專利名稱：乙肝基因疫苗轉移因子和免疫核糖核酸及工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于一種防治肝炎的特異免疫藥物和工藝。
乙型肝炎(HB)是全球性傳染病，全世界現有乙肝病毒表面抗原(HBBAg)慢性攜帶者在3億以上，我國已超過1億，因此國內外都非常重視乙型肝炎的防治，已研制出多種疫苗用于乙肝的預防，并獲得較好的預防效果，在治療方面，由于至今尚無針對乙肝病毒的特效藥物，免疫治療已成為乙型肝炎的主要治療方法之一，過去使用的免疫核糖核酸和轉移因子，是一種非特異的免疫治療藥物，近年研制出的用血源疫苗免疫動物而制備的，能針對乙肝病毒的特異免疫核糖核酸(HB-IRNA)和轉移因子(HB-TF)，用于臨床已取得較好的療效，但這種藥物在原料來源、制造工藝，使用效能等方面還存在不少缺點，為克服這些缺點，我們采用高新技術產品，研制了新型的抗乙肝免疫新藥——基因疫苗免疫核糖核酸和轉移因子，(G.HB-IRNA和G.HB-TF)。并設計了聯合制造新工藝。
G.HB-IRNA和G.HB-TF聯合制造工藝如下a)、用轉移基因細胞B4a分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白經純化制成的重組疫苗，或用其它高效基因工程乙肝疫苗或與血源疫苗混合，按5-60ug/只免疫豬、猴、羊、牛;
b)、在動物抗體高峰期，剖殺動物取出脾臟和淋巴組織，搗碎研磨成勻漿;
c)、反復凍融，在超聲條件下(35-60千赫)破細胞膜;
d)、放入透析袋對水(D.W)透析或放入超濾器進行超濾;
e)、透外液或超下液過HB抗原或抗體柱吸收抑制因子;
f)、吸收后按已有的TF制造技術，最終制成G.HB-TF;
g)、留下的透內或超上勻漿加入0.1-0.8%曲里通×100表面活性劑，在超聲條件下進一步破壞細胞核膜后，按已有的IRNA制造技術，最終制成G.HB-IRNA，這樣通過一次加工，可同時獲得兩個產品。
這種G.HB-TF和G.HB-IRNA與目前使用的HB-TF和HB-IRNA比較具有如下優點1、過去使用HB-TF和HB-IRNA均是用人血清，制成的血源性HB疫苗免疫動物而制造的，因而來源有限，加之制備過程復雜，成本高，價格昂貴，難以滿足需要，而本發明制成的G.HB-TF和G.HB-IRNA是采用高技術產品，基因工程乙肝疫苗而制造的，它可無限量的制造，來源豐富，制造方便，成本低，價格便宜。
2、過去是采用單一工藝生產的，一次只能出一個產品，而本發明是采用聯合工藝一次加工而成，一次可生產出G.HB-TF和G.HB-IRNA兩個產品，這樣能進一步提高工效，降低成本。
3、用高新技術產品，基因工程乙肝疫苗制造的G.HB-TF和G.HB-IRNA的成功率明顯高于血源疫苗制造的HB-TF和HB-IRNA。
4、由于本發明選用了高性能基因工程乙肝疫苗來制造TF和IRNA它的活性將高于過去的HB-TF和HB-IRNA，這從90年的第七屆國際病毒性肝炎會議的資料中已有佐證“含兩個亞型的疫苗較單一亞型者免疫原性增強，含前S1.2蛋白的疫苗可增強HBsAg的免疫原性和減少無反應性，使免疫應答出現早，抗體滴度高，持續時間長”。我國91年的資料進一步證明“基因重組疫苗的陽性出現率明顯高于血源疫苗，免疫一個月后，前者的幾何平均滴度(GMT)是429.7mIU，而后者僅有207.4mIU，6個月后前者可達628mIU，且抗體陰性率高達100%”。
5、如果將G.HB-TF和G.HB-IRNA與乙肝疫苗協同使用，將會產生更好的預防效果。
上述優點已充分顯示，本發明的實施和G.HB-TF和G.HB-IRNA的出現將為乙型肝炎的防治提供一種效果好、生產簡便、成本低的新型免疫藥劑，它將成為第二代的抗乙肝免疫新藥。
權利要求
1.一種用基因工程疫苗制造的防治乙肝的轉移因子(G.HB-TF)和免疫核糖核酸(G.HB-IRNA)其特征是，用高新技術生產的基因工程疫苗免疫動物，以聯合制造的新工藝加工而成，它的原料可無限量生產，加工方便，同時該藥物活性高，出現早、持續時間長，免疫一個月后抗體幾何平均滴度(GMT)為492.7mIU，六個月達628mIU陽性率高達100%。
2.一種用基因工程疫苗制造的G.HB-TF和G.HB-IRNA的制造工藝，它是根據TF存在于細胞質而IRNA存在于細胞核的特點和利用高新技術產品，基因工程疫苗設計建立的聯合新工藝，其特征是a)、用轉基因細胞B4a分泌的乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白經純化制成的重組疫苗，或用其它高效基因工程乙肝疫苗或與血源疫苗混合，按5-60ug/只免疫豬、猴、羊、牛;b)、在動物抗體高峰期，剖殺動物取出脾臟和淋巴組織，搗碎研磨成勻漿;c)、反復凍融，在超聲條件下(35-60千赫)破細胞膜;d)、放入透析袋對水(D.W)透析或放入超濾器進行超濾;e)、透外液或超下液過HB抗原或抗體柱吸收抑制因子;f)、吸收后按已有的TF制造技術，最終制成G.HB-TF;g)、留下的透內或超上勻漿加入0.1-0.8%曲里通×100表面活性劑，在超聲條件下進一步破壞細胞核膜后，按已有的IRNA制造技術，最終制成G.HB-IRNA，這樣通過一次加工，可同時獲得兩個產品。
3.一種用基因工程疫苗制造的防治乙型肝炎的G.HB-TF和G.HB-IRNA的用途，其特征是除能用于乙型肝炎的治療外，而且還能用于乙型肝炎的預防，特別是與乙肝疫苗，協同使用預防效果更好。
全文摘要
本發明涉及一種基因工程疫苗制造的防治乙肝的轉移的因子和免疫核糖核酸及工藝。乙肝是病毒性肝炎中危害十分嚴重的傳染病，目前世界有慢性攜帶者3億以上，我國已超過1億。不少患者發展為肝硬化或肝癌。以往的抗乙肝轉移因子和免疫核糖核酸，雖具有較好的防治效果，但它來源有限，工藝復雜，價格昴貴，活性和成功率不高，為克服之不足我們采用高技術產品設計了這種免疫新藥和工藝，它是用處理動物臟器采用聯合新工藝一次制造而成，將成為第二代抗乙肝新藥。
文檔編號A61K35/28GK1098315SQ93111640
公開日1995年2月8日 申請日期1993年8月4日 優先權日1993年8月4日
發明者姜光斗, 易泳梅, 姜高分, 姜促激 申請人:姜光斗