沖液。按此方法制備的溶液并用于治療動物的效果如圖8和9所示。
實施例113向混合器中稱量加入20％(質量)的L-色氨酸、62％(質量)的L-抗壞血酸和18％(質量)的D-葡糖胺。充分混合后，所得粉狀混合物用于頸防試驗。
實施例114按實施例113的方法，不同的是使用32％(質量)的L-精氨酸、28％(質量)的核黃素-5＇-磷酸和40％(質量)的蘋果酸。
實施例115按實施例113的方法，不同的是使用23％(質量)的L-色氨酸、0.2％(質量)的吡哆素、17.8％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸和59％(質量)的草乙酸。
實施例116按實施例113的方法，不同的是使用19％(質量)的L-酪氨酸、61％(質量)的L-抗壞血酸、0.2％(質量)的腺嘌呤和19.8％(質量)的L-組氨酸。
實施例117按實施例113的方法，不同的是使用31％(質量)的L-甲硫氨酸、53％(質量)的d-生物素、0.2％(質量)的腺嘌呤和15.8％(質量)的乳清酸。
實施例118按實施例113的方法，不同的是使用27％(質量)的L-苯丙氨酸、33％(質量)的核黃素、0.2％(質量)的三磷酸腺苷和39.8％(質量)的D-甘露糖。
實施例119按實施例113的方法，不同的是使用32％(質量)的L-組氨酸、9％(質量)的硫辛酸和59％(質量)的2-脫氧-D-核糖。
實施例120按實施例113的方法，不同的是使用12％(質量)的L-精氨酸、11％(質量)的吡哆素和77％(質量)的蘋果酸。
實施例121向混合器中稱量加入10％(質量)的L-甲硫氨酸、3％(質量)的L-色氨酸、0.2％(質量)的L-酪氨酸、10.9％(質量)的L-苯丙氨酸、22.7％(質量)的L-精氨酸、10％(質量)的L-組氨酸、1.1％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、11.9％(質量)的L-抗壞血酸、0.1％(質量)的d-生物素、0.2％(質量)的吡哆素、0.05％(質量)的核黃素、0.35％(質量)的核黃素-5＇-磷酸、0.1％(質量)的硫辛酸、0.6％(質量)的乳清酸、0.3％(質量)的腺嘌呤、0.9％(質量)的2-脫氧-D-核糖、11.5％(質量)的D-甘露糖、7％(質量)的D-葡糖胺、8％(質量)的蘋果酸、0.4％(質量)的草乙酸和0.7％(質量)的三磷酸腺苷。充分混合后，將所得的粉狀混合物用于預防試驗。
用Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞試驗實施例1-37組合物的作用和活性成份的協同作用(與單一成份的作用比較)。
在試驗中，使用科學文獻提供的最新方法。對于Sp2/0-Ag14和K562系，從介質中收集呈對數增長的細胞并再懸浮于用于細胞培養的96孔板中，最終濃度分別為每孔250μl合適的介質中有4×104個Sp2/0-Ag14細胞和2×104個K562細胞且每孔中含有預定濃度的試驗物質。對于HeLa、HEp-2和Vero細胞，從含有0.2％胰蛋白酶的75％融合組織培養物燒瓶中收集培養的細胞，并以密度為105個細胞/ml再懸浮于合適的介質中。將等份試樣(100μl)加至96孔微板中并培養24小時。然后除去介質并用含有預定濃度的試驗化合物的250μl新介質來代替。使各種細胞增生48小時。然后用錐蟲藍染料排除法用顯微鏡數活的Sp2/0-Ag14和K562細胞的數量。HeLa、HEp-2和Vero細胞的存活率通過評定細胞的內源性堿性磷酸酯酶活性來計量。用Student＇s t-試驗評估結果。在表中的平均值后面的數據和圖中的標志含義為“平均值的標準偏差”(SEM)。
表1的第1欄表示實施例編號、第2欄表示對比試驗的編號、其他6欄表示在試驗中所用成份的量，并用％(質量)表示。對比混合物由相同量的化學上類似但沒有藥理學作用的作為活性成份的物質(0.026％(質量)的L-絲氨酸、0.033％(質量)的L-天冬酰胺、0.029％(質量)的L-纈氨酸、0.018％(質量)的L-丙氨酸、0.006％(質量)的甘氨酸、0.059％(質量)的甜菜堿(trimethylglicine)和0.006％(質量)的L-脯氨酸作為氨基酸；0.017％(質量)的鹽酸硫胺素、0.006％(質量)的煙酸、0.019％(質量)的葉酸鈉、0.001％(質量)的D-泛酸半鈣、0.012％(質量)的尿嘧啶和0.0008％(質量)的辛酸作為維生素；0.003％(質量)的次黃嘌呤、0.038％(質量)的D(-)核糖、0.090％(質量)的葡萄糖、0.055％(質量)的N-乙酰基葡糖胺、0.081％(質量)的琥珀酸二鈉、0.080％(質量)的富馬酸二鈉和0.0015％(質量)的鳥苷三磷酸三鈉鹽)組成。最后兩欄分別表示含有4種和5種活性成份的組合物的作用和成份本身的作用(對比試驗)，即培養48小時后細胞的數目和以未處理細胞的量的百分比表示的細胞的量(未處理細胞的量為100％)。對于L-色氨酸例如第2-4對比試驗表示分別單用0.002、0.006和0.01％(質量)的L-色氨酸對細胞數目的作用。實施例2-4表示使用相同量的L-色氨酸但與其他4種活性成份一起使用時的作用。
從表1的最后兩欄的數據可以看出，在單獨使用上述物質時，它們均不表現出殺腫瘤細胞的作用，事實上，使用給定量的L-色氨酸時，細胞增生只有稍微增長。同時從這些欄中的數據還可以看出每種物質以協同作用方式與其用量成比例地增加了另外四種活性成份的作用。例如0.01％(質量)的L-色氨酸將四種其它活性成份的作用由73.1％增加至92.3％。相同量(0.01％(質量))的L-色氨酸本身在無其它四種成份時僅稍微增加了細胞的增生，這清楚地證明了協同作用。
在此使用最大量時(例如對于L-色氨酸為0.01％(質量)時)含有4種活性成份的組合物(實施例1、5、9、13和17)的作用與含有5種活性成份的組合物(實施例4、8、12、16和20)的作用在所有情況下均明顯不同(P＜0.01)，因此所有物質均明顯地增加了其它4種成份的作用。
表1本發明組合物和單-活性成份對Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞的作用
含有5種活性成份的實施例1-20的組合物的協同作用如圖1所示。其中用未處理細胞量的百分數(未處理細胞量為100％)表示的Sp2/0-Ag14細胞的量在縱軸上表示，橫軸為用％(質量)表示的L-色氨酸、2-脫氧-D-核糖、腺嘌呤、蘋果酸和L-抗壞血酸的量。白框表示單獨用上述物質培養48小時后用未處理的細胞的量的百分數表示的細胞的量，黑框表示當它們與其它4種活性成份一起使用時所得的結果。增加單一物質的用量時白框和黑框發生不同程度的變化(對于L-色氨酸甚至是以反方向變化)證明了協同作用。黑框表明組合物有較強的殺腫瘤細胞作用。
基于實施例21-37，表2表示當加入另外的成份時，含有5種活性成份的組合物對Sp2/0-Ag14細胞的作用是怎樣增加的，表2中用％(質量)并乘以1000表示物質的量，因此表中的數字應讀成×10-3，例如在實施例21中，對于L-色氨酸，數字6表示6×10-3，即0.006％(質量)。試驗條件同前。
與表1相同，從表2中的最后兩欄數據(用細胞數目和％表示)可以看出單獨使用上述物質時沒有一種具有減少細胞增生的作用，而通過L-苯丙氨酸(對比例22)、L-精氨酸(對比例23)、L-組氨酸(對比例24)和核黃素(對比例29)的作用，細胞的數目與未處理細胞的數目(對比例21)相比甚至稍有增加。也可以看出當使用同樣量時相同的物質協同地增加了實施例21的組合物的作用。沒有潛在的物質時，含有5種活性成份的實施例21組合物的作用在所有情況下均明顯低于與其它化合物一起使用時的作用。
含有21種活性成份的實施例107-111組合物的作用與含有5種活性成份且具有的相同量的常用活性成份的實施例102-106組合物的作用也進行了比較。為了與以前的結果比較，也使用了Sp2/0-Ag14細胞，并且試驗條件同前。結果如圖2所示。縱軸表示用未處理細胞的量的百分數表示的細胞的量的變化，橫軸表示用％表示的組合物量的變化(活性成份量的變化)。含有5種活性成份的實施例102組合物被看作為100％，因此，實施例103的80％組合物含有80％量的各成份，對于含有21種活性成份組合物，實施例107組合物被看作為100％。
表2本發明組合物和單一活性成份對Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞的作用
<p>表2(續)本發明組合物和單一活性成份對Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤細胞的作用
為了排除所測的作用是滲透作用或營養素的非特異過載或氨基酸不平衡的結果的可能性，也制備了對比混合物。這些對比混合物含有在以前試驗中被證實對PADS無效的物質。對比混合物的組合物如表1所示用實施例102-106和107-111的組合物和用對比混合物試驗所得的結果如圖2所示，其中有空心園符號的曲線表示對比混合物培養48小時后細胞數量的變化，有實心園符號的曲線表示對于含有5種活性成份的實施例102-106組合物時細胞數量的變化，而有空心三角符號的曲線表示對于含有21種活性成份的實施例107-111組合物時細胞數量的變化。在用實施例102和107的100％組合物進行的試驗中，如圖2所示，單個活性成份的使用量要使得對細胞數量基本沒有影響(這可從表1和2所示的以前的試驗結果看出)。從圖2可以看出，當一起使用時這些成份具有顯著的抗腫瘤作用。此事實再一次證明了活性成份的協同作用。從圖2也可看出，對比混合物對細胞的數目不會產生任何大的作用。因此，基于這些試驗可以排除所測的作用是滲透作用或營養素的非特異過載或氨基酸不平衡的結果。
為了弄清楚抗衡離子是否對組合物的作用有影響，用K+(實施例38-67)或Ca++(實施例68-97)離子代替Na+離子進行試驗。使用不同抗衡離子時組合物的作用沒有明顯不同，事實上，結果完全一致。
研究作為時間函數的實施例107的100％組合物對Sp2/0-Ag14細胞的作用并與100％對比混合物和未處理的細胞比較。試驗條件與以前的試驗相同，只是在此情況下，細胞不僅在48小時后計數而且在6、12、24和36小時后也計數。這些動力學試驗結果如圖3所示。縱軸表示細胞數目/ml，橫軸表示時間，單位為小時。有空心園符號的曲線表示未處理細胞的細胞數目的變化，有實心園符號的曲線表示用對比混合物時細胞數目的變化，有實心三角符號的曲線表示用含有21種活性成份的實施例107組合物時細胞數量的變化。所述變化為時間的函數。從圖3可以看出，對比混合物對細胞數目沒有任何顯著的作用，因為細胞數量隨時間指數地增加，曲線的形狀與未處理細胞增生所示的曲線的形狀一致。本發明的組合物對腫瘤有毒，并隨著時間的推移使腫瘤細胞數目減少。因此本發明組合物不僅能抑制細胞增生而且具有細胞毒性作用。選擇含有21種物質的上述組合物中的活性成份的量，以使當它們分別使用時對腫瘤細胞沒有任何顯著作用(當然，這對于其中活性劑的量為20％、40％等或更低的80％、60％等組合物來說更為正確)，因為將同樣的組合物用于所有體外試驗時其結果證實在所有情況下均是活性成份的協同作用。
上述結果證實了按照構成本發明基礎的認識選擇的物質的協同作用所產生的作用。另外這些結果也證實了這些認識是正確的，因為各種癌細胞以不同程度不同于正常細胞，對癌細胞最有效的本發明組合物彼此也不同。這意味著對于每種腫瘤應使用殺腫瘤細胞的協同作用作為標準選擇最合適的組合物，然而為了預防或當腫瘤類型不能確定時或為治療已用了許多時間時，優選使用含有21種活性成份的一般組合物，因此在下一個試驗中將研究這些組合物作用的一般性和其功效怎樣。
研究含有21種活性成份的實施例107-111組合物對K-562人紅白血病細胞的作用并與上述對比混合物的作用比較。試驗結果如圖4所示。與圖2相同，縱軸表示以未處理細胞量的百分數表示的細胞量的變化，橫軸表示以％表示的組合物量的變化(活性成份量的變化)。有空心園符號的曲線表示對比混合物的作用，而有實心園符號的曲線表示含有21種活性成份的組合物的作用。從圖4可以看出，本發明的組合物對K-562人紅白血病細胞也具有顯著的殺腫瘤細胞作用。
下面將研究含有21種活性成份的實施例107-111組合物對HeLa人上皮樣癌子宮頸細胞和HEp-2人表皮樣癌喉細胞的作用并與對比混合物的作用比較。為了證明以前的結果是一般性的并且與所用介質、懸浮方法、計數和測定方法的干擾作用無關必須進行該試驗。通過評定細胞的內源性堿性磷酸酯酶活性來測量HeLa、HEp-2和Vero細胞的存活率。簡言之，在培養后，通過洗滌除去未粘連(假定被損傷的)細胞。然后向各孔中加入溶解在150μl新鮮的10％二乙醇胺緩沖液(pH9.8)中的150μg堿性磷酸酯酶底物(磷酸4-硝基苯基酯，Sigma片劑，第111-112號)。將平板在30℃下培養直到未處理細胞的吸收度達到大約1的值。通過向各孔中加入50μl 3M NaOH使反應停止。借助Dynatech ELISA讀數器在405nm處測量吸收度。從各次讀數中減去本底(backround)值。結果如圖5(用HeLa細胞時)和圖6(用HEp-2細胞時)所示。與圖2和4相同，在此兩圖中縱軸表示以未處理細胞的量的百分數表示的細胞的量的變化。在這些情況下細胞數目的變化是通過測量滅活來測定的。橫軸表示以％表示的組合物量的變化(活性成份量的變化)。在圖5和6中，有空心園符號的曲線表示對比混合物的作用，而有實心園符號的曲線表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物的作用。從這些圖可以看出，這些組合物對兩種細胞系都有效。如果考慮到HEp-2被稱為抗御環境作用的硬(hardy)細胞系”，則這些結果更有價值[(American Type Culture Collection Catalogue of CellLines and Hybridomas，5th ed.，pp.15-16(1985)]。
按照本發明的理論基礎，本發明組合物僅選擇性地對癌細胞產生作用。為了進一步證實此論述，也研究了含有21種活性成份的實施例107-111組合物和對比混合物對正常的細胞系Vero African綠猴(green monkey)腎細胞的作用。試驗結果如圖7所示。縱軸表示以未處理細胞的細胞量的百分數表示的細胞的量的變化，橫軸表示以％表示的組合物量的變化(活性成份量的變化)。有空心園符號的曲線表示對比混合物的作用，而有實心園符號的曲線表示含有21種活性成份的實施例107-111組合物的作用。從圖7可以看出本發明的組合物對正常的Vero細胞系不產生細胞毒性作用，因為實施例107的100％組合物對增生的作用當對時間作曲線時，類似于圖3所示的對比混合物的作用。Vero屬于快速增生細胞系[(American TypeCulture Collection Catalogue of Cell Lines andHybridomas，5th ed.，pp.45-46(1985)]，因此該試驗證實與細胞生長抑制劑相反，本發明組合物對所有快速增生細胞無毒，但它選擇性地僅對腫瘤細胞產生作用。基于上述結果，本發明組合物被認為是抗腫瘤藥，而不是細胞毒性制劑。
為了證明本發明組合物的體內效果，亦進行藥理學試驗。在這些試驗中，總是使用科學文獻中所提供的方法和條件。用Sp2/0-Ag14細胞進行這些試驗。為了試驗，使用5-6周齡雌性BALB/c小鼠。用兩組每組各包括10只小鼠進行試驗。給小鼠腹膜內注射懸浮在200μl不完全的RPMI 1640介質中的5×104Sp2/0-Ag14細胞。注射當天作為試驗0天。通過致瘤試驗確定試驗所必需的細胞數目。注射細胞后24小時(即為試驗的第一天)開始處理動物并持續10天。在每次處理時用200μl PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)腹膜內注射對比組，而處理組腹膜內注射同樣體積的含有21種活性成份的實施例112組合物。
處理的最有效的方法是將組合物成份的濃度保持于相當高的水平的持續輸注。由于實際操作上的困難，而使用大致持續的周期性的處理，即每天處理動物6次。試驗結果如圖8所示。橫軸表示從試驗開始經過的天數，縱軸表示存活率％的值，即在給定的那天存活的小鼠的數目。因此，10只小鼠意味著100％，8只小鼠意味著80％。白框表示處理過的小鼠的存活率，黑框表示未處理的小鼠的存活率。從圖8可以看出，例如在第16天時沒有一只未處理的小鼠存活，而所有處理過的小鼠均存活。在第16天時所有未處理的小鼠均死亡，而處理過的小鼠在第25天死亡。可以看出由于處理，壽命顯著地增長了。對于處理組，半數(median)存活時間為21天，而對于未處理組為14天。由這些半數存活時間計算的T/C％值(150％)遠高于作為有效標準的125％。按照文獻所述，基于這些數值，本發明組合物可作為對給定細胞系具有有效抗腫瘤作用的制劑。
為了證明存活時間的增長是實施例112組合物對腫瘤細胞的毒性作用的結果而不是強促茁(roborating)作用的結果，進行另一試驗。按同樣的方式處理10-10只小鼠。處理10天后，從兩組小鼠的腹腔中取出細胞然后計數。兩組鼠的平均細胞數目(分別為5.55×105和5.95×107)之差很明顯(P＜0.001)，由此證明了本發明組合物的體內效果。
為了進一步證明本發明組合物的效果并排除這些結果僅是局部作用(細胞位于腹腔中并通過腹膜內處理)的結果的可能性，用人固體腫瘤皮下(s.c.)注射的先天性免疫缺損(胸腺缺損)(裸體)的小鼠進行另一試驗。為了試驗，使用HeLa細胞和6-8周齡雌性BALB/c(nu/nu)小鼠，在鼠的下肢皮下注射5×106個細胞。當腫瘤的大小達到50mm3的平均體積時開始用實施例112組合物處理。處理的時間表、處理的時間和用于處理的溶液(實施例112)與以前的藥理學試驗相同。用數字測徑器(callipers)(Mitutoyo，Inc.，Tokyo，Japan)每周兩次測量腫瘤的大小[長(L)，寬(W)，高(H)]。計算腫瘤的體積(用公式LWH/2計算)以及相對腫瘤體積Vt/Vo[Eur.J.Cancer.Clin.Oncol.，21，1253-1260(1988)]，其中Vt是實際腫瘤體積，而Vo是開始處理時的腫瘤體積。結果總結于圖9中，縱軸表示Vt/Vo值的平均值，橫軸表示開始處理后的天數。有空心園符號的曲線表示開始處理對比小鼠后相對腫瘤體積的增加，而有實心園符號的曲線表示開始處理處理動物后相對腫瘤體積的增加值，從圖9中可以看出處理能極大地減慢了腫瘤增長。例如對于對比小鼠，腫瘤體積在16.5天內增加至9倍數值，而對于處理小鼠，同樣9倍的生長則需要33天。由處理組和對比組的Vt/Vo值計算T/C％。在所有情況下的T/C％值均低于42％(即可接受作為有效標準之值)[Europ.J.Cancer，17,129-142(1981)]。此試驗再一次表明本發明組合物具有顯著的抗腫瘤作用。考慮到由于技術問題，我們遠非采用了最佳處理方法和最大的耐受劑量，而且同樣的處理在臨床條件下進行將更為有效(更長的處理時間、永久性作用，例如通過輸注等)，這些結果特別有可能成功。
在處理過程中體重的變化是一種良好的通用的表示處理的毒性的特征的指標，因此在上述試驗中測量了動物的體重。按照文獻，當平均體重降低10-15％時，制劑被認為是有毒的[Eur.J.Cancer.Clin.Oncol.，21,1253-1260(1988)]。在本發明人的試驗中，對于對比組，平均體重變化為-5.9±4.1％，而對于處理組為-6.6±3.9％。因此，在兩組間沒有明顯的差別，這意味著本發明組合物沒有毒副作用。
為了證明本發明組合物的預防有用性，按下述方法處理2-2組BALB/c小鼠(每組10只小鼠)使處理動物的食物按1∶1比例與實施例113-121組合物混合，并使動物任意進食。開始處理后5天向兩組動物腹膜內預防注射1×104Sp2/0-Ag14細胞。繼續處理100天。在注射細胞后100天殺死鼠時，進食過1-1的實施例113-121組合物與常規食物的混合物的小鼠沒有顯示出腹膜內的腫瘤增長跡象。而同時在注射了Sp2/0-Ag14細胞后在不同試驗組中的對比動物的存活時間為21至26天。
根據劑量和處理方法的不同，本發明組合物可用于預防癌性疾病、抑制AIDS和器官移植中腫瘤的生長、阻止轉移瘤的形成以及輔助、結合和直接治療腫瘤患者。
本發明組合物的主要優點如下a)使用適當的劑量，本發明組合物可用于預防癌性疾病、抑制AIDS和移植中的腫瘤形成、阻止轉移瘤形成以及直接、輔助或結合治療和治愈癌性疾病。
b)本發明組合物無毒。基于測量動物體重降低的毒性試驗證明了本發明組合物無毒。根據文獻數據，所述組合物的單一成份的毒性非常低，當這些物質一起使用時，甚至這種低毒性進一步降低。另外，靈長目動物耐受這些物質勝于用于測定毒性值的小動物。考慮到所有這些事實，表明本發明組合物應被認為是無毒的。
c)本發明組合物沒有或僅有可被忽略的副作用。由于幾乎所有的成份(除2-脫氧-D-核糖之外)已用于某種治療(僅有抗壞血酸用于抗癌治療中)中或作為食品添加劑，故已收集了各成份副作用的大量觀察數據。根據這些申請中收集的試驗數據，很明顯本發明組合物實際上沒有副作用。
d)本發明組合物具有選擇性。該選擇性被我們自己的試驗所證實，試驗表明對各種癌細胞有毒的本發明組合物分別對正常的Vero細胞、試驗動物或其正常的細胞無毒。由于正常細胞多于癌細胞并且癌細胞累積了組合物的成份，而對于正常細胞其攝取被控制，因此提高了選擇性。
e)本發明組合物可廣泛使用，它們的作用是一般性的。已經研究了本發明組合物對小鼠骨髓瘤(Sp2/0-Ag14)、人紅白血病(K-562)、人上皮樣癌子宮頸(HeLa)和人表皮樣癌喉(HEp-2)細胞系的作用。這些細胞代表了廣譜性，因為它們包括人和動物腫瘤，甚至于人腫瘤有白血病和兩種極不相同的固體腫瘤為代表。用這些細胞系進行的試驗所得的結果支持上述論述，即本發明組合物具有一般性作用，并可廣泛使用。
f)本發明組合物在制備上無任何困難，組合物成份是低分子量的物質并且容易得到，所以本發明組合物容易制備。
g)本發明組合物可溶于水中，因此容易服用。
權利要求
1.用于預防和治療癌性疾病的藥物組合物，它包括至少三種存在于循環系統中的活性化合物至少一種氨基酸、至少一種維生素以及至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物，其條件是如果組合物除含有氨基酸外僅含蘋果酸和一種維生素，那么維生素不是抗壞血酸。
2.根據權利要求1的組合物，該組合物除含有活性化合物外還包括藥學中常用的載體、稀釋劑和/或其它助劑。
3.根據權利要求1的組合物，其中所述氨基酸為L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽。
4.根據權利要求1的組合物，其中所述維生素是d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5’-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸、乳清酸和/或其鹽。
5.根據權利要求1的組合物，它包括L-色氨酸、L-抗壞血酸和至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-葡糖胺和/或其可藥用鹽的化合物。
6.根據權利要求1的組合物，它包括L-精氨酸、核黃素-5’-磷酸和至少一種選自D-甘露糖、蘋果酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物。
7.根據權利要求1的組合物，它包括0.002-70％(質量)的至少一種選自L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽的化合物作為氨基酸，0.0004-80％(質量)的至少一種選自d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5’-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸乳清酸和/或其鹽的化合物作為維生素以及0.003-80％(質量)的至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物。
8.根據權利要求1的組合物，它包括0.9-25％(質量)的L-甲硫氨酸、0.8-19％(質量)的L-色氨酸、1.1-48％(質量)的L-精氨酸、0.9-46％(質量)的d-生物素、1.2-16％(質量)的吡哆素、0.03-42％(質量)的核黃素-5’-磷酸、0.05-18％(質量)的D-葡糖胺、0.5-60％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.7-68％(質量)的蘋果酸、0.6-40％(質量)的D-甘露糖和/或其可藥用鹽。
9.根據權利要求1的組合物，它包括0.005-34％(質量)的L-甲硫氨酸、0.002-25％(質量)的L-色氨酸、0.02-23％(質量)的L-酪氨酸、0.04-30％(質量)的L-苯丙氨酸、0.04-50％(質量)的L-精氨酸、0.03-34％(質量)的L-組氨酸、0.05-22％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、0.01-60％(質量)的d-生物素、0.01-20％(質量)的吡哆素、0.0004-45％(質量)的核黃素、0.0005-45％(質量)的核黃素-5’-磷酸、0.003-70％(質量)的L-抗壞血酸、0.004-15％(質量)的硫辛酸、0.01-17％(質量)的乳清酸、0.001-10％(質量)的腺嘌呤、0.01-63％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.08-42％(質量)的D-甘露糖、0.05-20％(質量)的D-葡糖胺、0.01-80％(質量)的蘋果酸、0.02-60％(質量)的草乙酸、0.001-10％(質量)的三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽。
10.一種預防和治療癌性疾病的方法，它包括給待治療的患者施用治療有效量的權利要求1的組合物。
11.根據權利要求1的組合物，它包括30-44％(質量)的L-精氨酸、27-35％(質量)的核黃素-5’-磷酸、38-62％(質量)的蘋果酸和/或其可藥用鹽。
12.制備權利要求1組合物的方法，該方法包括使存在于循環系統中的活性化合物中的至少一種氨基酸、至少一種維生素以及至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷的化合物，以及，如果需要的話還有藥學上常用的載體、稀釋劑和/或其他助劑進行混合制成藥物組合物。
13.根據權利要求12的方法，它包括將L-色氨酸、L-抗壞血酸、至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-葡糖胺和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
14.根據權利要求12的方法，它包括將L-精氨酸、核黃素-5’-磷酸、至少一種選自D-甘露糖、蘋果酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
15.根據權利要求12的方法，該方法包括將30-44％(質量)的L-精氨酸、27-35％(質量)的核黃素-5’-磷酸、38-62％(質量)的蘋果酸和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
16.根據權利要求12的方法，該方法包括將0.002-70％(質量)的至少一種選自L-甲硫氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、N-苯甲酰甘氨酸和/或其鹽的化合物作為氨基酸，0.0004-80％(質量)的至少一種選自d-生物素、吡哆素、核黃素、核黃素-5’-磷酸、L-抗壞血酸、硫辛酸、乳清酸和/或其鹽的化合物作為維生素和0.003-80％(質量)的至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽的化合物混合制成藥物組合物。
17.根據權利要求12的方法，該方法包括將0.9-25％質量)的L-甲硫氨酸、0.8-19％(質量)的L-色氨酸、1.1-48％(質量)的L-精氨酸、0.9-46％(質量)的d-生物素、1.2-16％(質量)的吡哆素、0.03-42％(質量)的核黃素-5’-磷酸、0.05-18％(質量)的D-葡糖胺、0.5-60％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.7-68％(質量)的蘋果酸、0.6-40％(質量)的D-甘露糖和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
18.根據權利要求12的方法，該方法包括將0.005-34％(質量)的L-甲硫氨酸、0.002-25％(質量)的L-色氨酸、0.02-23％(質量)的L-酪氨酸、0.04-30％(質量)的L-苯丙氨酸、0.04-50％(質量)的L-精氨酸、0.03-34％(質量)的L-組氨酸、0.05-22％(質量)的N-苯甲酰甘氨酸、0.01-60％(質量)的d-生物素、0.01-20％(質量)的吡哆素、0.0004-45％(質量)的核黃素、0.0005-45％(質量)的核黃素-5’-磷酸、0.003-70％(質量)的L-抗壞血酸、0.004-15％(質量)的硫辛酸、0.01-17％(質量)的乳清酸、0.001-10％(質量)的腺嘌呤、0.01-63％(質量)的2-脫氧-D-核糖、0.08-42％(質量)的D-甘露糖、0.05-20％(質量)的D-葡糖胺、0.01-80％(質量)的蘋果酸、0.02-60％(質量)的草乙酸、0.001-10％(質量)的三磷酸腺苷和/或其可藥用鹽混合制成藥物組合物。
19.用作藥物的權利要求1的組合物。
20.用于治療癌癥的權利要求19的組合物。
21.用作藥物的權利要求1的組合物和藥物載體和/或助劑。
22.用作抗腫瘤藥劑的權利要求21的組合物。
23.用作治療癌癥的佐藥的權利要求1的組合物。
24.以片劑、糖錠劑、栓劑、膠囊劑或輸注液形式用于治療癌癥的權利要求1的組合物。
25.根據權利要求23的組合物，該組合物包括治療活性量的權利要求1的產物。
26.根據權利要求25的組合物，該組合物包括0.2-420g權利要求1的產物。
27.權利要求1的組合物用于制備治療癌癥的藥物的用途。
28.權利要求1的組合物用于制備以片劑或膠囊劑形式口服給藥治療癌癥的藥物的用途。
29.權利要求1的組合物用于制備以輸注液形式腸胃外給藥治療癌癥的藥物的用途。
30.權利要求1的組合物用于制備以片劑或膠囊劑形式口服給藥預防癌癥的藥物的用途。
全文摘要
本發明涉及預防和治療癌性疾病的藥物組合物及其制備方法。這些組合物包括至少三種存在于循環系統中的化合物至少一種氨基酸、至少一種維生素以及至少一種選自腺嘌呤、2-脫氧-D-核糖、D-甘露糖、D-葡糖胺、蘋果酸、草乙酸、三磷酸腺苷的化合物。本發明組合物可無毒作用地用于預防癌性疾病、抑制AIDS和移植時腫瘤的形成，阻止轉移瘤的形成以及直接、輔助或結合治療和治愈癌性疾病。
文檔編號A61K31/385GK1116406SQ9419090
公開日1996年2月7日 申請日期1994年11月8日 優先權日1993年11月9日
發明者G·庫爾卡薩 申請人:伊梅穆爾有限協會