專利名稱:白細胞介素－2的生產方法
本發明有關一種生產白細胞介素-2的方法。
白細胞介素-2(以下簡稱為IL-2，也稱為T細胞生長因子(TCGF)]是由凝集素、同種異型抗原等刺激T細胞而產生的一種淋巴因子。(《科學”雜志，193卷，1007頁，1976年)利用IL-2可獲得許多克隆，諸如T殺傷細胞克隆、T輔助細胞克隆和天然殺傷細胞的克隆等等。(《自然》雜志，268卷，154頁，1977年)。除了將其直接用于T細胞或天然殺傷細胞克隆化之外，IL-2也可用于特異抗原T殺傷細胞的體外增殖。這種特異抗原的T殺傷細胞能夠識別并摧毀諸如腫瘤抗原等特異抗原。還可以通過把這樣增殖的腫瘤特異性T殺傷細胞轉移至動物，來抑制腫瘤的生長(見《免疫學雜志》，125卷，1904頁，1980年)。
這些試驗結果意味著應用IL-2作為一種抗腫瘤制劑具有很大的潛力。人們已知，IL-2具有促進缺乏胸腺裸鼠，T輔助細胞恢復的功能(見《歐洲免疫學雜志》，10卷，719頁，1980年);也有促進T殺傷細胞誘導生成T輔助細胞的功能(見《自然》雜志，284卷，278頁，1980年)。因此，IL-2可望被用于治療免疫缺陷性疾病。
從人的T細胞可得到人的IL-2，但其數量極為微小。然而，由于近年來基因重組技術的發展，可以通過培養含有IL-2基因重組載體的大腸桿菌，得到作為生物活性蛋白的人IL-2。(見《自然》雜志，302卷，305頁，1983年和《核酸研究》，11卷，4307頁，1983年)通常生產人IL-2的方法，由于其產率低，不適合工業應用。在這種情況下，本發明者大量研究了培養能夠生產IL-2的大腸桿菌的方法。發現將大腸桿菌培養在PH4.8-6.0的酸性條件下，但必須在大約PH6.5-7.5中性或弱堿性條件下發酵，就能可觀地改善IL-2的產率(見《生化工程》，東京大學出版，25-26頁，1965年)。
基于上述發現，發明者進一步研究得到了本發明的成果。
本發明提供了一種生產白細胞介素-2的方法。就是在培養基中培養能生產白細胞介素-2的大腸桿菌轉化體，將其接種到PH4.8-6.0的培養基中，使其在該PH范圍內生長。
上面所說能生產IL-2的大腸桿菌具有用基因重組技術得到的IL-2基因，或是具有一個與IL-2生理活性相似的肽編碼的DNA。
本發明推薦使用哺乳動物的IL-2基因，可優選人們的IL-2基因編碼，其氨基酸順序如圖1所示(含1-133個氨基酸)。其中該基因的堿基順序(密碼1-133)示在圖2。
還包括下述一些肽編碼的DNA，其生理活性與IL-2相似。一個DNA，其氨基酸順序如圖1所示，其中半胱氨酸密碼(如125位半胱氨酸)被絲氨酸或蘇氨酸密碼所替換;另一個DNA，具有與IL-2相同的氨基酸順序，但其N端的四個氨基酸編碼的片段被除去。(見日本專利公告126088/1985)。
上述基因(DNA)必須有一個啟動子或上游啟動子。可用的啟動子包括色氨酸(trp)啟動子，乳糖(Lac)啟動子，蛋白鏈加長因子Tu(tuf B)啟動子和rec A啟動子等等。本發明優選使用的是色氨酸啟動子。
上面提及的基因和啟動子一般轉化到一個質粒中作為轉化載體，最常用的是PBR 322。它是質粒Col El的衍生體(見《基因》，2卷，95頁，1977年)。但也可用其它質粒，只要它們在大腸桿菌細胞中能被復制、保存便可。例如PBR 313(見《基因》，2卷，75頁，1977年);PBR 324和PBR 325(見《基因》，4卷，121頁，1978年);PBR327和PBR328(見《基因》，9卷，287頁，1980年);PKY 2289(見《基因》，3卷，1頁，1978年);PKY 2700(見《生物化學》，52卷，770頁，1980年);PACYC 177和PACYC 184(見《細菌學雜志》，134卷，1141頁，1978年);以及PRK 248 PRK 646和PDF 41(見《酶學方法》，68卷，268頁，1979年)。
作為表達載體的有屬于λgt系統的λgt·λc噬菌體、(《美國科學院學報》，71卷，4579頁，1974年)λgt·λB噬菌體、(見《ibid》，72卷，3416頁，1975年)λDam噬菌體(見《基因》，第1卷，255頁，1977年);卡龍載體(《科學》，196卷，161頁，1977年和《病毒學雜志》，29卷，555頁，1979年)和絲狀噬菌體。
上述的表達載體可用常規的方法組建(見《自然》，302卷，305頁，1983年和《核酸研究》，11卷，4307頁，1983年)。
大腸桿菌被用為宿主細菌，用連接有人的IL-2基因的表達載體去轉化它。大腸桿菌K-12菌株的衍生體，從操作和安全角度看，是特別好的。例如大腸桿菌菌株PR13，C-4，294，DH1，W 3110和C600使用結果都很好。
大腸桿菌C-4是一個從PR13分離出的菌株(見《細菌學雜志》，97卷，1522頁，1969年)，它是K-12(母本菌株)的衍生體。它具有下列細菌學特征a)顯微特征1)形狀和大小像正常大腸桿菌K-12菌株一樣，是單桿菌或雙桿菌，0.5-1.0×2-5μm，不顯示多態性。
2)運動性可運動。
3)鞭毛具周生鞭毛。
4)革蘭氏染色陰性。
5)孢子形成無。
6)耐酸性不耐酸b)在不同培養基中的生長狀態1)肉湯瓊脂平皿培養菌落小，扁平，環狀，半透明并有光澤。
2)肉湯瓊脂斜面培養菌落中等大小，扁平，半透明并稍有光澤。
3)肉湯液體培養生長中等，生成均一懸液。
4)肉湯明膠穿刺培養生長成均一的彌散狀態，沒有導致明膠液化。
5)石蕊乳不被凝結或胨化，PH值也未改變。
c)生理學特性1)硝酸鹽還原陽性2)反硝化作用陰性3)MR試驗陽性4)VP試驗陰性5)吲哚產生陽性6)硫化氫產生陰性7)淀粉水解陰性8)檸檬酸利用陰性9)無機氮源利用ⅰ)硝酸鈉陽性ⅱ)硫酸胺陽性10)生色性沒發現有水溶性色素產生11)尿素酶陰性12)氧化酶陰性13)過氧化氫酶陰性14)生長條件ⅰ)PH4.5-10.0ⅱ)溫度18-47℃
15)在氧中的行為選擇地厭氧16)O-F試驗陽性17)利用不同糖類產酸及產氧能力見表1表1糖 產酸能力 產氧能力L-阿拉伯糖 + +D-木糖 - -D-葡萄糖 + +D-甘露糖 + +D-果糖 + +D-半乳糖 - -麥芽糖 - -蔗糖 - -乳糖 + +海藻糖 + +D-山梨醇 + +D-甘露醇 - -肌醇 - -甘油 + +淀粉 - -這個菌株(大腸桿菌C-4)于1985年2月16日被貯存在國際貿易和工業部(FRI)的代理部門-發酵研究所，貯存號為FERM P-8101;貯存在FRI的菌株轉給布達佩斯條約貯存中心之一作為條件貯存樣品，貯存號為FERMBP-966;貯存在大阪發酵研究所(IFO)，貯存號為IFO-14421;貯存在中國CGMCC，貯存號為CGMCC0085。
大腸桿菌294是已知菌株(《美國科學院學報》，73卷，4474頁，1976年)，已貯存在IFO，貯存號為IFO-14171。
W3110和C600也是已知菌株;它們在1982年第15版的美國ATCC菌株目錄第一卷，貯存號分別為ATCC27325和ATCC27324。
1968年《自然》雜志，217卷，1110頁，敘述了DH1菌株。
用表達質粒轉化宿主大腸桿菌細胞，生產能夠制造IL-2的大腸桿菌細胞時，可用《分子生物學雜志》，53卷，159頁，1970年;《酶學方法》，68卷，253頁，1979年;及《基因》，3卷，279頁，1978年所敘述的方法進行轉化。
將能夠制造出IL-2的大腸桿菌接種到PH4.8-6.0的培養基上，再在該PH范圍內培養細菌。較好的PH范圍為5.0到5.8，PH5.5時生長最好。
然而，當細菌充分生長后，培養基中的PH會偏移出上述范圍而成為更酸的情況。
在培養基制備和滅菌的前、后，可用無機酸或堿來調節PH值。在大腸桿菌培養生長期間，要始終調節PH使其保持在一個特定的范圍。由于細菌培養過程PH經常要降低，因此，必須加入諸如氨水、氫氧化鈉和碳酸鈉等無機堿來調節PH，如果需要也可加入硫酸等無機酸，這些物質中，氨水是優先選用的，因為它也是培養基中氮的來源。
經常用的培養基是補充了葡萄糖和酪蛋白氨基酸的M-9培養基和M-03培養基。(培養基組分見表2)。然而，不光這兩種是可用的培養基，任何培養基，只要細菌可在其上制造IL-2，均可應用。對連接有諸如色氨酸啟動子等啟動子的重組體，可加入諸如3-μ-吲哚滿基丙烯酸等試劑來增加啟動子的效率。細菌培養期間，如果需要，也可加入葡萄糖和酪蛋白氨基酸等物質。為繁殖重組大腸桿菌細胞，可根據它們質粒中所含基因的類型，選用細菌對其顯示抗性的藥劑(如四環素等)。
表2 可用培養基的例子成分 改良M-9培養基 M-03培養基葡萄糖 10克/升 10克/升Na2HPO46克/升 -KH2PO43克/升 3克/升NaCl 0.5克/升 0.5克/升NHCl 1克/升 1克/升MgSO4·7H2O 0.34克/升 0.34克/升酪蛋白氨基酸 10克/升 10克/升培養溫度通常為15到45℃。按下列方式變溫可得到較高的產率保持大約37℃直到生長中期，再與細菌增殖成比例地降低溫度至20～30℃。
通常用攪動來使培養物通氣。培養基中以保持氧氣約含5%(v/v)，或更高的飽和氧濃度為宜，因為這將增加IL-2的產量。若在細菌培養期間，用純氧結合通氣，可能更為有效。
上述方法生產IL-2的量，可用依賴IL-2的細胞系來測定。人所共知，人IL-2促進大鼠和小鼠依賴IL-2細胞的增殖，也促進人依賴IL-2細胞的增殖(見《Immunological Review》，51卷，257頁，1980年)。因此，可用人、大鼠、或小鼠的依賴IL-2的細胞系(《免疫學雜志》，130卷，981-988頁，1983年)。
經過相當長的時期，可將小鼠依賴IL-2的細胞系制成特別穩定的亞培養物，從它們可得到具有高度重復性的資料。
在本說明書中，用依賴IL-2的小鼠細胞測定產生IL-2的量。根據該方法，依賴IL-2的小鼠細胞攝取放射性同位素胸腺嘧啶核苷的多少，作為一種數量的指示(《生化生物物理研究通訊》，109卷，363頁，1982年)。
根據不同條件，本發明可用不同方法萃取培養細胞產生的IL-2。例如1)通過常規方法收集培養的細菌細胞，將其懸在含有鹽酸胍的一種蛋白變性劑的緩沖液中，冰冷條件下，攪動懸液，將其離心，得到含IL-2的上清液。2)將收集的培養細胞懸在緩沖液中，用超聲波使細胞破裂，用溶菌酶和/或凍-熱交替處理后，將所得懸液離心，得到含IL-2的上清液。
常規的分離和純化方法可結合從上述上清液分離IL-2和純化它來使用，所用的各種方法如下基于溶解性的方法，如鹽析和有機溶劑沉淀;主要基于分子量不同的方法，如;透析、超濾、凝膠過濾和SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳;基于所帶電荷不同的方法，如離子交換層析;基于特異親合性，例如親合層析;基于疏水性的不同，如逆相高壓液相色譜;基于等電點不同的方法，如等電點電泳。由于人IL-2蛋白是高度疏水的，疏水性色譜，特別是用逆向型柱，在純化該蛋白時是明顯有效的。
上述純化的IL-2蛋白可使能夠識別并摧毀腫瘤抗原的特異性抗原T殺傷細胞在體外優先增殖;上述純化的IL-2蛋白也可使那些能摧毀無抗原敏感性腫瘤的天然殺傷細胞在體外增殖。此外，當這些T殺傷細胞被轉移到活體內時，本發明生產的人IL-2就不可避免同時被接種到體內，從而改善了這些細胞的抗腫瘤能力。基于這種原因，上述的IL-2蛋白可用于防止癌變，治療腫瘤和免疫缺陷性疾病。它可用于諸如小鼠、大鼠、家兔、狗、貓、豬、馬、羊、牛和人等溫血動物。
當上述IL-2蛋白作防治腫瘤藥物時，可以用已知藥物載體稀釋后口服或以針劑形式腸道外注射，或制成膠囊。此外，它可單獨使用或與如前所述增殖的T殺傷細胞或天然殺傷細胞結合使用。
此外，當以上述方式應用時，上述IL-2蛋白與已知天然人IL-2生物活性特別相似;由于它從IL-2受體上解離常數非常小，因此，既使很低的用量，效果也是令人滿意的。
圖1表示人IL-2的氨基酸順序(X表示蛋氨酸或氫)。
圖2表示人IL-2基因DNA順序的一個例子。
下面將用優選的實施例和參考例詳述本發明。
下面例子中所述的代表性轉化體已登記在國際貿易和工業部的工業科技代理部門-發酵研究所(FRI)和大阪發酵研究所(IFO)，貯存號示于下表。
貯存機構 FRI IFO CGMCC轉化體 (貯存日期)大腸桿菌 FERM IFO-14422 CGMCC0086C-4/PTF4 BP-967(1958年2月16日)大腸桿菌 FERM IFO-14299DH1/PTF4 BP-628(1984年4月6日)例1含人IL-2結構基因的表達質粒PTF4是從大腸桿菌DH1/PTF4(FERM BP-628)分離出來的(見公開的歐洲專利No.145390)，是用Birnboim，H.C.等人的方法(見《核酸研究》，7卷，1513頁，1979年)。根據Cohen，S.N.等人的方法將大腸桿菌PR13質粒轉化(見《美國科學院學報》，69卷，2110頁，1972年)。在一個200毫升的錐形瓶中加入50毫升(PH7.0)含1%細菌用胰化胨(美國Difco試驗室)，0.5%細菌-酵母萃取物(來自Difco)，0.5%氯化鈉和5毫克/升鹽酸四環素的培養基，將所得的轉化細胞接種到培養基上，然后將其在37℃下培養一夜。再將每個培養液分別接種到內裝30毫升培養基的200毫升錐形瓶中，培養基為含1毫克/升鹽酸維生素B的改良M-9培養基，將其在37℃培養4小時，再在30℃培養4小時，最后在25℃培養10小時，選擇IL-2產率明顯高的菌株，即是大腸桿菌C-4/PTF4。
再將所得的大腸桿菌C-4/PTF4細胞接種到一個裝有50毫升(PH7.0)培養基的250毫升錐形瓶中，內含1%細菌用胰化胨(Difco產品)，0.5%細菌-酵母萃取液(Difco產品)，0.5%氯化鈉，5毫克/升鹽酸四環素，在37℃培養過夜，得到初始培養液。在8個5升容積的發酵罐中分別注入2.5升含1毫克/升維生素B的M-03的培養基;滅菌后，用氨水或5N硫酸將8個罐的培養基的PH分別調至7.5，7.0，6.5，6.0，5.5，5.0，4.8和4.5。用125毫升初始培養液接種到每個發酵罐中，在370中培養，以2.5升/分通氣和每分鐘1300的轉速攪動，用氨水或5N硫酸不斷調整使各發酵罐保持特定PH值。培養期間當葡萄糖含量降至0.5%時，加入1%葡萄糖和1%酪蛋白氨基酸，繼續培養;結果示在表3。PH在4.6-6.0之間IL-2產率在PH7.0(通常采用的PH值)時增加2-5倍。
表3培養時PH對IL-2產率的影響(在37℃培養)PH IL-2產率＊4.5 15
4.8 2405.0 4005.5 5206.0 3306.5 1507.0 1007.5 50＊產率表示的是以PH7.0產率為100時的比率。
例2用與例1相同的方式制備8個不同PH的培養基，將例1得到的初始培養液接種到該培養基上，然后在通氣和搖動條件下，以變溫培養24小時。即先在37℃下培養;當培養物達到500Klett單位時，降溫至30℃;當達到1000Klett單位時降低溫度至25℃，連續培養到24小時為止。所得結果示在表4。PH在4.8-6.0之間IL-2產率比PH7.0，37℃下恒溫培養時的IL-2產率增加3-7.5倍。
表4 培養時PH對IL-2產率的影響(變溫培養)PH IL-2產率＊4.5 104.8 3005.0 5305.5 7506.0 510
6.5 1807.0 1307.5 60＊產率表示的是PH7.0，37℃下產率為100時的比率。
例3用含有人IL-2結構基因的表達質粒PTF4作為一個整體因子，按照例1的方法，轉化大腸桿菌菌株294，DH1，W3110和C600。將得到的轉化體接種到與例1相同的初始培養基中，在37℃培養一夜。分別將2.5升含1毫克/升鹽酸維生素B1的M-9培養基注入8個容積為5升的發酵罐，將4個發酵罐中培養基的PH調至5.5，剩余4個調至6.5。每罐均用125毫升的初始轉化體培養液接種，在例2的同樣條件下培養，結果示在表5。
表5 PH對不同轉化體中IL-2產率的影響。
轉化體(大腸桿菌) PH6.5 PH5.5294/PTF4 100 200DH1/PTF4 100 260W3110/PTF4 100 310C600/PTF4 100 280在所有轉化體中，PH5.5時的IL-2產率均比PH6.5時增加2倍以上。
例4如例1制備8個不同PH的培養基，在與例2相同的溫度條件下，用每種培養基連續培養24小時，培養期間用5N NaOH水溶液或5N硫酸保持特定PH值恒定不變。結果示在表6。PH4.8-6.0時IL-2的產率比PH7.0時增加5-7倍。
表6 PH對IL-2產率的影響(PH用NaOH調節，保持恒定)PH IL-2產率＊4.5 204.8 2755.0 5605.5 7256.0 5306.5 2107.0 1007.5 35＊產率是以PH7.0為100時的比率。
例5將例2中得到的每個培養液(PH5.5或7.0)離心，收集細菌細胞，然后在-80℃冷凍。取每種冷凍細胞12克，將其均勻地懸浮在100毫升內含7M鹽酸胍和0.1M Tris-HCl(PH7.0)的萃取液中，在4℃搖動1小時。然后將得到的每個溶胞液以28000xg離心20分鐘，得到上清液。將每個上清液用0.01M Tris-HCl緩沖液(PH8.5)透析，然后以19000xg離心10分鐘，得到透析上清液。再將其過一個用0.01M Tris-HCl緩沖液(PH8.5)平衡的DE52柱(DEAE纖維素為英國Whatman公司產品)，柱料將蛋白吸附;然后用一個線性NaCl濃度梯度(0-0.15M NaCl，1升)洗脫IL-2。用一個YM-5膜(來自Amicon Co.，USA)將每個活性部分濃縮到大約5毫升，然后在一個用0.1M Tris-HCl(PH8.0)-1M NaCl緩沖液平衡的Sephacryl S-200(瑞典，Pharmacia公司產品)柱(500毫升容積)上，凝膠過濾。用一個超微孔RPSC柱(Altex Co.，USA產品)吸附上述濃縮液，再將其進高壓液相色譜柱，用三氟乙酸-乙腈系統洗脫。
要維持下列條件柱超微孔RPSC(4.6×75mm)柱溫30℃洗脫液A0.1%三氟乙酸-99.9%水洗脫液B0.1%三氟乙酸-99.9%乙腈洗脫程序0-25分鐘用68%A+32%B25-35分鐘用55%A+45%B35-45分鐘用45%A+55%B45-48分鐘用30%A+70%B48分鐘后用100%B洗脫速率0.8毫升/分觀測波長230納米將洗脫大約39分鐘得到的一個活性部分收集，冷凍干燥，得到白色粉末狀的人IL-2蛋白。
從在PH7.0培養的細菌得到IL-2蛋白5.2毫克，而在PH5.5培養時，得到12.7毫克。兩種情況蛋白純度均為99%(用密度計測定)。兩種情況下得到的蛋白，化學性質沒有差別。
參考例用例1得到的大腸桿菌C-4/PTF4，根據Bouanchaud等人的方法用溴化乙錠固定其質粒，得到大腸桿菌C-4菌株(《普通微生物學雜志》，54卷，417頁，1968年)。
權利要求
1.在培養基中培養能制造白細胞介素-2的大腸桿菌轉化體生產白細胞介素-2的方法。其特征在于將該大腸桿菌接種到PH4.8-6.0的培養基中，并保持在此PH范圍內使細菌生長。
2.根據權利要求
1所述的方法，其中的大腸桿菌轉化體含有為下面氨基酸順序的白細胞介素-2或一個生理活性與白細胞介素-2相似的肽編碼的DNAX-丙氨酸-脯氨酸-蘇氨酸-絲氨酸-絲氨酸-絲氨酸-蘇氨酸-賴氨酸-賴氨酸-蘇氨酸-谷氨酰胺-亮氨酸-谷氨酰胺-亮氨酸-谷氨20酸-組氨酸-亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸-天冬氨酸-亮氨酸-谷氨酰胺-蛋氨酸-異亮氨酸-亮氨酸-天冬酰胺-甘氨酸-異亮氨酸-天冬酰胺-天冬酰胺-酪氨酸-賴氨酸-天冬酰胺-脯氨酸-賴氨酸-亮氨酸-蘇氨40酸-精氨酸-蛋氨酸-亮氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-賴氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-蛋氨酸-脯氨酸-賴氨酸-賴氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-谷氨酸-60亮氨酸-賴氨酸-組氨酸-亮氨酸-谷氨酰胺-半胱氨酸-亮氨酸-谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-亮氨酸-賴氨酸-脯氨酸-亮氨酸-谷氨酸-谷氨酸-纈氨酸-亮氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-丙氨酸-谷氨酰胺-絲氨酸-80賴氨酸-天冬酰胺-苯丙氨酸-組氨酸-亮氨酸-精氨酸-脯氨酸-精氨酸-天冬氨酸-亮氨酸-異亮氨酸-絲氨酸-天冬酰胺-異亮氨酸-天冬酰胺-纈氨酸-異亮氨酸-纈氨酸-亮氨酸-谷氨酸-亮氨酸-賴氨酸-100甘氨酸-絲氨酸-谷氨酸-蘇氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-蛋氨酸-半胱氨酸-谷氨酸-蘇氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-谷氨酸-蘇氨酸-丙氨酸-蘇氨酸-異120亮氨酸-纈氨酸-谷氨酸-苯丙氨酸-亮氨酸-天冬酰胺-精氨酸-色氨酸-異亮氨酸-蘇氨酸-苯丙氨酸-半胱氨酸-谷氨酰胺-絲氨酸-異亮133氨酸-異亮氨酸-絲氨酸-蘇氨酸-亮氨酸-蘇氨酸
3.根據權利要求
2所述方法，其中的DNA是為白細胞介素-2編碼。
4.根據權利要求
2所述方法，其中的轉化體含有DNA上游的啟動子。
5.根據權利要求
4所述方法，其中的啟動子是一個色氨酸啟動子或多個色氨酸啟動子。
6.根據權利要求
1所述方法，其中的大腸桿菌來源于大腸桿菌K-12菌株。
7.根據權利要求
1所述方法，其中PH值為5.0到5.8。
8.根據權利要求
1所述方法，其中培養基的PH值是用無機堿作為堿性物質調節的。
9.根據權利要求
8所述方法，其中的無機堿是氨水。
10.根據權利要求
1所述方法，其中的培養基為加葡萄糖和酪蛋白氨基酸的M-9培養基。(即改良的M-9培養基)
11.根據權利要求
1所述方法，其中細菌是在用搖動培養瓶并通氣條件下培養。
12.根據權利要求
1所述方法，其中培養開始是在大約37℃下進行的，到生長中期將溫度與增殖成比例地降至20到30℃。
專利摘要
本發明提供一種生產白細胞介素－2改進的方法。該方法通過在培養基上培養能生產白細胞介素－2的大腸桿菌轉化體，然后將其接種到pH4.8到6.0的培養基中，并在此pH范圍內使細菌生長。通過本發明的方法，白細胞介素－2的產率得到可觀的改善。
文檔編號C12R1/19GK86101353SQ86101353
公開日1986年9月10日 申請日期1986年3月10日
發明者北野一昭, 藤本茂 申請人:武田藥品工業株式會社導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan