專利名稱：用于治療包括免疫機能障礙在內的失調癥的方法和組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于治療包括免疫機能障礙在內的各種失調癥的方法和組合物。本發明特別涉及治療特定的免疫失調的方法，該方法包括對有免疫機能障礙的人或動物施用很低濃度的核糖核苷酸聚合酶或一種與核糖核苷酸聚合酶有關的化合物的步驟。在一些情況下，增效劑(例如，甘油、谷酰胺或其他增效劑)可與核糖核苷酸聚合酶一起施用，以提高治療活性。
在動物或人體內的細胞間介的免疫反應和/或體液免疫反應的異常可導致失調，這種失調實質上不是過敏性的，但它會成為一些疾病組織的異常靶向。包括免疫機能障礙的失調會引起各種各樣的癥狀。免疫缺陷失調的例子是遮蔽免疫目標的疾病(例如各種惡性腫瘤、與失調有關的各種皰疹、獲得性免疫缺陷綜合癥(HIV感染))，以及宿主自身產生的自身有害物質的疾病(這些疾病包括但不限于全身紅斑狼瘡、關節炎、糖尿病、甲狀腺炎、溶血性貧血病、萎縮性睪丸炎、古德帕斯徹疾病、自動免疫視網膜病、自動免疫血小板減少癥、交感神經系眼炎、嚴重的肌無力、格雷夫斯病(突眼性甲狀腺腫)、原發性膽汁肝硬化、慢性侵蝕性肝炎、潰瘍結腸炎、膜腎小球性腎炎、皮炎、板炎、慢性腎小球性腎炎、斯耶格倫綜合癥、賴特爾綜合癥肌炎、全身硬化多關節炎以及多發性硬化。
在前幾年，人們認為，抗自體反應是有害的，并且通常不會出現這樣的反應。最近，人們普遍認為正常免疫反應包括自身自動識別。而且，許多個體產生與自身抗原反應的非致病抗體。結果，我們現在的理解是僅在抗自體反應或者過度或產生特殊有害的免疫反應時，這種疾病才會發生。
由對外來的或內在的免疫原應答的體液或細胞間介的異常靶向所引起的疾病狀態表現為過敏性反應，這樣的反應通常為四類反應類型Ⅰ過敏反應，這種反應是用結合到肥大細胞上的受體上的IgE抗體間介。當與抗原出現交聯時，IgE抗體刺激肥大細胞，釋放一定量的具有藥理學活性的物質，這些物質可能引起過敏性癥狀。這些對抗原激發的反應是直接的并可能威及生命。類型Ⅰ反應的例子包括(但不限于)過敏性鼻炎、胃腸過敏、特應性皮炎、支氣管哮喘和馬氣喘病以及板炎。一種包括過敏性反應的自動免疫失調是在牛的“牛奶過敏”。
類型Ⅱ細胞毒性(細胞溶解)反應。這些細胞表面反應起因于抗原與IgM和/或IgG的相互作用，IgM和/或IgG可活化補體串，導致細胞的毀滅。類Ⅱ反應的例子包括(但不限于)白細胞減少癥、新生兒的溶血疾病以及古德帕斯徹疾病。包括細胞毒性/細胞溶解反應的自動免疫失調是溶血性貧血、血小板減少癥以及甲狀腺炎。
類型Ⅲ免疫綜合反應。在抗原和IgG或IgM的大量復合體在循環或在組織中大量積累，固定了補體時，會發生Ⅲ型反應。粒性白細胞附著到補體結合部位，并從粒中釋放出有害的溶解酶，這種類型反應的一個例子是血清病。包括在Ⅲ型反應中的自動免疫失調包括全身紅斑狼瘡、慢性腎小球性腎炎以及類風濕性關節炎。
類型Ⅳ細胞間介免疫性反應(MCI)，或延滯型超過敏性反應(DTH)。與前面的三個免疫反應類型相反，這種超過敏性反應是由T細胞而不是抗體間介的。活化的T細胞釋放出淋巴因子，該因子可能引起會損害局部組織的巨噬細胞、K細胞和NK細胞的積累和活化。這種反應可能在抗原激發后1-2天出現。第Ⅳ類反應的例子包括(但不限于)接觸性皮炎、結核病、過敏性大腦炎、甲狀腺炎以及原發同種移植排異反應。自動免疫失調幼稚糖尿病可以包括這種類型反應。
在正常情況下，所有上述類型的反應為個體提供了疾病防護。超過敏性反應雖然通過同樣的基礎細胞和分子機理起作用，但表現為一個能破壞宿主的過大的或不適宜的反應。這樣，可以把上述的許多疾病表現稱為抗自體失調或“自動免疫”疾病。
近來已變得很明顯，正常免疫反應包括自體-自體識別。這些識別是免疫細胞與自身抗原以非致病方式反應的結果。當抗自身反應進行過度或產生特別有害的免疫反應時就發生了疾病。例如，現在相信，在正常情況下存在許多T細胞和B細胞的自體反應克隆，但這些克隆受體內平衡機制的調節。這種控制機制的崩潰會導致自體反應克隆的活化和自動免疫疾病。
雖然B淋巴細胞和它們子代應對抗體的產生負責，在大多數情況下，它們需要輔助T淋巴細胞功能以便活化和分化進分泌抗體的細胞。而且輔助T細胞和它們的衍生產物表現出向下調節免疫反應的能力。如果T細胞種群是自身能耐受的，它可預防能分化進入產生自體抗體的細胞的B細胞增殖和分化。在免疫途經的幾個階段的任何一個都可能出現自身耐受機制中的缺陷。帶有能產生已被T細胞阻止了的致病自體抗體的B細胞的個體在這種情況下能產生大量的有害抗體。因為確定是否有疾病發生的依據是自體抗體的數量，所以免疫調節和免疫刺激的量的大小對疾病發展上有較少免疫異常較為健康之間的平衡是至關重要的。
此外，強免疫刺激可能壓倒正常調節機制并激勵B細胞產生抗體和自體抗體，而不需通常的T細胞來調節。這樣的刺激的例子包括移植物對宿主的疾病(就象同種骨髓移植后出現的疾病)，或由各種強有力的多克隆免疫因子(腸毒素)或甚至刺激B細胞(EpsteinBarrvirus)(非洲淋巴細胞瘤病毒)的病毒來刺激。奇怪的是，現已證明這些同樣的抗原也是具有療效。現已證明，腸毒素可降低在鼠中自體免疫狼瘡腎炎的嚴重程度，并可保護動物免受實驗性過敏性腦脊髓炎的侵害。僅僅幾百個分子的這種物質(例如種毒素)就可以觸發免疫細胞的傳染和復制。
如上所述的抗自身反應過度的自體免疫情況的一個例子是全身紅斑狼瘡(SLE)，這種病因未知的疾病的特征在于具有各種自身抗原，這些抗原包括核、細胞質和細胞膜抗原決定簇。這里沒有出現能診斷為這種疾病的臨床或實驗室異常。雖然有大約70%的帶SLE病人中出現抗DNA抗體，但各病人的臨床癥狀和實驗室研究結果的差異很大。結果，現已發展并改進了試圖包括全身紅斑狼瘡病人并排除其他失調(包括但又不限于類風濕關節炎、進行性的全身硬化癥、多肌炎以及斯耶格倫綜合癥的病人)的標準。
不同病人表現的臨床征候和癥狀中存在驚人的變異性。一些病人中，較高疾病活性期與數月或數年的較低疾病活性期交替發生。這樣的變異性要求針對各病人的情況進行預防和治療。一些全身紅斑狼瘡病人有大量的抗DNA并且LE細胞試驗呈陽性，其他病人不這樣。在臨床范圍的一端是多半疲勞、關節痛、日光過敏、疹以及抗細胞核抗體為特征的溫和疾病的病人，在該范圍的另一端是表現急性進行性腎炎或嚴重CNS機能障礙的病人。大部分病人處于需要一點兒或不需要治療的最溫和類病人和需要增強治療的病人及主要器官的嚴重病人之間。除了自生的特發的的全身紅斑狼瘡病人外，這種疾病可在人體內由特定藥物誘發。許多其他動物(如狗、貓、水貂、馬以及鼠)也會產生一種類似全身紅斑狼瘡的綜合癥。
關節炎(特別是類風濕關節炎)是另一種炎性自體免疫失調。通常認為遺傳和環境因素決定這種疾病的病程。該疾病通常始于在四肢上一個或多個關節的疼痛、觸痛以及腫脹。一般來說，該疾病對稱發作，但主要側病癥更嚴重。雖然該病通常也發生在手和腳的小關節、腔、踝關節、膝、肘及髖，但該病特別涉及到接近指(趾)節間的、跖趾的、掌指的關節。
在疾病初期，對類風濕病因子和抗核抗體陽性的病人很有可能會出現病情惡化。皮膚潰瘍是最普通的網狀組織外的表現。對類風濕病因子的高滴定度的陽性試驗、存在循環免疫復合體以及適當降低的補體滴定度是有全身表現的病人的特征。在馬的跗關節中的后腳踝關節內腫病具有與之相似的病原學特征。
直到今天，對由免疫機能障礙引起的絕大多數疾病還沒有令人滿意的療法。因此需要一種能有效地緩解這些疾病癥狀而又不引起其他副作用的方法和組合物。該方法應該是安全的，并能有效地治療與上述多種疾病有關的癥狀。
本發明提供了一種用于減輕與免疫缺陷和與異常的體液和細胞間免疫失調有關的疾病的癥狀的方法和組合物。本發明包括對有免疫機能障礙的人或動物施用具有療效量的核糖核苷酰聚合酶或一餾分或它們的衍生物。較好的核糖核苷酸聚合酶是RNA聚合酶。有效劑量極低，并且不會引起副作用(例如對核糖核苷酸聚合酶的過敏性反應)。此外，給人或動物施用的RNA聚合酶的劑量通常將不引起抗體反應。
人們已經發現，給有免疫機能障礙的人或動物施用極低量的核糖核苷酸聚合酶會減輕或消除免疫機能障礙癥狀。這種核糖核苷酸聚合酶可以與增效劑一起施用，以提高其療效，這類增效劑的例子包括(但不限于)甘油、谷酰胺、組胺以及神經氨糖酸苷酶。
因此，本發明的一個目的是提供一種用于治療包括免疫機能障礙在內的失調的方法和組合物。
本發明的另一個目的是提供一種用于治療全身紅斑狼瘡病的方法和組合物。
本發明的第三個目的是提供一種用于治療板炎的方法和組合物。
本發明的第四個目的是提供一種用于治療皮炎的方法和組合物。
本發明的第五個目的是提供一種用于治療關節炎的方法和組合物。
本發明的第六個目的是提供一種用于治療自體免疫視網膜失調(如Voyt-Aoyanagi-Harada綜合癥)的方法和組合物。
本發明的第七個目的是提供一種用于治療癌的方法和組合物。
本發明的第八個目的是治療特定的某些感染疾病(例如AIDS)。
參考了下面公開的實施例的描述和所附的權利要求書后，將變得這些目的和其它目的、特征以及優點明顯。
圖1是DBA/IJ鼠對用膠原蛋白Ⅱ免疫的反應的示意圖。
圖2是DBA/IJ鼠對用膠原蛋白Ⅱ免疫的抗體反應的示意圖。
圖3是對DBA’IJ鼠的各種治療反應的示意圖，這些鼠在施用膠原蛋白Ⅱ以后關節被相應地固定。
此處，術語“核糖核苷酸聚合酶”指任何這樣的蛋白質，該蛋白質具有核糖核苷酸聚合酶活性，或有一個基本上類似于一個有核糖核苷酸聚合酶活性的蛋白質的氨基酸順序。這種核糖核苷酸聚合酶包括(但不限于)核糖核酸(RNA聚合酶)聚合酶以及反轉錄酶。可以用于實現本發明的這種核糖核苷酸聚合酶也可以是一種滅活的酶或該酶的一個部分。
術語“免疫機能障礙”包括(但不限于)由于免疫系統衰退以及有關系統的一免疫反應發生增加為特征的任何免疫機能障礙失調，和/或由于外部或內部免疫原物質所致的體液和細胞傳遞損害。這個術語也包括迷亂免疫反應(例如在自體免疫疾病中觀察到的迷亂免疫反應)。
此處，術語“核糖核苷酸聚合酶的療效量”指足以減輕或消除免疫機能障礙失調癥狀的核糖核苷酸聚合酶的量。在此公開了優選的有代表性的劑量和濃度。
術語“增效劑”用在此處是指能提高RNA聚合酶療效的任何化合物或組合物。
本發明提供了一種用于減輕與免疫機能障礙有關的疾病癥狀的方法和組合物。本發明包括對有免疫機能障礙的人或動物施用具有療效量的核糖核苷酸聚合酶或一餾分或其衍生物，這個有效劑量極低，不會引起對核糖核苷酸聚合酶型蛋白質的過敏性反應。
實際上，本發明包括對有免疫機能障礙的人或動物施用每核糖核苷酸聚合酶劑量單位少于約10-2毫克的組合物，核糖核苷酸聚合酶或它的活性衍生物的合適劑量大約10-2毫克-10-8毫克之間。更合適的核糖核苷酸聚合酶的劑量在10-3毫克和10-7毫克之間，最合適的核糖核苷酸聚合酶的劑量是大約10-4毫克。較可取的是每個受治療者整個療程中每日劑量不超過大約10-2毫克，而更可取的劑量不超過約5X10-3毫克-10-4毫克。這樣，本發明包括組合物，該組合物包括一核糖核苷酸聚合酶或其一活性衍生物的溶液，酶或其衍生物在該溶液中的濃度在大約10-3-10-7毫克/毫升之間。
因為在一批到另一批以及一個制造商到另一個制造商的RNA聚合酶的特異活性受酶的來原、純化方法等因素的影響而可能有很大的變化。這里推薦用“活性單位”來表示RNA聚合酶的劑量。所定義的RNA聚合酶活性單位隨RNA聚合酶的來源的不同而有所不同。術語“單位”由各個制造商而定。下面所提供的定義引用了幾個制造商的定義，并包括了反轉錄酶A.來自E.coli K-12(Sigma Chemical Company)的RNA聚合酶“用腓腸胸腺DNA作模板，在PH7.9、37℃下，在10分鐘內，一個單位將釋放1.0納摩爾(10-9)摩爾的PP。”
B.T3RNA聚合酶(由噬菌體T3而來的RNA聚合酶，PharmaciaBiotech，Inc.)“用含T3啟動基因的質粒，一個單位在50微升試驗緩沖液中，60分鐘內，在37℃下催化1納摩爾AMP加入不溶于酸的產物”。
C.AMV反轉錄酶(Promega Corporation)一個單位定義為在10分鐘內，37℃下，在0.05M Tris-HCl，pH8.3，40mM KCl，7mmMgCl2，10mM DTT，0.1mg/ml BSA，0.5mM3H-dTTT，以及130μg/ml rA400∶dT50，10∶1的不溶于酸的劑型中催化摻入1納摩爾dTTT時所需的酶量。
D.M-MLV反轉錄酶，RNA酶H Minus(Promega Corporation)“一單位是這樣一個酶量，它將結合1納摩爾dTTT摻入，在10分鐘，37℃，在50mM Tris-HCl，pH8.3，40mM KCL，10mM DTT，7mM MgCL2，0.1mg/ml BSA，0.5mM3HdTTT，以及130μg/ml rA400∶dT50，10∶1”(注此定義與對C的定義相同，但是在目錄中是用不同的語言表達的)。
提供反轉錄酶的PromegaCovporation不提供所定批次中的反轉錄酶中的蛋白質量的信息，因此無法精確計算特異活性。Promega所提供的酶的單位為單位/毫升數，典型的是20000-25000單位/毫升的AMV反轉錄酶，以及100000-200000單位/毫升的M-MLV反轉錄酶。為計算起見，我們假定蛋白質濃度是1毫克/毫升。因此反轉錄酶的特異活性與RNA聚合酶的特異活性是完全不同的。
同樣，兩種RNA聚合酶的特定活性也因其來源不同而差別很大。來自E.coliK-12的RNA聚合酶的特異活性在1000-5000單位/毫克之間;T3RNA聚合酶的特異活性在200000-400000單位/毫克之間，在本發明的蛋白質范圍的計算中考慮到了這些差別。
這樣，在實施本發明的過程中，可以測定RNA聚合酶的特異活性，然后利用總的活性在0.0004-4000單位之間的酶量，所述的單位相應于在大約1X10-9毫克-4.0毫克之間的蛋白質。RNA聚合酶活性的優選范圍在0.04-100單位，更合適的范圍在0.1-10單位活性之間。
本發明的第二個方面是，提供一種藥物組合物，它包括一種用于施用核糖核苷酸聚合酶或其一餾分或其衍生物的載體和多種無藥效的成份，所述的載體含高達約10-2毫克的核糖核苷酸聚合酶或其一餾分或其衍生物。優選的藥物組合物含約10-2-約10-8毫克的核糖核苷酸聚合酶或其餾分或其衍生物。RNA聚合酶的體積最好在大約0.05毫升-0.5毫升之間。但是，在實施本發明時也可用其他劑量體積的組合物。
本發明包括在每24小時期間施用不超過大約10-2毫克量的核糖核苷酸聚合酶，當然，在一定的情況下，在任何一天中所施用的總量都可能超過這個優選的限量。核糖核苷酸聚合酶可以液體形式施用，或者，也可以固體形式施用，此時，核糖核苷酸聚合酶是被包埋或被混合在可生物降解或腐蝕的基質中。這個基質可以是一種隨時間流逝而逐漸釋放的基質。對本領域的普通技術人員來說，這類基質是公知的，而且對本發明來說并不很關鍵。可以通過皮下注射或舌下途經來施用核糖核苷酸聚合酶;RNA聚合酶也可以經過肌肉注射、腹膜內注射或靜脈內注射來給藥;RNA聚合酶也可以透過皮膚或通粒膜來給藥。RNA聚合酶給藥較合適的途經是通過皮下注射或舌下途經。
在另一個實施例中，核糖核苷酸聚合酶可以與其他化合物一起施用以提高其治療效果。可與其他影響免疫系統的分子(增效劑)共同使用的核糖核苷酸聚合酶的一個例子包括(但不限于)劑是在約5X10-1-2X10-8毫克/劑量之間的甘油，劑量在約2.2X10-2-2X10-8毫克/劑量之間的谷酰胺，劑量在約10-2毫克-10-8毫克/劑量之間的組胺。
在一個實施例中，載體是一種惰性容器中的水溶液。在另一種變型中，該制劑呈栓劑劑型。雖然其他注射方式也是本發明的一部分，液體劑型的制劑最好經皮下注射。此外，也可以通過粘膜(例如鼻粘膜)來施用該制劑。液體載體包括(但不限于)在鹽水(0.9%NaCl)中0.1%的酚，其他藥理學承認的載體也可用于施用核糖核苷酸聚合酶。
在實施本發明時可以使用的核糖核苷酸聚合酶包括(但不限于)RNA聚合酶(三磷酸核苷RNA核苷酸轉移酶[由DNA導向];EC2.7.7.6)以及反轉錄酶(由RNA導向的DNA聚合酶、DNA核苷酸轉錄酶[由RNA導向]、復原酶、EC2.7.7.49)。應該注意到，核糖核苷酸聚合酶可以有酶活性也可以沒有酶活性。此外，具有基本類似的氨基酸順序的蛋白質也可作為天然酶來實施本發明。可以預期，以不同核糖核苷酸聚合酶的混合物的形式施用核糖核苷酸聚合酶也是本發明的一部分。可以理解，核糖核苷酸聚合酶的來源對本發明而言并非關鍵。例如，在完成本發明中，來E.coli的RNA聚合酶和由噬菌體T3來的RNA聚合酶都能有效地實施本發明。
可以用標準方法來施用核糖核苷酸聚合酶，這些方法包括(但不限于)肌肉內和皮下途經給藥。也可以通過舌下和鼻內途經來施用核糖核苷酸聚合酶。因一個劑量的核糖核苷酸聚合酶的有效量很低，所以本發明的組合物也可以通過皮膚、肛門或口施用。劑量單位或者可以是液體或者也可以是固體。雖然在一定情況下更大的劑量可以施用，一般來說施用量最多為每天約4倍的劑量單位。
用下面的例子來進一步說明本發明，這些例子能以任何方式來限制本發明的范圍。與之相反，可以清楚地理解，這種手段可以有各種其他實施例、改進和等同例，在讀了在此的描述后，本領域普通技術人員可以提出這類例子，而且這類例子不脫離本發明的精神和/或所附權利要求書的范圍。
例Ⅰ.在DBA/IJ鼠中膠原Ⅱ型誘導的關節炎模式Trentham等人，(TreuthamD.E.等人，“對膠原Ⅱ的自體免疫關節炎的一實驗模式”，J.Exp.Med.Vol.146，pp.857-868，1977)最先報告了用帶完善的Freund佐劑(CFA)的膠原Ⅱ在鼠類動物中誘導炎性關節炎來研究在關節炎中的自體免疫的模式。其他類型的膠原以及注射有Freund佐劑的膠原(完全或不完全的)都不能誘導多關節炎。每天都對這些動物進行臨床檢查，發現注射CII-CFA后的14-60天是關節炎開始的時間。隨后用DBA/IJ系近交鼠進行研究，同樣采用CII-CFA，在4-5周內這種鼠發生了炎性多關節炎。這些研究也表明，沒有CFA或用其他類型膠原的情況下，這些動物不發生關節炎。這種關節炎病的最后導致一個肢體或多個肢體的固定。對膠原Ⅱ的體液和細胞二者的免疫反應顯然包括在關節炎的誘導中。研究表明，在疾病的發展過程中，免疫系統起著關鍵性的作用。在這種關節炎動物模式中已經觀察到對關節中常常發現的蛋白質(例如膠原Ⅱ)的自體免疫性。
DBA/IJ鼠是在Jackson實驗室(BarHarbor，Maine)得到的。這種鼠為7-10周齡。把這種鼠在聚碳酯籠中分為二或三個組。使這種鼠飼用標準的實驗室食物，并隨意給水。在這個研究中使用的膠原Ⅱ是按Trentham等人用上面描述的方法制備的。在將CII用于對照研究之前所進行的試驗性研究表明，CII能夠誘發關節炎。在該鼠尾部的基部真皮內注射含在等體積的CFA中乳化的100微克CII的0.1ml乳劑。15天后施用等量的加強劑量。如前面描述的那樣每天檢查肢腫脹。當動物有一個肢體發生固定(即在該關節處不能彎曲)時，可以認為關節炎完全表現出來。這通常發生在CII初次注射后的30-35天之間。
在初始膠原注射前5天，的確定4個治療組，每組8只鼠鹽水對照組;
用二甲基甘油(DMG)處理后的鼠;
用含氯萘處理后的鼠;
RNA聚合酶。。
在整個研究期間，每個鼠每天皮下注射0.1ml的相應的試驗藥劑。當鹽水對照組發生關節炎時。除對14只發生肢固定的鼠外，對其它鼠這項結束研究。為使這14只鼠的癥狀好轉，接著進行治療和觀察。為進行反轉研究，對兩個各有7只鼠的治療組中的個鼠每天皮下注射對照用鹽水或RNA聚合酶0.1ml。在這項研究中的RNA聚合酶的用濃度為每劑量0.4單位(0.15μg)的酶制備的。將該酶的濃縮物首先在0.4%酚的鹽水中失活4小時，然后用注射用無菌鹽水進行稀釋。對照鹽水經過同樣的處理。每周一次從這些鼠的眶竇后抽取血液樣品。收集血清并在-20℃冰凍貯存，供以后進行抗體檢測所用。DMG的劑量是100μg/kg體重，而含氯萘的劑量是1.3克/kg體重。
在鹽水對照級、DMG組和含氯萘組中，首先觀察到炎性反應，然后發現與類風濕關節炎相似的癥狀(關節固定)。用RNA聚合酶處理的組中沒有誘發炎性反應，也沒有出現關節炎癥狀(圖1)。
在每個試驗組都存在對膠原Ⅱ的抗體。當出現關節炎時，在鹽水、DMG以及含氯萘組中對膠原Ⅱ的抗體滴定度急劇升高，高于關節炎發生(圖2)時所處的1.1ELSA單位。用RNA聚合酶治療未發生關節炎組時膠原Ⅱ抗體的滴定度沒有急劇地升高。RNA聚合酶組的抗體滴定度沒有上升到認為發生關節炎的0.1ELISA單位水平之上，但該值逐漸升高，然后在低于1.1ELSA單位之下的一滴定度處整平。
對因注射CII而患關節炎的DBA/IJ鼠每天施用低水平的RNA聚合酶，在三天內就降低了關節的腫脹和僵硬程度。這些動物在五天內已無癥狀，并且在10天的實驗期間保持無癥狀。在患關節炎后，用鹽水處理的鼠在10天時癥狀沒有好轉。隨后，宰殺這些鼠。
從幾個實驗中收集因膠原誘導產生關節炎(關節固定)的7個鹽水對照鼠，并用每天0.4單位的RNA聚合酶進行治療，直到癥狀減退(5天)，在RNA聚合酶治療開始時和5天時取血液樣品，用ELISA檢驗法測定類風濕病因子。表Ⅰ中示出了該實驗的結果。
表Ⅰ
RNA聚合酶對關節炎鼠中在類風濕病因子(RF)滴定度的影響RF滴定度(ELISA單位)動物編號關節固定關節不固定減少%10.6870.5462121.1070.8981930.7350.4703640.6800.5322250.7470.5982060.6720.5561771.0500.60542例Ⅱ對一個20年的在10年前慢性變跛混合飼養的切去肢體的家畜，有6天內每天在頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶。在這項研究中，用濃度為每劑量0.4單位(0.15μg)酶制備RNA聚合酶。該酶的濃縮物首先在0.4%酚的鹽水中失活4小時，然后用注射用無菌鹽水進行稀釋，在例Ⅰ到ⅩⅥ中的所有RNA聚合酶的制備方法都與之類似。
主人繼續過度地飼養這些馬。治療三天后這些動物的癥狀明顯好轉，并且在6天內癥狀消失。這匹馬直到現在仍然沒有癥狀，從無癥狀開始至今已有四個月了。
例ⅢX-射線診斷發現，一個12年的Morgan母馬的跗關節有后腳踝關節內腫病(關節炎)。對該馬每天皮下施用0.4單位的RNA聚合酶前后達6天，在6天內該馬的癥狀顯著改善，并在以后的5個月內沒有出現關節炎癥狀。
例Ⅳ一個18歲的母馬視力嚴重降低，在眼部沒有毛，并且眼周圍區域色素嚴重沉著。經診斷，該馬患自體免疫視網膜病(Voytaoyanagi-haradaSyndrome)，并每天在頸部皮下注射單一劑量為0.4單位的RNA聚合酶。治療6天后，該馬的視力有所改善。眼部周圍的色素開始再現，眼周圍的毛開始再生。在治療后的兩個半月中，這匹馬的情況仍然正常。
例Ⅴ一嚴重變跛的10歲母馬，并患有自體免疫視網膜病(Voytaoyanagi-haradaSyndrome)，該馬眼周圍的毛發生減少，并且眼周圍缺乏色素。每天在頸部皮下注射劑量為0.4單位的RNA聚合酶治療該馬。在6天內該馬變跛和視網膜病的癥狀發生好轉。
例Ⅵ一個9年的割去一肢的馬，在跗關節它有嚴重的刺傷傷疤，致使大量流體排出，并有炎癥，以及皮膚傷疤。連續6天內每天在該馬的頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶。6天的治療對該馬非常有效，此后該馬從異常癥狀中恢復過來。
例Ⅶ一個全身紅斑狼瘡的26歲的截肢的畜(眼腫起合攏，而且所有四肢變跛，對用Banamine和butadiazol的治療沒有起反應)。對該畜每天在頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶，連續給藥6天。治療3天后，該馬眼部腫起和角膜炎的癥狀大大降低，并且治療6天后，該馬接近正常，該馬的癥狀繼續改善并且在一個半星期內癥狀消失。5個月后，這匹馬仍無癥狀。
例Ⅷ對用葡萄球菌誘發濃皮病(在用林可霉素和先鋒霉素治療后葡萄球菌感染腫脹沒有消退)的兩個8周小狗，每天在頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶，連續給藥6天。在3天內腫脹消失，并且每只小狗的癥狀都沒有復發。
例Ⅸ對一有嚴重髖發育異常的12周德國牧羊犬(它對類固醇治療無反應)，每天在頸部皮下單獨施用0.4單位RNA聚合酶，連續給藥6天。治療6天后，發育異常消失，并且這個狗一直沒有出現髖發育異常的征兆。
例Ⅹ對一個有嚴重板炎的三年一季度的馬，每天在頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶，連續給藥6天。隨著6天治療，該馬的板炎癥狀大大降低。繼續進行兩天治療后，該馬的炎癥完全消失。該馬現在又成為了賽馬。
例Ⅺ對一個有嚴重退化的馬膝骨疣失調7年的Thoroughbred，每天在頸部皮下單獨施用0.4單位的RNA聚合酶，連續給藥6天。這個馬完全恢復，并且現在又成為賽馬。
例Ⅻ對一個有紅斑狼瘡的25歲的女子，每天在皮下單獨施用0.4單位RNA聚合酶，連續施用6天。治療三天后，該婦女的關節疼痛顯著減輕，與狼瘡有關的極端疲勞感也顯著減輕，眼周圍膜和組織的腫脹也已減輕。治療6天后，該病人已無疾病癥狀。在以后的幾個月內，該病人仍無癥狀。
例ⅩⅢ對一有全身紅斑狼瘡的32歲的女子，每天在舌下單獨施用兩次0.4單位RNA的聚合酶，連續施用7天。治療7天后，她的疾病癥狀消失。并且在一出現疾病癥狀就舌下施用0.4單位RNA聚合酶的基礎上，在一年多的時間里，她保持無癥狀。
例XIV一個十一年割去一肢的馬，診斷認為可能患有持續性抑止關節炎，該馬對其他治療手段不敏感。對該馬在一個月內每天皮下注射0.5ml劑量的0.4單位的RNA聚合酶(這種酶是用從PhamaciaLKBTechnologies購買的T3噬菌體制備的)。該馬在這段時間所用的藥物只是T3RNA聚合酶。該馬在1992年3月由馬醫給它裝上蹄鐵，在二年中它第一次站上了起來。在1992年12月，該馬仍然很好，沒有表現出任何以前的抑止關節炎的癥狀。
例XV一個有髖發育異常的8歲的德國牧羊犬，用0.5ml劑量的0.4單位T3RNA聚合酶(PharmaciaLKBTechnologies，Piscataway，N.J.)治療。連續治療6天后，該動物的病情有很大改善從此該動物保持無癥狀。
例XVI
一個有嚴重脊柱關節炎的25歲的閹畜，對類固醇或其他治療藥物無反應。用0.5ml劑量的0.4單位T3RNA聚合酶(PharmaciaLKBTechnologies，Piscataway，N.J.)對它進行治療。每天皮下注射該藥6天后，該馬的病情和運動能力有很大改善。
當然，應該想到，前面的敘述僅涉及本發明一些優選的實施例，這里可以在不離開如所附權利要求書陳述的本發明的精神和范圍的前提下對之作出大量的改進或替換。
圖1
代表RNA聚合酶
代表含氯萘
代表DMG
代表鹽水對照圖2-代表RNA聚合酶…代表DMG
代表含氯萘
代表對照
鹽水對照數值大于1-1誘發關節炎
RNA聚合物圖權利要求
1.一種治療人或動物免疫機能障礙失調的方法，包括對人或動物施用具有療效量的核糖核苷酶聚合酶的步聚。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于核糖核苷酸聚合酶選自RNA聚合酶和反轉錄酶或它們的混合物。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于核糖核苷酸聚合酶是RNA聚合酶。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于定期施用核糖核苷酸聚合酶。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于通過皮下注射來施用核糖核苷酸聚合酶。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于舌下施用核糖核苷酸聚合酶。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于核糖核苷酸聚合酶已被失活。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于對人或動物施用具有療效量的核糖核苷酸聚合酶和增效劑。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于增效劑選自甘油、組胺、谷酰胺以及神經氨糖酸苷酶。
10.一種用于治療免疫機能障礙的組合物，包括在藥用的載體中的具有療效量的核糖核苷酸聚合酶。
11.如權利要求10所述的組合物，其特征在于該核糖核苷酸聚合酶選自RNA聚合酶和反轉錄酶或它們的混合物。
12.如權利要求11所述的組合物，其特征在于核糖核苷酸聚合酶是RNA聚合酶。
13.如權利要求10所述的組合物，其特征在于藥用的載體是一種固體。
14.如權利要求10所述的組合物，其特征在于藥用的載體是隨時間流釋而不斷釋放的基質。
15.如權利要求10所述的組合物，其特征在于藥用的載體是鹽水。
16.如權利要求15所述的組合物，其特征在于還包括濃度約為0.1%的酚。
17.如權利要求10所述的組合物，其特征在于核糖核苷酸聚合酶是失活的。
18.如權利要求10所述的組合物，還包括一種增效劑。
19.如權利要求18所述的組合物，其特征在于增效劑選自組胺、谷酰胺和神經氨糖酸苷酶。
全文摘要
本發明提供了一用于治療包括免疫機能障礙在內的失調癥的方法和組合物。本發明包括對患有免疫機能障礙失調的人或動物施用低劑量的核糖核苷酸聚合酶蛋白質或其一種衍生物。
文檔編號A61K9/00GK1091316SQ9310590
公開日1994年8月31日 申請日期1993年4月22日 優先權日1992年4月22日
發明者E·L·克蘭 申請人:分子阿克斯公司