專利名稱:FeLV疫苗的無針施用的制作方法
參考引用本申請要求2004年6月4日提交的美國臨時專利申請系列號60/576,771的權益。
前述的申請和在其中或其審查期間引用的所有文件(“申請引用文件”)及所有在“申請引用文件”中引用或參考的文件和所有在這里引用或參考的文件(“此處引用的文件”)及所有在“此處引用的文件”中引用或參考的文件以及對這里或者在這里引作參考的任何文件所提到的任何產品的任何廠商的用法說明書、描述、產品規格和產品小冊子，均在此引入作為參考，并可能在本發明的實施中使用。
發明領域本發明提供為貓科動物接種疫苗對抗貓白血病的方法。
背景技術：
FeLV是全世界常見的家貓感染，導致顯著的發病率和死亡率。抗原血癥的患病率可從在健康貓中的1-5％到在病貓中的15-30％而變化(Hosie M.J.等人，Veterinary Records，1989，128，293-297；Braley J.，Feline Practice，1994，22，25-29；Malik R.等人，Australian Veterinary Journal，1997，75，323-327；Arjona A.等人，Journal of Clinical Microbiology，2000，38，3448-3449)。這種病毒可建立以持續性病毒血癥和致死性后果為特征的終身感染。大多數FeLV相關的疾病出現在持續感染的動物中，這些疾病通常是嚴重的而且大多數是致命的。最常診斷出的病癥有淋巴瘤、髓細胞性白血病、免疫缺陷以及非再生障礙性貧血。這種感染可通過識別和隔離為感染源的持續病毒血癥的貓來加以控制，疫苗也已幫助阻止病毒的傳播。目前有幾種FeLV疫苗可以用，它們大多含有滅活病毒或重組亞單位。其效用尚存在爭議(Sparkes A.H.，Journal of Small AnimalPractice，1997，38，187-194)。已經觀察到疫苗失效(breakdown)，需要改進功效，特別是需要在現場狀況中更多的保護證據。替代方法是使用重組病毒載體。已測試了金絲雀痘病毒載體，特別是ALVAC載體的FeLV基因表達(Tartaglia J.等人，Journal of Virology，1993，67，2370-2375；Poulet H.等人，Veterinary Record，2003，153，141-145)。商業化的重組FeLV疫苗也可獲得(EURIFELFeLV，Merial)。
因此普遍需要改進FeLV疫苗的功效和安全性。
一般來說，提高疫苗的功效可通過給予較高劑量免疫原，或使用佐劑配制疫苗，或這二者的組合。
給予較高劑量免疫原顯著增加了疫苗的成本，這樣一來，消費者會覺得疫苗太昂貴。
另一方面，使用佐劑配制疫苗使疫苗更有效，有時可以減少免疫原的量。然而，佐劑化疫苗比非佐劑化疫苗誘發較高比率的局部不良反應(Gobar等人，JAVMA，2002，220(10)，1477-1482)，從而增大注射部位疫苗相關的纖維肉瘤的風險(Baker R.J.，Feline Practice，1998，26(5)，18-20)。
還已提議在獸醫領域中使用無針注射器(WO-A-98/03659；WO-A-92/15330；WO-A-98/03658；van Rooij等人，Vet.Immunol.Immunopathol.，1998，66(2)，113-126；US-A-6,451,770；Schrijver等人，Vaccine，1998，16(2-3)，130-134)。但在現有技術中卻有相互矛盾的結果(McKercher P.D.等人，Can.J.Comp.Med.，1976，40，67-74；Epstein，Hum.Gene Ther.，2002，13(13)，275-280；Haensler，Vaccine，1999，17(7-8)，628-638)。
此申請中對任何文件的引用或確認并不承認這些文件可以作為本發明的現有技術獲得。
發明概述本發明的目的在于提供新的接種貓科動物的方法，該方法有效、使用更容易且成本較低，并增加安全性。
此目的通過借助噴液(liquid jet)無針注射器施用基于病毒載體的FeLV重組疫苗來滿足，確保疫苗基本上分布于動物的真皮和皮下。
本發明的第一個目的是針對FeLV的疫苗接種方法，其可包括使用噴液無針注射器將有效量的基于病毒載體的FeLV重組疫苗基本上施用于貓科動物的真皮和皮下的步驟，該施用引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
本發明的另一個目的是疫苗接種試劑盒或套盒，其可包括這種噴液無針注射器和至少一個含有基于病毒載體的FeLV重組疫苗的疫苗小瓶，其有效裝配以實施將疫苗基本上施用于貓科動物的真皮和皮下以引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
本發明的另一個目的是可編碼并表達至少一種FeLV免疫原的重組病毒載體和可接受的賦形劑或稀釋劑的應用，用于制備被設計成用噴液無針注射器基本上施用于貓科動物的真皮和皮下，從而引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答的液體疫苗。
需要注意的是，在本文公開內容特別是在權利要求
和/或段落中，如“包含”等類似的術語可具有在美國專利法中歸于其的含義，例如它們可能意味著“包括等類似含義；如“基本上由……組成”的術語具有在美國專利法中賦予其的含義，例如它們可允許未明確引述的成分，但排除在現有技術中發現的成分或影響本發明的基本特征或新特征的成分。
這些和其它實施方案被公開或由下面的詳細描述顯而易見且包括在內。
附圖的簡要描述下面以實例給出的詳細描述，并非有意將本發明局限于所描述的特定實施方案，可以結合附圖加以理解，將其引入作為參考，其中圖1例示了使用無針注射器注射到貓的稀釋的中國墨汁的分布情況。黑色箭頭指示墨汁在真皮和皮下分布的區域。
圖2例示了使用無針注射器注射到貓的稀釋的中國墨汁的分布情況。黑色箭頭指示墨汁在真皮內分布的區域。
詳細描述本發明涉及針對FeLV的疫苗接種方法，包括使用噴液無針注射器將有效量的基于病毒載體的FeLV重組疫苗基本上施用于貓科動物的真皮和皮下的步驟，該施用引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
“基本上”意思是指有些疫苗也可能在表皮或肌肉中被發現。
保護性免疫應答的特征為在攻擊后抗原血癥顯著減輕或顯著的中和抗體滴度。安全的免疫應答的特征是與疫苗施用相關的負作用的局限，尤其是局部注射部位反應的顯著減輕或缺乏，以及疫苗施用后厭食和抑郁等癥狀的顯著減輕或缺乏。
貓科動物包括貓，這包括新生、幼崽、雄性、雌性、懷孕雌性。
疫苗包含重組病毒載體和可接受的賦形劑或稀釋劑。重組病毒載體特別包括皰疹病毒、腺病毒和諸如禽痘(US-A-5,174,993；US-A-5,505,941和US-A-5,766,599)或金絲雀痘等的痘病毒(US-A-5,756,103)。賦形劑或稀釋劑包括但并不局限于無菌水、生理鹽水、葡萄糖、緩沖液等類似液體。賦形劑或稀釋劑還可包括多元醇、糖族或pH緩沖劑。賦形劑或稀釋劑還可包括例如氨基酸、肽、抗氧化劑、殺菌劑、抑菌化合物。
重組病毒載體編碼并表達至少一種FeLV免疫原，尤其是FeLV env基因或FeLV env和gag/pro基因。FeLV基因組的完整序列可以在Chen等人，J Virol.1998 Sep；72(9)7048-56中找到，結合常規實驗方法，可使本領域技術人員確定任何FeLV免疫原的序列。
在這一實施方案的優選方面，本發明的方法是利用表達FeLV env或FeLV env和gag/pro基因的重組金絲雀痘病毒(如vCP97構建體，見US-A-5.756.103中的實施例53)來實施的。
作為本發明的可選方面，本發明的方法利用表達FeLV env或FeLVenv和gag/pro基因的重組禽痘病毒來實施。
本發明進一步包括至少一種FeLV免疫原，其包含于載體分子或表達載體中，與啟動子元件及可選地與增強子可操作性連接。
在一有利實施方案中，啟動子為巨細胞病毒(CMV)即刻早期基因的啟動子。在另一有利實施方案中，啟動子和/或增強子為氧誘導型。可用于本發明方法的氧誘導型啟動子和/或增強子的實例包括但不限于早期生長反應-1(Egr1)啟動子(見例如Park等人，J Clin Invest.2002 Aug；110(3)403-1)，缺氧誘導因子(HIF)誘導型增強子(見例如Cuevas等人，Cancer Res.2003 Oct 15；63(20)6877-84)和Mn-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)啟動子(見例如Gao等人，Gene.1996Oct 17；176(1-2)269-70)。
在另一實施方案中，啟動子和/或增強子包括多種細胞或組織特異性啟動子(如肌肉、內皮細胞、肝、體細胞或干細胞)，多種病毒啟動子和增強子，以及對各種動物物種等基因特異性的多種FeLV免疫原序列。已描述的肌肉特異性啟動子和增強子的例子是本領域技術人員已知的(見例如Li等人，Gene Ther.1999 Dec；6(12)2005-11；Li等人，Nat Biotechnol.1999 Mar；17(3)241-5和Loirat等人，Virology.1999 Jul 20；260(1)74-83；其公開內容整體引作參考)。
本發明中可使用的啟動子和增強子包括但不限于勞斯肉瘤病毒的LTR、HSV-1的TK、SV40的早期或晚期啟動子、腺病毒主要晚期(MLP)，磷酸甘油酸酯激酶、金屬硫蛋白、α-1抗胰蛋白酶、白蛋白、膠原酶、彈性蛋白酶I、β-肌動蛋白、β-珠蛋白、γ-珠蛋白、α-胎蛋白、肌肉肌酸激酶。
“載體”是指重組DNA或RNA質粒或病毒，其含有有待在體外或體內遞送至靶細胞的異源多核苷酸。異源多核苷酸可以包含以治療為目的的感興趣基因序列，并可任選地為表達盒形式。正如在此處所用的，載體并不需要能夠在最終的靶細胞或對象中復制。該術語包括克隆載體，病毒載體也包括在內。
術語“重組”意為半合成或合成來源的多核苷酸，其不存在于自然界中或以自然界未發現的排列與另一多核苷酸連接。
“異源”是指源自遺傳上獨特的實體，其不同于與之相比較的實體的其余部分。例如，多核苷酸可以通過基因工程技術置入得自另一不同來源的質粒或載體中，并稱為異源多核苷酸。從它的天然編碼序列中移出并有效連接到非天然序列的編碼序列的啟動子為異源啟動子。
本發明的多核苷酸可以包含額外序列，例如在同一轉錄單元中的附加編碼序列，控制元件如啟動子，核糖體結合位點，多聚腺苷酸位點，處于同一或不同啟動子控制的其他轉錄單元，允許克隆、表達、同源重組和宿主細胞轉化的序列，以及可能對于提供本發明實施方案理想的任何這類構建體。
本發明包括表達FeLV免疫原或其變體或同源物或片段的載體。表達FeLV免疫原的元件有利地存在于本發明的載體中。最低限度地，這包含、基本上組成或組成為起始密碼子(ATG)、終止密碼子和啟動子，以及任選地對某些載體如質粒和特定病毒載體如不是痘病毒的病毒載體還有多聚腺苷酸序列。當多核苷酸編碼多蛋白片段如FeLV免疫原時，有利的是在載體中，ATG置于閱讀框的5’端，終止密碼子置于3’端。其他控制表達的元件也可存在，如增強子序列、穩定序列如內含子和使蛋白分泌的信號序列。
制備和/或施用載體或重組體或質粒以在體內或體外表達本發明基因的基因產物的方法可以是任何期望的方法，例如可通過以下文件中公開的方法或以下文件中引述的文件中公開的方法或類似方法美國專利4,603,112；4,769,330；4,394,448；4,722,848；4,745,051；4,769,331；4,945,050；5,494,807；5,514,375；5,744,140；5,744,141；5,756,103；5,762,938；5,766,599；5,990,091；5,174,993；5,505,941；5,338,683；5,494,807；5,591,639；5,589,466；5,677,178；5,591,439；5,552,143；5,580,859；6,130,066；6,004,777；6,130,066；6,497,883；6,464,984；6,451,770；6,391,314；6,387,376；6,376,473；6,368,603；6,348,196；6,306,400；6,228,846；6,221,362；6,217,883；6,207,166；6,207,165；6,159,477；6,153,199；6,090,393；6,074,649；6,045,803；6,033,670；6,485,729；6,103,526；6,224,882；6,312,682；6,348,450和6；312,683；美國專利申請系列號920,197，申請日為1986年10月16日；WO 90/01543；WO 91/11525；WO 94/16716；WO 96/39491；WO 98/33510；EP 265785；EP 0 370 573；Andreansky等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1996；9311313-11318；Ballay等人，EMBO J.1993；43861-65；Felgner等人，J.Biol.Chem.1994；2692550-2561；Frolov等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996；9311371-11377；Graham，Tibtech1990；885-87；Grunhaus等人，Sem.Virol.1992；3237-52；Ju等人，Diabetologia 1998；41736-739；Kitson等人，J.Virol.1991；653068-3075；McClements等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1996；9311414-11420；Moss，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1996；9311341-11348；Paoletti，Proc.Natl.Acad.Sci.USA1996；9311349-11353；Pennock等人，Mol.Cell.Biol.1984；4399-406；Richardson(Ed)，Methods in Molecular Biology1995；39，“Baculovirus Expression Protocols，”Humana PressInc.；Smith等人(1983)Mol.Cell.Biol.1983；32156-2165；Robertson等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996；9311334-11340；Robinson等人，Sem.Imm unol.1997；9271；和Roizman，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1996；9311307-11312。由此，本發明中的載體可以是任意合適的重組病毒或病毒載體，例如痘病毒(如痘苗病毒、鳥痘病毒、金絲雀痘病毒、禽痘病毒、浣熊痘病毒、豬痘病毒等)，腺病毒(如人腺病毒、犬腺病毒)，皰疹病毒(如犬皰疹病毒)，桿狀病毒，逆轉錄病毒等(如本文引作參考的文件中)；或載體可為質粒。這里引用或引入作為參考的文件，除了提供在本發明實施中有用的載體實例外，還可以提供諸如非-FeLV免疫原、非-FeLV抗原肽或其片段和細胞因子等的非-FeLV免疫原的來源，這些非-FeLV免疫原有待通過在本發明組合物中或其所包括在內的載體表達。
本發明還涉及包含載體如表達載體的制劑，如治療組合物。這種制劑可以包含、基本上組成或組成為一種或多種載體，如表達載體，例如體內表達載體，所述載體包含、基本上組成或組成為(并有利地表達)一種或多種FeLV免疫原。有利的是，這種載體包含并表達多核苷酸，該多核苷酸包括、基本上組成或組成為編碼一種或多種FeLV免疫原的編碼區；和藥學或獸醫學上可以接受的載體、賦形劑或介質。這樣，根據本發明的一個實施方案，制劑中的另一載體或多種載體包含、基本上組成或組成為，編碼FeLV免疫原或其片段的一種或多種其它蛋白的多核苷酸，并在適宜的情況下所述載體表達所述蛋白。
根據本發明的另一實施方案，制劑中的一種或多種載體包含、基本上組成或組成為，編碼FeLV免疫原的一種或多種蛋白或其片段的多核苷酸，所述載體具有所述多核苷酸的表達。本發明的制劑有利地包含、基本上組成或組成為至少兩種載體，其包含、基本上組成或組成為，來自不同FeLV分離株的編碼相同蛋白和/或不同蛋白(但有利地編碼相同的蛋白)的多核苷酸，并且有利的是所述載體還表達所述多核苷酸，有利地在體內在適宜條件下或合適狀況下或在合適的宿主細胞中。制劑含有一種或多種載體，所述載體含有、基本上組成或組成為，編碼(并有利地表達，有利地在體內)FeLV肽、融合蛋白或其表位的多核苷酸。
根據本發明的一個實施方案，表達載體是病毒載體，特別是體內表達載體。在有利的實施方案中，表達載體是腺病毒載體。有利的是，腺病毒載體是人Ad5載體，E1-缺失和/或E3-缺失的腺病毒。
在一個特定實施方案中，病毒載體是痘病毒，如痘苗病毒或減毒痘苗病毒(例如MVA，Ankara疫苗株在雞胚成纖維細胞上傳代超過570次后獲得的經修飾的Ankara株，見Stickl & Hochstein-Mintzel，Munch.Med.Wschr.，1971，113，1149-1153；Sutter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，1992，89，10847-10851；可作為ATCCVR-1508得到；或NYVAC，見美國專利5,494,807，例如實施例1到6，以及下列等等，美國專利5,494,807，其中討論了NYVAC的構建以及帶有從哥本哈根株痘苗病毒基因組中刪除的額外ORF的NYVAC變異以及將異源編碼核酸分子插入該重組體的位點，以及匹配啟動子的應用；也參見WO96/40241)，鳥痘病毒或減毒鳥痘病毒(如金絲雀痘，禽痘，斑鳩痘，鴿痘，鵪鶉痘，ALVAC或TROVAC；見例如美國專利號5,505,941，5,494,807)，豬痘病毒，浣熊痘病毒，駱駝痘病毒或粘液瘤病病毒。
根據本發明的另一個實施方案，痘病毒載體是金絲雀痘病毒或禽痘病毒載體，有利的是減毒的金絲雀痘病毒或禽痘病毒。在這方面，金絲雀疸可獲自ATCC登錄號VR-111。減毒的金絲雀痘病毒描述于美國專利No.5,756,103(ALVAC)和WO01/05934。眾多禽痘病毒疫苗接種株也可得到，例如由MERIAL上市的DIFTOSEC CT株和由INTERVET上市的NOBILIS VARIOLE疫苗；并可參考美國專利No.5,766,599，其涉及減毒的禽痘株TROVAC。
有關生成其重組體的方法和如何施用其重組體的信息，技術人員可參考本文引用的文件和WO90/12882，例如，有關痘苗病毒，可提及美國專利No.4,769,330，4,722,848，4,603,112，5,110,587，5,494,807和5,762,938等等；有關禽痘，可提及美國專利No.5,174,993，5,505,941和US-5,766,599等；有關金絲雀痘，可提及美國專利No.5,756,103等；有關豬痘，可提及美國專利No.5,382,425等；以及有關浣熊痘，可提及WO00/03030等。
當表達載體是痘苗病毒時，有待表達的多核苷酸的插入位點有利地在胸苷激酶(TK)基因或插入位點，血細胞凝集素(HA)基因或插入位點，編碼A型包含體(ATI)的區域；還參見本文引用的文件，特別是涉及痘苗病毒的那些。在金絲雀痘的情況下，有利的是插入位點是ORF C3、C5和/或C6；還參見本文引用的文件，特別是涉及金絲雀痘病毒的那些。在禽痘的情況下，有利的是插入位點是ORF F7和/或F8；還參見本文引用的文件，特別是涉及禽痘病毒的那些。MVA病毒的插入位點有利地是如同在多種出版物中，包括Carroll M.W.等人，Vaccine，1997，15(4)，387-394；Stittelaar K.J.等人，J.Virol.，2000，74(9)，4236-4243；Sutter G.等人，1994，Vaccine，12(11)，1032-1040；并且在這方面，還注意到完整的MVA基因組描述于AntoineG.，Virology，1998，244，365-396，其使得技術人員能夠使用其它插入位點或其它啟動子。
有利的是，有待表達的多核苷酸插入特定痘病毒啟動子控制之下，如痘苗啟動子7.5 kDa(Cochran等人，J.Virology，1985，54，30-35)，痘苗啟動子I3L(Riviere等人，J.Virology，1992，66，3424-3434)，痘苗啟動子HA(Shida，Virology，1986，150，451-457)，牛痘啟動子ATI(Funahashi等人，J.Gen.Virol.，1988，69，35-47)，痘苗啟動子H6(Taylor J.等人，Vaccine，1988，6，504-508；Guo P.等人J.Virol.，1989，63，4189-4198；Perkus M.等人，J.Virol.，1989，63，3829-3836)等等。
在特定實施方案中，病毒載體是腺病毒，如人腺病毒(HAV)或犬腺病毒(CAV)。
在一個實施方案中，病毒載體是人腺病毒，特別是血清型5腺病毒，通過病毒基因組的E1區域中的缺失(特別是從大約核苷酸459到大約核苷酸3510，參考hAd5的序列，公開于GenBank登錄號M73260和參考文獻出版物J.Chroboczek等人，Virol.1992，186，280-285中)而使得不能復制。缺失的腺病毒在表達E1的293(F.Graham等人，J.Gen.Virol.1977，36，59-72)或PER細胞特別是PER.C6(F.Falloux等人，Human Gene Therapy 1998，9，1909-1917)中繁殖。人腺病毒可以在E3區域中缺失，特別是從大約核苷酸28592到大約核苷酸30470。E1區域中的缺失可以和E3區域中的缺失結合進行(見J.Shriver等人Nature，2002，415，331-335，F.Graham等人，Methods in Molecular Biology Vol.7Gene Transfer andExpression Protocols Edited by E.Murray，The Human Press Inc，1991，p 109-128；Y.Ilan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.1997，94，2587-2592；US6,133,028；US6,692,956；S.Tripathy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.1994，91，11557-11561；B.Tapnell Adv.DrugDeliv.Rev.1993，12，185-199；X.Danthinne等人，Gene Thrapy2000，7，1707-1714；K.Berkner Bio Techniques 1988，6，616-629；K.Berkner等人，Nucl.Acid Res.1983，11，6003-6020；C.Chavier等人，J.Virol.1996，70，4805-4810)。最終在E1和/或E3區域部分或完全缺失后，插入位點可以為E1和/或E3基因座(區域)。有利的是，當表達載體是腺病毒時，有待表達的多核苷酸插入到在真核細胞中有功能的啟動子的控制之下，如強啟動子，優選巨細胞病毒即刻早期基因啟動子(CMV-IE啟動子)，特別是在M.Boshart等人，Cell 1985，41，521-530中從大約核苷酸-734到大約核苷酸+7的增強子/啟動子區域，或者是來自Promega公司的pCI載體的增強子/啟動子區域。CMV-IE啟動子有利地是鼠或人來源的。也可使用延伸因子1α的啟動子。在一個特定實施方案中，可以使用受缺氧調控的啟動子如在K.Boast等人，Human Gene Therapy1999，13，2197-2208中所述的啟動子HRE。還可以使用肌肉特異性啟動子(X.Li等人，Nat.Biotechnol.1999，17，241-245)。本文還關于質粒載體討論了強啟動子。在一個實施方案中，剪接序列可位于增強子/啟動子區域下游。例如，從CMV-IE基因中分離的內含子1(R.Stenberg等人，J.Virol.1984，49，190)，從兔或人的β-珠蛋白基因中分離的內含子，特別是b-珠蛋白的內含子2，從免疫球蛋白中分離的內含子，來自SV40早期基因的剪接序列，或者是從包含與小鼠免疫球蛋白受體序列融合的人β-珠蛋白供體序列的Promega公司的pCI載體中分離的嵌合內含子序列(Genbank中登錄號為CVU47120中從大約890到大約核苷酸1022)。poly(A)序列和終止子序列可插入有待表達的多核苷酸的下游，如牛生長激素基因，特別是Genbank中登錄號為BOVGHRH中從大約核苷酸2339到大約核苷酸2550，兔β-珠蛋白基因或SV40晚期基因多聚腺苷酸化信號。
在另一個實施方案中，病毒載體為犬腺病毒，特別是CAV-2(見例如L.Fischer等人Vaccine，2002，20，3485-3497；美國專利5,529,780；美國專利5,688,920；PCT申請號WO95/14102)。對于CAV，插入位點可以是在E3區域中和/或在位于E4區域和右ITR區域之間的區域中(參見美國專利6,090,393；美國專利6,156,567)。在一個實施方案中，插入序列處于啟動子控制之下，如巨細胞病毒即刻早期基因啟動子(CMV-IE啟動子)或已對人腺病毒載體描述的啟動子。poly(A)序列和終止子序列可以插入有待表達的多核苷酸的下游，如牛生長激素基因或兔β-珠蛋白基因多聚腺苷酸化信號。
在另一個特定實施方案中，病毒載體為皰疹病毒，如犬皰疹病毒(CHV)或貓皰疹病毒(FHV)。對于CHV，插入位點可以特別在胸苷激酶基因中、在ORF3中或在UL43ORF中(參見美國專利號6,159,477)。在一個實施方案中，有待表達的多核苷酸插入到在真核細胞中有功能的啟動子控制之下，有利地是CMV-IE啟動子(鼠或人)。在一個特定實施方案中，可以使用受缺氧調控的啟動子，如在K.Boast等人，HumanGene Therapy1999，13，2197-2208中描述的啟動子HRE。poly(A)序列和終止子序列可以插入到有待表達的多核苷酸的下游，如牛生長激素或兔β-珠蛋白基因多聚腺苷酸化信號。
根據本發明又一個實施方案，表達載體是質粒載體或DNA質粒載體，特別是體內表達載體。在一個具體非限定性的實例中，可以將pVR1020或1012質粒(VICAL Inc.；Luke C.等人，Journal ofInfectious Diseases，1997，175，91-97；Hartikka J.等人，HumanGene Therapy，1996，7，1205-1217，見例如美國專利號5,846,946和6,451,769)用作載體以插入多核苷酸序列。pVR1020質粒源于pVR1012，包含人tPA信號序列。在一個實施方案中，人tPA信號包含Genbank中登錄號HUMTPA14從氨基酸M(1)到氨基酸S(23)。在另一個具體非限定性實例中，用作插入多核苷酸序列的載體的質粒可以包含馬IGF1的信號肽序列，Genbank中登錄號U28070從氨基酸M(24)到氨基酸A(48)。關于可在實踐中考慮或采用的DNA質粒的其它信息可在例如以下美國專利中找到6,852,705、6,818,628、6,586,412、6,576,243、6,558,674、6,464,984、6,451,770、6,376,473和6,221,362。
術語質粒涵蓋任何DNA轉錄單元，其包含根據本發明的多核苷酸和其在所需宿主或靶標的細胞中體內表達所必需的元件；在這方面，應注意到，超螺旋的或非超螺旋的、環狀質粒，以及線性形式，都意圖落在本發明的范圍內。
每一質粒包含或含有或基本上組成為，除了編碼FeLV免疫原或其變體、類似物和片段的多核苷酸，與啟動子可操作性連接或處于啟動子控制下或依賴于啟動子。總的來說，有利地是采用在真核細胞中有功能的強啟動子。優選的強啟動子是人或鼠來源的即刻早期巨細胞病毒啟動子(CMV-IE)，或任選地具有另一來源如大鼠或豚鼠。CMV-IE啟動子可包含實際的啟動子部分，該部分可以與或不與增強子部分相連。可參考EP-A-260 148，EP-A-323 597，美國專利5,168,062、5,385,839和4,968,615，以及PCT申請號WO87/03905。CMV-IE啟動子有利地是人CMV-IE(Boshart M.等人，Cell.，1985，41，521-530)和鼠CMV-IE。
更廣義地，啟動子具有病毒或細胞來源。可在本發明實施中有效采用的除CMV-IE以外的強病毒啟動子是SV40病毒的早期/晚期啟動子或勞斯肉瘤病毒的LTR啟動子。可在本發明的實施中有效采用的強細胞啟動子是細胞骨架的基因的啟動子，如結蛋白啟動子(Kwissa M.等人，Vaccine，2000，18，2337-2344)，或肌動蛋白啟動子(MiyazakiJ.等人，Gene，1989，79，269-277)。
這些啟動子的功能性亞片段，即這些啟動子維持適當啟動活性的部分，包括在本發明內，例如根據PCT申請號WO98/00166或美國專利6,156,567的截短的CMV-IE啟動子可用于實施本發明。在本發明實施中的啟動子因而包括全長啟動的衍生物和亞片段，其維持適當的啟動活性因此發揮啟動子作用，優選啟動活性基本上類似于所述衍生物或亞片段來源的實際或全長的啟動子，例如美國專利6,156,567的截短的CMV-IE啟動子的活性類似于全長CMV-IE啟動子的活性。因此，本發明實施中的CMV-IE啟動子可包含或基本上組成或組成為，全長啟動子的啟動子部分和/或全長啟動子的增強子部分，以及衍生物和亞片段。
優選地，質粒包含或基本上組成為其它表達控制元件。特別有利的是引入穩定序列，例如內含子序列，優選hCMV-IE的第一個內含子(PCT申請號WO89/01036)，兔b-珠蛋白基因的內含子II(van Ooyen等人，Science，1979，206，337-344)。
至于對于質粒和除痘病毒以外的病毒載體的多聚腺苷酸化信號(polyA)，更多的可以使用牛生長激素(bGH)基因的poly(A)信號(見美國專利5,122,458)、或兔b-珠蛋白基因的poly(A)信號或SV40病毒的poly(A)信號。
根據本發明的另一實施方案，表達載體是用于在合適的細胞體系中體外表達蛋白的表達載體。表達的蛋白可以在培養物上清液中或從中收獲，在分泌之后或不在分泌之后(如果沒有分泌，通常發生或進行細胞裂解)，任選地通過濃縮方法如超濾法進行濃縮和/或通過純化手段如親和、離子交換、凝膠過濾-型色譜法進行純化。
可用于本發明中的宿主細胞包括但不限于肌肉細胞、角質形成細胞、成肌細胞、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、vero細胞、BHK21、sf9細胞等類似細胞。本領域技術人員理解，根據特定基因，培養宿主細胞的條件不同，并且有時候需要進行常規實驗來確定取決于宿主細胞培養FeLV的最優化條件。例如，編碼FeLV免疫原的載體可以轉化到成肌細胞(該細胞可從來自需要治療的動物的肌肉組織獲得)中，且可將經轉化的成肌細胞移植到動物。另一個實例中，角質形成細胞也可以用編碼FeLV免疫原的載體轉化并移植到動物體內，導致FeLV免疫原分泌到循環中。
“宿主細胞”是指已經遺傳改變或能夠被遺傳改變(通過施用外源多核苷酸(如重組質粒或載體))的原核或真核細胞。當談到經遺傳改變的細胞時，該術語既指原始改變的細胞，也指其后代。
包含目的序列的多核苷酸可以插入合適的克隆或表達載體中，該載體接下來可以導入合適的宿主細胞以進行復制和擴增。多核苷酸可以通過本領域已知的各種方法導入宿主細胞。含目的多核苷酸的載體可以通過多種適宜方法中的任何方法導入宿主細胞，包括直接攝取、胞吞作用、轉染、f-交配、電穿孔，使用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-葡聚糖或其它物質的轉染；微粒轟擊；脂質轉染；和感染(當載體是感染性的，例如逆轉錄病毒載體)。導入載體或多核苷酸的選擇常取決于宿主細胞的特征。
在有利的實施方案中，本發明提供施用治療有效量的制劑以在靶細胞中遞送和表達FeLV免疫原。治療有效量的確定對本領域技術人員而言是常規試驗。一個實施方案中，制劑包含包括表達FeLV免疫原的多核苷酸的表達載體，以及藥學或獸醫學上可以接受的載體、介質或賦形劑。在有利的實施方案中，藥學或獸醫學上可以接受的載體、介質或賦形劑有利于轉染和/或改善載體或蛋白的保存。
本領域技術人員熟知藥學或獸醫學上可以接受的載體或介質或賦形劑。例如藥學或獸醫學上可以接受的載體或介質或賦形劑可以是0.9％NaCl(如鹽水)溶液或磷酸鹽緩沖液，可用于本發明方法的其它藥學或獸醫學上可以接受的載體或介質或賦形劑包括但不限于多聚-(L-谷氨酸)和聚乙烯吡咯烷酮。藥學或獸醫學上可以接受的載體或介質或賦形劑可以是任何化合物或化合物的組合，其有利于載體的(或本發明載體在體外表達的蛋白)的施用；有利的是，所述載體、介質或賦形劑可有利于轉染和/或改善載體(或蛋白)的保存。劑量和劑量體積在此只以一般描述討論，其也可由本領域技術人員通過閱讀本文公開內容并結合本領域知識來確定，無需任何過度實驗。
有利地但不排外地適合于質粒的含有季銨鹽的陽離子脂質有利地是具有以下結構式的那些 其中，R1為具有12-18個碳原子的飽和或不飽和的直鏈脂族基團；R2是含有2或3個碳原子的另一脂族基團而X是胺或羥基基團，如DMRIE。在另一實施方案中，陽離子脂質可以和中性脂質如DOPE相結合。
在這些陽離子脂質中，優選DMRIE(N-(2-羥乙基)-N，N-二甲基-2，3-雙(十四烷氧基)-1-丙烷銨；WO96/34109)，有利地與中性脂質相結合，其中中性脂質有利地是DOPE(二油酰-磷脂酰-乙醇胺；Behr J.P.，1994，Bioconjugate Chemistry，5，382-389)，以形成DMRIE-DOPE。
有利的是，臨時形成質粒與佐劑的混合物，并且有利地是與制備物的施用同時進行或在制備物的施用前不久進行；例如，在施用之間不久，形成質粒-佐劑混合物，有利地是在施用之前給出足夠的時間，以使混合物形成復合物，例如在施用之前約10-約60分鐘，如在施用之前約30分鐘。
當DOPE存在時，DMRIE∶DOPE的摩爾比有利地時大約95∶大約5到大約5∶大約95，更有利地是大約1∶大約1，例如1∶1。
DMRIE或DMRIE-DOPE佐劑∶質粒的重量比可以是大約50∶大約1到大約1∶大約10，如大約10∶大約1到大約1∶大約5，有利地是大約1∶大約1到大約1∶大約2，例如1∶1-1∶2。
丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物優選是交聯的，特別是與糖的聚烯基醚類或多元醇類。這些化合物已知稱為卡波姆(Pharmeuropa vol.8，No.2，June 1996)。本領域技術人員也可以參考US-A-2,909,462，其中描述了這類與多羥基化化合物交聯的丙烯酸聚合物，所述多羥基化化合物具有至少3個羥基，優選不超過8個，至少3個羥基的氫原子被具有至少2個碳原子的不飽和脂族基團替代。優選的基團是含有2-4個碳原子的那些，如乙烯基、烯丙基和其它乙烯型不飽和基團。所述不飽和基團可以本身含有其它取代基，如甲基。以商品名Carbopol出售的產品(BF Goodrich，Ohio，USA)特別適宜。它們與烯丙基蔗糖或與烯丙基季戊四醇交聯。其中可以提及Carbopol974P、934P和971P。
在馬來酸酐和烯基衍生物的共聚物中，優選EMA共聚物(Monsanto)，其是馬來酸酐和乙烯的共聚物，為線性或交聯的，例如與二乙烯醚交聯。可參考J.Fields等人，Nature，186778-780，Jun.4，1960。
有用的佐劑的比例是本領域技術人員熟知的和容易得到的。舉例而言，丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物或馬來酸酐和烯基共聚物在最終疫苗組合物中的濃度將從0.01％到1.5％W/V，更特別是從0.05到1％W/V，優選從0.1到0.4％W/V。
任選地，根據本發明方法使用的疫苗可含有細胞因子。細胞因子可作為蛋白或作為插入重組病毒載體的編碼該細胞因子的基因存在。細胞因子可選自貓細胞因子，如貓白細胞介素18(fIL-18)(Taylor S.等人，DNA Seq.，2000，10(6)，387-394)，fIL-16(Leutenegger C.M.等人，DNA Seq.，1998，9(1)，59-63)，fIL-12(Fehr D.等人，DNASeq.，1997，8(1-2)，77-82；Imamura T.等人，J.Vet.Med.Sci.，2000，62(10)，1079-1087)和貓GM-CSF(粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子)(GenBank AF053007)。
在特定實施方案中，藥物組合物在體內直接給藥，且編碼的產物由載體在宿主中表達。在體內遞送編碼FeLV免疫原的載體的方法(見例如美國專利6,423,693；專利公開EP 1052286，EP 1205551，美國專利公開20040057941，WO 9905300和Draghia-Akli等人，Mol Ther.2002 Dec；6(6)830-6；其公開內容整體引作參考)可經修改來將本發明的FeLV免疫原遞送給貓。本文描述的對編碼FeLV免疫原的載體的體內遞送可由本領域技術人員在上述參考文獻的教導下完成。
有利的是，根據本發明的藥物和/或治療組合物和/或制劑包含或基本上組成或組成為，引發治療反應有效量的一種或多種本文討論的表達載體和/或多肽；并且有效量可由本文公開內容包括此處引入的文件和本領域的知識來確定，無需過度實驗。
在基于質粒載體的治療和/或藥物組合物的情況下，通常而言，一劑可包含、基本上組成或組成為，大約1mg到大約2000mg，有利地是大約50mg到大約1000mg，更有利地是大約100μg到大約800μg表達FeLV免疫原的質粒。當基于質粒載體的治療和/或藥物組合物以電穿孔法施用時，質粒劑量通常為大約0.1μg到1mg，有利地是大約1μg到100μg，有利地是大約2μg到50μg。劑量體積可以是大約0.1到大約2ml，有利地是大約0.2到大約1ml。這些劑量和劑量體積適于治療貓和其他哺乳動物目標物種，如馬和犬。
治療和/或藥物組合物每劑包含大約104到大約1011，有利地大約105到1010，更有利地大約106到大約109的表達FeLV免疫原的重組腺病毒的病毒顆粒。在基于痘病毒的治療和/或藥物組合物的情況下，一劑可以為大約102pfu到大約109pfu。藥物組合物每劑含有大約105到109，有利地大約106到108pfu的表達FeLV免疫原的痘病毒或皰疹病毒重組體。
用于哺乳動物目標物種的組合物的劑量體積，如貓組合物的劑量體積，基于病毒載體，例如基于非-痘病毒-病毒載體的組合物，通常為大約0.1到大約2.0ml，優選大約0.1到大約1.0ml，更優選大約0.5ml到大約1.0ml。
本領域技術人員應該明白的是，本文公開內容是以舉例方式提供的，且本發明不受其所限。根據本文公開內容和本領域的知識，技術人員可以確定施用的次數，施用途徑和有待用于每一注射方案的劑量，而無需任何過度實驗。
本發明考慮到將有效量的根據本發明制備的治療組合物對動物進行至少一次施用。動物可以是雄性、雌性、懷孕雌性和新生動物。這種施用可經由多種途徑，包括但不限于肌內(IM)、皮內(ID)或皮下(SC)注射，或經由鼻內或口服施用。根據本發明的治療組合物還可以通過無針裝置施用(如用Pigjet、Biojector或Vitajet裝置(Bioject，Oregon，USA))。另一施用質粒組合物的方法是使用電穿孔(見例如S.Tollefsen等人Vaccine，2002，20，3370-3378；S.Tollefsen等人Scand.J.Immunol.，2003，57，229-238；S.Babiuk等人，Vaccine，2002，20，3399-3408；PCT申請WO99/01158)。在另一實施方案中，通過基因槍或金顆粒轟擊將質粒遞送給動物。在有利的實施方案中，動物是脊椎動物。在更有利的實施方案中，脊椎動物是貓。
噴液無針注射器是實施通過一微孔在高壓下注射特定量液體的裝置。注射器的機械規格可調節或選擇以控制穿透入組織的深度。使用注射器(syringe)或無針注射器(injecto )施用液體最終導致液體在組織中的不同分布。使用注射器導致局部化的團塊或池。使用(無針)注射器導致彌散分布在靶向組織的層中，如WO-A-01/13975中例示的。
穿透的深度主要通過液體壓力控制。該液體壓力取決于注射器的機械規格，如彈簧或任何其它推進手段的強度和活塞和噴口的直徑。這是本領域技術人員容易得到的。
注射深度可容易地通過在施用優選具有與預期疫苗相同粘度的有色液體后對注射部位的組織解剖來確定(優選相應于將施用疫苗的位置，并且有利地在與待接種疫苗的種群相同物種和年齡的動物上進行測試)。這種測試可直接用另外含有染料的預期疫苗來進行。這種測試可使本領域技術人員調節注射器的機械規格。
無針注射器可以配備有包括一個或多個噴嘴的頭部。使用幾個噴嘴可增加疫苗在較大區域內的分散模式。可以有1到10個噴嘴，優選1到6個。
幾種注射器可以商購得到。VitajetTM3(Bioject Inc.)特別適于本發明的方法。
有利的是使用配備有允許標準小瓶或安瓿直接與注射器相配的手段的注射器。此外，疫苗小瓶可包含幾個疫苗劑量，允許使用注射器和同一小瓶幾次注射疫苗和/或接種幾個動物。這樣，注射器優選能夠從同一疫苗小瓶進行連續注射。
本發明還涉及刺激脊椎動物免疫應答的方法。在一個實施方案中，脊椎動物是鳥、貓、牛、狗、魚、山羊、馬、人、小鼠、猴、豬、兔或綿羊。在更有利的實施方案中，脊椎動物是貓。
在本發明的一方面，針對FeLV的疫苗接種可與對抗另一種貓疾病的疫苗接種相結合。疫苗包含根據本發明的病毒載體和能夠保護對抗這些其它疾病(尤其是貓皰疹病毒疾病、貓杯狀病毒疾病、貓傳染性粒細胞缺乏癥、副流感病毒2型疾病、貓免疫缺陷病和衣原體病)的疫苗成分。
注射的劑量體積可為大約0.1ml到大約1.0ml，優選大約0.1ml到大約0.8ml，更優選大約0.2ml到大約0.5ml，在優選的應用中，注射的劑量體積可以為0.25ml。一劑的體積定義為是指一次施用于一個動物的疫苗的總體積。
疫苗可含大約104.5到大約108.0TCID50/劑(50％組織培養感染劑量/劑疫苗)，優選大約105.5到大約106.5TCID50/劑。
任選地，施用可以重復，作為加強施用，以合適的間隔，如果必需或期望，例如在第一次施用后大約2到大約8周，優選在第一次施用后大約3-大約5周。加強施用也可以每年重復進行。
本發明的另一個目的是有效量的如上所述的編碼并表達至少一種FeLV免疫原的重組病毒載體和可接受的賦形劑或稀釋劑的應用，用于制備液體重組病毒疫苗，該疫苗被設計成用如上所述的噴液無針注射器基本上施用于貓科動物的真皮和皮下，并導致引發FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
另一目的是疫苗接種試劑盒或套盒(set)，其包括這樣的噴液無針注射器和至少一個含有如上所述的基于病毒載體的FeLV重組疫苗的疫苗小瓶，二者有效裝配以實施將疫苗施用于貓科動物。疫苗的分布基本上在真皮和皮下完成。
這種疫苗接種試劑盒或套盒能夠引發對抗FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
現將通過以下非限定性實施例來進一步描述本發明。
實施例1小貓中的無針注射器分布將0.3或0.5ml經稀釋的中國墨汁溶液施用于10-14周大小的8只小貓。
注射使用VitajetTM3無針注射器(Bioject Inc.)完成，采用0.006和0.007英寸直徑的噴嘴和100#彈簧。注射施用于小貓的腰部區域中或四頭肌中，不事先剃毛。
為了觀察墨汁的分布，將動物剃毛。
在真皮、皮下區域中發現墨汁，有時在肌肉中發現少量墨汁。使用0.006噴嘴完成的注射和使用0.007噴嘴完成的注射之間沒有肉眼可檢測到的差異。不同體積(0.3和0.5ml)的分布是相似的。在腰部區域中和在四頭肌中的分布是類似的。
圖1和2顯示了這些注射和墨汁分布的照片。
實施例2用帶針頭的注射器在小貓中施用疫苗40只8-9周大小的貓隨機分為兩組，每組20只小貓。
組1小貓在第0天和23天接種在無菌水中的包含表達FeLV env和gag/pro基因的重組金絲雀痘病毒載體(vCP97，見US-A-5.756.103中的實施例53)的疫苗。以1.0ml/劑的體積和以106.6TCID50/劑(50％組織培養感染劑量/劑疫苗)，采用注射器和針頭進行皮下注射。
對組2的小貓在第0天和23天用注射器和針頭皮下給予安慰劑(1ml無菌水)以用作為對照。
在第49天，以104.96FAID50/ml(50％熒光抗體感染劑量/毫升)，對所有的小貓均用1ml FeLV強毒株(61E病毒株，從NationalInstitutes of Health(NIH)，USA獲得)進行攻擊(0.5ml經口和0.25ml每只鼻孔)。
在接種和攻擊當天，以及攻擊后20天和以后4-8周每周一次，采集血樣。對血樣用商品試劑盒(Virachek，Synbiotics Corp.)檢測游離可溶性p27蛋白來測試FeLV抗原血癥。當小貓連續3周或不連續5周測試為陽性時，認為抗原血癥持續。
FeLV抗原血癥組1中，7只小貓具有持續性抗原血癥(65％的保護)。組2中17只小貓具有持續性抗原血癥，占小貓的85％。
實施例3小貓的無針疫苗注射40只平均年齡為9周的小貓隨機分為2組，每組20只小貓。
組1的小貓在第0天和22天接種在無菌水中的包含表達FeLV env和gag/pro基因的金絲雀痘載體(vCP97，見US-A-5.756.103中的實施例53)的重組病毒疫苗。
組2在第0天給予安慰劑(0.25ml無菌水)，作為對照。
所有注射均經由VitajetTM3無針注射器(Bioject Inc.)以每劑0.25ml的體積施用于外側大腿區域中。以0.007英寸直徑的噴嘴和100#彈簧使用無針注射器。
組1中，第一次接種(V1)以106.3TCID50/劑施用疫苗，第二次接種(V2)以105.8TCID50/劑施用疫苗。
在第43天，以105.0TCID50/ml，對所有的小貓均用1ml FeLV強毒株(61E病毒株，從National Institutes of Health(NIH)，USA獲得)進行攻擊(0.5ml經口和0.25ml每只鼻孔)。
在第一系列接種前一天，第二系列接種前一天，就在攻擊之前，在攻擊后3周和此后連續8周每周一次，采集血樣。對血樣用商品試劑盒(Virachek，Synbiotics Corp.)檢測游離可溶性p27蛋白來測試FeLV抗原血癥。當小貓連續3周或不連續5周測試為陽性時，認為抗原血癥持續。
FeLV抗原血癥組1中，5只小貓具有持續性抗原血癥(75％的保護)。組2中18只小貓具有持續性抗原血癥，占小貓的90％。
這些結果的統計學分析顯示組1和組2之間的顯著性差異(p＝6.861E-05)。
臨床體征任何組中沒有一只小貓在觀察期間厭食。
除對照組中的一只小貓外，沒有一只小貓顯示出抑郁征象。
沒有一只小貓顯示出注射部位反應。
結論基于不存在厭食和抑郁和實際上無局部反應，用無針注射器注射的重組病毒疫苗在小貓中是安全的。
當與未接種的對照組相比時，重組病毒疫苗保護小貓對抗FeLV攻擊。
無針接種后獲得的保護作用高于用注射器和針頭接種后獲得的保護作用(見實施例2)，分別是大約75％的保護比65％，即使包含表達FeLV env和gag/pro基因的金絲雀痘載體的重組病毒疫苗的注射量對于首次施用低2倍且對于加強施用低6倍。
本發明現將通過以下標號的段落作進一步描述。
1.有效量的編碼并表達至少一種FeLV免疫原的重組病毒載體和可接受的賦形劑或稀釋劑的應用，用于制備液體重組病毒疫苗，該疫苗被設計成用噴液無針注射器施用于貓科動物，并引發安全的和保護性的對抗FeLV的免疫應答。
2.根據段落1的應用，其中所述疫苗包含選自由皰疹病毒、腺病毒、痘病毒組成的組的成員的病毒載體。
3.根據段落2的應用，使用所述病毒載體為金絲雀痘病毒或禽痘病毒。
4.根據段落2的應用，其中所述病毒載體為vCP97。
5.根據段落1的應用，其中所述疫苗包含大約104.5到大約107.0TCID50/劑(50％組織培養感染劑量/劑疫苗)。
6.根據段落1的應用，其中所述噴液無針注射器為VitajetTM裝置。
7.疫苗接種試劑盒或套盒，包括噴液無針注射器和至少一個含有基于病毒載體的FeLV重組疫苗的疫苗小瓶，二者有效裝配以實施將疫苗施用于貓科動物，并引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
* * *已這樣詳細描述了本發明的優選實施方案，要理解的是，以上段落限定的發明并不限于以上說明書中所述的特定細節，其許多明顯的變異是可能而不偏離本發明的精神或范圍的。
權利要求
1.引發對抗FeLV的安全的和保護性的免疫應答的方法，包括將含有有效量的編碼和表達至少一種FeLV免疫原的重組病毒載體和可接受的賦形劑或稀釋劑的疫苗用噴液無針注射器給貓科動物施用。
2.權利要求
1的方法，其中所述病毒載體是皰疹病毒載體、腺病毒載體或痘病毒載體。
3.權利要求
2的方法，其中所述病毒載體是金絲雀痘病毒或禽痘病毒。
4.權利要求
2的方法，其中所述病毒載體是vCP97。
5.權利要求
2的方法，其中所述疫苗含約104.5-約107.0TCID50/劑(50％組織培養感染劑量/劑疫苗)。
6.權利要求
1的方法，其中所述噴液無針注射器是VitajetTM裝置。
7.疫苗接種試劑盒或套盒，其包含噴液無針注射器和至少一個裝有基于病毒載體的FeLV重組疫苗的疫苗小瓶，其有效地裝配以實施將疫苗施用于貓科動物，并引發針對FeLV的安全的和保護性的免疫應答。
專利摘要
本發明提供了接種貓科動物以對抗貓白血病的新方法。基于病毒載體的FeLV重組疫苗借助于噴液無針注射器能使疫苗基本上分布于動物的真皮和皮下。
文檔編號A61K39/00GK1997389SQ200580024190
公開日2007年7月11日 申請日期2005年6月6日
發明者T·采蓋, M·C·帕多, A·T·利爾德 申請人:梅瑞爾有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan