口服給藥系統的制作方法

專利名稱:口服給藥系統的制作方法
本發明涉及口服給藥系統。更具體地說本發明涉及通過給予與維生素B12(VB12)或其類似物結合的活性物質來增強活性物質的吸收。
口服給藥方式大概是對人供給抗原或藥理活性劑的最佳方式。然而這種途徑最主要的缺點一般是腸胃道對抗原或藥理活性劑的攝取都不好，而且一些制劑由于長時間與蛋白水解酶接觸而遭破壞。在這方面，過去使人或動物以口服方式免疫的努力所取得的成績很有限。通常只有通過口服大量的抗原或結合非腸道給藥並以口服支援的方式才能完成有效的接種。近年來我們進行的利用與腸粘膜具有結合能力的一些分子的工作演示證明了用低劑量的這些結合蛋白或通過把各種抗原或半抗原偶聯到這些載體上能實現有效的口服免疫。這些分子由腸道的攝取或轉運至循環似乎是由于內吞作用的傳遞受體的緣故。
一些時間以來，已知腸道中存在著一些吸收食物分子的特殊機制。因此就有單糖、雙糖氨基酸和維生素的具體吸收機制。這些吸收機制的大多數依賴于特定蛋白質和酶如單糖酶或雙糖酶的存在，它們位于與這些分子結合並將其轉運到細胞層和膜本體中去的粘膜薄膜本體中。
發現這些吸收機制中有兩個值得注意的例外是鐵的轉運和VB12的吸收。在這兩種情況下，一種特殊的結合蛋白被釋放到腸中，在腸腔中與其配位體結合。
因此，鐵在腸道吸收時，傳遞蛋白從胃里被釋放出來，與鐵結合，再在十二指腸的粘膜上與受體結合。受體-鐵傳遞蛋白-鐵復合物再通過受體傳遞的內吞作用而被吸收。
相似地，通過由腸吸收生理量的VB12需要VB12與天然存在的被稱為內源因子(IF)(1-5)的轉運蛋白結合。這種蛋白質由基底壁細胞釋放到胃腔中去。只要與內源因子結合，VB12·IF復合物就與位于小腸末端回腸上的結合IF受體的膜相互作用。受體-IF-B12復合物再通過受體傳遞的內吞作用(RME)而內化。Allen和Majerus(7)證實了有可能化學改性VB12，把它偶聯到一個樹脂上，並用這種VB12-樹脂親合凈化IF。這一發現啟示我們有可能將一些大分子(如Allen和Majerus所使用的樹脂)與VB12偶聯而且還仍然保持它特別是與內源因子相互作用的能力。通過把這些分子偶合到VB12上並保持VB12與內源因子相互作用的能力，我們有希望能夠利用VB12的天然吸收機制將VB12以及各種偶聯到它上的分子、各種蛋白質、藥物或其他藥物活性分子轉運到循環體系中。
本發明的目的是利用VB12的吸收機制從腸腔將與VB12或其類似物共價偶聯的活性物質如藥物、激素、抗原物質等轉運到循環體系中。
在第一個實例中，本發明提供了一種復合物，它至少包括一種至少與一種載體分子鍵合的活性物質，該載體分子是VB12或其類似物，在復合物中，該載體的對于脊椎動物體中VB12的吸收和轉運是必須的進行結合反應的能力以及該活性物質的活性基本上都被保留。
在本發明的說明書中，術語“活性物質”包括激素、生物活性肽、治療劑、抗原或半抗原的全部、部份、類似物、同系物、衍生物或其組合物。
按照本發明傳送的最佳活性物質包括激素和生物活性肽如LHRH，胰島素、罩酮、干擾素、PMSG、HCG和抑制素;治療劑如新霉素、舒喘靈、嘧啶甲胺、青霉素G、甲氧苯青霉素、羧芐青霉素、陪替丁、甲苯噻嗪、鹽酸氯胺酮、甲萘甲醇和鐵葡聚糖;抗原或半抗原包括過敏原、蛋白質、多糖以及分泌產物如青草花粉(如大麥和葡萄冰草)、草花粉(如苜蓿、酸模屬草類)、樹木花粉(如梣、塞浦路斯)、植物花粉(如金雀花)、上皮(如貓毛、狗毛、豬毛)以及室內塵螨類、小麥粗糠和木棉;由流感、麻疹、風疹、天花、黃熱病、白喉、破傷風、霍亂、鼠疫、斑疹傷寒、BCG、結核病病原體、流感嗜血桿菌、粘膜炎奈瑟氏菌、肺炎桿菌、肺炎球菌、鏈球菌得到的蛋白質或對抗它們的免疫原;由白喉、破傷風、霍亂、鼠疫、斑疹傷寒、結核病病原菌、流感嗜血桿菌、粘膜炎奈瑟氏菌、肺炎桿菌、肺炎球菌鏈球菌、鏈球菌變種得到的分泌產物或由瘧原蟲或小雞球蟲病的病原體得到。
VB12最佳類似物包括氰基鈷胺素(CN-Cb1)水合鈷胺素、腺嘌呤核苷鈷胺素、甲基鈷胺素、羥基鈷胺素、氰基鈷胺素對稱二苯脲和5-氧-甲基芐鈷胺素〔(5-OMeBZa)CN-Cb1〕以及以上所有化合物的脫二甲基、乙胺化和甲基胺化類似物。還可包括鈷啉醇酰胺的各種類似物和同系物，如輔酶B12和5′-脫氧腺嘌呤核苷鈷胺素，其他類似物包括氯代鈷胺素、亞硫代鈷胺素(sulfitocobalamin)、硝基鈷胺素、氰硫基鈷胺素、苯并咪唑衍生物如5，6-二氯代苯并咪唑、5-羥基苯并咪唑、三甲基苯并咪唑以及腺嘌呤核苷氰基鈷胺素〔(Ade)CN-Cb1〕、鈷胺素內酯、鈷胺素內酰胺和N-酰苯胺、乙胺、VB12的一元羧酸和二元羧酸衍生物或其類似物。
VB12最佳衍生物包括其一元、二元或三元羧酸衍生物或VB12的丙酰胺衍生物。載體還可以包括鈷原子被鋅或鎳取代的VB12衍生物，VB12或其類似物的可啉環可以用不影響它與IF結合的任何取代基取代。
本發明的一個最佳實施例中還提供了一種包括Lys-6形式的LHRH和VB12的復合物。
本發明的偶聯了活性物質的復合物可被用于把這些物質轉送到任何單細胞或多細胞的有機體中，條件是需要VB12特定的轉動機制。例如，由于損失了在細胞內轉運抗生素的能力，使這些細菌對于該特定抗生素產生的抗藥性可以通過這個方法克服。借助于VB12的轉運機制，VB12-抗菌素復合物因此就能有效地被傳送到細菌的細胞內。這使得可以再次利用由于細菌抗藥性的出現而使其現在的應用受到限制的若干抗菌素。轉送上述類型的活性物質，可以對許多物種或有機體，特別是人或動物的寄生物都能實現。
在另一實施例中，本發明提供了一個生產一種復合物的方法，該復合物至少包括一種與至少一種載體分子鍵合的活性物質，所述載體分子是VB12或其類似物，復合物中該載體對于脊椎動物體中VB12的吸收和轉運是必須的進行結合反應的能力以及活性物質的活性基本被保持，該方法包括了一個或多個下述步驟a)將活性物質與載體分子反應生成所述絡合物;
b)化學改性活性物質以提供至少一個能形成化學鍵的官能團，並將該活性物質與載體反應生成所述復合物;
c)化學改性該載體以提供至少一個能形成化學鍵的官能團，並將該活性物質與載體反應生成所述復合物。
d)化學改性該活性物質和載體以提供能形成化學鍵的官能團，並將該活性物質與載體反應生成所述的復合物;
e)將該活性物質與至少一種交聯劑反應，並將該活性物質和載體分子反應生成所述復合物;
f)將該載體分子與至少一種交聯劑反應，並將該活性物質與載體反應生成所述復合物;
g)將該活性物質和載體與至少一種交聯劑反應，並將該活性物質和載體反應生成所述復合物。
本發明最佳方法包括(Ⅰ)通過弱酸水解制備VB12一元酸的衍生物，並純化該衍生物;
(Ⅱ)化學改性該活性物質以提供至少一個能形成化學鍵的官能團，以及(Ⅲ)將改性的活性物質和VB12一元酸衍生物反應生成所述復合物。
交聯劑可包含有二硫鍵或可被酸、堿或高碘酸裂解。交聯劑的例子包括N-(4-疊氮苯基硫代)苯鄰二甲酰亞胺，4，4′-二硫雙苯基疊氮化物、二硫雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)、二甲基-3，3′二硫雙丙咪酯。2HCl，3-3′-二硫雙(硫代琥珀酰亞胺丙酯)。乙基-4-疊氧苯基-1，4-二硫丁咪酯。HCl、N-琥珀酰亞胺基-(4-(疊氮苯基)-1，3-二硫代丙酯、硫代琥珀酰亞胺基-2-(間-疊氮基-0-硝基苯甲酰氨基)-乙基-1，3′-二硫丙酯、N-硫代琥珀酰亞胺基-2-(對-疊氮水揚酰亞胺基)-乙基-1，3′-二硫丙酯、N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酯、硫代琥珀酰亞胺基-(4-疊氮苯基二硫代)-丙酯、以及2-亞氨硫烷。最佳交聯劑是酒石酸二琥珀亞胺酯和雙-〔2-(琥珀酰亞胺基氧代羰基氧)-乙基〕砜。
載體和活性物質的交聯最好是通過把VB12的A、B和C環相鄰的丙酰胺側鏈的酰胺基酸性水解，並偶聯到活性物質的合適基團上去來完成。
在本發明另一實例中，提供了一種包括本發明絡合物以及藥物學允許的載體或稀釋劑的藥物。
藥物學上允許的載體或稀釋劑的例子包括一些典型的載體和稀釋劑，如碳酸氫鈉溶液和能中和胃酸或具有類似的緩沖能力的類似的稀釋劑、二元醇、油類、油/水或水/油乳劑，以及還包括以乳劑、凝膠、膏以及粘性膠體分散劑形式的藥物。該藥物存在的形式可為膠囊，片劑、慢釋放或配劑形式或作為凝膠或膏。此外該藥物還可以當作家畜飼料或適于人消耗的食物來提供。
本發明還提供一種包含本發明復合物的抗菌組份，其中活性物質是一種與其載體或稀釋劑一起的抗細菌活性物質。
在另一實例中，本發明提供了一個增強脊椎動物體對口服活性物質的應答的方法，該方法包括口服有效量的作為本發明復合物的所說的活性物質，或本發明的藥物。
本發明還提供了一個選擇性調節對抗原或半抗原免疫應答強度和類型的方法，該方法包括口服有效量的作為本發明的復合物的所述抗原或半抗原，或本發明的藥物。
本發明還提供了把一種活性物質提供給需要VB12並且對B12有特定吸收機制的任何單細胞或多細胞生物體，包括細菌、原生動物或寄生蟲的方法，該方法包括給生物體施用本發明的復合物。在這種情況下，由于失去了將抗生素轉運到細胞中去的能力而對抗生素表現出抗藥性的細菌，可以通過把該抗生素偶聯到VB12上，並利用該細菌天然的VB12吸收機制將該抗生素傳送到其細胞中，而使細菌對抗生素再次敏感。這樣，由于出現細菌抗性而已中斷使用的許多抗生素能夠恢復它在藥物上的重要性。
在本發明的另一實例中，提供了一個使用本發明的復合物使活性物質通過血/腦屏障或通過胎盤輸送到發育中的胎兒中去的方法。通過這些屏障上天然的VB12吸收機制來達到這些物質的傳遞。
完成本發明的最好方式材料牛血清蛋白(BSA)、VB12、對硝基酚、LHRH醋酸鹽以及新霉素硫酸鹽全部購于美國，密蘇里州、圣路易斯、西格馬化學公司。
1-乙基-3-(二-甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDAC)是從加利福尼亞BIORAD室驗室得到的，而N，N′-二環己基碳化二亞胺(DCC)是從Fluka公司購買的。
制備1VB12的一元羧基衍生物VB12的酸性衍生物可以通過天然VB12于室溫下，在0.4MHCl中水解72小時容易地被制取。把水解物通入Dowex AGI-X8離子交換柱而中止反應。把含VB12一元酸的流出物凍干並且重新懸浮于0.2M的吡啶中，用1M氫氧化銨調節pH＝9.05。該溶液再通到事先用0.2M吡啶平衡過的SephadoxQAEA25，再用0.6M吡啶至0.4M，0.16M醋酸的梯度溶液提洗出單羧酸。把含有純化過的單酸的各個組份匯集起來凍干。
下面舉例說明本發明最佳實施方案，但並不構成對本發明的限制。
單羧基VB12通過使用適當的碳化二亞胺而能被共價交聯到任何一個含氨基的化合物上。
例1 VB12-BSAVB12-BSA復合物的生成是通過等量的COOH-B12與BSA于蒸餾水混合，用1M NaOH調節其pH到6.5，再將等量的固體EDAC加入到溶液中並使其反應過夜。游離的，未反應的COOH-B12用Sephadex G25色譜除去，之后重復進行VB12-BSA復合物的乙醇沉淀。
例2 VB12-Lys-6-LHRH把單羧基VB12加1.5當量的n-羥基琥珀酰亞胺溶解于冷的(4℃)二甲基甲酰胺(DMF)中，往該溶液加入1.1當量的二環己基碳化二亞胺(DCC)的DMF溶液。將該溶液加溫到室溫並使其反應1小時。加入在含三乙胺的DMF中的Lys-6-LHRH溶液，並使其反應過夜。所得到的絡合物先經Sephadex G-25色層分離，再經逆相HPLC從游離的反應物中分離出來。
例3 VB12-新霉素VB12的整個酸性水解物用NaOH調節到pH＝6.5，再將等量的硫酸新霉素加到該溶液中去，然后加等量的EDAC。讓這種軛合反應進行一整夜，之后軛合劑通過在G-25上色層分離和逆相HPLC從未反應的反式物中被分離出來。
所有的反應和凈化程序都由薄層色譜監視。BSA的VB12取代反應的程度借助于對該軛合物的光譜掃描測定，對于1mg/ml的BSA和VB12溶液，采用0.D.278，消光值各為0.6和11.5，而對VB12，O.D.361，消光值為20.4。
軛合物的施用雌性C57B1/6J小鼠(18-22g)是從動物資源中心(Perth，Western Australia)得到的，采用專門制作的飼管使所有的小鼠都接受在0.5ml、pH9.5的0.1M碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液中軛合物制劑，小鼠在第0天和14天喂。第21天從小鼠眼窩血管取血，采用與抗-鼠血清軛合的堿性磷酸酶通過ELISA法測定血清的抗體效應。
例4口服VB12-BSA復合物后發生的血清抗體刺激對于與B12共價鍵合的VB12供體蛋白質分子的從腸道到循環體系的可能的潛力進行了研究。由這種復合物產生的免疫應答與只服用該蛋白質或與VB12一起服用，或與肌肉內注射蛋白質所產生的應答進行了比較。
如表1所示，服用微克量級的BSA或偶合了VB12的FGG的小鼠，分別對BSA或FGG產生值得注意的血清抗體應答的刺激作用。不管是服用相似量的蛋白質，還是50倍過量的混合有VB12或不混VB12的蛋白質都不產生抗-BSA或抗-FGG抗體的刺激作用。喂給VB12-蛋白質復合物還有可能刺激好的細胞免疫性(用DTH的蹼分析測量)。
表1口服VB12-BSA或VB12-FGG復合物的免疫應答口服免疫原血清抗體應答＊蹼反應+BSA(50μg) ＜4 0BSA(2500μg) ＜4 未測VB12＜4 0VB12+BSA ＜4 0VB12-BSA 1351±198 17.3±5FGG ＜4 0VB12+FGG ＜4 0VB12-FGG 1584±647 23.3±6FGG+FCA s.c 16504±3047 27.4±4＊開始喂養后的21天，于37℃下給出ELISA法讀數為0.545分鐘后的抗血清稀釋度的倒數。每個值代表15只小鼠的平均值±1標準偏差。小鼠在第1天和14天接受兩次抗原(50μg)的喂養。在21天時以小鼠后眼窩血管取血，采用前述ELISA法測量(Russell-Jones等人，1984)其抗體效價。每一種蛋白分子平均被5個VB12基團取代。
+用千分卡尺測量蹼的腫脹mm數。所有組都先接受50μg初劑量的抗原，之后在右腳用10μg免疫抗原，左蹼用10μg的卵清蛋白進行接觸免疫試驗，于24小時后測量腫脹。
例5口服VB12-LHRH刺激排卵雖然若干種激素，像雌激素和孕酮激素，口服后可被有效地吸收，但有很多其它激素口服時可能沒有多少效果。這些激素中值得注意的是肽激素黃體化激素的釋放激素(LHRH)，或促性腺激素釋放激素(GnRH)。這種激素一般是由前腦垂體分泌的，並且負責控制黃體化激素(LH)和促卵泡素(FSH)的釋放。不經腸胃道的HRH注射先前已被證明在刺激FSH和LH釋放中是有效的，然而口服LHRH沒什么效果。已經進行了許多有關改變LHRH順序方面的研究，結果發現了一些興奮劑和抗興奮劑。目前發現到的最有效的興奮劑之一要算是LHRH的D-Lys-6類似物(D-Lys-6.LHRH)。因為這種類似物在賴氨酸的ε氨基易于為肽交聯，所以決定使用DCC法使單羧基VB12鏈合到D-Lys6.LHRH上，並檢驗其口服效果。
我們合成了LHRH的D-Lys-6類似物，並用逆相HPLC純化。在采用如例2所述的Dcc法把純化的類似物偶連到單羧基VB12上。該結合物用在10%乙酸中的Sephadex G-25層析純化，再經HPLC層析純化。
成熟的C57B1/6J雌性小鼠按下述方式處理第0天所有的小鼠都皮下(S/C)接受一個排卵過速劑量的妊娠牝馬血清促性腺激素(PMSG)以刺激卵巢卯泡的生長，48小時后小鼠接受各種劑量的LHRH，Lys-6-LHRH或生理鹽水。第3天處死小鼠檢查排卵。采用立體顯微鏡在80X倍率下檢查卵巢上存在的黃體出血以檢查排卵。
下述的結果表明通過將Lys-6-LRH偶連到VB12上有可能通過口服方式來輸送該類似物、並仍能觀察到像這里是以其在發育卵泡中刺激排卵的能力為例子的生理效應。靜脈注射時這種制劑不能發揮它的效果可推測是當VB12不與反式鈷氰胺Ⅱ復合時，游離的VB12迅速清除的反映。
表Ⅱ演示Lys-6-LHRH的生物活性處理 排卵小鼠數第0天 第2天PMSG 8IU Lys-6-LHRH 50μgiv 3/4PMSG 8IU LHRH 50μgiv 1/4PMSG 8IU 生理鹽水 250μliv 0/4PMSG 4IU Lys-6-LHRH 50μgiv 3/3PMSG 4IU LHRH 50μgiv 1/3PMSG 4IU 生理鹽水 250μliv 0/3表Ⅲ演示VB12以口服方式傳送Lys-6-LRH的能力處理 排卵小鼠數第0天 第2天pMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 50μgiv 0/5pMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 50μg/os 3/5pMSG 8IU LHRH 50μg/os 1/5pMSG 8IU 生理鹽水 250μl/os 0/5
表Ⅳ口服提供VB12-Lys-6-LHRH的劑量響應處理 排卵小鼠數第0天 第2天PMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 4/5PMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 3/5PMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 5/5PMSG 8IU VB12-Lys-6-LHRH 2/5PMSG 8IU LHRH 1/5PMSG 8IU LHRH 1/5PMSG 8IU LHRH 0/5PMSG 8IU LHRH 0/5PMSG 8IU HCG 5/5PMSG 8IU 生理鹽水 0/5例6一些藥品，包括抗生素、新霉素，當非腸胃道注射時是非常有效的抗生素，然而當口服給藥時，則完全無效，因為它們不能通過腸的上皮轉運，因此決意要搞清楚VB12是否能對口服時對機體感染無效的抗生素(新霉素)起載體的作用。
如例3所述，新霉素被共價鏈合到VB12上，並喂給感染了S.typhimurium的小鼠。
口服新霉素、或新霉素加VB12是不能消除機體的S.typhimurium感染的，然而，當新霉素偶連到VB12上時，大量的這種結合物通過腸的上皮被轉運，因而能消除機體的沙門氏菌感染。表3表明，感染了S.typhimurium的小鼠不管喂VB12，新霉素結合物(總劑量為1毫克)還是通過肌肉注射新霉素或VB12。新霉素(兩者總劑量都是1毫克)都能得救。所有別的處理未能防止由于感染而引起的死亡。另外，口服后能消除實驗動物肝和脾感染點的VB12。新霉素的量的大小表明至少在這一劑量下，VB12。新霉素是可以與只是肌肉注射新霉素或新霉素。VB12結合物相比擬的(表5)。
表5VB12-新霉素結合物的殺菌性質處理 途徑 存活鼠數月 百分比生理鹽水 口服 0 0新霉素 口服 0 0VB12口服 0 0新霉素+VB12口服 0 0新霉素-VB12口服 2 100生理鹽水 肌肉注射 0 0新霉素 肌肉注射 2 100新霉素-VB12肌肉注射 2 100雄性C57B1/6J小鼠(1組)第0天喂1×106個S.typhimurium菌。第3天小鼠或接受生理鹽水，或VB12，或VB12+新霉素(新霉素+VB12)或偶連到新霉素上的VB12(新霉素-VB12)，或者只接受新霉素。總劑量為1毫克，分5小份每隔12小時給藥一次。按例3說明的方法將新霉素偶連到VB12上並純化該結合物。
可以將VB12以共價鍵方式偶連到蛋白質(FGG和BSA)，激素(LHRH)和抗生素(新霉素)上並利用對VB12天然的有效吸收機制將這些分子從腸腔轉運到機體循環中，同時保證偶連到VB12上的這些分子的全部免疫原性和/或生物活性。這些發現的重要意義在于VB12可能用作為高效能的激素、抗生素和脈管活化肽的特殊載體，而目前它們必須借助于注射反復地施藥，又貴又不方便。
工業適用性本發明對以前通過腸道不能以有效量轉運或不能依靠口服各種抗原產生有效的機體免疫應答的各種分子提供了一種簡單而新穎的特殊口服給藥技術。這些抗原喂給時通常不能誘發免疫應答，除非是服用大量抗原。類似地，通常腸吸收不好的各種活性分子可被共價鍵合到VB12上，從而使它們易于腸吸收。
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權利要求
1.一種復合物，它至少包括一種與至少一個載體分子鍵合的活性物質，所述載體分子是維生素B12或其類似物，該復合物基本保持了該載體的在脊椎動物體內吸收和轉運VB12所必須的進行結合反應的能力以及該活性物質的活性。
2.按照權利要求
1所述的復合物，其中的活性物質選自于激素、生物活性肽或治療劑的全部、部份、類似物、同系物、衍生物或其組合物。
3.按照權利要求
2所述的復合物，其中活性物質是一種選自LHRH、胰島素、睪酮、干擾素、PMSG、HCG或抑制素的激素。
4.按照權利要求
2所述的復合物，其中活性物質是LHRH的Lys-6形式。
5.按照權利要求
2所述的復合物，其中活性物質是選自新霉素，舒喘靈、嘧啶甲胺、青霉素G、甲氧苯青霉素、羧芐青霉素、陪替丁、甲苯噻嗪、氯胺酮鹽酸鹽、甲萘丙醇或鐵葡聚糖的治療劑。
6.按照權利要求
1所述的復合物，在其中，所說的物質是選自于抗原或半抗原的全部、部份、類似物、同系物、衍生物或其組合物。
7.按照權利要求
6所述的復合物，其中所述抗原或半抗原是過敏原、蛋白質、多糖或分泌物。
8.按照權利要求
6所述的復合物，其中所述抗原或半抗原選自于青草花粉、草花粉、樹木花粉、植物花粉、貓毛、狗毛、豬毛或其他上皮、室內塵螨類、小麥粗糠、木棉;由流感、麻疹、風疹、天花、黃熱病、白喉、破傷風、霍亂、鼠疫、斑疹傷寒、BCG、結核病病原體、流感嗜血桿菌、粘膜炎奈瑟氏菌、肺炎桿菌、肺炎球菌、鏈球菌得到的蛋白質或對抗它們的免疫原;由白喉、破傷風、霍亂、鼠疫、斑疹傷寒、結核病病原菌、流感嗜血桿菌、粘膜炎奈瑟氏菌、肺炎桿菌、肺炎球菌、鏈球菌、鏈球菌變種得到的分泌產物或由瘧原蟲或小雞球蟲病的病原體得到。
9.按照權利要求
1所述的復合物，其中載體是氰鈷胺素、水合鈷胺素、腺嘌呤核苷鈷胺素、甲基鈷胺素、羥基鈷胺素、對稱二苯胺氰基鈷胺素和5-0-甲基芐鈷胺素、以上所有的化合物的脫二甲基、乙胺化和甲基胺化類似物，以及鈷啉醇酰胺的類似物和同系物、輔酶B12，5-脫氧腺嘌呤核苷鈷胺素、氯代鈷胺素、亞硫代鈷胺素(Sulfitocobalamin);硝基鈷胺素、氰硫基鈷胺素、苯并咪唑衍生物、腺嘌呤核苷氰基鈷胺素、鈷胺素內酯、鈷胺素內酰胺以及N-酰苯胺、乙胺、丙酰胺、維生素B12的一元羧酸和二元羧酸衍生物或其類似物。
10.按照權利要求
1中所述的復合物，其中載體是用鎳或鋅代替鈷的維生素B12的類似物。
11.按照權利要求
1中所述的復合物，其中載體是用不影響與內因子結合的取代基取代可啉環的維生素B12類似物。
12.按照權利要求
1中所述的生產復合物的方法，該方法包括一種以上的下列步驟a)將活性物質與載體反應形成所述復合物;b)化學改性該活性物質以提供至少一個能形成化學鍵的官能團，然后將該活性物質和載體反應生成所述的復合物;c)化學改性該載體以提供至少一個能形成化學鍵的官能團，並將該活性物質與載體反應生成所述復合物;d)化學改性該活性物質和載體以提供能形成化學鍵的官能團，並將活性物質和載體反應生成所述的復合物;e)將該活性物質與至少一種交聯劑反應，並將該活性物質和載體分子反應生成所述復合物;f)將該載體和至少一種交聯劑反應，並將該活性物質和載體反應生成所述復合物;g)將該活性物質和載體與至少一種交聯劑反應並將該活性物質和載體反應生成所述復合物。
13.按照權利要求
12所述方法，包括(Ⅰ)通過弱酸水解制備維生素B12一元酸的衍生物並且純化所述的衍生物;(Ⅱ)化學改性該活性物質以提供至少一個能形成化學鍵的官能團;以及(Ⅲ)將該改性的活性物質與維生素B12的一元酸衍生物反應生成所述的復合物。
14.按照權利要求
12所述的方法，其中活性物質和載體的化學交聯是通過靠近維生素B12的A、B、C、環的丙酰胺側鏈酰胺基的酸性水解，並且與該活性物質適當的基團偶連實現的。
15.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是含二硫化物鍵的可裂解的交聯劑。
16.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是可以用酸裂解的。
17.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是可以用高碘酸裂解的。
18.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是可以用堿裂解的。
19.按照權利要求
12的方法，其中交聯劑是N-(4-疊氮苯基硫代)苯鄰二甲酰亞胺，4，4′-二硫雙苯基疊氮化物，二硫雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)、二甲基-3，3′二硫雙丙咪酯。2HCl、3-3′-二硫雙(硫代琥珀酰亞胺丙酯)，乙基-4-疊氧苯基-1，4-二硫丁咪酯·HCl。N-琥珀酰亞胺基-(4-疊氮苯基)-1，3-二硫代丙酯、硫代琥珀酰亞胺基-2-(間-疊氮基-0-硝基苯甲酰氨基)-乙基-1，3′-二硫丙酯、N-硫代琥珀酰亞胺基-2-(對-疊氮水楊酰亞胺基)-乙基-1，3′-二硫丙酯、N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酯、硫代琥珀酰亞胺基-(4-疊氮苯基二硫代)-丙酯、或2-亞胺基硫烷。
20.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是酒石酸二琥珀酰亞胺酯。
21.按照權利要求
12所述的方法，其中交聯劑是雙-〔2-(琥珀酰亞胺基氧代羰基氧)-乙基〕-砜。
22.含有如權利要求
1所述的復合物以及藥學上允許的它的載體或稀釋劑的藥物。
23.如權利要求
22所述的藥物，其中所述藥物形式是膠囊、片劑、慢釋放劑、配劑、凝膠或膏或包有腸溶衣的。
24.一種由如權利要求
1所述的、其中的活性物質是抗細菌活性的復合物與它的載體或稀釋劑組成的抗菌成份。
25.一種增強脊椎動物對口服活性物質的應答的方法，該法包括給所述脊椎動物口服有效量的成為權利要求
1的復合物形成的所述活性物質或有效量的按權利要求
22的藥物。
26.一種選擇性調節脊椎動物對抗原或半抗原免疫應答的強度和/或類型的方法，該法包括給所述脊椎動物口服有效量的成為權利要求
1的復合物形式或權利要求
22的藥物形式的所述抗原或半抗原。
27.一種通過需要一種活性物質的脊椎動物血/腦屏障將該活性物質轉運到其腦中的方法，該法包括給所述脊椎動物口服有效量的權利要求
1的復合物形式的所述活性物質或權利要求
22的藥物。
28.一種對需要所述活性物質的胎兒供給一種活性物質的方法，該法包括向妊娠哺乳動物服用有效量的權利要求
1的復合物形式的所述活性物質，或權利要求
22中的藥物。
29.一種對具有需要維生素B12並具有維生素VB12特定吸收機制的單細胞或多細胞生物體供給活性物質的方法，該法包括給所述生物體服用權利要求
1中的復合物或權利要求
22的藥物，或者將權利要求
24中的配方施加到所述生物體出現或似乎出現的部位。
專利摘要
本發明提供具有載體分子維生素B
文檔編號A61K39/00GK86107590SQ86107590
公開日1987年5月20日 申請日期1986年10月10日
發明者格雷戈里·約翰·拉塞爾-瓊斯, 彼得·阿倫·豪, 亨利·詹姆斯·德艾茨珀魯亞 申請人:澳州生物科技公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan