專利名稱：3-芳酰基苯并[b]噻吩的磺酸酯和氨基甲酸酯衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及3-芳酰基苯并噻吩類，含有這類化合物的組合物，以及它們在預防骨損耗、治療血膽固醇過多癥及治療激素依賴的哺乳動物的乳房和子宮癌癥中的用途。
骨損耗的機制還不十分清楚，一般印象是，新骨形成和舊骨消溶的失衡導致了骨組織的凈損失，從而產生骨損耗癥。骨損耗包括骨中的無機物和蛋白質組分的減少，它導致骨折率，特別是股骨和前臂及脊椎骨的骨折率增加。這些部位的骨折依次導致總的發病率增加，身材明顯變矮，活動能力降低，在許多情況下由于并發癥而導致死亡率增加。
發生骨損耗的病人范圍很廣，他們包括絕經后的婦女，子宮切除術后的婦女，經歷過或正在經受長期住院治療的類皮質固酮癥患者、庫興氏皮質酮過多癥患者和生殖腺發育不全性的不育癥患者。
一種未得到證實的說法是，骨損耗能導致骨質疏松癥，這是一種衰弱性疾病，患者的突擊特點是在骨的體積不減少的情況下骨質丟失(密度降低，骨的空隙加大)，從而使骨變得疏松易碎。
一種很普通類型的骨質疏松癥發現于絕經后的婦女，該病患者僅在美國估計就達2000萬到2500萬。絕經后婦女骨質疏松癥的一個重要特點是由于卵巢停止產生雌激素而導致骨質的大量而迅速地流失。確實，文獻資料清楚地表明，雌激素能抑制骨質疏松性骨損耗的發展，在美國和其它許多國家均用雌激素替代物對絕經后婦女的骨質疏松癥進行有效的治療。
所有哺乳動物的細胞均需要膽固醇作為其細胞膜的結構性成分，也需要膽固醇來生成非固醇類最終產物。類固醇激素的合成也需要膽固醇。然而，正是膽固醇的這種不溶于水、因而使其在細胞膜中很有用的特性，也使得它具有潛在的致命性。當膽固醇沉積在不恰當的地方，例如沉積在動脈壁內，就很不容易再動員起來，就容易發展成一塊粥樣硬化斑。血清膽固醇濃度升高，加上低濃度的脂蛋白，已被證明是形成動脈粥樣硬化并使其發展的主要因素。
哺乳動物血清中的脂蛋白由膽固醇及膽固醇酯、甘油三酸酯、磷脂和脫輔基蛋白構成。血清或血漿脂蛋白由許多部分構成。血漿脂蛋白的主要部分為極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、中密度脂蛋白(IDL)和高密度脂蛋白(HDL)。這些部分的大小和密度不同，核心部分的甘油三酸脂和膽固醇酯的相對含量不同，表面脫輔基蛋白的性質也不同。
哺乳動物血清中的膽固醇來源包括外源性的飲食和內源性的合成。膽固醇的內源性合成涉及一系列復雜的酶催化的反應和調節機制，通常稱為甲羥戊酸酯途徑。在調節甲羥戊酸酯合成的過程中，細胞遇到一個復雜的問題，因為甲羥戊酸酯代謝的主要終產物膽固醇來自血漿低密度脂蛋白(該蛋白通過細胞內變體介導的作用進入細胞)，也來自細胞內的合成。每個細胞必須平衡這些外源性和內源性的膽固醇，以便維持甲羥戊酸酯的合成，同時又要避免固醇類物質的過多積累。通過在甲羥戊酸酯合成中至少兩種相繼的酶的反饋調節(3-羥-3-甲基戊二酰輔酶A[HMG-COA]合成酶和HMG-COA還原酶)以及LDL變體的反饋調節，可以實現這種平衡。在沒有LDL時，哺乳動物細胞中這兩種酶保持著高度的活性，從而合成了甲羥戊酸酯，進而生成膽固醇以及非固醇類產物。當存在來自外源的LDL時，HMG-COA合成酶和還原酶的活性受到抑制，細胞產生的能最終生成非固醇類終產物的甲羥戊酸酯的量也較少。
大量的事實表明，對高脂蛋白血癥進行治療可以減少或預防動脈粥樣硬化并發癥。除了為保持正常的體重和盡量降低血脂濃度而制定特定的食譜外，治療方案還包括消除導致加重高脂蛋白血癥的各種因素以及服用治療藥物，這些藥物可以通過減少產生脂蛋白或加強從血漿中除去脂蛋白的作用而降低血漿中脂蛋白的濃度。
目前已有一類很有希望的藥物用于治療高血膽固醇癥，其作用方式為抑制HMG-COA還原酶，這是一種限制內源性膽固醇合成速率的酶。這類藥物競爭性地抑制這種酶的活性。這一來就降低了膽固醇的內源性合成，而且通過正常的內環境穩定的機制，血漿中的膽固醇被LDL受體清除，從而恢復細胞內的膽固醇平衡。
相對于體內其它細胞而言，肝細胞既可釋放LDL前體，又能經受體介導從血清中吸收LDL，從而在保持血清膽固醇內環境穩定方面起著關鍵作用。在人和動物模型中，肝臟的LDL受體和與LDL相聯系的血清膽固醇水平之間存在一種反相關關系。一般地說，較高的肝細胞受體數導致較低的與LDL相聯系的血清膽固醇水平。釋放到肝細胞的膽固醇可以作為膽固醇酯貯存起來，可以轉化為膽酸而被釋入膽管，或者進入一個氧膽固醇庫。正是這種氧膽固醇庫，據信與LDL受體基因的最終產物的抑制有關，也與涉及到膽固醇合成途徑的一些酶的最終產物的抑制有關。
在冠心病發病率很高的人群中，女性病例數明顯地少于男性病例。低年齡組中(如35-44歲的男人和婦女)尤其如此。
一般來說，血漿中脂蛋白的代謝受生殖腺固醇類物質在循環中的濃度的影響。因生殖腺狀態的變化或因服入了外源性的生殖腺固醇類而引起的血清中的雌激素和雄激素濃度的改變也伴隨著血清中脂蛋白水平的改變。受雌激素和雄激素的影響而發生的變化證明了這樣一種看法，男女間脂蛋白水平的差異是由于性激素不同造成的。
一般認為性腺固醇類與血漿脂蛋白之間的關系是雄激素降低HDL濃度而增加LDL，因此男人血漿中HDL低而LDL高。雌激素的作用正相反，它提高HDL的濃度而降低LDL的濃度。這種因性激素不同而導致的脂蛋白深度的差異被認為是婦女較男人的心血管病發病率低的原因之一。絕經期后，婦女推動了雌激素的保護作用，心血管病的發病率也就增加到男人的水平。絕經后的婦女，其服用雌激素者，一般較同是絕經后的婦女而不服用雌激素者的心血管病發病率要低。雌激素(特別當口服時)能降低血漿中LDL的水平而提高HDL的水平。
雌激素降低LDL的水平而提高HDL水平的機制尚不清楚。一般地講，血漿中某種脂蛋白濃度的變化是由于它的合成速率或分解代謝速率的改變引起的。例如，在動物中，由于雌激素增加了肝中LDL受體的數量，它可以通過加強從血漿中清除LDL而降低LDL的濃度。
三苯氧胺(1-對-β二甲氨基乙氧苯基-反式-1，2-二苯基-丁-1-烯)是眾所周知的拮抗雌激素的化合物，具有抗哺乳類乳腺癌的活性。見The Merch Index，11th Ed.，1430(1989)。此外，三苯氧胺的類似物也有抗雌激素的活性，包括抗哺乳類動物乳腺癌的活性(美國專利No.4，623，660)。許多其它的化合物也都有類似的抗雌激素的活性，可以抑制哺乳動物乳腺癌的生長。例如，美國專利No.4，133，814公開了2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩及其-1-氧化物;美國專利No.4，230，862描述了3-苯基-4-芳酰基-1，2-二氫萘和1-芳酰基-2-苯基萘;美國專利No.4，418，068則公開了6-羥-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b′]-噻吩。
雖然雌激素對于骨和血脂具有有益的作用，但即便給予很低的劑量，長期的雌激素治療也會產生各種失調和疾病，包括增加發生子宮癌和乳腺癌的危險，使得許多婦女不愿接受這種治療。近來提出的一些治療方案試圖減少腫瘤的危險，例如同時服用孕激素和雌激素，使患者有規律地停藥出血，這種方案對大多數老年婦女是不適用的。對雌激素治療的明顯的毒副作用的擔心，加之雌激素在改善骨損耗癥方面的作用有限，因而需要發展一種替代的方法來治療骨損耗、高膽固醇血癥和激素依賴的哺乳動物乳腺癌和子宮癌，替代的治療方法會有效而無毒副作用。
為滿足這一需要，使用了一類通常叫作抗雌激素的化合物，它們可與雌激素的受體反應，目前僅取得了有限的成功，可能是因為這類化合物通常兼具顯效劑和拮抗劑的作用。即，雖然這類化合物能拮抗雌激素與其受體發生反應，但在具有雌激素受體的組織中，這類化合物本身就可以引起雌激素反應。因此，某些抗雌激素治療同樣有像雌激素治療那樣的付作用。
本發明提供了若干化合物和含有這些化合物的藥物制劑，以及抑制骨損耗、治療高膽固醇血癥和激素依賴的哺乳動物乳腺癌和子宮癌的方法，它們基本上沒有雌激素療法所固有的付作用，因此可以對上述疾病和癥狀進行有效而可接受的治療。
本發明提供了新的具有下式結構的3-芳酰基苯并[b]噻吩及其藥學上可用的鹽和溶劑化物其中 X為一個鍵或-CH2-;
R2為選自吡咯烷子基、哌啶子基或六亞甲基亞氨基的雜環;
R為-OH、-OSO2-(CH2)n-CH3或 R1為氫、-OH、氟、氯、-OSO2-(CH2)n-CH3或 ;
每個R3分別為C1-C6烷基、C3-C6環烷基、未取代的或取代的苯基，其中所述取代基為氟、氯、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基;
每個n分別為3、4或5;
條件是至少R和R1之一為-OSO2-(CH2)n-CH3或 。
本發明也提供了藥物制劑，其中含有式Ⅰ化合物以及與之混合的藥學上可用的載體、稀釋制或賦型劑。
本發明還提供了預防骨損耗、治療高膽固醇血癥和激素依賴的哺乳動物乳腺癌和子宮癌的方法，這些方法包括給予需要這種治療的哺乳動物有效量的一種式Ⅰ化合物。
式Ⅰ化合物至少可以用甲酮(methanone)作為分子母體或用苯并[b]噻吩作為分子母體明確地對其命名。為便于說明，以下用上述的一種或兩種分子母體命名式Ⅰ化合物。
用于描述式Ⅰ化合物的一般的化學術語具有它們通常的含義。例如，“烷基”一詞單用或作為其它取代基的一部分，均表示具有所述的碳原子數目的直鏈或支鏈的烷基，如甲基、乙基、丙基和異丙基以及所指定的更高級同系物和異構體。
“烷氧基”一詞表示具有所稱數目碳原子并連接一個氧原子的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基，也包括支鏈結構，如異丙氧基。
式Ⅰ的苯并[b]噻吩可抑制婦女在因自然原因、外科手術或其它原因導致停經后由于內源性雌激素的缺乏而引起的骨損耗。男人的骨密度降低和骨持損耗也與激素調節的減少有關，因此也屬本發明治療方法的醫治對象。
式Ⅰ的苯并[b]噻吩也能降低人的血清膽固醇水平。多種病理狀態和失調，包括婦女因自然原因、外科手術或其它原因導致的停經后出現的內源性雌激素缺乏以及生殖腺畸形患者，均可引起血清膽固醇增高。
式Ⅰ化合物，當投以有效劑量時，可用于治療激素依賴的哺乳動物乳腺癌和子宮癌。本文所用的“治療激素依賴的乳腺癌和子宮癌”一詞表示清除或抑制(包括預防)哺乳動物的乳腺癌和子宮癌。“有效劑量”一詞表示足以預防或治療哺乳動物乳腺癌和子宮癌的活性物質的劑量。
“激素依賴的癌癥”一詞通常指的是那些因哺乳動物的激素的有無和多少而影響其發生和發展的癌癥。這些激素包括(但并不僅限于)雌激素和催乳激素。
式Ⅰ的苯并噻吩是一系列非類固醇類化合物，它們在主要的性靶組織中對常規雌激素受體表現有很高的親合力。然而，它們在那些組織中只引起最低限度的雌激素反應，實際上它們是天然雌激素(如雌二醇)的強有力的拮抗物。與其它結構上明確的抗雌激素類化合物不同的是，式Ⅰ的這類苯并噻吩在主要的性靶組織中能拮抗典型的雌激素反應，而在骨密度和血清膽固醇水平方面卻能引起雌激素反應。這種兩重性表明在特異的靶細胞中有選擇的促效/拮抗活性，在預防骨損耗和治療高膽固醇血癥時非常希望有這樣的活性。因而，本發明的一個主要優點就是式Ⅰ的苯并噻吩能抑制骨損耗，降低血清膽固醇水平，但在主要的性靶組織中不引起明顯的雌激素反應。因此，本發明提供了抑制骨損耗、降低血清膽固醇水平的方法，它包括給予需要治療的人服用一定量的式Ⅰ化合物，所述一定量是指這樣一種劑量，它能抑制骨損耗和/或降低血清膽固醇水平、但又不明顯地影響主要的性靶組織。
本發明的優選化合物是下述的式Ⅰ化合物其中R2為吡咯烷子基或哌啶子基;R為-OSO2-(CH2)n-CH3;R1選自氟、氯或-OSO2-(CH2)n-CH3;每個n各自為3、4或5;以及它們的藥學上可用的酸成鹽和溶劑化物。
特別優選的化合物是下述的式Ⅰ化合物及其藥學上可用的酸成鹽和溶劑化物其中R2為一個哌啶子環;R為-OSO2-(CH2)n-CH3;R1為-OSO2-(CH2)n-CH3;每個n各自為3或4。
如上所述，本發明包括由上述式Ⅰ所定義的化合物的藥學上可用的鹽。式Ⅰ的化合物可與許多無毒的無機堿以及無毒的無機和有機酸反應而生成藥學上可用的鹽。通常用來生成藥學上可用的酸加成鹽的酸包括無機酸(如鹽酸、溴酸、碘酸、硫酸、磷酸等)和有機酸(如對甲苯磺酸、甲磺酸、對溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等)。因此，藥學上可用的鹽的實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、葵酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，苯乙酸鹽，苯丙酸鹽，苯丁酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，γ-羥基丁酸鹽，乙醇酸鹽，酒石酸鹽，甲磺酸鹽，丙磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽，扁桃酸鹽等等。優選的藥學上可用的酸成鹽是與礦物酸(如鹽酸和溴酸)以及有機酸(如檸檬酸)形成的酸成鹽。
堿加成鹽實例包括與無毒的無機堿(如銨或堿金屬或堿土金屬的氫氧化物、碳酸鹽，碳酸氫鹽等等形成的鹽。因此，用于制備本發明鹽的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鉀。特別優選鉀鹽和鈉鹽形式。
本發明的化合物可按已有的方法制取，如美國專利No.4，133，814和No.4，418，068號所介紹的方法，這兩個專利均并入本文作參考。上述美國專利給出了制取類似化合物的實施例。一般來說，合成的過程用含有6-羥基和2-(4-羥苯基)的苯并[b]噻吩為原料。將原料化合物保護起來、烷基化、再隨意地去保護，生成式Ⅰ的化合物。然后，如果愿意，可以制備更多的式Ⅰ的化合物。本發明的化合物的具體制備方法敘述如下，有必要對上述方法做些改良以適應具體取代基的反應功能性。這些改良對本專業人員來說是明確的和顯而易見的。
藥學上可用的酸加成鹽典型地是通過將式Ⅰ化合物與相同克分子數或過量的堿或酸反應而生成的。各反應物通常是在共溶劑(如乙醚或苯)中混合。正常情況下大約在1小時到10天內可從溶液中沉淀析出鹽，然后用過濾的方法把鹽分離出來，或用常規方法把溶劑除去。
另外，某些式Ⅰ化合物可與水或有機溶劑(如乙醇)形成溶劑化物。這些溶劑化物也可用于本發明的方法中。
下述實施例僅說明本發明化合物的制備，決不是對其加以限制。
實施例1[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將5.1g(10mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)-苯并[b]噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽懸浮于250ml四氫呋喃中，加7.1g(70mmol)三乙胺。用冰浴將反應混合物冷卻至0℃，加10mg二甲氨基吡啶(DMAP)。緩緩加入4.7g(30mmol)正丁基磺酰氯。將反應混合物置于氮氣中，緩慢加熱至室溫，保持72小時。將反應混合物過濾并蒸發成油狀。將油狀殘渣再溶解于氯仿中，用硅膠柱做色層分離，用線性梯度的氯仿→氯仿-甲醇(19∶1;v∶v)洗脫。將所需要的部分合并，蒸發干燥，生成5.60g標題化合物，為棕黃色的非晶狀粉。
C36H43NO8S3MS(FD)m/e＝714(M+1)NMR與所給出的結構完全一致。
實施例2[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將5.4g[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮溶于乙酸乙酯(EtOAc)中，加入用Hcl飽和的乙醚溶液直到不再生成沉淀。將液體潷去，用乙醚研磨固體成分。從熱的EtOAc中結晶出3.74g標題化合物，為白色粉末。
C36H43NO8S3-HCl元素分析元素分析: C H N計算: 57.7 5.88 1.87實測值: 57.75 5.93 1.93
NMR與所給出的結構完全一致。
實施例3[6-(正戊基磺酰氧基)-2-[4-(正戊基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將3g(5.9mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的鹽酸鹽懸浮在100ml四氫呋喃(THF)中，加入10mg DMAP，再加3g(30mmol)三乙胺。將反應混合物于室溫中在氯氣覆蓋下攪拌20分鐘。將2-5g(14.7mmol)正戊基磺酰氯溶解在25mlTHF中，并慢慢加到攪拌著的反應混合物中。在室溫下使反應在氮氣中進行18小時。將反應混合物過濾，以真空蒸發法除去揮發性物質。將生成物溶于小量氯仿中，用硅膠柱做色譜分離(HPLC)，以線性梯度的氯仿至氯仿-甲醇(19∶1v/v)洗脫。用薄層色譜法(TLC)鑒定所需要的部分，將其合并，蒸發，產生3.82g標題化合物，為粘稠的油狀物。
C38H47NO8S3NMR與所術結構完全一致MS(FD)m/e＝743(M+2)元素分析: C H N計算值: 61.51 6.39 1.89實測值: 57.63 6.44 1.50實施例4[6-(正戊基磺酰氧基)-2-[4-(正戊基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將3.7g[6-(正戊基磺酰氧基)-2-[4-(正戊基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮溶于25ml EtOAc中，加入HCl-Et2O的乙醚溶液。形成了沉淀，將液體潷去。將此粘性的固體用Et2O研磨，室溫下真空干燥，產生2.12g標題化合物，與白色非晶狀并具吸濕性的固體。
C38H47NO8S3·HClNMR與所述結構完全一致元素分析: C H N計算值: 58.63 6.22 1.80實測值: 57.35 6.45 1.38實施例5[6-(正己基磺酰氧基)-2-[4-(正己基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將3g(5.9mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-甲酮鹽酸鹽懸浮于250ml THF中，加10mg DMAP。加4g(40mmol)三乙胺。將反應混合物在室溫下用氮氣覆蓋攪拌20分鐘。將溶于25ml THF中的3.6g(19.6mmol)正己基磺酰氯加入反應混合物中。在室溫下使反應在氮氣中進行3天。將反應混合物真空蒸發，再懸浮于EtOAc中，用水洗滌。將有機層通過無水Na2SO4過濾干燥并蒸發生成黃色油狀物。將此油狀物溶于氯仿中，在硅膠柱上做高壓液相色譜(HPLC)分離，以氯仿至氯仿-甲醇(19∶1v/v)的線性梯度洗脫。用TLC法鑒定所需要的部分，合并后蒸發，產生3.14g標題化合物，稠油狀。
C40H51NO8S3NMR與所述結構一致MS(FD)m/e＝771(M+1)元素分析: C H N計算值: 62.39 6.68 1.82實測值: 62.33 6.62 2.03實施例6[6-(正己基磺酰氧基)-2-[4-(正己基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將3g[6-(正己基磺酰氧基)-2-[4-(正己基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮溶于20ml EtoAc中，加HCl-Et2O。沒有沉淀生成。將反應混合物蒸發成稠油狀，用Et2O研磨數次，室溫下真空干燥，產生1.64g標題化合物，為白色非晶狀并具吸濕性的粉末。
NMR與所述結構一致元素分析: C H N計算值: 59.67 6.50 1.74實測值: 59.47 6.59 1.77
C40H51NO8S3-HCl實施例7[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮檸檬鹽酸鹽的制備將2g(2.8mmol)[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮溶于200ml丙酮中，加0.63g(3mmol)檸檬酸。在室溫下將反應混合物覆蓋于氮氣中18小時。將反應混合物在50℃下真空蒸發。用乙醚將反應混合物研磨數次，室溫嚇真空干燥，產生2.35g標題化合物，為白色的非晶狀并具吸濕性的粉末。
元素分析: C H N計算值: 55.68 5.67 1.55實測值: 55.39 5.60 1.60NMR與所述結構一致實施例8[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-苯基]甲酮的制備將2.5g(4.77mmol)[6-羥基-2-[4-羥基苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-苯基]甲酮的鹽酸鹽溶于100ml THF中，再加入3.9g(39mmol)三乙胺和10mg DMAP。在室溫下將反應混合物通氮攪拌15分鐘。將溶于15ml THF中的4g(25.5mmol)正丁基磺酰氯緩緩加入。在室溫下使反應在通氮條件下進行18小時。加入25ml甲醇使反應停止，真空干燥使反應物濃縮。用硅膠柱對粗產物做色譜分離，用氯仿-甲醇(19∶1v/v)洗脫。用TLC法鑒定所需要的部分，將其合并，并蒸發成棕黃色的油狀物。
實施例9[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[3-(1-哌啶基)丙氧基]-苯基]甲酮溶于EtOAc-己烷中，吹泡通入HCl氣。將反應混合物蒸發，用硅膠柱做HPLC分離，用CHCl3再用CHCl3-MeOH(19∶1v/v)洗脫。用TLC檢測出所需要的部分，合并后蒸發，產生2.5g標題化合物，為棕黃色非晶狀粉末。
NMR與所述結構一致MS(FD)m/e＝728(M-HCl)元素分析: C H N計算值: 58.14 6.07 1.83實測值: 57.90 6.05 1.82C37H46NO8S3-HCl實施例10[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將1.5g(3mmol)[6-羥基-2-[4-羥基苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽懸浮于200ml THF中。加1.5g(15mmol)三乙胺和10mg 4-N，N-二甲氨基吡啶。將反應混合物通氮攪拌數分鐘。將1.56g正丁基磺酰氯(10mmol)溶于50ml THF中，在20分鐘內將其緩慢加入反應混合物中。室溫下將反應混合物通氮攪拌18小時。真空蒸發使反應混合物成膠狀。將此粗產物懸浮于100ml EtOAc中，先用NaHCO3溶液再用水洗滌。將有機層通過無水Na2SO4干燥，并蒸發成黃色油狀物。最終產物從熱的EtOAc-己烷中結晶出來，產生410mg標題化合物。
MNR與所述結構一致MSm/e＝700(M+1)FD元素分析: C H N計算值: 60.2 5.86 2.01實測值: 59.94 5.94 2.00MW＝699C35H41NO8S實施例11[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將350mg[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]-苯基]甲酮(0.5mmol)溶于10ml EtOAc中，加入鹽酸乙醚飽和溶液。不產生沉淀，將反應混合物蒸發成膠狀的白色固體。將產物用Et2O研磨2次，過濾，室溫下真空干燥，產生220mg標題化合物。
NMR與所述結構一致元素分析: C H N計算值: 57.09 5.75 1.90實測值: 57.27 5.91 1.86MW＝736.37C35H41NO8S3-HCl實施例12[6-羥基-2-[4-正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)-乙氧基]苯基]甲酮的制備將20g[6-羥基-2-[4-羥基苯基]苯并[b]噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮(Raloxifene)的鹽酸鹽(0.04mol)懸浮于250ml THF中。加入10g三乙胺(0.1mol)和10mg4-N，N-二甲氨基吡啶。將反應混合物通氮攪拌數分鐘。將6.25g正丁基磺酰氯(0.04mol)溶于25ml THF中，于20分鐘內將此緩慢加入反應混合物中。在室溫下使反應在N2中進行5天。將反應混合物蒸發成膠狀，懸浮于EtOAc中。將此EtOAc混合物依次用水、稀NaHC3和水洗滌。通過無水Na2SO4使此EtOAc溶液過濾并蒸發，得非晶形固體。
將生成的固體溶于50ml CH2CL2中，用硅膠柱做色譜分離(HPLC)，以線性梯度的氯仿至氯仿-甲醇(19∶1v/v)洗脫。TLC法檢測出4個部分，真空蒸發得非晶形固體。
A部分為[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮，5.43gB部分為[6-羥基-2-[4-(正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮，2.19gRf＝0.50，硅膠，氯仿-甲醇(19∶1)v/vC部分為[6-正丁基磺酰氧基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮，3.60gRf＝0.41，硅膠，氯仿-甲醇(19∶1)v/vD部分為Raloxifene，3.94g將所有的B部分溶于熱EtOAc中，加入己烷，結晶出來的標題化合物為1.89g。
NMR與所述的結構一致元素分析: C H N計算值: 64.8 5.90 2.36實測值: 64.85 6.07 2.49C32H35NO6S2實施例13[6-羥基-2-[4(正丁基磺酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將1.7g[6-羥基-2-[4(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮(2.86mmol)溶于EtOAc中，加入HCl-Et2O的飽和溶液。有混濁的白色沉淀析出。潷去液體，用Et2O將余下的固體研磨兩次，干燥后產生1.57g標題化合物，為白色的非晶狀粉末。
NMR與所述的結構一致元素分析: C H N計算值: 60.99 5.76 2.22;
實測值: 61.17 5.88 2.27C32H35NO6S2-HClMSm/e＝594(M-Hcl)F.D.
實施例14[6-正丁基磺酰氧基-2-[4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將實施例12中所有的C部分溶于50ml熱的EtOAc和己烷中。沒有結晶析出。真空蒸發除去溶劑，產生3.17g標題化合物，為白色的油狀固體。
NMR與所述的結構一致。
MSm/e＝594(M+1)FD元素分析: C H N計算值: 64.8 5.90 2.36;
實測值: 64.37 5.87 2.28MW＝593C32H35NO6S實施例15[6-正丁基磺酰氧基-2-[4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將3g[6-正丁基磺酰氧基-2-[4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶于50ml EtOAc中，加入Et2O的HCl飽和溶液。析出混濁的白色沉淀，將液體潷去。用Et2O研磨固體兩次使之干燥。生成2.51g標題化合物，為白色非晶狀的粉末。
NMR與所述的結構一致。
元素分析: C H N計算值: 60.99 5.76 2.22;
實測值: 60.71 5.84 2.21MW＝630.23C32H35NO6S2-HClMSm/e＝594(M-Hcl)F.D.
實施例16[6-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]-2-[4-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將5.56g(10.7mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶于200ml干THF中，加5.45g(35.2mmol)4-氯苯基異氰酸酯。將反應混合物在室溫下通氮攪拌。18小時后真空蒸發除去溶劑，再溶于氯仿中。將此氯仿溶液冷卻到-20℃24小時，濾去所生成的沉淀。將其余溶液在硅膠柱上做色譜分離(Waters Prep 500，HPLC)，用線性梯度的氯仿至氯仿-甲醇液(19∶1)(v/v)洗脫。用TLC鑒測所需要的部分，合并后蒸發干燥，生成4.01g標題化合物，為棕黃色的非晶狀粉末。
C42H35Cl2N3O6S元素分析: C H N計算值: 64.6 4.48 5.38實測值: 65.69 4.81 4.83MS(FD)m/e＝779.781實施例17[6-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]-2-[4-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將4.01g[6-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]-2-[4-[N-(4-氯苯基)氨甲酰氧基]苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮溶于200ml乙醚中，加少量THF以調節此溶液。加入用HCl飽和的乙醚溶液直到沒有更多的沉淀生成為止。將反應混合物蒸發干燥，用乙醚研磨數次。將鹽從熱的EtOAc和無水乙醇中結晶出來，效果很好。蒸發掉溶劑，產生2.58g標題化合物，為棕黃色非晶狀粉末。
C42H35Cl2N3O6S-HCl元素分析: C H N計算值: 61.73 4.44 5.14實測值: 57.43 4.29 4.19NMR與所述的結構一致而且含有不定量的溶劑。
實施例18[6-(N-正丁基氨甲酰氧基)-2-[4-正丁基氨甲酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]-苯基]甲酮的制備將4.47g(9mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶于250ml THF中，加入4g(40mmol)正丁基異氰酸酯。在室溫通氮條件下使反應混合物反應72小時。然后將反應混合物蒸發，用很少的氯仿將殘余物溶解。將此溶液上硅膠柱做色譜分離(HPLC)，用線性梯度的氯仿至氯仿甲醇液(19∶1)洗脫，產生4.87g標題化合物，與棕黃色非晶狀粉末。
元素分析: C H N計算值: 67.73 6.75 6.52實測值: 66.43 6.67 6.24.
MS(FD)m/e＝672(M+1)NMR與所述的結構一致實施例19[6-(N-甲基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-甲基氨甲酰基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將3g(5.9mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的鹽酸鹽用250ml無水THF制成懸液。向此懸液中加入2g(10mmol)三乙胺，將反應混合物在室溫下通氮攪拌約15分鐘。將5.8g(20mmol)甲基異氰酸酯加入攪拌著的混合物中。使反應進行36小時。將反應混合物過濾并真空蒸發干燥。將殘余物溶于30ml氯仿中，上硅膠柱做色譜分離(HPLC)，用線性梯度的氯仿至氯仿-甲醇溶液(19∶1)洗脫。用TLC法分析各種成分，將所需要的成分合并并真空蒸發干燥，生成2.2g標題化合物，為非晶形粉末。
NMR與所述的結構一致IR3465，2942，1741cm-1(CHCl3)MSm/e＝588(M+1)FDC32H33N3O6S.
實施例20[6-(N-甲基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-甲基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將2g[6-(N-甲基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-甲基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶于20ml EtOAc中，加入HCl-乙醚溶液，生成白色沉淀。將反應混合物真空蒸發至干。將固體成分用丙酮-乙酸乙酯結晶，過濾，用EtOAc洗滌，干燥，生成1.98g標題化合物。
NMR與所述的結構一致元素分析: C H N計算值: 61.58 5.49 6.73實測值: 61.25 5.96 5.97.
C32H34clN3O6S.
實施例21[6-(N-乙基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-乙基氨甲酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將4g(7.85mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的鹽酸鹽用250ml無水THF制成懸液，加入3g(30mmol)三乙胺。室溫下將反應混合物通氮攪拌15分鐘。加入1.67g(23.5mmol)乙基異氰酸酯。24小時后，用TLC檢查，發現反應并末進行完全。再加4.5g異氰酸酯。96小時后將反應混合物過濾，像實施例19一樣進行色譜分離，生成4.23g標題化合物，為白色非晶形粉末。
NMR與所述的結構一致。
MSm/e＝616(M+1)FDC34H37N3O6S.
實施例22[6-(N-乙基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-乙基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備本化合物基本上用與實施例20相同的方法制取，得3.58g標題化合物。
NMR與所述的結構一致。
元素分析: C H N計算值: 62.61 5.87 6.44;
實測值: 62.33 6.16 6.41.
C32H38ClN3O6S.
實施例23[6-(N-異丙基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-異丙基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將4g(7.85mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽用250ml無水THF制成懸液，加3g(30mmol)三乙胺。在室溫下將反應混合物通氮攪拌15分鐘。
加入2.77g(32.6mmol)異丙基異氰酸酯。24小時后，用TLC法檢測反應的進行程度，發現尚未反應完全。再加10.8g(130.4mmol)這種異氰酸酯，使反應再進行96小時。按實施例19所述方法將所想要的化合物大量分離出來，得4.01g標題化合物，為棕黃色的非晶形粉末。
NMR與所述的結構一致。
MSm/e＝644(M+1)FDC36H41N3O6S
實施例24[6-(N-異丙基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-異丙基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備本化合物基本上是按實施例20的方法制取的，得到3.58g標題化合物，為白色晶狀粉。
NMR與所述的結構一致。
元素分析: C H N計算值: 63.56 6.22 6.18實測值: 63.63 6.52 5.95C36H42ClN3O6S.
實施例25[6-(N-環己基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-環己基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將3g(5.9mmol)[6-羥基-2-(4-羥基苯基)-苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽用250ml無水THF制成懸液，加2g(20mmol)三乙胺。室溫下將反應混合物通氮攪拌15分鐘。加14.5g(105mmol)環己基異氰酸酯。使反應進行48小時，然后再加20mmol這種異氰酸酯。24小時后基本按實施例19的方法將所要的化合物分離出來，產生4.07g標題化合物，為棕黃色的非晶狀粉末。
NMR與所述的結構一致。
MSm/e＝724(M+1)FD
C42H49N3O6S實施例26[6-(N-環己基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-環己基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備按實施例20所述之相同方法將3.9g[6-(N-環己基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-環己基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮轉換為其鹽酸鹽，并從熱EtOAc中將其結晶出來。產生3g標題化合物，為白色粉末。
NMR與所述的結構一致。
元素分析: C H N計算值: 66.34 6.63 5.53實測值: 66.32 6.92 5.62C42H50ClN3O6S.
實施例27[6-(N-苯基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-苯基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的制備將3g(5.9mmol)[6-羥基-2[4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮的鹽酸鹽用250ml無水THF制成懸液，加2g(20mmol)三乙胺。室溫下將反應混合物通氮攪拌15分鐘。加入15ml苯基異氰酸酯，使反應進行96小時。再加5ml異氰酸酯。48小時后將反應混合物過濾并蒸發成油狀，用正庚烷研磨此油狀物，潷去液體。將此油狀物溶于氯仿中，上硅膠柱做色譜分離(HPLC)，用線性梯度的氯仿至氯仿-甲醇(19∶1)洗脫。將所想要的部分合并起來并蒸發成油狀，產生3.31g標題化合物。
NMR與所述的結構一致。
MSm/e＝711和一些212(二苯脲)C42H37N3O6S實施例28[6-(N-苯基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-苯基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備將3.2g[6-(N-苯基氨甲酰氧基)-2-[4-(N-苯基氨甲酰氧基)-苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮溶于EtOAc中并過濾。在此溶液中加入HCl-乙醚，產生白色沉淀。將液體潷去將固體溶于少量的丙酮中并過濾。然后使之蒸發干燥產生270mg標題化合物，為棕黃色非晶狀粉末。
元素分析: C H N計算值: 67.42 5.12 5.62實測值: 67.51 5.37 5.50C42H38ClN3O6S.
基本上遵循上述方法，本專業人員均可制備式Ⅰ化合物。
如上所指出的，本發明的化合物可用于阻止骨損耗，降低血清膽固醇水平，治療激素依賴的哺乳動物的乳腺癌和子宮癌。因此，本發明的另一實例是阻止骨損耗、降低血清膽固醇和治療激素依賴的乳腺癌和子宮癌的方法，即給需要治療的哺乳動物施用阻止骨損耗、降低血清膽固醇和抑制激素依賴的乳腺癌和子宮癌有效劑量，式Ⅰ化合物或其藥學上可用的鹽或溶劑化物。
此處所用“有效劑量”一詞的意思是本發明化合物的一定量，使用該量的本發明化合物能夠阻止骨損耗、降低血清膽固醇水平或抑制激素依賴的乳腺或子宮癌。本發明的方法包括臨床治療和/或預防投藥，視情況而定。當然，按照本發明，為收到治療和/或預防效果所需服用的本發明化合物的具體劑量將取決于患者的具體情況，包括所用的化合物、給藥途徑、以及所治療的病情。典型的日劑量為每公斤體重0.1～1000mg本發明的活性化合物，此為無毒性作用劑量水平，可以單服本發明的化合物，也可與雌激素同服，或與雌激素制成合劑。優選的日劑量一般為0.5～600mg/kg，理想的劑量為1.0～300mg/kg。通常可接受的雌激素的有效日劑量為0.01～4.0mg，典型用量是0.1～2.0mg。
本發明的方法適用于女人和男人。由于男人實際上缺乏雌激素反應，因此男人應用本發明方法不會產生雌激素或雌激素顯效劑所引起的男人女性化癥狀，如男子的女性化乳房。然而本發明方法更適用于婦女，特別是雌激素缺乏的婦女。所說的骨損耗是骨質減少而骨的體積不變，如骨質疏松和庫興氏癥。雌激素缺乏癥可以自然地發生，例如絕經以后或外科手術后。曾經或正在長期服用類皮質酮的患者以及生殖腺發育不全的患者也可以應用本發明的化合物、制劑和方法。
本發明化合物的給藥途徑有多種，包括經口、經直腸、皮膚、皮下、靜脈內、肌肉內和鼻內給藥。在投用本發明的化合物前最好將其制成制劑。因此，本發明的另一實例是藥物制劑，該制劑包括有效劑量的式Ⅰ化合物或其藥學上可用的鹽或溶劑化物，或者是它們之一與雌激素的混合物;以及藥學上可用的載體、稀釋劑或賦型劑。
制劑中活性成分的含量為0.1-99.9%(重量)。“藥學上可用的”一詞表示該載體、稀釋劑或賦型劑必需與配方中的其它成分相容并且對其接受者無害。
本發明的藥物制劑按已知方法用眾所周知且容易得到的成分制備。在制備本發明的組合物時，通常將活性成分與載體混合起來，或用載體稀釋，或者包于一種載體內，這種載體可以是膠丸、膠囊、紙或其它容器。當用載體作稀釋劑時，這種載體可以是固體、半固體或液體物質，它們作為活性成份的載體、賦形劑或介質。因此，本發明的組合物可被制成片劑、丸劑、粉劑、錠劑、藥囊、扁藥囊、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿、氣霧劑(固體或溶于液體介質中)、軟的和硬的明膠膠囊、栓劑、滅菌注射液、滅菌的粉劑等等。典型的局部用藥制劑是含有高達10%(w/w)活性成分的軟膏、乳膏、膠凍和洗劑。
下列的制劑實例只是為了說明本發明，而決不是限定本發明的范圍。當然，“活性成分”一詞表示式Ⅰ的一種化合物或其藥學上可用的鹽或溶劑化物。
制劑1使用下列成分制備硬膠囊量(mg/每膠囊)活性成分 250干淀粉 200硬脂酸鎂 10總量 460mg制劑2使用下列成分制備片劑: 量(mg/片)活性成分 250微晶纖維素 400煙化二氧化硅 10硬脂酸 5總量 665mg將上述成分混合壓成665mg/片的藥片.
制劑3用下列成分制成氣溶膠溶液:
重量活性成分 0.25乙醇 25.75推進劑22(氯二氟甲烷) 70.00總量 100.00
將活性成分與乙醇混合后，將混合物加到推進劑22中，冷卻到-30℃后轉移到一個灌裝機內，然后向一個不銹鋼容器內灌入所需的量，用其余的推進劑稀釋，然后將容器裝上閥門。
制劑4每片含60mg活性成分的片劑，制法如下每片含60mg活性成分的片劑,制法如下:
活性成分 60mg淀粉 45mg微晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(1%水溶液) 4mg羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石 1mg總量 150mg將活性成分，淀粉和纖維素過篩(No.45目U.S.篩)，充分混勻。將含聚乙烯吡咯烷酮的溶液與上述的混合粉混勻，再將此混合物過篩，(No.14目U.S篩)。將如此產生的顆粒在50℃下干燥，過篩(No.18目U.S篩)。將預先過了篩(No.60目U.S篩)的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石與以上生成的顆粒混合，用壓片機制片，做成每片150mg的片劑。
制劑5每粒含80mg有效成分的膠囊，制法如下活性成分 80mg淀粉 59mg微晶纖維素 59mg硬脂酸鎂 2mg總量 200mg將活性成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合后過篩(No.45目U.S.篩)，裝到硬膠囊里，每粒硬膠囊裝此過了篩的混合物200mg。
制劑6每粒含225mg活性成分的栓劑，制法如下活性成分 225mg飽和脂肪酸甘油酯 2,000mg總量 2,225mg將活性成分過篩(No.60目U.S.篩)后懸浮于預先用最低必需熱量熔化的飽和脂肪酸甘油酯中，然后將此混合物倒入一容積有2g的栓劑模子中并使之冷卻。
制劑7每5ml中含50mg活性成分的混懸乳液的制法如下活性成分 50mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25ml苯甲酸溶液 0.10ml調味劑 適量食品色素 適量去離子水加到總量 5ml將活性成分過篩(No.45目U.S.篩)后與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成滑潤的膏狀物。將苯甲酸液、調味劑和色素用一點水稀釋，邊攪拌邊加到上述膏狀物中。然后加入足夠的水得所需體積的產物。
制劑8靜脈給藥的制劑配制如下活性成分 100mg等滲鹽水 1,000m含上述成分的溶液，一般經靜脈給藥，速率為1ml/min。
以下是在絕經后骨質疏松模型中的效果評價，其中測定了不同治療后對遠端股骨密度和血清膽固醇水平的影響。
骨密度75日齡的雌性Sprague Dawley大鼠(體重225-275g)是從密西西比州Portage市的Chacles River實驗室得到的。每3只一組籠養，任意進食(含鈣約1%)和水。室溫保持在22.2°±1.7℃，最低濕度40%R.H.。光照時間為L∶D＝12∶12。這些大鼠經1周飼養后在麻醉(44mg/kg酮亞胺和5mg/kg Xylazine[印地安那州，印地安那波利斯，Butler]，肌注)狀態下行雙側卵巢切除術。用安慰劑或雌激素治療，或在手術當天從麻醉中恢復過來后即開始投以式Ⅰ的化合物。口服(管飼法)劑量為0.5ml1%羧甲基纖維素(CMC)。手術當天及手術后每周一次測定體重，根據體重變化調整劑量。用安慰劑或雌激素治療的切除了卵巢的(OVX)鼠和未切除卵巢的鼠(未受損的)作為陰性和陽性對照與各實驗組的結果做平行評價。
每天對鼠進行治療，共進行35天(每個治療組6只鼠)，第36天用CO2窒息法將鼠處死。在有些情況下，要在CO2處死前抽取被麻醉的老鼠(酮亞胺/xylazine)的心臟血樣做膽固醇分析。35天對于最大的骨密度減少來講已經足夠了。處死老鼠時摘出子宮，剝去體外組織，測濕重前排掉液體內容物以確定與卵巢全切除相關的雌激素缺乏。卵巢切除一般會使子宮失重約75%。然后將子宮置于10%中性緩沖福爾馬林中以便隨后做組織學分析。
將右側股骨切除，用單色光子吸收比色計在股骨的遠干骺端距髕骨溝1mm處檢測。密度計的讀數代表骨密度值，它是骨中無機物含量和骨寬度的函數。
血清膽固醇(4天測定)75日齡的雌性Sprague Dawley大鼠來自密西西比州Portage的查爾斯河實驗室(Charles River)，體重200-225g。這些大鼠或做雙側卵巢切除(OVX)，或在查爾斯河實驗室做假外科手術，一周后再運來。這些鼠一運到即被飼養在金屬的掛籠中，每籠3-4只鼠，任意進食(鈣含量約0.5%)和水，飼喂一周。室溫保持在22.2±1.7℃，最低相對濕度40%，室內光照為L∶D＝12∶12。
投藥安排/組織取樣經過一周的適應階段后(即OVX后2周，即開始每天按劑量投以試驗的化合物。所有化合物均口服，劑量為1ml/kg體重，另有說明者除外。17β-雌二醇(以20%聚乙烯甘醇為載體)經皮下投藥，17α-乙炔基雌二醇和試驗的化合物經口服給藥(另有說明者除外)，劑型為1%羧甲基纖維素或20%環糊精懸劑。給大鼠每日投藥，共4天。然后將大鼠稱重，用酮亞胺Xylazine(2∶1(v∶v))混合劑麻醉大鼠，心臟穿刺采取血樣。然后用CO2窒息法處死大鼠，沿腹中線切開取出子宮并稱其濕重。
膽固醇分析室溫下2小時使血樣凝結，3000rpm離心10分鐘獲得血清。用Boehringer Mannheim Diagostics高效膽固醇分析儀測定血清膽固醇。簡言之，即將膽固醇氧化產生膽甾-4-烯-3-酮和過氧化氫。然后H2O2與苯酚和4-氨基非那宗在有過氧化物存在的情況下反應產生一種對一醌亞胺染料，用分光光度計在500nm處讀取結果。然后根據標準曲線計算膽固醇的濃度。整個分析工作是用Biomek自動工作臺自動進行的。
子宮嗜曙紅細胞過氧化物酶分析將做骨密度測定和血清膽固醇測定時取出的子宮在做酶測定之前保存于4℃。然后用含0.005%Triton x-100的50nM Tris緩沖液(pH8.0，數量為子宮體積的50倍)將子宮勻漿。加入0.01%過氧化氫和用Tris緩沖液配制的10mM鄰苯二胺(終濃度)，在450nm處記錄吸收度的增加1分鐘。子宮中嗜曙紅細胞的存在是化合物具有雌激素活性的指征。在反應曲線開始的線性部分外檢出了15秒間隔的最大速度。
化合物來源17β-雌二醇和17α-乙炔基雌二醇購自密蘇里州圣路易斯的Sigma化學品公司。
統計所有各實驗組均包括5-6只大鼠。用方差單向分析法進行統計比較。當有顯著差異時(P≤0.05)，用Post-hoc范圍分析將平均數離散。以百分變異(%)表示結果，該百分變異是與用載體治療的OVX鼠作對照經比較計算而得出的。
在美國專利No.4，418，068中，[6-(甲基磺酰氧基)-2-[4-(甲基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽和[6-(苯基磺酰氧基)-2-[4-(苯基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽的制備是以羥基保護的中間產物形式(該中間產物用于該專利所公開的化合物的合成)公開的。上述試驗中也制備和評價了這些中間產物。
4天治療的結果如表1所示，35天治療的結果列于表2。表3和表4列出的結果為用同樣的方法對美國專利No.4，418，068中(羥基)保護的中間產物的評價結果，以及對本發明范圍之外的磺酸酯類似物(按式Ⅰ，其中R和R1為-OSO2-(CH2)n-CH3，n為2或6，X為一個鍵，R2為哌啶子基)的評價結果(只作4天投藥的評價)。
表14-天 OVX實施例號 劑量 子宮重 嗜曙紅細胞過氧化物酶 血清膽固醇(mg/kg) (%增加) (Vmax) (%降低)1 0.1 -7.2 5.2 32.01 -8.9 5.6 44.810 -6.4 5.0 65.22 0.01 0 4.2 00.1 22.4 4.2 32.91 32.6 5.2 58.010 27.6 7.0 69.94 0.1 -8.4 5.2 -10.91 -1.3 3.2 14.710 24.2 5.6 37.76 0.1 -11.8 3.8 29.71 -11.8 4.1 15.110 10.1 4.4 26.69 0.1 19.5 4.7 31.71 43.9 7.3 52.010 56.1 22.9 73.011 0.1 2.8 14.9 33.41 17.7 14.4 61.710 22.3 10.1 62.313 0.1 33.3 7.7 44.41 12.5 7.6 72.010 25.0 5.5 75.215 0.1 6.3 5.3 72.71 16.7 4.8 69.910 -2.0 5.3 72.120 0.01 16.7 5.3 24.30.1 19.0 4.9 23.01 45.2 10.7 52.022 0.1 48.8 3.1 43.81 35.1 3.7 65.510 41.8 1.2 63.024 0.1 34.9 4.8 28.21 42.3 7.1 56.110 50.5 5.3 55.726 0.1 13.0 3.5 12.21 23.7 4.6 51.310 14.4 5.2 52.8
表235-天 OVX實施例號 劑量 骨中無機物含量 子宮重 血清膽固醇(mg/kg) (%保護) (%增加,比OVX) (%降低,比OVX)2 0.01 -40 14.4 0.90.1 -17.5 49.0 16.41.0 -7.5 71.2 30.710.0 50 73.5 48.24 0.01 10.7 -1.0 2.30.1 14.7 -4.8 -371.0 41.3 74.8 -2410.0 54.2 83.3 51.36 0.01 6.7 13.4 -1.50.1 10.0 16.2 -15.81.0 0 27.6 -11.610.0 40.0 77.6 -2.020 0.01 -2.1 38.6 45.00.1 20.8 89.2 42.61.0 12.5 78.4 57.710.0 25 90.6 53.622 0.01 -24.4 -2.3 9.20.1 6.7 55.0 31.91.0 44.4 48.4 53.510.0 42.2 48.8 59.524 0.01 -24.4 4.2 19.90.1 33.3 40.0 30.61.0 31.1 81.6 49.610.0 64.4 42.0 50.526 0.01 0 1.3 0.50.1 -29.2 41.1 39.41.0 54.2 96.9 51.810.0 50.0 62.5 45.028 0.01 -0.6 13.4 -6.10.1 42.7 61.8 10.41.0 22.1 80.8 4.4
DMBA引導的哺乳動物腫瘤的抑制產生哺乳動物腫瘤的Sprague-Dawley大鼠購自印地安那州印地安那波斯的Harlan公司。約在55日齡時，給大鼠一次性口服7，12-二甲基苯并[a]蒽(DMBA)20mg。服用DMBA后6周，每周觸摸乳腺檢查是否出現腫塊。一旦查出一個或數個腫塊，則用卡尺測出每個腫塊的長徑和短徑，記錄測量結果，該大鼠即被選做實驗用。盡量使分在試驗組和對照組的動物的腫塊大小一致，以便使各試驗組同腫塊的平均大小相等。每次實驗的對照組和試驗組各有5-9只大鼠。每次實驗中試驗動物的平均數列于此處的各數據表中。
試驗化合物的給藥途徑或經口服或以2%阿拉伯膠的劑型腹膜下注射。若口服則化合物溶解或懸浮于0.2ml玉米油中。每次處理，包括阿拉伯膠和玉米油的對照處理，每日對每只試驗大鼠只“投藥”一次。在最初一次測量了腫塊的大小并選定了試驗動物后，每周均按上述方法測量一次腫塊的大小。對試驗動物的“投藥”和測量持續3-5周，最后再測定一次腫塊的大小。測定每種化合物和對照組“投藥”使腫塊大小的平均值改變的幅度。分析腫塊大小變化的平均值是否有顯著意義(用Student′s t檢驗)。這些試驗的結果列于表5。
權利要求
1.下式的化合物及其藥學上可用的鹽和溶劑化物 其中X為一個鍵或-CH2-；R2為選自吡咯烷子基、哌啶子基或六亞甲基亞氨基的雜環；R為-OH、-OSO2-(CH2)n-CH3或 ；R1為氫、-OH、氟、氯、-OSO2-(CH2)n-CH3或 ；每個R3分別為C1-C6烷基、C3-C6環烷基、未取代的或取代的苯基，其中所述取代基為氟、氯、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基；每個n分別為3、4或5；條件是至少R和R1之一為-OSO2-(CH2)n-CH3或 。
2.權利要求1的化合物，其中R2為吡咯烷子基或哌啶子基環。
3.權利要求1的化合物，其中R為-OSO2-(CH2)n-CH3，n為3、4或5。
4.權利要求3的化合物，其中R1為氫、-OH、氯、氟或-OSO2-(CH2)n-CH3，n為3、4或5。
5.權利要求1的化合物，其中R2為哌啶子基環;R和R1為-OSO2-(CH2)n-CH3;每個n各自分別為3或4。
6.權利要求5的化合物，它是[6-(正丁基磺酰氧基)-2-[4-(正丁基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮或其藥學上可用的鹽或溶劑化物。
7.權利要求5的化合物，它是[6-(正戊基磺酰氧基)-2-[4-(正戊基磺酰氧基)苯基]苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮或其藥學上可用的鹽或溶劑化物。
8.一種藥物制劑，它包括權利要求1至7中任一權項的一種化合物作為活性成分，以及與之混合的一種或多種藥學上可用的載體。
9.權利要求1至7中任一權項的化合物用于阻止骨損耗。
10.權利要求1至7中任一權項的化合物用于降低血清膽固醇水平。
11.權利要求1至7中任一權項的化合物，用于治療激素依賴的乳腺癌或子宮癌。
全文摘要
本發明涉及3-芳酰基苯并[b]噻吩的磺酸酯和氨基甲酸酯衍生物、含有這些化合物的藥物制劑方法以及應用這些化合物抑制骨損耗、降低血清膽固醇水平和治療激素依賴的哺乳動物乳腺癌和子宮癌的方法。
文檔編號A61K31/38GK1097420SQ94102910
公開日1995年1月18日 申請日期1994年3月17日 優先權日1993年3月19日
發明者L·J·布拉克, H·U·布拉恩, G·J·庫力南 申請人:伊萊利利公司