專利名稱：：化妝品的制作方法
技術領域：
：本發明是關于防止皮膚老化及防止皮脂氧化的化妝品，這種化妝品的特征是含有PleurotusSajorcaju菌絲體培養液的精制液(下文中簡稱為培養精制液)。眾所周知，皮膚與其他的內臟器官不同，它容易受外界因素例如陽光、溫度、濕度等物理因素或洗滌劑等化學因素的影響，其中尤以陽光中所含的紫外線對皮膚的影響最甚，往往導致產生皺紋、色素沉積、干燥肌等皮膚老化現象。以往，為了預防上述現象發生，人們使用摻有紫外線吸收劑、保濕劑、細胞活化劑、防氧化劑等的化妝品，可是效果并不理想，此外還具有光敏性等對皮膚不良的副作用，因此在使用上存在一些問題。鑒于上述情況，本發明人對于不會由于紫外線而引起皮膚老化的化妝品進了研究，經反復研究的結果，發現PleurotusSajorcaju的培養精制液具有良好的抑制紫外線損傷、抑制黑色素生成以及抗氧化等作用，而且對皮膚具有高度的安全性，進一步研究的結果還發現，摻入這種培養精制液的化妝品在用于皮膚時，具有防止因紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現象的效果，在用于頭皮時，具有防止皮脂氧化、消除頭皮屑和搔癢的效果，從而完成了本發明。也就是說，本發明是一種具有高度安全性的用于皮膚或頭皮的化妝品，其特征是，在外用劑基料中摻入PleurotusSajorcaju菌絲體的培養精制液。本發明的有效成分是由PleurotusSajorcaju的培養液中提取的，它是對PleurotusSajorcaju的菌絲體進行液體培養，然后除去菌絲體，最后精制而得到的水溶性液體，它是采用常規的實施方法精制而得到的。所謂PleurotusSajorcaju是一種名叫PlerotusSajorcaju的印度產的擔子菌類，在此之前還沒有人將它用作化妝品的配料，尤其是完全不知道它具有抑制紫外線損傷的作用、抑制黑色素生成的作用及抗氧化作用。本發明的培養精制液，由于具有良好的抑制紫外線損傷的作用和抑制黑色素生成的作用，因此在將含有這種培養精制液的化妝品施用于皮膚上時，對于由有害的紫外線所引起的，表示皮膚老化現象的皺紋和色素沉積癥非常有效，此外，在施用于頭皮時還具有抗氧化作用，因此可有效地防止產生頭皮屑和搔癢癥。本發明的化妝品的劑型沒有特別的限制，只要能施用到皮膚或頭皮上，任何劑型都是可以的，例如，可以按常規的調制方法把起有效成分作用的PleurotusSajorcaju培養精制液作為基劑、助劑、添加劑用于制造化妝水、乳脂、乳液、生發水等化妝品。本發明中使用的培養精制液的配入量為化妝品總量的0.01～50%(重量)，最好是0.1～30%(重量)。下面敘述作為本發明的有效成分的PleurotusSajorcaju培養精制液的制造例。制造例1將30克葡萄糖、2克酶母提取物、2克胨、1克磷酸二氫鉀、0.5克硫酸鎂、0.1克氯化鈉、0.1克氯化鈣及1000毫升蒸餾水置于發酵罐中加溫溶解，在高壓釜中于12.1℃下滅菌15分鐘，冷卻到室溫。在其上面接種PleuroutusSajorcaju的菌絲，然后在30℃下通氣振蕩培養一星期。培養結束后，以2500rpm轉速進行離心分離以除去菌絲，再用氟鎂石等助濾劑過濾，得到500克清澈的PleurotusSajorcaju培養精制液。制造例2將30克葡萄糖、2克酵母提取物、100克豆漿、2克胨、1克磷酸二氫鉀、0.5克硫酸鎂、0.1克氯化鈉、0.1克氯化鈣、以及800毫升蒸餾水在發酵罐中加溫溶解，在高壓釜中于121℃下滅菌15分鐘，冷卻至室溫。在其上面接種PleurotusSajorcaju的菌絲，然后在30℃通氣振蕩培養1周。培養結束后，以2000rpm轉速進行離心分離以除去菌絲，再用氟鎂石等助濾劑過濾，得到500克清澈的PleurotusSajorcaju培養精制液。制造例3在1000克上述制造例2中制備的PleurotusSajorcaju培養精制液中添加50毫克蛋白酶(Actinase，科研制藥株式會社制)，在室溫下攪拌18小時。使用分子量1000的超濾膜除去分子量在1000以上的物質，經減壓蒸餾后，得到200克PleurotusSajorcaju培養精制液。下面說明本發明中使用的培養精制液及摻入該培養精制液的制劑的試驗結果(效果數據)。實施例以下，通過實施例詳細地說明本發明。試驗例(1)對紫外線損傷的抑制作用a)試驗方法在4毫升含10%(體積)牛胎兒血清的Eagle′sMEM培養基中加入培養的小鼠成纖維細胞(3T3-LISwissAlbino)1×105個細胞/0.1毫升，在37℃和5%CO2氣氛條件下培養。培養開始后的第三天對其照射30mJ、60mJ劑量的紫外線(uVB)，紫外線照射后立即分別用一份新的介質來置換舊的介質，所說的新介質分別含有4毫升的1/5、3/20、1/10、1/20的PleurotusSajorcaju培養精制液(制造例3中制備的)。紫外線照射2天后，用結晶胰蛋白酶和EDTA的混合液剝離細胞，計算出活細胞的數目。另一方面，加入未經紫外線照射的各種不同濃度的PleurotusSajorcaju培養精制液，按同樣的方法培養，然后計算活細胞的數目并據此求出在同一濃度的試料中的細胞存活率。對照組的存活率(%)＝(經紫外線照射后的活細胞數)/(未照射紫外線時的活細胞數)×100另外，以未添加PleurotusSajorcaju培養精制液的情況下的存活率作為對照組來評價其抑制紫外線損傷的效果。試樣細胞存活率(%)＝(經紫外線照射后的活細胞數)/(未照射紫外線時的活細胞數)×100b)試驗結果如表1所示，在紫外線30mJ、60mJ照射的情況下，與對照組相比，證實了添加1/5、3/20、1/10、1/20PleurotusSajorcaju培養精制液確有抑制紫外線損傷的效果。表1</tables>(2)B16細胞的抑制黑色素生成的作用a)試驗方法在10毫升含10%(體積)牛胎兒血清的Eagle′sMEM培養基中分別加入上述制造例中制備的PleurotusSajorcaju培養提取液，其加入量為10毫升的1/2、1/4、1/8，以加入上述培養提取液的一組作為試驗組A、B、C，以未加入試樣的一組作為對照組。在上述制備好的試驗組和對照組中，每個組分別接種1.0×105個培養精制液B16細胞，然后在37℃下并于5%CO2氣氛中培養5天。在這一期間換一次培養基。培養基剝離細胞并進行離心分離(約700G)，然后用肉眼觀察并比較試驗組與對照組細胞的離心小球的黑色度。b)試驗結果試驗結果如下表(判定基準)+表示白色度+++白色;++白色-灰色;+灰色;-黑色(3)抗氧化作用a)試驗方法試驗樣品1)蒸餾水(對照物)2)維生素E(40μm)3)PleurotusSajorcaju的精制培養液(制造例1中制備的)0.80%4)PleurotusSajorcaju的精制培養液(制造例2中制備的)0.8%5)PleurotusSajorcaju的精制培養液(制造例3中制備的)0.8%將5.0毫升上述試驗樣品加到1.0毫升500mM亞油酸乙醇溶液(pH7.0)的10.0毫升1M磷酸緩沖液和9.0毫升乙醇中，以調制成試驗樣品溶液。將各試樣溶液在37℃的暗處放置9日，然后用硫氰酸鐵法測定過氧化值隨時間的變化情況，也就是說，在0.1毫升試驗樣品溶液中加入4.7毫升75%的乙醇、0.1毫升30%的硫氰化鐵銨(硫氰酸銨)、0.1毫升2×10-2M氯化亞鐵的3.5%鹽酸鹽溶液，在剛好3分鐘后測定在500nm波長處的吸光度。b)試驗結果試驗結果如圖1中所示。(4)使用試驗(A)改善皺紋的效果a)試驗方法在20名婦女(35～55歲)的臉上每日早晚二次連續涂抹下述實施例的香精(處方例7)，3個月后檢查小皺紋的改善程度。涂抹分左半邊臉和右半邊臉進行，在一側臉上涂抹本發明的香精，在另一側臉上涂抹不含PleurotusSajorcaju培養精制液的香精(對照物)，然后進行評定。b)試驗結果評定相對于使用香精之前的小皺紋改善程度，結果證實本發明的香精具有明顯的對小皺紋改善的效果。試驗結果示于表3中。表3</tables>(B)改善色素沉積的效果a)試驗方法試驗樣品調制下述實施例的處方例2-4以及用蒸餾水代替其中的培養精制液而得到同一處方的作為對照物的乳液，用來作為試驗樣品。1)處方例2(摻入制造例1的培養精制液的乳液)2)處方例3(摻入制造例2的培養精制液的乳液)3)處方例4(摻入制造例3的培養精制液的乳液)4)對照物(摻入蒸餾水來取代培養精制液而得到的乳液)在50名被試驗人員的上臂內側設定4個1.5×1.5cm的區域，作為A、B、C和D區。然后，從10厘米距離的地方用2支FL20S·BLB燈和2支FL20S·E-30燈照射上述各區域5分鐘。照射之后，立即在A區上涂抹處方例2，在B區上涂抹處方例3，在C區上涂抹處方例4，在D區上涂抹對照物，按每日3次連續涂7天，7天后檢查色素沉積的改善程度。b)試驗結果將A、B和C區的情況與D區進行比較，評價色素沉積的改善程度。其結果示于表4中。表4</tables>如上所述，本發明的化妝品顯示出良好的改善色素沉積的效果。(C)防止頭皮屑及搔癢癥的效果a)試驗方法經事先調查，選擇10名有頭皮屑、搔癢癥等煩惱的男子(年令25～35歲)，使用下述處方例的滋補藥(處方例8)和不含PleurotusSajorcaju培養精制液的滋補藥(作為對照物)進行試驗。每周3次用洗發液洗頭，用毛巾擦干后在頭皮上一邊按摩一邊涂抹上4毫升作為對照物的試驗樣品。三星期后由熟練的評判人員分4個等級對頭皮屑和搔癢的程度進行評定及問診調查。然后按照與上述對照試驗同樣的方式，每周3次連續3周使用滋補藥(處方例8)，評定頭皮屑和搔癢的程度。評定的結果以10名被試驗人員的平均值表示。頭皮屑程度的評判標準0幾乎看不到1看到少量2看到一些3看到相當數量搔癢程度的評判標準0幾乎沒有感覺1稍有感覺2感覺到3感覺明顯b)試驗結果評定滋補藥(處方例8)和滋補藥(對照物)使用者的頭皮屑和搔癢程度的結果表明，本發明的PleurotusSajorcaju培養精制液具有明顯的防止頭皮屑和搔癢癥的效果。試驗結果示于表5中。表5外用劑的調制本發明的化妝品可以按各種已知的劑型使用，例如乳膏、乳液、化妝水、發膏、生發藥水等。最好是將作為有效成分的培養精制液摻合到水相中。某些種類的化妝品是由水相和油相組合而成的，在這種情況下最好預先將作為有效成分的培養精制液摻合到水相中。外用劑的調制例調制例1乳膏將甘油、山梨糖醇等保濕劑與蒸餾水混合，然后摻入培養精制液，從而制成水相。另一方面，將蜂蠟、石蠟、微晶蠟、精制地蠟、高級脂肪酸、硬化油等固體油組分以及三十碳烷、液體石蠟、各種酯油等液體油組分與防腐劑、表面活性劑等油性組分摻混起來，從而制成油相。然后，緩緩地加熱水相，當加熱到約80℃時，一點一點地添加已加熱到大體與其相同溫度的油相，使之乳化，從而制成乳膏。調制例2乳液將甘油等保濕劑、酸或堿等pH調節劑以及培養精制液與蒸餾水混合，然后加入乙醇，從而制成水相。另一方面，將蜂蠟、石蠟等固體油組分以及三十碳烷、液體石蠟、各種酯油等液體油組分與防腐劑、表面活性劑等油性成分加熱混合，從而制成油相。接著，將油相加到水相中進行預乳化，再向其中加入羧甲基纖維素等保護膠體，在高速攪拌機中使之均勻地乳化，從而制成乳液。調制例3化妝水將培養精制液與甘油、丙二醇等保濕劑、皮膚營養劑一起摻合到蒸餾水中。另外使防腐劑、香料等溶解于乙醇中。將這樣所得到的兩種物質在室溫下混合溶解，從而制成化妝水。調制例4乳狀發膏(CreamPack)將培養精制液與甘油等保濕劑、聚乙烯醇、蜂膠(beegum)等成膜劑一起加到蒸餾水中，使之膨脹，必要時可加入高嶺土、滑石、氧化鋅等的粉末，此外，再向其中加入溶解有香料、防腐劑等的乙醇，將其混煉直至成為糊狀，從而制成膏狀物。調制例5生發藥水將甘油等保濕劑、螯合劑以及培養精制液加到蒸餾水中制成水相，將水相一點一點地加到乙醇中，使之混合均勻，然后將其過濾，從而制成生發藥水。〔處方例〕下面說明化妝品的具體的處方例，不過，本發明不限于這些處方例。處方例1(乳膏)(重量%)聚氧乙烯油基醚(P.O.E.O)1.60甘油單硬脂酸酯3.00白蠟2.80十六烷醇3.00硬脂酸1.75液體石蠟7.10Parsol17890.50三十碳烷4.50甘油2.50Carbopol9400.08ClewatN0.01制造例3中制備的培養精制液0.10蒸餾水73.06此外，添加少量的香料和防腐劑處方例2(乳液)(重量%)三十碳烷5.00凡士林2.00蜂蠟0.50脫水山梨糖醇倍半油酸酯1.20丙二醇5.00乙醇5.00羧基乙烯基聚合物(1%水溶液)20.00氫氧化鉀0.10制造例1中制備的培養精制液10.00蒸餾水51.20此外，添加少量的香料、防腐劑和抗氧化劑處方例3(乳液)使用“制造例2中制造的培養精制液”來取代處方例2中所述“制造例1中制備的培養精制液”，即得到處方例3。處方例4(乳液)使用“制造例3中制備的培養精制液”來代替處方例2中所述“制造例1中制備的培養精制液”，即得到處方例4。處方例5(化妝水)(重量%)檸檬酸0.40碳酸鈣0.20乙醇5.00丙二醇9.00制造例1中制備的培養精制液30.00蒸餾水55.40另加少量的香料和防腐劑處方例6(發膏)(重量%)蜂膠(beegum)5.00三十碳烷2.00丙二醇5.00氯化鋅10.00乙醇5.00制造例2中制備的培養精制液2.00蒸餾水71.00另加少量的香料和防腐劑處方例7(香精)(重量%)羧基乙烯基聚合物(1%水溶液)10.00甘油20.00乙醇1.00透明質酸鈉(0.1%水溶液)10.00制造例2中的培養精制液10.00蒸餾水49.00另加少量香料和防腐劑處方例8(生發藥水)(重量%)乙醇(95%)75.00甘油5.00制造例2中制備的培養精制液5.00蒸餾水15.00另加少量香料和防腐劑本發明提供了以上述PleurotusSajorcaju的培養精制液為有效成分的化妝品。這種化妝品如果涂抹在皮膚上，完全沒有副作用，并可有效地預防由于紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現象。如果用于頭皮上，則可有效地防止生成頭皮屑和搔癢癥。圖1中所示為抗氧化作用試驗的試驗結果。○-○制造例1中的培養精制液△-△制造例2中的培養精制液□-□制造例2中的培養精制液●-●維生素E10μm×-×對照物(蒸餾水)權利要求1.一種化妝品，含有從PleurotusSajorcaju菌絲體的培養液中提取得到的精制液。2.權利要求1所述的化妝品，其中含有0.1-30%(重量)所述的精制液和70-99.9%(重量)的皮膚可以接受的載體、稀釋劑或溶劑。3.一種制備化妝用的液體的方法，包括在培養基中由于24-35℃溫度范圍內有氧培養PleurotusSajorcaju的菌絲體，然后將液體部分與其余的發酵肉湯分離。4.權利要求3所述的方法，其中所述的液體隨后用蛋白酶進行處理，并進行超過濾，除去分子量大于1000的物質。全文摘要一種化妝品材料，含有從PleurotusSajorcaju的菌絲體培養液中提取的精制液。PleurotusSajircaju的培養精制液具有良好的抑制紫外線損傷、抑制黑色素生成以及抗氧化的作用，因此，摻有這種精制液的化妝品，在施用到皮膚上時可以有效地預防因紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現象，在施用于頭皮上時，可有效地抑制頭皮屑和搔癢癥。文檔編號A61K8/00GK1064805SQ9210142公開日1992年9月30日申請日期1992年2月8日優先權日1991年2月8日發明者三谷纮明,下田浩子,吉井隆,田代圭介申請人:蜜絲佛陀株式會社,三省制藥株式會社