專利名稱：一種降血脂減輕動脈粥樣硬化的人工生物膜制備方法
技術領域：
本發明屬于一種用于調節與改善機體功能的人工生物膜的制備方法。本發明所用的主要原料為從大豆中提取的磷脂酰膽堿。
從五十年代人們就發現磷脂具有降血脂、治療動脈粥樣硬化、改善動脈壁活性、治療脂肪肝、肝硬化貧血等功能，經過國內外學者多年研究，其機理在于磷脂本身就是構成機體的細胞成份，大豆磷脂含有機體內所必需的不飽合脂肪酸，能將膽固醇帶出體外。由此，國內國外有人最先將從大豆中提出的磷脂直接用于口服或不經任何處理將磷脂加入水中靜脈注射，取得了減輕動脈硬化的作用，在此我們稱這種方法為方法一(見PL and Atherosclerosis Avog aro P.etal New York 1983)。1967年在文獻Path Bact Vol94 P77中又有人提出將大豆磷脂和蛋黃磷脂經過超聲處理后靜脈注入機體(兔子)中，也得出減輕動脈粥樣硬化且大豆磷脂效果優于蛋黃磷脂的結論。在此基礎上，國外學者還做了大量的機理研究，結果表明經過振蕩后的磷脂形成了一個直徑為0.45微米，均勻的球形人工生物膜，此膜進入機體后由于其均勻性和呈球膜狀，能更好的和體內的脂蛋白、動脈壁相互作用，參于細胞內的物質交換更有利于將體內的膽固醇帶出體外，且磷脂本身并不在體內積蓄。我們稱這種方法為方法二。
從方法一我們可以看出，它是不經過處理直接利用磷脂口服或稀釋水中進行靜脈注射的動物實驗。其靜脈注射共八次，每周兩次，每次為5毫升%，得出的結論為治療組的主動脈瘢塊為2.7級，對照組的主動脈瘢塊為4.5級，證實了磷脂確有很好的降血脂，減輕動脈粥樣硬化的作用。
方法二所作的實驗主要側重于人工生物膜減輕動脈硬化的機理研究，既使作了實驗，也是零星的、缺乏統計學意義。比如方法二所做的實驗僅用11只兔子，又分為四組，每組才1-2只，得出的結論為大豆磷脂做成的人工生物膜效果最好，而蛋黃磷脂做成的人工生物膜效果比不給人工生物膜的對照組還差的結論，為選用合適的原料提供了一條新的途徑。方法二雖然采用了較新穎的方法處理磷脂，并提出用人工生物膜進行實驗，可由于每組才1-2只兔子，其結論缺乏統計學意義，尤其實驗缺乏成組的改善心血管狀況的數據，無法強有力的證明大豆磷脂人工生物膜的效果。
鑒于方法一雖有一定的效果，但它所用的原料未經過處理，其優勢未發揮出來(參見本發明的對比，已被本發明所采用的方法證明)。而方法二過去的實驗目的偏重于機理的探討研究，其超聲后制成的人工生物膜未見有詳盡的實驗結果報導，實驗缺乏統計學意義，無說服力。更重要的是制備過程中所采用的方法從選料到配方存在有許多的缺陷與不足，即選料成份具有致敏性，振蕩方式易產生雜質，投料的參數過高影響療效及振蕩的合理時間，均有待于完善提高。
本發明的任務在于克服上述已有方法的缺陷。即在方法二的基礎上對其所用的原料、配料參數、振蕩時間與方式上進行了新的改進，在實驗組數量大大優于方法一方法二的基礎上，得出了具有統計學意義的結論，且其效果又優于方法一的新的人工生物膜制備方法。
解決上述任務的方案是，采用制做人工生物膜的新技術，完善具有統計學意義的實驗組。其制備新技術的實質在于選用了以大豆磷脂酰膽堿為主要成份的原料;采用無接觸超聲;以振蕩結果控制超聲時間以及新的投量參數的人工生物膜制備方法。
本發明的細節、優點和特征，用下列附圖
與實施例來詳盡說明。
1、大豆磷脂主要由磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺兩種成份構成，據文獻報道磷脂酰乙醇胺具有致敏作用，在使用中有一定的局限性，這也是國外為什麼一直不將磷脂大量使用臨床的原因，其實驗也多為機理上的探討。鑒于以上情況，本發明在選用的磷脂成份上注意了這一方面，以磷脂酰膽堿為主要成份，盡量減少磷脂酰乙醇胺的成份。方法二用的大豆磷脂其磷脂酰膽堿占71.0%，磷脂酰乙醇胺占20.2%，本發明所用的大豆磷脂所含的磷脂酰膽堿占95-98%，而其磷脂酰乙醇胺含量僅占不到1%，所以以此原料制成的人工生物膜在使用中能有效的克服致敏性，從而提高療效以及便于推廣使用。
2、利用方法二制備生物膜的過程中，是將超聲頭直接放入液體中進行振蕩，在振蕩過程中產生的雜質使產品變色發黑，這是由于探頭上的金屬鈦離子脫落溶于水中所致，另外探頭本身的不潔也容易給產品造成污染，雖然最后還要將產品超速離心剔去鈦碎屑和雜質，但這樣既增加了工作量，也還是不能保證產品的純度，因為在離心中液體仍要同其它物體接觸。為克服原有技術的這一缺陷，本發明采用了無接觸超聲，見圖一(1)為超聲發生器，(2)玻璃容器，(3)超聲發生器的槽體，(4)調配好的原料。即直接將配好的液體放入玻璃容器中，然后將玻璃容器置于超聲器的槽內，其底部與超聲槽接觸，從而通過超聲槽振蕩傳于玻璃容器達到制作人工生物膜的目的，避免了直接將超聲探頭置于液體中的弊病。
3、在超聲過程中，原有技術超聲時間的參數為三次，每次10分鐘，總體不超過40分鐘。本發明不拘于此點、而以隨時用顯微鏡觀察振蕩中的磷脂人工生物膜的大小、均勻性是否達到預定標準為準。在觀察到生物膜達到0.4微米，均勻性趨同的狀況下即停止振蕩，其使用時間參數在50-120分鐘。
4、本發明在磷脂與生理鹽水的配比量上，采用了20毫克-50毫克/每毫升鹽水的配比率。此配比率遠遠低于方法二300毫克/每毫升鹽水的配比率。其目的在于，按本配比率配制的成品在進入機體內后更易起到磷脂的生物學作用，這是由于制做出的成品不稠，流動性好，利于靜脈注射。若按方法二的配比率作出的人工生物膜太密，呈積聚在一起的狀態，在注射前還要稀釋，終歸有積在一起的可能，這樣在進入機體后，其大小超過0.4微米，不利于參于體內細胞的交換，影響療效。
由本方法生產的磷脂人工生物膜經動物實驗證實，與方法一比較，主動脈粥樣硬化瘢塊分級優于原方法。見下組對比國外給藥組 2.7 對照組 4.5本組給要組 2.0 對照組 4.0經與方法二比較，除有顯著的療效外，還具有統計學意義。
現將用本發明制做的人工生物膜，經三組動物實驗的對比數據列具如下表一 多次注脂質體對進食高脂兔血脂的影響mmol/L X±SN TC β-脂蛋白 PL HDL-PL (VLDL+LDL)-PL TG(g/L)(1)正常組7 3.4 4.9 42.9 20.8 22.1 1.0± ± ± ± ± ±1.5 2.7 6.0 1.3 4.7 0.3(2)進食高脂 28.5 31.3 66.6 22.8 43.8 1.9對照組7 ± ± ± ± ± ±2.5＃＃＃ 0.2＃＃＃ 6.4＃＃＃ 1.5＃ 4.9＃＃＃ 0.9＃(3)進食高脂 22.9 27.2 57.1 21.1 36.0 1.4給藥組5 ± ± ± ± ± ±4.7※ 5.6 6.3※ 0.9※ 5.4※ 0.4＃＃＃P≤0.001 ＃P≤0.05與(1)比較※※※P≤0.001 ※P≤0.05與(2)比較
表三 主動脈粥樣硬化斑塊面積占主動脈總面積的百分數及分級N 斑塊占總面積% 分 級(1)正常組7 0% 0(2)進食高脂 43.7% 4對照組5(3)進食高脂 13.0% 2給藥組5各組后面的數字為實驗兔子的個數，結果為三個月后的觀察結果。表一中mmol/L為每立升含多少摩爾，X±S為平均值加減標準差，TC為血中總膽固醇;PL為磷脂;HDL-PL為高密度質蛋白所系帶的磷脂;(VLDL+LDL)-PL為極低密度質蛋白+低密度質蛋白所帶的磷脂;TG為甘油三脂;＃表示有顯著差異(2)與(1)比，※表示有顯著差異(3)與(2)比，P為有顯著差異的參數，一般小于0.05即表示有顯著差異，其值越小差異性越大。通過TC欄可以看出，(2)與(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(2)比有顯著差異，反映了用藥后可使血中總膽固醇含量顯著下降。通過β-脂蛋白欄可以看出，(2)于(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(2)比說明用藥后有降低的傾向。PL，HDL-PL，(VLDL+LDL)-PL三欄說明磷脂在體內不積蓄。通過TG欄可以看出，(2)與(1)比有顯著差異，說明造成了高血脂模型，(3)與(1)比說明用藥后與正常組沒有顯著差異，而(2)與(1)比有顯著差異，說明用藥后可使TG下降。從表二中可以看出，四項指標在給藥后均有下降，除TK外均有顯著差異，反映了人工生物膜在血液流變中均能起到降低血液粘度，改善紅細胞硬度的作用。從表三中可以看出用藥后瘢塊面積低于不用藥組，(2)與(3)做統計學處理后有以下結論(2)的X±S＝0.435±0.15，(3)的X±S＝0.13±0.136，兩組相比P≤0.01，有顯著差異。以上實驗為靜脈注射，每周兩次，每次每公斤80毫克磷脂人工生物膜溶于10毫升的鹽水。在以上實驗的基礎上，還應用本發明所制成的人工生物膜給兔子口服，取得的效果十分令人振奮，這是國外所沒做過的，由于不屬于本發明所述的范圍，在此從略。
本發明制備過程用下例實施例說明將大豆磷脂(含磷脂酰膽堿95-98%)放入盛著鹽水的玻璃容器中，其投入量為每毫升鹽水20-50毫克，所用鹽水為0.9%的氯化鈉生理鹽水。將容器置于超聲發生器的槽內，啟動機器進行振蕩，在50-120分鐘的振蕩過程中，隨時觀察人工生物膜的生成狀況，當膜呈均勻狀態且為0.4微米時即停止振蕩。然后用0.45微米的濾膜過濾振蕩后的液體，再將過濾后的液體用100℃的流通蒸汽經30分鐘的滅菌，即可投用使用。若靜脈點滴還需調整液體的PH值，使其達到PH＝7.2即可。
權利要求
1.一種降血脂減輕動脈粥樣硬化的人工生物膜的制備方法。它包括生產人工生物膜制備中必要的方法。本發明的特征是，選用大豆磷脂酰膽堿為主要成份的原料；采用無接觸超聲振蕩的方式，給出了停止振蕩的依據及超聲時間參數；給出新的投料配比參數。
2.根據權利要求1，所述的原料為從大豆中提取的磷脂，其成份為磷脂酰膽堿占95-98%，磷脂酰乙醇胺含量小于1%。
3.根據權利要求1，所述的振蕩方式為無探頭接觸超聲法。
4.根據權利要求1，停止振蕩的依據是用顯微鏡隨時觀察人工生物膜，當其達到0.4微米且大小均勻時停止振蕩。
5.根據權利要求1，本方法給出的新的配比量參數為20-50毫克/每毫升鹽水。
6.根據權利要求1，3，本發明采用直接將容器置于超聲器所帶的槽體內進行振蕩。
7.根據權利要求1，4，本發明所振蕩的時間參數為50-120分鐘。
全文摘要
一種以大豆磷脂為主要原料的人工生物膜的制備方法。其成品應用于保健食品與新的藥物底基，參于調節與改善機體的功能。其特征在于制備過程中選用了以磷脂酰膽堿為主要成分的原料，采用了無接觸超聲振蕩方式并給出了振蕩時間的參數，以及制做人工生物膜用的新的配比參數。用本方法制備的人工生物膜具有降血脂，減輕動脈粥樣硬化等多方面的功能，效果顯著。其方法本身具有簡單、實用、投資少見效快的特點。
文檔編號A61K31/66GK1053745SQ9110187
公開日1991年8月14日 申請日期1991年3月28日 優先權日1991年3月28日
發明者徐寧生, 劉曉勤, 趙春玉, 孟慶玲 申請人:北京醫科大學