專利名稱:一種應用蔗糖區帶超速離心制備高純度手足口病疫苗的方法
技術領域：
本發明屬于一種病毒性疫苗的制備方法。
技術背景
手足口病(Hand foot mouth di sea se，HFMD)是由腸道病毒感染引起的急性傳 染病。多發生于5歲以下兒童，尤其是3歲以下的嬰幼兒，年長兒及成人亦偶有發病。可引 起手、足、口腔、臀部、膝關節部位的皰疹。部分病例可出現中樞神經系統損傷、肺水腫、肺出 血、循環衰竭及心臟損害。個別重癥患兒病情發展快，導致死亡。
而常規的層析純化所制得的疫苗的純度較低。
發明內容
為了解決上述問題，本發明采用的硫酸魚精蛋白結合超速離心的方法，制得了較 高純度的疫苗。
本發明所采用的技術方法是將滅活的手足口病毒濃縮液經過蔗糖區帶離心、純 化、制備成手足口病毒疫苗。
在蔗糖區帶離心純化之前的滅活的手足口病毒濃縮液(包括EV71病毒濃縮液、科 薩其病毒濃縮液)中，加入終濃度為0.5g/ml 5g/ml硫酸魚精蛋白充分混合，并置2°C 8°C處理0. 5h 5h后，經8000g IOOOOg離心5min lOmin，取上清液為待離心手足口病
毒液，用于離心純化。
蔗糖區帶離心可為速率區帶離心，分離手足口病毒顆粒的速率區帶段(包括一種 固定濃度蔗糖區帶段、越接近邊孔濃度越高的多種濃度的蔗糖區帶段)為30% 60% (百 分比為質量質量百分比)濃度的蔗糖，離心條件為應用區帶轉頭，靠近中心孔為待離心手 足口病毒液，靠近邊孔為上述速率區帶段，25000rpm 35000rpm離心，至手足口病毒顆粒 離心至上述的速率區帶段并且和雜蛋白分開，收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
蔗糖區帶離心也可為密度梯度區帶離心，離心條件為應用區帶轉頭，由靠近中心 孔至靠近邊孔依次為待離心手足口病毒液、30% 60% (百分比為質量質量百分比)蔗糖、 63% 67% (百分比為質量質量百分比)蔗糖，25000rpm 35000rpm離心至手足口病毒 顆粒至等密度點，收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
離心純化收集液，通過超濾脫糖后配制成手足口病疫苗。
權利要求
1.一種將手足口病毒濃縮液經過蔗糖區帶離心純化制備手足口病疫苗的方法。
2.根據權利要求
1所述的方法，其特征在于在蔗糖區帶離心純化之前的手足口病毒濃 縮液(包括EV71病毒濃縮液、科薩其病毒濃縮液)中，加入終濃度為0. 5g/ml 5g/ml硫 酸魚精蛋白充分混合，并置2°C 8°C處理0. 5h 5h后，經8000g IOOOOg離心5min lOmin，取上清液為待離心手足口病毒液，用于離心純化。
3.根據權利要求
1所述的方法，其特征在于蔗糖區帶離心為速率區帶離心，分離手足 口病毒顆粒的速率區帶段(包括一種固定濃度蔗糖區帶段、越接近邊孔濃度越高的多種濃 度的蔗糖區帶段)為30% 60% (百分比為質量質量百分比)濃度的蔗糖，離心條件為應 用區帶轉頭，靠近中心孔為待離心手足口病毒液，靠近邊孔為上述速率區帶段，25000rpm 35000rpm離心池 20h，至手足口病毒顆粒離心至上述的速率區帶段并且和雜蛋白分開， 收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
4.根據權利要求
1所述的方法，其特征在于蔗糖區帶離心為密度梯度區帶離心，離 心條件為應用區帶轉頭，由靠近中心孔至靠近邊孔依次為待離心手足口病毒液、30% 60% (百分比為質量質量百分比)蔗糖、63% 67% (百分比為質量質量百分比)蔗糖， 25000rpm 35000rpm離心池 20h，至手足口病毒顆粒至等密度點，收集手足口病毒峰為 離心純化收集液。
5.根據權利要求
1所述的方法，其特征在于離心純化收集液，通過超濾脫糖后的高純 度手足口病毒抗原用于制備手足口病滅活疫苗。
專利摘要
技術領域：
本發明屬于一種新型病毒性滅活疫苗。用途該疫苗用于預防手足口病。主要技術在EV71或科薩其病毒濃縮液中，加入終濃度為0.5～5g/ml硫酸魚精蛋白置2～8℃處理0.5～5h后，經8000～10000g離心5～10min，取上清液經蔗糖速率區帶離心，或蔗糖密度梯度區帶離心后，收集手足口病毒峰，通過超濾脫糖后最終配制成手足口疫苗。
文檔編號A61K39/125GKCN102068691SQ201010603405
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月24日
發明者楊國松 申請人:福爾生物制藥股份有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan