專利名稱:注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種脂質體的制備方法，具體涉及一種注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法。
背景技術：
鹽酸伊立替康是喜樹堿的半合成衍生物。喜樹堿可特異性地與拓撲異構酶I結合，后者誘導可逆性單鏈斷裂，從而使DNA雙鏈結構解旋；伊立替康代謝物SN-38可與拓撲異構酶I-DNA復合物結合，從而阻止斷裂單鏈的再連接。現有研究提示，伊立替康的細胞毒作用歸因于DNA合成過程中，復制酶與拓撲異構酶I-DNA一SN-38三聯復合物相互作用，從而引起DNA雙鏈斷裂。哺乳動物細胞不能有效地修復這種DNA雙鏈斷裂。由此達到殺滅腫瘤細胞的目的。
伊立替康可以溶于水，但是其代謝物鹽酸伊立替康才為其活性成分，而在代謝過程中可以產生嚴重的不良反應，比如遲發性腹瀉，惡心，嘔吐，并且可以導致中性粒細胞減少，呼吸困難、肌肉收縮、痙攣及感覺異常等，這些不良反應嚴重的影響了臨床使用。
發明內容本發明的目的是為克服背景技術的不足，而提供一種提高鹽酸伊立替康療效并降低其毒副作用的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法。
為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是一種注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于該方法通過將脂質混合物溶解于有機溶劑中，至溶液澄清透明，得脂質溶液，脂質溶液與緩沖液按照1∶1～8體積比在梯度泵中混合，混合后的空白脂質體通過均質機均質或鋪有聚碳酸脂膜的擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，除去有機溶劑，中間不斷補充緩沖液，得到空白脂質體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用脂質體pH調節劑調節pH值至堿性，制成載藥脂質體；或者將脂質混合物及鹽酸伊立替康溶解于有機溶劑中，通過噴霧干燥或真空干燥除去有機溶劑，使脂質成膜，通過加入含鹽酸伊立替康的水合溶液水合形成載藥脂質體。
所述鹽酸伊立替康用量與空白脂質體摩爾數比為0.001～1∶1；所述有機溶劑為氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、異丙醇和正丁醇中的單一溶劑，或其中的兩種或兩種以上溶劑制成的混合溶劑；所述緩沖液為pH值在3.3～8之間的檸檬酸緩沖液，或pH值在3.3～13之間的酒石酸緩沖液，或其它pH值在2.5～10之間的有機酸緩沖液；所述聚碳酸脂膜的孔徑為20～400nm，層數1～10層；所述脂質混合物中含有以下摩爾百分比的原料磷脂酰膽堿20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～30％；膽固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％；所述磷脂酰膽堿是蛋黃磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿或氫化大豆磷脂酰膽堿；聚乙二醇衍生物為HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000；所述脂質體pH調節劑是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液；所述調節pH值至堿性指的pH范圍為7.5～3.5。
梯度泵用于按比例混合脂質溶液與緩沖液制備空白脂質體，擠壓器用于控制空白脂質體的粒徑，超濾器用于除去空白脂質體中的有機溶劑并將脂質體濃縮到合適的濃度。
本發明通過現代脂質體技術制備的注射用鹽酸伊立替康脂質體，該脂質體是由磷脂酰膽堿、鞘磷脂、膽固醇和聚乙二醇衍生物等脂質與鹽酸伊立替康形成的脂質復合物，該復合物可以改變伊立替康在活體內的藥代動力學，從而改變其作用效果及毒性特征。
本發明與現有技術相比具有以下優點本發明所采用的方法將鹽酸伊立替康包封在脂質體小囊內，避免了鹽酸伊立替康在代謝過程中產生嚴重的不良反應，提高了鹽酸伊立替康的療效并降低了其毒副作用；根據本工藝生產的注射用鹽酸伊立替康脂質體，粒徑在50～200nm之間，包封率達95％以上，性質穩定，療效確切，使用安全可靠，適于工業化生產。
具體實施方式以下結合實施例對本發明作進一步的詳細描述。
實施例1實驗室小試(1)薄膜法制備鹽酸伊立替康脂質體處方蛋黃磷脂酰膽堿 2.12g(2.789473684mmol)心肌磷脂 12.00g(15mmol)膽固醇 5.88g(15.23316062mmol)氯仿 13.00mL200mL制備方法將蛋黃磷脂酰膽堿、心肌磷脂、膽固醇和鹽酸伊立替康溶于有機溶劑氯仿中至溶液澄清透明，旋轉蒸發儀抽真空除去有機溶劑氯仿并使脂質成膜，鹽酸伊立替康1.5g的蔗糖溶液200mL水合，分別過400nm、200nm、100nm膜統一粒徑，制得載藥脂質體，凍干貯存于2～4℃。
實施例2pH梯度法制備(1)空白脂質體的制備處方磷脂酰膽堿 10.605g(13.95394737mmol)膽固醇 4.395g(11.38601036mmol)乙醇 24.75mL叔丁醇 24.75mL檸檬酸緩沖液 適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿和膽固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質體通過擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，中間不斷補充檸檬酸緩沖液(pH＝4.0)750mL，然后濃縮脂質體至目標濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于300mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質體中，加入(2)步制備的堿溶液并將pH值調至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
實施例3放大生產工藝(1)空白脂質體的制備處方心肌磷脂 211.8g(278.6842105mmol)膽固醇 88.2g(228.4974093mmol)乙醇 495mL叔丁醇 495mL檸檬酸緩沖液 3000mL3000mL制備方法將心肌磷脂和膽固醇溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質體通過擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，中間不斷補充檸檬酸緩沖液(pH＝4.0)15L，然后濃縮脂質體至目標濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉84g，加注射用水1800mL溶解，過濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將24g鹽酸伊立替康溶于1200mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，加支撐劑蔗糖，分裝，凍干，即得。
實施例4pH梯度法制備長循環脂質體
(1)空白脂質體的制備處方磷脂酰膽堿 8.773g(11.543421.5mmol)膽固醇 3.232g(8.373056995mmol)HSPE-S-mPEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL叔丁醇 24.75mL0.1mol/L的NaOH溶液 適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿、膽固醇和HSPE-S-mPEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質體通過擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，中間不斷補充檸檬酸緩沖液750mL，然后濃縮脂質體至目標濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
實施例5pH梯度法制備長循環脂質體(1)空白脂質體的制備處方磷脂酰膽堿 10.605g(13.95394737mmol)膽固醇 3.232g(8.373056995mmol)DSPE-PEG20002.995g(1.047202797mmol)乙醇 24.75mL
叔丁醇 24.75mL0.1mol/L的MaOH溶液 適量150mL制備方法將磷脂酰膽堿、膽固醇和DSPE-PEG2000溶于乙醇和叔丁醇1∶1(v/v)的混合溶劑中至溶液澄清透明。脂質溶液與檸檬酸緩沖液按照1∶4的體積比在梯度泵中混合制備前體脂質體。梯度泵與擠壓器相連，擠壓器中鋪5張100nm的聚碳酸脂膜。混合后的前體脂質體通過擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，中間不斷補充檸檬酸緩沖液750mL，然后濃縮脂質體至目標濃度(100mg膜材/mL)，即得空白脂質體。
(2)堿注射液的制備稱取碳酸鈉10.5g，加注射用水225mL溶解，過濾除菌即得堿注射液。
(3)載藥將6g鹽酸伊立替康溶于600mL含10％(Wt/Wt)蔗糖的水或0.01mol/L的稀鹽酸中，加入(1)步制備的空白脂質體中，加入(2)步制備的堿溶液將pH值調至7.5，攪拌混勻，靜置20min，除菌，分裝，即得。
上述實施例的原輔料配比、有機溶劑種類及比例、工藝過程等沒有一一列舉，經申請人的實踐證明所提供的制作工藝、原輔料及其配比、有機溶劑選擇及配比、緩沖液選擇及配比等均包含在權利要求
中。
根據本工藝生產的鹽酸伊立替康脂質體，包封率達95％以上，性質穩定，療效確切，使用安全可靠，適于工業化生產。
名詞解釋HSPE-PEG2000表示其平均分子量為2000的聚乙二醇-氫化大豆磷脂酰乙醇胺；DSPE-PEG2000表示其平均分子量為2000的聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺。
權利要求
1.一種注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于該方法通過將脂質混合物溶解于有機溶劑中，至溶液澄清透明，得脂質溶液，脂質溶液與緩沖液按照1∶1～8體積比在梯度泵中混合，混合后的空白脂質體通過均質機均質或鋪有聚碳酸脂膜的擠壓器擠壓統一粒徑，流出的脂質體混合溶液立即通過超濾器超濾，除去有機溶劑，中間不斷補充緩沖液，得到空白脂質體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用脂質體pH調節劑調節pH值至堿性，制成載藥脂質體；或者將脂質混合物及鹽酸伊立替康溶解于有機溶劑中，通過噴霧干燥或真空干燥除去有機溶劑，使脂質成膜，通過加入含鹽酸伊立替康的水合溶液水合形成載藥脂質體。
2.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述鹽酸伊立替康用量與空白脂質體摩爾數比為0.001～1∶1。
3.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述有機溶劑為氯仿、甲醇、乙醇、叔丁醇、異丙醇和正丁醇中的單一溶劑，或其中的兩種或兩種以上溶劑制成的混合溶劑。
4.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述緩沖液為pH值在3.3～8之間的檸檬酸緩沖液，或pH值在3.3～13之間的酒石酸緩沖液，或其它pH值在2.5～10之間的有機酸緩沖液。
5.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述聚碳酸脂膜的孔徑為20～400nm，層數1～10層。
6.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述脂質混合物中含有以下摩爾百分比的原料磷脂酰膽堿20～80％；鞘磷脂0～30％；心肌磷脂0～60％；膽固醇20～80％；聚乙二醇衍生物0～10％。
7.根據權利要求
6所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述聚乙二醇衍生物為HSPE-S-mPEG2000或DSPE-PEG2000。
8.根據權利要求
6所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述磷脂酰膽堿是蛋黃磷脂酰膽堿、大豆磷脂酰膽堿或氫化大豆磷脂酰膽堿。
9.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述脂質體pH調節劑是Na2CO3溶液、NaOH溶液、NH4Cl溶液、NaHCO3溶液或Ca(OH)2溶液。
10.根據權利要求
1所述的注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，其特征在于所述調節pH值至堿性指的pH范圍為7.5～3.5。
專利摘要
本發明公開了一種注射用鹽酸伊立替康脂質體的制備方法，該方法通過將一定摩爾比的脂質混合物溶解于有機溶劑中，脂質溶液與緩沖液按照一定體積比混合，通過聚碳酸脂膜擠壓統一粒徑，并通過超濾除去有機溶劑，得到空白脂質體，加入鹽酸伊立替康溶液，并用pH調節劑調節pH值至堿性，制成載藥脂質體；或者將一定摩爾比的磷脂、膽固醇等脂質及鹽酸伊立替康溶解于有機溶劑中，通過噴霧干燥、真空干燥或其他方法除去有機溶劑，使脂質成膜，通過加入含藥物的水合溶液水合形成載藥脂質體。根據本發明生產的注射用鹽酸伊立替康脂質體，粒徑在50～200nm之間，包封率達95％以上，性質穩定，療效確切，使用安全可靠，適于工業化生產。
文檔編號A61K31/4738GK1994279SQ200610105371
公開日2007年7月11日 申請日期2006年12月31日
發明者佐建鋒, 王九成, 黃馨惠, 傅經國, 魏春龍, 胡忍樂 申請人:西安力邦醫藥科技有限責任公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan