取代的犬尿氨酸、其制備方法及其作為藥物的用途的制作方法

專利名稱：取代的犬尿氨酸、其制備方法及其作為藥物的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及某些化合物的新的醫療用途和一些新化合物，以及制備這些化合物的方法和含有這些化合物的藥物組合物。
特別地，本發明涉及用于治療與大腦衰老過程相關的識知障礙的化合物，該類化合物被用作犬尿氨酸轉氨酶(現有技術中稱為KAT)的抑制劑。
這些用作KAT抑制劑的化合物可通過標準試驗來鑒定，例如按照J.Neurochem.，57，533-540(1991)中所述，在鼠腦組織的勻漿中測定化合物對抑制KAT活性的能力，或者按照J.Neurochem.，52，1629-1636(1989)中所述的利用鼠腦組織切片測定該類化合物對犬尿喹啉酸(KYNA)生成的抑制作用。
KAT能催化由犬尿氨酸(KYN)轉向KYNA的生物合成 而且KAT是腦內KYNA細胞外濃度調節的特異應答物質(J.Neurochem.，57，533-540，1991)。
KYNA是有效的興奮氨基酸(EAA)受體拮抗物，它對N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體復合物的甘氨酸調節位點具有特別高的親和性(J.Neurochem.，52，1319-1328，1989)。
作為天然存在的腦代謝產物(J.Neurochem.，51，177-180，1988和BrainRes，454，164-169，1988)，KYNA可能是作為大腦谷氨酸功能的反向內源調節劑而起作用(Ann.N.Y.Acad.Sci.，Vol.648，P.140-153，1992)。
EAA受體，特別是NMDA受體是已知的，它在哺乳動物腦內起重要作用(J.C.WatkinsandG.L.，Collingridge-編輯-，TheNMDAreceptor，OxfordUniversityPress，Oxford，1989，PP.242)。例如，NMDA受體的激活對認知過程，例如學習和記憶是重要的(J.C.WatkinsandG.L.Collingridge-eds-，InTheNMDAreceptor，OxfordUniversityPress，Oxford，P.137～151，1989)，對大腦進化也是重要的(TrendsPharmacol.Sci.，11，290～296，1990)。
因此，NMDA受體功能的下降對大腦生理功能，進而對整個有機體具有不利的影響。例如在衰老的大腦內出現的NMDA受體數量的減少(Synapse，6，388～343，1990)可能和衰老相關的識知功能的失調相關聯的。
在腦內，KYNA的濃度及KYNA的生物合成酶KAT的活性隨著年齡增長有明顯增長(BrainRes.558，1～5，1992andNeurosci，Lett.，94，145～150，1988)。KAT抑制劑通過使NMDA受體上谷氨酸片段的增加，對NMDA受體功能不充分和/或KAT活性及KYNA量異常增強的情況特別有用。因此，它們對治療與衰老相關的病理表現，例如，老年人的識知障礙，包括注意力和記憶力減弱以及失眠現象特別有用。
KAT抑制劑也可以用于治療產期腦功能失調，產期腦功能失調可能與產后KAT進化的特征區特異類型中的不規則相關(H.BaranandR.SchwarczRegionaldifferencesintheontogenicpatternofKATintheratbrain，Dev.BrainRes.，inpress)。
因此本發明的第一方面包括KAT抑制劑在治療產期腦功能失調方面的應用。
在本發明說明書中，“治療”一詞包括“預防性治療”及“癥狀的明顯減輕”。
根據本發明，用作KAT抑制劑的特定化合物是具有下列通式(Ⅰ)的5-取代犬尿氨酸衍生物 其中R是鹵素、C1-C6烷基、C5-C7環烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R1是羥基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羥基氨基、C1-C4烷氧基氨基或芐氧基氨基。
本發明也包括用作KAT抑制劑的式(Ⅰ)化合物的藥物可接受的鹽類，及式(Ⅰ)代表的單獨存在或混合存在的可能的異構體。
本發明也涉及式(Ⅰ)化合物所代表的某些新化合物。
作為本發明第二個目的的化合物，是具有下列通式(IA)的化合物
其中R是鹵素、C1-C6烷基、C5-C7環烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R1是羥基、C1-C6烷氧基、氨基、單-C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羥基氨基、C1-C4烷氧基氨基或芐氧基氨基。
條件是(ⅰ)當R1是羥基且同時R是鹵素時，則該鹵素不是氟;和(ⅱ)當R1是羥基且同時R是C1-C6烷基時，則該C1-C6烷基不是甲基。
本發明的第二個目的中也包括式(IA)化合物的藥用可接受的鹽類，及式(IA)代表的單獨存在或混合存在的全部可能的異構體，且同樣受上述條件的限制。
在本說明書中，對于上述的式(Ⅰ)和(IA)，各種取代基的特征如下“鹵素”代表Cl、Br、I或F，優選Cl和Br。
“C1-C6烷基”包括，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基和正己基，優選的是甲基、乙基、正丙基或異丙基。
“C5-C7環烷基”代表5～7節的單碳環，優選的是環戊基或環己基。
“C6-C10芳氧基”包括，例如苯氧基和萘氧基;優選的是苯氧基。
“苯基-C1-C4烷基”代表含有苯基的C1-C4烷基，例如芐基或1-苯基乙基;優選的是芐基。
“苯基-C1-C4烷氧基”代表含有苯基的C1-C4烷氧基，例如芐氧基或1-苯基乙氧基;優選的是芐氧基。
“C1-C6烷氧基”包括，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基和異丙氧基;優選的是甲氧基或乙氧基。
“C1-C6烷基氨基”包括，例如，甲氨基、乙氨基、正丙氨基、異丙氨基和正丁氨基;優選的是甲氨基。
“C1-C4烷氧基氨基”包括，例如，甲氧氨基、乙氧氨基、正丙氧氨基和異丙氧氨基;優選的是甲氧氨基。
式(Ⅰ)和(IA)的化合物具有一不對稱碳原子，因而它們可能以光學異構體的消旋混合物(對映體)形式存在，或以單一光學異構體形式存在。
除非另有說明，式(Ⅰ)或(IA)化合物的不對稱中心的S構型相當于天然犬尿氨酸的L型，反之，R構型相當于天然犬尿氨酸的D型。
式(Ⅰ)或(IA)化合物的藥用可接受的鹽類包括使用藥用可接受的酸類所形成的鹽，或無機酸，例如鹽酸、氫溴酸、硝酸或硫酸、或有機酸，例如檸檬酸、酒石酸、馬來酸、富馬酸、甲磺酸或乙磺酸，或者，當式(Ⅰ)或(IA)的化合物含有酸性基團，例如羰基時，則與藥用可接受的堿形成鹽，例如堿金屬，如鈉或鉀，堿土金屬如鈣或鎂;鋅或鋁;或有機堿例如脂族胺類如甲胺、二乙胺、三甲基胺、乙胺和雜環胺如吡啶。
本發明優選的一類化合物是由式(IA)表示的化合物，其單一的異構體或異構體混合物，及其藥用可接受的鹽類，其中R是鹵素，C1-C6烷基或C5-C7環烷基;R1是羥基;條件是(ⅰ)當R是鹵素時，則該鹵素是不氟;和(ⅱ)當R是C1-C6烷基時，則該C1-C6烷基不是甲基。
上述式(IA)優選的化合物的特例有2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-溴苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-異丙基苯基)-4-氧代-丁酸;
2-氨基-4-(2-氨基-5-環己基苯基)-4-氧代-丁酸;
及上述化合物單一的異構體或異構體的混合物及其藥用可接受的鹽類。
本發明的式(Ⅰ)或(IA)的化合物可根據下述方法制備1)使式(Ⅱ)的化合物與氯代乙腈反應而得到式(Ⅲ)的化合物 其中R如式(Ⅰ)或(IA)中所定義，
其中R定義如上。
2)使式(Ⅲ)的化合物與二乙基乙酰氨基丙二酸的鈉鹽反應，得到式(Ⅳ)的化合物 其中R定義如上。
3)使式(Ⅳ)的化合物用濃鹽酸處理，得到R定義如上且R1是羥基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物;如果需要，可以將式(Ⅰ)或(IA)的化合物轉換成R1部分不是羥基的另一種式(Ⅰ)或(IA)的化合物;且如果需要，可以將式(Ⅰ)或(IA)的化合物成鹽;且如果需要，可以將式(Ⅰ)或(IA)化合物的異構體混合物分離成單一的異構體。
或者，式(Ⅰ)或(IA)的化合物可以通過立體有擇地定向合成方法而直接得到單一的異構體。
式(Ⅱ)的化合物與氯乙腈之間的反應可通過以下步驟完成，向攪拌著的三氯化硼的二氯甲烷溶液中，加入式(Ⅱ)化合物于無水苯中的溶液，然后加入氯代乙腈和三氯化鋁，將所得的混合物回流20小時。
式(Ⅲ)的化合物與乙酰氨基丙二酸鈉鹽之間的反應可通過下述步驟進行向乙醇的鈉溶液中加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(溶于乙醇中)，然后加入式(Ⅲ)的化合物，使反應混合物在室溫放置20小時，然后于40℃加熱4小時。
式(Ⅳ)的化合物與濃鹽酸之間的反應例如可按下述方法進行將式(Ⅳ)的化合物于濃鹽酸中回流7小時。
其中R1不是羥基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物，可以按照本領域的普通技術人員共知的方法，由R如上所定義且R1羥基的式(Ⅰ)或(IA)的化合物作起始物而進行制備。
使式(Ⅰ)或(IA)的化合物成鹽可以按照已知的方法進行;通常是通過將本發明的化合物與適量的成鹽試劑反應而實施的。
已如上述，式(Ⅰ)或(IA)的化合物中有一不對稱碳原子，因此這些化合物可以以消旋混合形式存在，也可能以單一的光學異構體(非對映體)形式存在。因而，這些化合物可以先作為混合物的形式進行合成，然后通過常規方法將所要的異構體分離出來，或通過已知的立體有擇性方法進行合成。
從相應的消旋混合物中分離為單一的光學異構體例如可以按下述方法進行按照現有技術中已知的方法，使用合適的氨基酸保護基團，如乙酰基、羰芐氧羰基或叔丁氧羰基，將外消旋的式(Ⅰ)或(IA)化合物轉換成N-保護的化合物。然后將所得到的式(Ⅰ)或式(IA)的外消旋化合物的N-保護的衍生物，在用適當的光學活性胺如α-甲基芐胺，番木鱉堿或辛可寧，在適當的溶劑如乙酸乙酯或二噁烷存在下成鹽后，再進行重結晶，得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的一種對映性純的非對映異構體的鹽，然后用已知方法脫保護，而得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的拆開的(R)或(S)對映體。
或者也可以通過立體有擇地定向合成方法而直接得到式(Ⅰ)或(IA)化合物的單一對映體。
例如，將式(Ⅴ)的化合物， (其中R是鹵素、C1-C6烷基、C5-C7環烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基-C1-C4烷氧基或三氟甲基;
R2是COR3或COOR3，其中R3是C1-C6烷基)與式(VIA)或(VIB)的化合物進行反應， (其中R2按式(Ⅴ)化合物中所定義)然后將所得的化合物用合適的水解劑如HCl或HBr進行水解，得到其中R如上所定義且R1是羥基的式(Ⅰ)或(IA)化合物的純對映體。
通過本領域技術人員熟知的標準操作，可以將R1是羥基的式(Ⅰ)或(IA)化合物的純對映體轉換成取代基R1是羥基的式(Ⅰ)或(IA)的另一種化合物。
式(Ⅴ)化合物與式(VIA)或(VIB)化合物之間的反應例如可以通過下述方法完成，在合適的鈀復合物如三(二亞芐基丙酮二鈀(O)-氯仿加合物存在下，將反應物混合而進行。
式(Ⅴ)的化合物可以按現有技術已知的方法制備(J.Org.Chem.1979，44，1133)。
式(VIA)或(VIB)的化合物可按現有技術已知方法制備(J.Org.Chem.1988，53，6138)。
式(VIA)或(VIB)的化合物中的C1-C6烷基的含意與式(Ⅰ)或(IA)化合物中相同。
或者，也可以直接得到純的式(Ⅰ)的或(IA)的化合物的對映體，例如，通過將式(Ⅰ)或(IA)的外消旋化合物或及其反應衍生物，與適當的光學純的胺，如(R)-(-)-或(S)-(+)-2-氨基-2-苯乙醇，在適當的溶劑如二甲基甲酰胺(DMF)中如在5°至25℃溫度下進行反應，反應時間可以如從1小時至48小時之間。所得到的非對映異構體可以通過層析法分離而得到純的差向異構體(即非對映異構體僅在一個不對稱中心上構象不同)，該產物經合適的水解劑如HCl或HBr進行水解，而得到式(Ⅰ)或(IA)的對映體純的化合物。
在本發明的化合物的合成中，用作起始物的相當于式(Ⅱ)化合物的取代的苯胺是可以商購的化合物，或通過本領域技術人員熟知的方法進行制備。
式(Ⅰ)或(IA)的化合物在抑制犬尿氨酸轉氨酶(KAT)的效率可以用下述試驗A)、B)、C)表明。
A)鼠腦組織勻漿中KAT活性抑制的測定KAT用OKunoetal.詳述的方法測定(Measurementofratbrain kynurenine amino-transferase at physiological kynurenine concenrtrations，J.Neurochem.，57，533-540，1991)。簡言之，動物被斷頭處死，然后將腦組織勻化(15v/w在5mMTris-乙酸酯緩沖液，pH8.0中，含有10mM2-巰基乙醇和50μm吡哆醛-5′-磷酸)且在2μm[3H]KYN(30 n Ci)，1mM2-酮戊二酸和70μM吡哆醛-5′-磷酸存在下，在150nMTris-乙酸酯緩沖液pH8.0中，于37℃培養2小時。該反應通過加入三氯乙酸而終止。
新合成的[3H]KYNA在Dowex 50 W陽離子交換柱上由[3H]KYN中分離，并用液體閃爍譜分析法定量。空白對照通過使用已在沸水中加熱失活10分鐘的組織而進行的。
在這些條件下測試時，本發明的化合物能夠抑制KAT的活性。
以可代表量的式(Ⅰ)或(IA)化合物而得到的結果列于下表中表1
nc＝未計算B)通過鼠組織切片測定對KYNA產生的抑制按照常規，從大腦皮質得到的切片(1×1mm;重≈1.5mg/片)在冰上分離，然后轉入培養皿中(10片/皿)，該培養皿中含有1ml的氧化的Krebs-Ringer緩沖液(NaCl，118.5mM;KCl，4.75mM;CaCl2，1.77mM;MgSO4，1.18mM;NaH2PO4，12.9mM;NaH2PO4，3mM;葡萄糖，5mM;pH7.4)。接著，在50μM L-KYN存在下，在氧氣室內振搖的水浴上，該組織在37℃下預培養10分鐘，然后在37℃再培養2小時。按照要求，本發明的化合物包括在培養物中。培養后，迅速將培養皿置于冰上，快速地將切片與培養基分離。為了測定KYNA，將1ml的培養基樣品浸漬于沸水浴中10分鐘，然后離心(8.730×g，10分鐘)除去沉淀的蛋白質。上清液用0.2M HCl稀釋(11，v/v)，并加到Dowex 50 W(氫型，Sigma)陽離子交換柱(0.5×2cm)上。接著，用1ml的0.1M HCl和1ml的水洗滌該柱，含KYNA的部分用2ml的水洗脫出來。洗脫液加到3-μm C18HPLC柱(100×3.2內徑，Bioanalytical Systems，West Lafayette，IN，U.S.A)，KYNA用含有50mM乙酸銨和5%甲醇的流動相以0.5ml/min的速度洗脫，在該條件下，KYNA的保留時≈7分鐘。
記錄數據并用連接到置于340nm的160UV吸收監測儀(BeckmanInstruments，Berkeley，CA，U.S.A)的Hewlett-Packard3390A積分儀進行計算。
在本測試中，用代號表示的式(Ⅰ)或(IA)的化合物被測試，所得結果列于表2中。
表2 ＊在300μm nc＝未計算表1和表2中所用的縮寫Me、Et、n-Pr、i-Pr分別代表甲基、乙基、正丙基和異丙基。
C)使用部分純化酶制劑進行動力學分析KAT抑制劑(BrainResearch，534，37-44(1990)。
在0.1ml總體積的反應混合物中，含有用未標記的KYN稀釋到最終濃度為2μm的[3H]KYN(30 nCi)、1mM丙酮酸鹽、70μm吡哆醛-5′-磷酸、150mM Tris-乙酸鹽緩沖液pH8.0，和部分純化的酶制劑。如果需要，受試化合物包括在培養混合物中，該反應通過加入丙酮酸鹽開始，在37℃培養2小時后加入14μl的50%(w/w)的三氯乙酸而使反應終止。接著，加入1ml的0.1M HCl，并用Beckman52B微型離心機離心4分鐘而將變性蛋白除去。1ml的所得的上清液加在Dowex 50 W柱(0.5×1.0cm;H+型)上，先用1ml的0.1M HCl洗滌，然后用1ml的蒸餾水洗滌。[3H]KYNA用2ml的蒸餾水洗脫，并用液相閃爍譜分析法定量。酶測定重復三次，空白對照通過已于沸水浴中加熱失活10分鐘的酶制劑而進行的。
動力學試驗是使用上述的標準KAT方法，通過在有或沒有固定濃度的受試化合物存在的條件下，改變在2μm至2mM之間的KYN的濃度而進行的。用兩次重復的點作圖，通過線性回歸分析確定最佳曲線。
動力學常數L-犬尿氨酸D,L-5-Cl,犬尿氨酸KmKi369μM88μM本發明在其范圍中還包括一些藥物組合物，該組合物含有治療有效量的式(Ⅰ)或(IA)的化合物的活性物質或其藥用可接受的鹽類以及式(Ⅰ)或(IA)包括的任何可能的異構體及異構體的混合物，其相關的一種或多種藥用可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
哺乳動物，如人，是可用本發明的藥用組合物治療的。
本發明的化合物可以通過常規途徑，例如胃腸外給藥，如通過靜脈注射或輸液，肌內注射、皮下的、局部的或口服的或其它的通過吸入或吹入的適宜形式給藥。劑量取決于患者的年齡、體重和條件，化合物的效力和施用途徑。例如，對于成年人，合適的施用劑量為每劑中活性物質量為0.1至100mg，每天服用1～4次。本發明的藥用組合物通常按下述方法制備并以藥用可接受的形式施用。例如靜脈注射或輸液的溶液可以含有的載體是無菌水，或優選的是無菌的等滲性的鹽水溶液。
肌內注射的懸浮劑、溶液劑或乳劑可以含有與活性化合物一起的藥用可接受的載體，例如，無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二元醇如丙二醇和如有必要適量的利多卡因鹽酸鹽。
注射劑的配方中可以含有其它配方制劑如助懸劑、穩定劑和/或分散劑。
或者，活性成分可以以粉末狀配制，在使用前與合適的載體如無菌的無熱原的水一起而構成。在局部施用制劑中，如霜劑、洗劑、膏劑時，活性成分可與常用的含油的或乳化的載體混合。
固體口服制劑，如片劑和膠囊劑，與活性物質一起可以含有稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉和土豆淀粉;潤滑劑例如硅石、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或鈣，和/或聚乙二醇;結合劑，例如，淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素，羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮;解聚劑，例如淀粉、藻酸、藻酸鹽、淀粉甘醇酸鈉;泡騰混合物;著色劑;甜味劑;濕潤劑，例如卵磷脂、多乙氧基醚、十二烷基硫酸酯;以及，通常藥物制劑中所使用的無毒、藥物上惰性的物質。所述藥物制劑可根據已知方法配制，例如通過混合、制粒、壓片、包糖衣或包膜等方法。
片劑也以用本領域已知的方法進行包衣。
液體口服形式的制劑，例如，混懸劑、糖漿劑或液劑可以按常規方法，例如，用藥用可接受的添加劑、防腐劑、甜味劑/或調味劑而進行配制。
本發明的藥用組合物，可以通過本領域熟知的方法而制成某些劑型，使該藥用組合物施用于患者后，其活性成分可以或快速、或持續或緩慢地釋放。
下述的實施例用以說明本發明，但并不限制本發明。
實施例15-氯-2氨基-α-氯代乙酰苯在氮氣氛下，溫度為5℃至10℃的條件下向攪拌著的三氯化硼的二氯甲烷溶液(100ml1M，0.1mol)中滴加4-氯苯胺(12.12g，0.095mol)的無水苯溶液(120ml)。
向所得的混合物中，依次加入氯代乙腈(7.72ml，0.115mol)和三氯化鋁(13.33g，0.1mol)。然后，將該混合物回流20小時。
冷卻后，加入冰冷卻的2N鹽酸(≈100ml)，形成一種黃色沉淀，混合物在攪拌下于80℃加熱，直到沉淀溶解(≈45′)。
冷卻后的溶液通過加入2NNaOH使pH調至2，并用二氯甲烷萃取(三次)。
有機相用水洗滌，然后干燥(Na2SO4)，并濃縮。
殘留物用己烷(≈120ml)研磨，得到9.27g所需的淡棕色固體產物，m.p.133-136℃。
按照相似方法，可以制得下列化合物5-甲基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.127～129℃;
5-氟-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.121～123℃;
5-乙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.118～120℃;
5-環己基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.88～91℃;
5-溴-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.127～130℃;
5-正丙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.119～122℃;
5-異丙基-2-氨基-α-氯代乙酰苯，m.p.66～70℃。
實施例2乙酰氨基-(2-氨基-5-氯苯甲酰甲基)丙二酸乙酯將鈉(1.04g，0.0453mol)溶于乙醇(80ml)中，并加入乙酰氨基丙二酸二乙酯(9.84g，0.0453mol)在120ml乙醇的溶液，該溶液在45℃加熱1小時。
冷卻至室溫后，滴加5-氯-2-氨基-α-氯代乙酰苯(9.25g，0.0453mol)在150ml乙醇的溶液，同時在氮氣氛下攪拌。
將反應物在室溫攪拌20小時，然后將該混合物在40℃加熱4小時。將反應混合物蒸發至干，殘留物用300ml水溶解，并加入1NNaOH(20ml)，用乙醚萃取。
有機相用水洗滌，干燥并蒸發至干，得到固體，用210ml異丙醇重結晶而得到6.02g所需的膏狀固體的產物，m.p.156～158℃。
按照相似的方法，可以制備下列化合物乙酰氨基-(2-氨基-5-甲基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.179～181℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-氟代苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.143～145℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-乙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.121～123℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-環己基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.89～93℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-溴代苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.151～154℃;
乙酰氨基-(2-氨基-5-正丙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.115～117℃;和乙酰氨基-(2-氨基-5-異丙基苯甲酰甲基)-丙二酸二乙酯，m.p.110～115℃。
實施例32-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D，L-5-氯代-犬尿氨酸)攪拌下將乙酰氨基-(2-氨基-5-氯代苯甲酰甲基)丙二酸二乙酯(5.3g，0.01377mol)在濃鹽酸(60ml)的溶液回流7小時。
反應物真空蒸發至干，殘留物用水溶解，用二氯甲烷洗滌。
將水相濃縮，殘留物溶于水(100ml)中，將所得溶液用2NNaOH將pH調至6.5而得到所需的黃色沉淀產物。
過濾，水洗固體得到3.10g的所需產物，m.p.236～238℃(分解)。
按照類似的方法，可以制備下列化合物2-氨基-4-(2-氨基-5-甲基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.230～250℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-氟代苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.200～225℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.210℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-環己基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.230～250℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-溴代苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.233℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.233～234℃(分解);
2-氨基-4-(2-氨基-5-異丙基苯基)-4-氧代-丁酸，m.p.235℃(分解)。
實施例4通過非對映異構體鹽的拆開方法而制備(S)(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5-氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)向攪拌著的2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(5.23g，21.55mmol)、NaHCO3(3.98g，47.4mmol)和Na2CO3·10H2O(6.16g，21.55mmol)在300ml水的溶液中，室溫下滴加乙酸酐(2.236ml，23.7mmol)。
將溶液攪拌1小時，用2NHCl酸化至pH5，用乙酸乙酯萃取(4次)，水洗，干燥并蒸發，以得到一淺黃色固體。
該粗產物用己烷研磨，得到2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(4.20g;68.4%;m.p.187-190℃)。
向攪拌的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(4.20g，14.75mmol)在500ml95%乙醇的溶液中，滴加R-(+)-α-甲基芐胺(1.88ml，14.75mmol)。20分鐘后，將溶劑蒸發掉，殘留物用乙醚研制得到固體物(5.10g;m.p.130～150℃;[α]20D＝+2.5°(1%，CH3OH)。
用乙酸乙酯重結晶四次，得到1.12g(對映體收率37%)的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的(-)-α-甲基芐胺的鹽(m.p.154.5～156℃;[α]20D＝-60.8°(1%，CH3OH)。
向劇烈攪拌的(-)-α-甲基芐胺鹽(1.12g，2.76mmol)在乙酸乙酯(100ml)的溶液中，加入水(20ml)和1N HCl(2.9ml，2.9mmol)。30分鐘后，分出有機相，水相用乙酸乙酯萃取。合并的有機相用水洗，干燥并蒸發而得到淡棕色(-)-2-α-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代丁酸(0.76g;97%)固體(m.p.182～183.5℃(分解);[α]20D＝-88.7°(1%，CH3OH)。
將(-)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(0.76g，2.67mmol)在2N HCl(90ml)中的溶液，在回流溫度下加熱3小時，將該水溶液蒸發至干，將殘留物溶于水中，用CH2Cl2洗滌并再蒸發。將殘留物溶于水(30ml)中并用1N NaOH調pH至6.5，析出淡黃色固體物。將該固體過濾并用冷水洗滌，得到(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(0.40g;59.7%;m.p.210～211℃(分解);[α]20D＝+11.5(1%，CH3COOH;ee＝96%)。
將制備(-)-α-甲基芐胺鹽過程中所得的母液混合并蒸發，得到4.9g(12mmol)的固體。該(-)和(+)鹽的混合物和400ml乙酸乙酯，80ml水和1NHCl(12.6ml，12.6mmol)一起劇烈攪拌。30分鐘后，分出有機相，水相用乙酸乙酯萃取。合并的有機相用水洗，干燥并蒸發，得到富含(+)對映體的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(淡棕色固體)(3.41g;100%;m.p.172～178℃)。
向攪拌著的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(3.41g，11.97mmol)在400ml95%乙醇的溶液中，滴加(S)-(-)-α-甲基芐胺(1.52ml，11.97mmol)。20分鐘后，蒸發掉溶劑。用乙酸乙酯進行三次重結晶后得到1.49g(61.3%)2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的(+)-α-甲基芐胺鹽(m.p.154.5～155.5℃);[α]20D＝+60.9(1%，CH3OH)。
1.49g的上述鹽按上述，用于制備(-)對映體的方法進行，得到1.03g(98.5%)的(+)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(m.p.179～180℃，分解);[α]20D＝+89.0(1%，CH3OH)。
為了制備(R)對映體，按上述方法用(+)-2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸作起始物，得到0.65g(71.4%)的(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(m.p.208～209℃(分解);[α]20D＝-12.6°(1%，CH3COOH，ee＝96%)。
實施例5通過對映體有擇合成方法制備(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)。
在氮氣氛下，用冰浴冷卻4-氯-N-新戊酰苯胺(2.11g，10mmol)在30ml無水四氫呋喃中的溶液。然后滴加1.6M的正丁基鋰(15.625ml，25mmol)的己烷溶液，在0℃攪拌2.5小時后，于0℃在20分鐘內加入氯化三甲錫(2.19g，11mmol)溶于無水四氫呋喃(8ml)的溶液。然后將該反應物在0℃攪拌2小時，在室溫攪拌16小時，用水驟冷，并用乙酸乙酯萃取，有機相用鹽水洗滌，干燥并濃縮至干。殘留物在硅膠柱上用閃式層析純化(二異丙醚石油醚40°/70°＝1023)，得到3.1g4-氯-2-三甲基甲錫烷基-N-新戊酰苯胺的白色固體，(82.9%，m.p.169～172℃)。
＊Joc44，1133(1979)將4-氯-2-三甲基甲錫烷基-N-新戊酰基苯胺(1.6g，4.2mmol)和(S)-3-芐氧羰基-5-氧代-4-噁唑烷乙酰氯(1.25g，42mmol)溶于無水甲苯(50ml)中。向該溶液中加入Pd2(dba)3CHCl3(40.5mg)，該混合物在70℃加熱8小時。混合物冷卻后，通過硅藻土過濾除去催化劑，濾液濃縮，然后用乙酸乙酯稀釋;所得的溶液依次用飽和的碳酸氫鹽、水和飽和的NaCl洗滌，然后干燥并蒸發。殘留物在硅膠柱上用閃式層析純化(乙酸乙酯己烷＝830)，得到(S)-(+)-N-新戊酰-2-[1-氧-2-[3-(芐氧羰基)-5-氧代-噁唑烷-4-基]-乙基]-4-氯苯胺的無色晶體1.06g(53.5%);m.p.113～116℃;[α]20D＝-114.5(1%，乙酸乙酯)。
＊JOC53，6138(1988)。
將攪拌著的(S)-(+)-N-新戊酰-2-[1-氧-2-[3-(芐氧羰基)-5-氧-噁唑烷-4-基]乙基]-4-氯代苯胺(1.06g，2.24mmol)、37%HCl(20ml)、H2O(20ml)和CH3COOH(28ml)的混合物于70℃加熱5.5小時，將該溶液蒸發至干，殘留物溶于水(30ml)中，用CH2Cl2洗滌并再次蒸發，粗產物在硅膠柱上用閃式層析純化(氯仿甲醇30%NH4OH＝140606)，得到(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的黃色結晶(0.29g;51.5%;m.p.206～208℃;[α]20D＝-12.0°(1%;CH3COOH);ee＝96%)。
按類似方法，可以制備
(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸);[α]20D＝+11.5°(1%，CH3COOH)。
實施例6通過非對映異構體的形成和層析分離制備(S)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(L-5-氯代犬尿氨酸)和(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸)。
氮氣氛下，于5～8℃時，向攪拌著的2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基-4-氧代-丁酸(0.569g;2mmol)在無DMF(8ml)的溶液中，分批加入1，1′-羰基二咪唑(0.34g;2.1mmol)。在5℃攪拌1.5小時后，于3～5℃時，滴加(R)-(-)2-氨基-2-苯乙醇(0.33g;2.4mmol)在無水DMF(6ml)中的溶液。然后將反應物在冰浴中攪拌2小時，在室溫攪拌16小時，然后用水驟冷并用乙酸乙酯萃取。有機相用水洗滌，用無水硫酸鈉干燥，并濃縮至干。殘留物經閃式硅膠柱層析純化(乙酸乙酯甲醇＝982)，而得到2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-N-(2-羥基-1-苯基乙基)-4-氧代丁酰胺的黃色固體(0.18g;22%;m.p.212～215℃)(純非對映異構體Rf略小)。
將2-乙酰氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-N-(2-羥基-1-苯基-乙基)-4-氧代-丁酰胺(純非對映異構體Rf略小)(0.155g;0.383mmol)在2N HCl(15ml)中的溶液，回流加熱6小時，將該溶液蒸發至干，殘留物溶于水中，用CH2Cl2洗滌并再蒸發，粗產物經閃式硅膠柱層析純化(氯仿甲醇30%氨水溶液＝140606)，得到(S)-(-)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的黃色固體(0.048g;50%，m.p.205～208℃;[α]20D＝-12.0°(1%，CH3COOH)。
按照相似方法，可以制備下列化合物(R)-(+)-2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸(D-5-氯代犬尿氨酸);[α]20D＝+11.5°(1%，CH3COOH)。
實施例7口服施用的片劑片劑可以通過已知的方法如直接壓片法或濕法制粒法而制得。
例如，每片重0.250g且含有50mg活性物質的片劑可以按下述方法制得組成(10，000片)2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧丁酸500g乳糖1400g玉米淀粉500g滑石粉80g硬脂酸鎂20g將2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代丁酸、乳糖和一半量的玉米淀粉混合，將混合物擠壓通過0.5mm目的篩。將玉米淀粉(10g)懸浮于溫水(90ml)中，所得的漿液用于將粉制粒，干燥制成的粒，過1.4mm目篩，然后加入剩余的淀粉、滑石粉和硬脂酸鎂，小心混合然后壓片。
其它劑量的片劑可以通過調節活性物質與輔劑的比例來制得。
實施例8口服施用的膠囊每粒內含物為0.200g并含有20mg活性物質的膠囊可以按下述方法制得500粒膠囊的組成2-氨基-4-(2-氨基-5-氯苯基)-4-氧代-丁酸10g乳糖80g玉米淀粉5g硬脂酸鎂5g將上述物質裝入雙片硬度明膠膠囊中，每粒膠囊的內容物重0.200g。
實施例9肌內注射劑25mg/ml注射用藥物組合物可通過下述方法制得，將25g的2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸的鈉鹽溶于注射用水(100ml)中制成注射液，然后封于1～5ml的安瓿內。
權利要求
1.作為犬尿氨酸轉氨酶(KAT)抑制劑的一類化合物的使用，該類化合物用于治療與衰老相關的識知障礙及產期腦功能失調。
2.根據權利要求1的使用，其中用作犬尿氨酸轉氨酶(KAT)抑制劑的化合物是具有通式(Ⅰ)的化合物，其單一異構體或其異構體的混合物，及其藥用可接受的鹽。 其中R是鹵素、C1-C6烷基、C5-C7環烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;R1是羥基、C1-C6烷氧基、氨基、單C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羥基氨基、C1-C4烷氧基氨基或芐氧基氨基。
3.式(IA)的化合物，其單一異構體或其異構體的混合物，及其藥用可接受的鹽類， 其中R是鹵素、C1-C6烷基、C5-C7環烷基、苯基-C1-C4烷基、C1-C6烷氧基、C6-C10芳氧基、苯基C1-C4烷氧基或三氟甲基;R1是羥基，C1-C6烷氧基、氨基、單C1-C6烷基氨基、二-C1-C6烷基氨基、羥基氨基、C1-C4烷氧基氨基或芐氧基氨基，條件是(ⅰ)當R1是羥基且同時R是鹵素時，則該鹵素不是氟;(ⅱ)當R1是羥基且同時R是C1-C6烷基時，則該C1-C6烷基不是甲基。
4.根據權利要求3的通式(IA)的化合物，其單一異構體或其異構體的混合物，及其藥用可接受的鹽類，其中R是鹵素，C1-C6烷基或C5-C7環烷基;R1是羥基，條件是(ⅰ)當R是鹵素時，則該鹵素是不氟;(ⅱ)當R是C1-C6烷基時，則該C1-C6烷基不是甲基。
5.選自下述的化合物，其單一異構體或其異構體的混合物，及其藥用可接受的鹽類2-氨基-4-(2-氨基-5-氯代苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-乙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-溴代苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-正丙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-異丙基苯基)-4-氧代-丁酸;2-氨基-4-(2-氨基-5-環己基苯基)-4-氧代-丁酸。
6.一種制備權利要求2所定義的式(Ⅰ)化合物或權利要求3所定義的式(IA)的化合物，或其藥用可接受的鹽類的方法，該方法包括1)使式(Ⅱ)的化合物與氯代乙腈反應而得到式(Ⅲ)的化合物 其中R如權利要求2中式(Ⅰ)或權利要求3中式(IA)中所定義， 其中R定義如上。2)使式(Ⅲ)的化合物與乙酰氨基丙二酸的鈉鹽反應，而生成式(Ⅳ)的化合物 其中R定義如上。3)使上述定義的式(Ⅳ)化合物用濃鹽酸處理，生成式(Ⅰ)或(IA)的化合物，其中R定義如上，R1是羥基，并且如果需要，可以把式(Ⅰ)或(IA)的化合物轉化成R1部分不是羥基的(Ⅰ)或(IA)的其它化合物;并且如果需要，可以將式(Ⅰ)或(IA)的化合物異轉化成鹽，并且如果需要，可以將式(Ⅰ)或(IA)化合物的異構體混合物分離成單一的異構體。
7.一種藥用組合物，該組合物含有治療有效量的權利要求2的式Ⅰ化合物或根據權利要求3的式(IA)的化合物，或其藥用可接受的鹽類，及其藥用可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
8.根據權利要求7的藥用組合物，它用于治療衰老相關的識知障礙和產期腦功能失調。
全文摘要
本發明涉及某些化合物在治療與大腦衰老相關的識知障礙及產期腦功能失調方面的應用。本發明還提供了式(IA)表示的作為KAT抑制劑的新化合物，及其單一異構體或異構體混合物及其可藥用的鹽類，其中R是鹵素、C
文檔編號A61K31/00GK1113386SQ94190583
公開日1995年12月13日 申請日期1994年7月15日 優先權日1993年8月6日
發明者羅伯特·施瓦茨, 馬里奧·瓦拉西, 阿圖羅·D-托爾, 卡梅拉·斯佩謝拉, 艾伯特·布蘭切特 申請人:巴爾的摩的馬里蘭大學, 法馬西亞公司