專利名稱：具有中樞抑制作用的取代肉桂酸及其鹽類衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種具有中樞神經(jīng)抑制作用因而有可能成為一種新的鎮(zhèn)靜、安眠、麻醉和抗驚厥藥物的取代肉桂酸及其鹽類衍生物。
關(guān)于取代肉桂酸(β-苯丙烯酸)類衍生物在抗驚厥和抗癲癇方面的作用已有不少研究和報(bào)道，其中主要是對(duì)改變了化合物結(jié)構(gòu)中苯環(huán)取代基的肉桂酰胺類化合物在藥效方面影響的研究，并以北京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院研究工作的報(bào)道為多。如，《藥學(xué)學(xué)報(bào)》1987(6)420-425介紹了具有一氯或一溴或二氯取代苯環(huán)結(jié)構(gòu)的一系列α-溴代肉桂酰胺類化合物。該雜志1986(8)580-585也報(bào)道了38個(gè)包括有上述取代基及其它取代基的苯環(huán)結(jié)構(gòu)的一系列肉桂酰胺化合物。這些研究工作一方面均僅局限于在抗驚厥作用方面，并且尚僅為在小鼠動(dòng)物試驗(yàn)階段的結(jié)果，另一方面他們由各自不同角度的研究工作得出并支持了一個(gè)相同的結(jié)論，即，苯環(huán)上同時(shí)帶有兩個(gè)鹵原子，例如二氯取代，并不是最適宜的取代基，而帶有一個(gè)氯或一個(gè)溴的化合物抗驚厥活性似更強(qiáng)。
《國(guó)外醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)分冊(cè)》1987(6)253-255介紹了另一種結(jié)構(gòu)的取代肉桂酰胺類實(shí)驗(yàn)性廣譜抗癲癇新藥，分子式為間-溴-N-乙基桂皮酰胺，其苯環(huán)結(jié)構(gòu)為間位的溴取代。但由該文獻(xiàn)報(bào)道的試驗(yàn)結(jié)果可知，在治療的第一個(gè)月，中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性及胃腸毒性明顯，表明其作為藥物使用尚不是最理想的。
對(duì)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物另一個(gè)需引起重視的是其成癮性問(wèn)題。目前的研究顯示，結(jié)構(gòu)中含有共價(jià)結(jié)合態(tài)的氮，例如某些生物鹼等，是引發(fā)成癮傾向的一個(gè)原因。上述各文獻(xiàn)雖未對(duì)所報(bào)道的酰胺類化合物在成癮性方面作出說(shuō)明，但卻有進(jìn)一步研究和探討的必要。
根據(jù)上述情況，本發(fā)明的目的在于提供一種新的肉桂酸類化合物，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)和初步臨床觀察，表明其制成口服或注射等藥學(xué)上可接受的劑型后均可望成為一種有價(jià)值的中樞神經(jīng)抑制型藥物。
本發(fā)明的化合物為2-氯-4-溴-α-甲基肉桂酸及其堿金屬鹽或乙二胺鹽類化合物，其結(jié)構(gòu)為
其中M為H或堿金屬元素或乙二胺。在堿金屬元素中，以鉀、鈉，特別是鈉最為方便和常用。
本發(fā)明化合物的合成可以由2-氯-4-溴甲苯為原料，經(jīng)氧化得到相應(yīng)的苯甲醛后，再與丙酸酐縮合而得到本發(fā)明所說(shuō)的肉桂酸產(chǎn)物。經(jīng)與氫氧化鈉(或鉀)、碳酸鈉(或鉀)等堿金屬堿性化合物中和即得到相應(yīng)的肉桂酸鈉鹽或鉀鹽;若以1∶1或以2∶1摩爾比與乙二胺反應(yīng)則可分別得到單肉桂酸乙二胺鹽或雙肉桂酸乙二胺鹽的不同產(chǎn)物。
具體合成實(shí)施例如下將82克2-氯-4-溴甲苯與330毫升醋酐混合，冷卻攪拌下滴加90毫升濃硫酸。于0～5℃滴加由120克鉻酐與600毫升醋酐配成的冷氧化液。滴加完繼續(xù)攪拌1小時(shí)后，傾入2.5升冰水中，靜置。濾取固體，水洗，研細(xì)，用10%碳酸鈉浸泡后過(guò)濾，水洗至中性，于200毫升95%乙醇、200毫升水和20毫升濃硫酸的混合液中回流2小時(shí)，再傾入冰水中，靜置，過(guò)濾，水洗至中性。用95%乙醇重結(jié)晶，得到相應(yīng)的苯甲醛的白色針狀產(chǎn)物74克，收率84%，mp74～76℃。
將69克無(wú)水碳酸鉀與260克丙酸酐攪拌混合后，加入220克上步得到的苯甲醛產(chǎn)物，升溫并回流10小時(shí)后，傾入冰水中，濾取固體，水洗。在堿性條件下水蒸汽蒸餾除去殘留的未反應(yīng)苯甲醛，趁熱過(guò)濾。濃鹽酸酸化濾液，冷卻，過(guò)濾，固體水洗，95%乙醇重結(jié)晶，得到199克2-氯-4-溴-α甲基肉桂酸產(chǎn)物，收率72%，mp153～155℃。
元素分析C10H8O2BrCl，理論值為C43.59，H2.93，X(Br，Cl)41.87;實(shí)測(cè)值為C43.46，H2.97，X41.80。
1HNMR值(δppm)7.82(1H，m，J＜2Hz，-CH＝)，
7.63(1H，d，J＝1.9Hz，H-3)，7.45(1H，dd，J5，6＝8.2Hz，J5，3＝1.9Hz，H-5)，7.22(1H，d，J＝8.2Hz，H-6)2.01(3H，d，J＝1.4Hz，-CH3)。
質(zhì)譜分析(M+)274/276/278的相對(duì)強(qiáng)度為3/4/1，證明分子中含氯，溴原子各1個(gè)。
由美國(guó)《J.Am.Chem.Soc.》1966;88(22)5213關(guān)于α-甲基肉桂酸順-反異構(gòu)體β-H的核磁共振譜數(shù)據(jù)，順式δ＝6.73，反式δ＝7.80，可以推知本發(fā)明上述合成的肉桂酸產(chǎn)物應(yīng)為取代苯基與羧基呈反式的結(jié)構(gòu)。
為增加水溶性，分別將此肉桂酸產(chǎn)物與氫氧化鈉和乙二胺制成其鈉鹽和雙酸乙二胺鹽后，進(jìn)行了毒性、藥理及臨床等項(xiàng)試驗(yàn)。
一、毒性及三致試驗(yàn)采用昆明種小白鼠(體重18～22克)，雌雄各半，作急性毒性試驗(yàn)的結(jié)果，鈉鹽LD50(mg/kg)值分別為灌胃995.1，腹腔注射351.1，靜脈注射353.5。以翻正反射消失為指標(biāo)的麻醉作用ED50(半數(shù)有效量，mg/kg)值分別為灌胃261，腹腔注射112.7，靜脈注射59.4。其治療指數(shù)為3～6，其中口服為3.81，腹腔注射為3.12，靜脈注射為5.95。表明了其與硫噴妥鈉相近，較為安全。胺鹽經(jīng)口服，小鼠的LD50為859mg/kg，大鼠(Wistar大鼠，體重170～280克，雌雄各半)的LD50為2240mg/kg，按化學(xué)物質(zhì)急性經(jīng)口毒性分級(jí)，也屬于低毒類化合物。
以體重為100～150克雌雄各半的大白鼠(75只)為對(duì)象，按每公斤體重20、50、100和200毫克標(biāo)準(zhǔn)口服灌胃連續(xù)30天作鈉鹽的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)，結(jié)果表明，在給藥期間除200和100毫克組初期有鎮(zhèn)靜及食欲下降現(xiàn)象外，其余各組在活動(dòng)度、皮毛、食欲、體重、血象等方面與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均為P＞0.05)。常規(guī)病理切片鏡檢發(fā)現(xiàn)200毫克組的肝、腎組織上皮細(xì)胞有水樣變性(P＜0.05)，且此種改變有顯著的量效關(guān)系，100毫克組次之，但50與20毫克組未發(fā)現(xiàn)有此種病理改變。腦、心、脾、腎上腺等其余組織則未見有病理改變發(fā)生。
以體重7～11公斤的犬各12只(均雌雄各半)對(duì)鈉鹽和胺鹽以口服灌胃方式作長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)觀察，鈉鹽給藥劑量(mg/kg)分別為40和120連續(xù)給藥3個(gè)月;胺鹽給藥劑量(mg/kg)分別為40、80和120(均用3%淀粉溶液配成4%和8%的混合液)，連續(xù)給藥6個(gè)月。各對(duì)照組均灌以同容積的蒸餾水。試驗(yàn)結(jié)果灌服鈉鹽后，動(dòng)物進(jìn)食、活動(dòng)、毛發(fā)、體重及腎功能等均正常，觀察發(fā)現(xiàn)藥物在肝、腎及腸組織中的分布最高，血常規(guī)中的淋巴細(xì)胞及肝功能中的TTT指標(biāo)有較顯著的改變(P＜0.05)，表明長(zhǎng)期大量使用對(duì)淋巴細(xì)胞的生成和/或破壞有一定影響，對(duì)肝功能的一定毒性作用。灌服胺鹽后，動(dòng)物的一般狀況也均良好，對(duì)造血功能及肝、腎功能無(wú)明顯影響，病理組織切片也未見實(shí)質(zhì)性損害，但大劑量(120mg/kg)長(zhǎng)期連續(xù)使用則可使紅細(xì)胞及血清總蛋白明顯下降。
對(duì)胺鹽通過(guò)Ames試驗(yàn)、微核試驗(yàn)和體外中國(guó)倉(cāng)鼠(CHL)細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)進(jìn)行的致突變性試驗(yàn)和以已交配昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行的致畸性試驗(yàn)結(jié)果表明，胺鹽的濃度范圍為5～1562μg時(shí)，無(wú)論是加或不加S9活化系統(tǒng)，Ames試驗(yàn)均呈陰性;根據(jù)50%細(xì)胞生長(zhǎng)抑制量及中期分裂相細(xì)胞受抑制情況確定出最高劑量的各劑量組受檢物(加或不加S9)誘發(fā)CHL細(xì)胞染色體畸變率均在正常范圍內(nèi);各劑量組均未引起小鼠胸骨骨髓MNPCE率的明顯增加。致畸試驗(yàn)中，各劑量組均未影響胎鼠存活和生長(zhǎng)發(fā)育，也未引起胎鼠的外觀、內(nèi)臟和骨骼畸形。因此，可推論該胺鹽在通常臨床用藥量下對(duì)人類可能是比較安全的。
二、藥效試驗(yàn)以小白鼠、大白鼠、家兔及靈長(zhǎng)目動(dòng)物樹鼩為試驗(yàn)動(dòng)物對(duì)上述鈉鹽和胺鹽分別作鎮(zhèn)靜和抗癲癇等中樞神經(jīng)抑制作用試驗(yàn)表明，鈉鹽的特點(diǎn)是水溶性強(qiáng)且速效，小劑量鎮(zhèn)靜，加大劑量可催眠，再大劑量可麻醉(動(dòng)物翻正反射消失)，經(jīng)口服、腹腔注射、皮下注射或靜脈注射均有效，并且靜脈注射可有針頭麻醉的效果(即藥物推注完，動(dòng)物即已被麻醉)。胺鹽的特點(diǎn)是作用時(shí)間持續(xù)較長(zhǎng)，對(duì)抗戊四氮等化學(xué)性驚厥和電驚厥作用較鈉鹽為強(qiáng)。
對(duì)小白鼠、大白鼠和家兔以翻正反射消失為指標(biāo)作麻醉試驗(yàn)的ED50(mg/kg)小白鼠為59.4(靜脈注射)，112.7(腹腔注射)，261(灌胃);大白鼠為102(靜脈注射);家兔為50～100(靜脈注射)。
體重1.7～2.8公斤的雄性家兔按200mg/kg劑量腹腔注射鈉鹽后，10～15分鐘開始出現(xiàn)睫毛反射遲鈍，30～35分鐘后極度遲鈍，70～150分鐘后恢復(fù)正常。記錄大腦皮層電圖(ECoG)表明中樞神經(jīng)活動(dòng)處于抑制狀態(tài)的梭形波和高幅慢波明顯增多，與生理鹽水對(duì)照組比較其出現(xiàn)百分率在1、2、3甚至4小時(shí)的差異均極顯著(P＜0.01)。
用胺鹽對(duì)體重為110～181克雌雄兼有的樹鼩以400mg/kg劑量灌胃給藥后，出現(xiàn)鎮(zhèn)靜時(shí)間平均為12.88分鐘，20分鐘后血中濃度達(dá)到高峰，鎮(zhèn)靜持續(xù)時(shí)間平均為98分鐘。表明胃腸道吸收較快，出現(xiàn)鎮(zhèn)靜的時(shí)間快。
對(duì)鈉鹽以體重1.7～2.5公斤雄性家兔以腹腔注射給藥方式作對(duì)抗肌注馬桑內(nèi)酯(3mg/kg)所致的癲癇試驗(yàn)，由遙測(cè)記錄ECoG的結(jié)果表明，隨劑量不同，藥效也不同。在100mg/kg時(shí)，不能使動(dòng)物免除癲癇的生發(fā)，只能減輕其發(fā)作程度;在200mg/kg時(shí)，不僅能減輕發(fā)作程度，也能使癲癇發(fā)生率降低。說(shuō)明鈉鹽能減低癲癇發(fā)生率、延長(zhǎng)潛伏期、減輕發(fā)作程度和降低死亡率。
對(duì)胺鹽以上述的樹鼩為試驗(yàn)動(dòng)物以灌胃給藥方式作對(duì)抗馬桑內(nèi)酯(5mg/kg，肌注)所致癲癇試驗(yàn)的結(jié)果表明，小劑量(100mg/kg)不能完全對(duì)抗小發(fā)作，大劑量(400mg/kg)可完全對(duì)抗，而小劑量對(duì)抗大發(fā)作比大劑量更有效。
類似的其它試驗(yàn)也表明，在對(duì)抗戊四氮和印防已毒素等化學(xué)性驚厥和電驚厥上二者均有效，且胺鹽作用強(qiáng)于鈉鹽。但在同樣試驗(yàn)條件下二者均不具有對(duì)抗士的寧(脊髓型致驚劑)所致的驚厥，說(shuō)明其對(duì)抗驚厥的作用部位可能在高級(jí)神經(jīng)系統(tǒng)。
三、初步臨床試驗(yàn)觀察以公認(rèn)的神經(jīng)衰弱診斷標(biāo)準(zhǔn)確診的神經(jīng)衰弱病例14例(男12例，女2例)，年齡18～22歲，病程最短1個(gè)月，最長(zhǎng)7年。采用單盲法給藥，每次25～50mg(鈉鹽膠囊劑)，睡前半小時(shí)口服。治療期間無(wú)心理治，不服用其它藥物。痊愈及基本痊愈6例(42.86%)，顯著好轉(zhuǎn)5例(35.71%)，好轉(zhuǎn)3例(21.43%)?？傆行?00%，其中2例療程為2周，9例為1個(gè)月，3例為5周，并且14例多數(shù)在一周左右顯效。療程與療效還顯示出病程短的治療效果好。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明化合物治療神經(jīng)衰弱有明顯療效，特別是對(duì)頭痛、睡眠障礙、情緒不穩(wěn)者效果更佳，有較好的鎮(zhèn)靜催眠作用。
以鈉鹽膠囊劑，每日100～800mg，一次或分次口服對(duì)4例繼發(fā)或隱原性全身強(qiáng)直一陣攣癲癇作開放型單向序貫試驗(yàn)，將鈉鹽分別附加于標(biāo)準(zhǔn)抗癲癇藥(苯巴比妥、苯妥英鈉、癲健安、撲癇酮、丙戊酸鈉、安定等)進(jìn)行治療。試驗(yàn)期內(nèi)3例病人完全無(wú)發(fā)作，其中有兩例將苯巴比妥或安定部分或全部撤除后仍未見發(fā)作。有1例病人在試驗(yàn)期內(nèi)仍有發(fā)作，但發(fā)作次數(shù)較試驗(yàn)前減少57%，發(fā)作程度較試驗(yàn)前明顯減輕。因此全部試驗(yàn)病人均判斷為有效。試驗(yàn)期間血常規(guī)、肝、腎功能及電解質(zhì)均無(wú)異常變化，僅有個(gè)別病人分別出現(xiàn)口干、咽痛、大便干結(jié)、食欲差、嗜睡、月經(jīng)少等副作用，但均較輕微，能耐受。
對(duì)本發(fā)明上述化合物中的單酸乙二胺鹽作類似的動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果顯示其藥效似不及雙酸乙二胺鹽化合物為佳。
雖然文獻(xiàn)報(bào)道曾認(rèn)為此類化合物中苯環(huán)上帶有兩個(gè)鹵原子取代不是最佳結(jié)構(gòu)，但以上試驗(yàn)結(jié)果均表明本發(fā)明所提供的苯環(huán)上同時(shí)帶有一個(gè)氯和一個(gè)溴的取代肉桂酸及其鹽類化合物則有可望成為一種鎮(zhèn)靜、安眠、麻醉和抗驚厥效果均好，且毒副作用小的有價(jià)值的中樞神經(jīng)抑制藥物。同時(shí)，由試驗(yàn)結(jié)果及分子結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，其可能不存在成癮性。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)制成藥學(xué)上可以接受的劑型而可成為中樞神經(jīng)抑制藥物的在苯環(huán)上帶有鹵素取代基的取代肉桂酸類化合物，其特征在于此化合物為2-氯-4-溴-α-甲基肉桂酸及其鹽類衍生物，其結(jié)構(gòu)為
其中M可以為H、堿金屬元素或乙二胺。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所說(shuō)的M為Na。
3.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于M為同時(shí)與兩個(gè)所說(shuō)的肉桂酸成鹽的乙二胺。
全文摘要
本發(fā)明提供的是一種可成為中樞神經(jīng)抑制藥物的取代肉桂酸類化合物，結(jié)構(gòu)為2-氯-4-溴-α-甲基肉桂酸及其堿金屬或乙二胺的鹽。動(dòng)物試驗(yàn)表明在通常臨床用量下其對(duì)人類安全且無(wú)成癮性。隨用量不同，可具有鎮(zhèn)靜、催眠、麻醉及抗驚厥等中樞神經(jīng)抑制作用。
文檔編號(hào)A61K31/19GK1083471SQ9311186
公開日1994年3月9日 申請(qǐng)日期1993年6月25日 優(yōu)先權(quán)日1993年6月25日
發(fā)明者李正化, 郭直惟, 楊宇, 龔祥嘉, 王宇, 楊紅, 濮潔 申請(qǐng)人:華西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院