專利名稱：骨誘導素的制作方法
技術領域：
本發明是屬于骨科和口腔科臨床應用的一種生物材料，能替代自身植骨和促進骨后生長。
現有的制備方法一般是這樣的取兔、鼠和狗等四肢長骨，去掉軟組織和骨髓，分別依次放入氯仿、甲醇混合液中脫脂1小時，0.6N HCl脫鈣24h，2M CaCl2浸泡1小時和0.5M EDTA浸泡1小時，然后用8M LiCl處理1小時，再在55℃水浴中1小時，所得產物稱為骨基質明膠。上述制備方法的缺點在于(1)因各種試劑處理的時間短，不能充分去除脂肪和非膠原性蛋白，加上缺乏免疫抑制劑的處理，故不能明顯降低最終產物“骨基質明膠”的抗原性，因而只能用于實驗動物，而禁忌用于臨床；(2)不能用于豬、牛等大動物骨的脫鈣，而為了工業化批量生產，這是必不可少的；(3)8M LiCl使骨膠原纖維收縮劇烈，而且濃度太高，成本昂貴；(4)缺乏一套適合于工業化生產的規范的操作流程，也無規范的樣品劑型、包裝和消毒；(5)沒有將骨干和骨骺分開進行處理(一般是不要骨骺)，這樣不僅損失了一半的骨源，使成本上升，而且骨骺制成粒狀后療效較骨干更佳；(6)在制備程序上，本法是先將骨制備成條型和粒型后，再進一步脫指和非膠原蛋白的提取，這樣由于面積擴大了，提取的效率也大大提高，而現有的方法缺乏先成型后制備的步驟。
本發明的目的是利用我國價廉易得的豬骨，制備一種能用于我國骨科和口腔科臨床，明顯促進折逾合和替代自身植骨的生物材料-骨誘導素。
本發明是這樣實現的取新鮮后殺的豬四肢長骨，去除所有的軟組織和骨膜，水洗后，在干骺端部位鋸斷，將骨干和骨骺分開。骨骺據成約0.5cm厚薄片狀，將骨干內的內髓去除，并將其鋸成約3-4cm長，用水徹底凈殘存血液。將骨干和骨骺分別浸泡入1∶1氯仿甲醇液中，體積比1∶3，共浸泡2-3天，每24小時換液一次。去除氯仿甲醇，用水將骨洗凈，然后加入0.6N鹽酸脫鈣，體積比1∶3，每24-48小時換液，直至所有骨變軟，時間約10-20天。去除HCl，充分洗去殘存酸液后，骨干部分成型為1×1×40mm8顆粒狀，再分別用1∶1氯仿、甲醇液浸泡2天，每24小時換液直至液體呈白色，無分層。去除氯仿、甲醇液后充分水洗，使其揮發干燥。分別加入2M氯化鈣，體積比為1∶3，共48小時，每24小時換液。傾去氯化鈣，流水充分沖洗后，加入飽和EDTA-Na2液，體積比1∶3，48小時，每24小時換液。去除EDTA-NA2液并用流水洗水殘液后，加入4M氯化鋰，體積比1∶2，共48小時，每24小時換液。傾去氯化鋰液，用蒸餾水反復漂洗去除殘存液體，然后冷凍干燥，用環氧乙烷消毒，安訊分裝，存放于-18℃待用。
本發明的骨誘導素是利用牛骨、豬骨等動物的大塊骨頭制作的，充分去除抗原性成份，具有免疫抑制劑處理，能制作人體的骨頭。
實施例將牛骨的四肢長骨去除所有軟組織、骨膜和骨髓，用水洗干凈，在干骺部分鋸斷，將骨干和骨骺分開，骨骺部分鋸成3×2×2cm骨塊，骨干鋸成4×2×2cm骨塊，骨干和骨骺分別浸泡在1∶1的氯仿和甲醇溶液中，體積比為1∶3，共浸泡2天，每天換液一次，去除氯仿、甲醇溶液，用水洗凈，加入0.6N鹽酸進行脫鈣至變軟，時間為15天，每天將變軟的骨塊取出，去除氯化氫，水洗，骨干部分成型為1×1×40mm3條狀，骨骺部分成型為2×2×2mm3顆粒狀，再分別用1∶1氯仿、甲醇浸泡2天，每天換液一次，濾去氯仿、甲醇，進行水洗，揮發干燥，分別加入2M氯化鈣，進行2天浸泡，體積比為1∶3，每天換液一次，去除氯化鈣后水洗，然后加入飽和EDTA-Na2，體積比為1∶3，浸泡2天，每天換液一次，去除EDTA-Na2溶液，進行水洗，加入4M氯化鋰，體積比為1∶3，浸泡2天，每天換液，濾去氯化鋰，用蒸餾水，漂洗，洗去殘存液體，進行冷凍干燥，用環氯乙烷消毒后釋放1天，存放在-18℃里。
權利要求
1.一種骨誘導素，其特征在于將骨干和骨骺分開，骨骺鋸成薄片狀，骨干鋸成長條狀，將骨干內的骨髓去除，清洗，然后將骨干和骺分別浸泡1∶1氯仿甲醇液中，共浸泡2-3天，每24小時換液一次，過濾，清洗，然后加入0.6N鹽酸脫鈣，時間為10-20，每24小時換液，過濾清洗；將骨干成型為條狀，骨骺為顆粒狀，再分別用1∶1氯仿、甲醇液浸泡2天，每24小時換液，過濾，水洗，干燥，再加入到2M氯化鈣里，浸泡2天，每天換液一次，過濾、水洗，加入飽和EDTA-Na2溶液2天，每天換液一次；過濾，水洗，加入4M氯化鋰X浸泡2天，然后過濾，用蒸餾水漂先，冷凍干燥，進行消毒而成。
2.根據權利要求，所述的骨誘導素，其特征在于骨干和骨骺與氯仿甲醇溶液的體和比為1∶3。
3.根據權利要求1所述的骨誘導素，其特征在于消毒劑是環氧乙烷。
全文摘要
本發明的骨誘導素，其特征在于將骨頭鋸成小片，浸匯在1∶1氯仿甲醇液中2天，然后過濾加入到0.6M鹽酸進行脫鈣10—20天過濾成型，再在1∶1氯仿甲醇液中浸泡2天，再加入到2M氯化鈣里浸泡2天，水洗，加入飽和EDTA-Na 本發明的骨誘導素是利用牛、豬等動物的大塊骨頭制作的，充分去除抗原性成分具有免疫抑制劑處理，能代替人體的骨頭。
文檔編號A61L27/00GK1101573SQ9311868
公開日1995年4月19日 申請日期1993年10月13日 優先權日1993年10月13日
發明者胡曉波 申請人:胡曉波