專利名稱：培養天然牛黃的生產工藝的制作方法
本生產工藝屬于一種生物制藥方法，它是以牛膽汁或以一定比例的牛、豬混合膽汁作原料，在特制的培養器里模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養出天然牛黃。
牛黃就是牛的膽囊結石，是一種名貴中藥材，自古就開始入藥，但由于天然牛黃產量極少，所以自古至今從來沒有滿足過醫療的需要，為此，從50年代起，國內一些研究單位和制藥廠通過分析天然牛黃的各種成分及藥理作用，研制成功了人工牛黃，并投入了生產。人工牛黃在鎮靜、抗驚厥、解熱等方面，經藥理和臨床證實與天然牛黃具有相同的作用，但在心、腦血管性疾病、健康長壽以及在治療癌癥的科學研究中天然牛黃已顯示出它的特色。為了獲得更多的天然牛黃，國內從70年代后期又開始了牛體內培植牛黃的研究，一直到今天已有了突破性進展，但從目前搞的較好的一份報告(即山西省農科院畜牧獸醫研究所武駿秀等同志搞的牛體內培植天然牛黃)，最高產量17.6克，最低4克，平均8.6克，時間一年(中藥材科技1983年6月第15頁)一頭牛一年產黃8.6克，價值688元(按每克80元計算)，而一頭牛一年的草料費就價值600-800元，所以經濟效益不顯著。在這種情況下我們發明了體外培養天然牛黃的方法，經中國醫學科學院情報研究所進行國內文獻檢索和專家訪問，截止88年5月29日沒有發現這方面的報道和研究單位，經中國科技情報研究所進行國際聯機檢索，檢索了六個數據庫(九個文檔)未見與本發明有關的國外文獻資料。
生產工藝大腸桿菌的分離、鑒別與誘變→菌種→接種種子培養基→接種膽汁→離心沉降→干燥→成品。
一、菌種的分離、誘變1、大腸桿菌分離來源(1)從牛、豬、雞膽汁中直接分離大腸桿菌。
(2)從牛、豬、雞、人糞便中分離大腸桿菌。
2、誘變鑒別培養基(1)配方a、3DM蛋白胨2克NaCl0.35克瓊脂2克乳糖1克1%中性紅水溶液0.5毫升蒸餾水70毫升膽汁30毫升b、5DMc、6DM在3DM配方基礎上將膽汁含量分別改為50%和60%。
(2)配制方法a、將蛋白胨、NaCl、瓊脂加入70毫升水中加熱溶解。
b、然后加入乳糖、膽汁。
c、紗布過濾。
d、調PH值7.4-7.6。
e、加1%中性紅水溶液0.5毫升。
f、10磅20分鐘高壓滅菌。
g、冷至50℃傾注成平板。
3、菌種保藏培養基即在6DM基礎上除去中性紅。
4、分離誘變方法膽汁(牛、豬、雞) (4000轉/分)/(離心) 沉淀物或糞便(牛、豬、雞、人) (接種)/() 3DM (37℃24小時)/(選紅色菌落) 5DM (37℃24小時)/(同時作細菌學鑒定) 6DM→菌種斜面保存。
二、接種種子培養基1、配方蛋白胨1.2克NaCl0.35克牛肉膏0.4克乳糖0.3克蒸餾水70毫升膽汁30毫升2、配制方法(1)將蛋白胨、NaCl、牛肉膏加入70ml水中加熱溶解(2)加乳糖、膽汁
(3)紗布過濾(4)調PH值7.4-7.6(5)10磅20分鐘高壓滅菌3、接種方法從菌種斜面或6DM構取大腸桿菌菌落，接種種子培養基，37℃24小時即可作種子使用。
三、接種膽汁1、膽汁來源(1)活體牛引流膽汁(2)屠宰后的新鮮牛膽汁(3)60%以上牛膽汁與豬膽汁混合(4)羊膽汁亦可2、膽汁質量要求(1)取膽汁要無菌操作(2)新鮮無變質3、牛黃培養罐的材料要求培養罐內壁可用玻璃、陶瓷、乳膠等材料構成。在實驗室里可用500或1000毫升的三角瓶代替。
4、添加成份為乳糖、蔗糖、麥芽糖、牛肉膏、CaCl2、MgSO4，其比例隨膽汁質量而變，以下為常用比例。
乳糖0.1%牛肉膏0.05%蔗糖 0.05% CaCl20.005%麥芽糖 0.05% MgSO40.003%5、培養溫度在15-42℃均能長出牛黃，以34-39℃為最佳。
6、在一個大氣壓下培養。
7、培養時間接種24小時至26天內均有牛黃產生，以4-13天為佳。
8、PH值控制在6.3-8.0之間。
四、離心沉降一般培養4-16天，當培養罐底牛黃沉淀達一定量后，用離心機離心沉降(4000轉/分)。
五、干燥將離心沉降物置于普通干燥箱60℃以下干烤至干(真空干燥更好)，然后研磨成粉末，并除去大的雜質顆粒即得牛黃成品。
用本生產工藝生產出來的產品為橙黃色或棕黃色疏松粉末，味先苦后甜，按中藥鑒定學(任仁安主編)1986年版顯微鑒別于天然牛黃組織特征相同，按中國藥典(1985年版)與天然牛黃對照檢驗，掛甲試驗，糠醛-硫酸反應;氯仿-硫酸-過氧化氫反應均與天然牛黃一致。薄層層析，與膽酸、去氧膽酸、膽紅素對照品的相應位置上顯相同顏色的斑點，與天然牛黃一致。
本發明的目的就是為了生產更多的天然牛黃，以滿足醫療和科研的需要，同時也是脫貧致富的一條門路，用一頭牛通過膽囊或總膽管與十二指腸體外接橋手術取膽汁，平均每頭每天可取膽汁700毫升，可連續取100天(3個月以上)，每1000毫升膽汁可產牛黃1克(平均值)，目前我們的最高產量已達到1000毫升膽汁產3.85克牛黃(質量合格)，這樣一頭牛一次手術應用3個月可產牛黃70克，3個月后將此牛賣掉再換新牛，一年可輪換三頭牛，即同樣消耗一頭牛一年的草料，用體外培養可得到210克牛黃，而牛體內培植一年僅得8.6克，其年經濟效益是牛體內培植牛黃的24.4倍。活體引流膽汁連續使用3個月，對牛健康沒有明顯的影響，吃喝正常，體重有增有減，與飼養管理相關，膽汁的質量與飼養管理也相關，使用后的牛賣價與買價基本相同。
實施例菌種 (接種)/() 100毫升種子培基(三角瓶) (37℃)/(24小時) 接種1000毫升牛膽汁(乳糖1克;蔗糖0.5克;麥芽糖0.5克;牛肉膏0.5克;CaCl20.05克;MgSO40.03克) (37℃)/(6天) 離心沉降并放于白的確良布上，放在普通干燥箱里55℃干燥至干，研磨成粉末即可。
權利要求
1.一種培養天然牛黃的生產工藝，其特征是在牛體外用牛、豬、羊膽汁模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養生產出天然牛黃。
2.根據權利要求1所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于用大腸桿菌接種于膽汁進行培養而生產天然牛黃。
3.根據權利要求2所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于所用的膽汁中添加了乳糖、蔗糖、麥芽糖、牛肉膏、CaCl2、MgSO4。
4.根據權利要求3所述的培養的生產工藝，其特征在于膽汁中添加的物質重量比分別是乳糖0.1%、蔗糖0.05%、麥芽糖0.05%、牛肉膏0.05%、CaCl20.005%、MgSO40.003%。
5.根據權利要求1、2、3、4所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于完成牛黃培養后采取離心沉降，提取天然牛黃。
6.根據權利要求1、2、3、4所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于培養溫度在15-42℃。
7.根據權利要求1、2、3、4所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征是培養時氣壓為一個大氣壓。
8.根據權利要求1、2、3、4所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于膽汁的PH值為6.3-8.0。
9.根據權利要求1、2、3、4所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于大腸桿菌菌種的培養基中含有乳糖和膽汁。
10.根據權利要求9所述的培養天然牛黃的生產工藝，其特征在于大腸桿菌的菌種培養基配方為蛋白胨 1.2克 NaCl 0.35克牛肉膏 0.4克 乳糖 0.3克蒸餾水 70毫升 膽汁 30毫升
全文摘要
本發明是在體外培養天然牛黃，它是以牛膽汁或一定比例的牛、豬混合膽汁為原料，在一個特制的培養器里模擬牛膽囊結石形成的病理條件而培養出天然牛黃，其產品符合中國藥典(85年版)的規定，其性狀、成分和藥理作用等均與天然牛黃類同。用牛活體取膽汁來體外培養天然牛黃，其年經濟效益是牛體內培植天然牛黃的24.4倍。
文檔編號A61K35/413GK1041105SQ88106429
公開日1990年4月11日 申請日期1988年9月12日 優先權日1988年9月12日
發明者郝滿良, 王志君, 周世貞, 陳富海, 李鐵栓 申請人:河北農業大學