抗衰老藥物組合物及其制備方法

專利名稱:抗衰老藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種含有節(jié)旋藻、蛹蟲草、川芎、枸杞等原料提取液的抗衰老藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活的改善，科技文化的進(jìn)步，人類的平均壽命正在不斷的延長(zhǎng)，老年人在人口總數(shù)中占的比例越來越大，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)60歲以上的人口，目前已達(dá)1.4億左右，占全國(guó)總?cè)丝诘?0％以上，進(jìn)入老齡化國(guó)家。
衰老是人體的生理規(guī)律不可避免的現(xiàn)象。衰老的進(jìn)程又受環(huán)境、飲食及其自身健康狀況和生活習(xí)慣等等多種因素左右。應(yīng)用科技手段和方法，探索衰老的發(fā)生和演進(jìn)過程，對(duì)一些老年疾病予以防治。衰老發(fā)生的機(jī)制極為復(fù)雜，由一系列生理、病理過程綜合作用的多因素所致，我國(guó)醫(yī)藥學(xué)在延緩衰老，延年益壽等方面，積累了豐富的理論知識(shí)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。
人們?yōu)檠泳徦ダ系倪M(jìn)程，一直在探索尋求各種防衰老的方法，在眾多的方法中，“補(bǔ)品”抗衰是我國(guó)傳統(tǒng)的行之有效的方法之一，也是被世界各國(guó)關(guān)注的課題。
人們隨著年齡的增長(zhǎng)，生理機(jī)能在逐漸改變，對(duì)飲食營(yíng)養(yǎng)的要求也在不斷的發(fā)生變化，因此結(jié)合生理功能改變的特點(diǎn)，制成相應(yīng)的飲食，以適應(yīng)年齡的增長(zhǎng)需要，從而達(dá)到預(yù)防疾病和推遲、延緩衰老的目的。
自由基性質(zhì)活潑，具有極強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力。其數(shù)量隨年齡的增加而增長(zhǎng)，在細(xì)胞內(nèi)自由基超過一定數(shù)量時(shí)，機(jī)體即產(chǎn)生不良影響和損傷，促使人體衰老。因此，尋覓可清除自由基的物質(zhì)也是抗衰老的方法之一。
大量的中醫(yī)典籍，都表明了益氣活血在衰老過程中的重要作用。清·王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》中有“元?dú)饧忍摚夭荒苓_(dá)瘀血管，血管無氣，必停留瘀”的描述。并明確指出補(bǔ)氣藥與活血藥一同應(yīng)用的良好效果。
臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，混合組成多種物質(zhì)，比單一物質(zhì)的抗衰效果好。氣虛血瘀是一種以氣虛為本，血瘀為標(biāo)的本虛標(biāo)實(shí)證，人到老年，必然會(huì)有元?dú)獠蛔?，五臟之氣衰憊之變化，這是衰老的根本機(jī)制。因此，對(duì)氣虛血瘀在衰老過程中的重要機(jī)制變化的認(rèn)識(shí)，以及應(yīng)用益氣活血的中草藥和菌藻類進(jìn)行抗衰老的防治作用的研究得到了確定。如能改善氣虛血瘀則是抗衰老的又一種萬法，對(duì)延緩衰老具有一定的作用。
《內(nèi)經(jīng)》有“邪之所湊，其氣必虛”之說，明確表達(dá)了氣虛時(shí)機(jī)體抗病能力不足，免疫功能低下的特點(diǎn)。應(yīng)用同位素標(biāo)記法測(cè)定發(fā)現(xiàn)，多種疾病的虛癥患者的細(xì)胞免疫功能都有所降低，這就為免疫功能與中醫(yī)正氣概念之間的相互關(guān)系提供了佐證。老年病多屬虛癥，這是由于在免疫功能降低的基礎(chǔ)上發(fā)生的生理性虛癥和病理性虛癥交織所致。因此，觀察免疫功能的改善，尤其是細(xì)胞免疫功能提高，是評(píng)價(jià)、判斷抗衰老作用的重要標(biāo)志之一。血瘀的機(jī)理可以從眾多的項(xiàng)目來檢測(cè)，目前一般認(rèn)為TXB2(血栓素)與PGE2(前列腺素)的平衡變化能客觀反應(yīng)血小板聚集與血管壁的舒縮情況，血漿TXB2水平升高，可能是血瘀癥的重要特癥之一，兩者之間的動(dòng)態(tài)平衡構(gòu)成了氣血相互依存和制約的關(guān)系，可見選擇細(xì)胞免疫功能測(cè)定與TXB2、PGE2的平衡關(guān)系來說明氣虛與血瘀的變化是合理的。
目前市場(chǎng)出售的各種(類)護(hù)膚、美容化妝品，種類繁多，不勝枚舉，究其作用，一般僅能起到暫時(shí)性的潤(rùn)膚作用，有些甚至因其中所含的增白劑等物，還會(huì)導(dǎo)致皮炎等副作用發(fā)生。本發(fā)明人認(rèn)為，單純以有機(jī)化合物或金屬物質(zhì)(單體)成份作為添加劑制成的化妝品膏、霜或乳劑等，最終不能起到保護(hù)皮膚，延緩皮膚衰老的作用，還或多或少的存在著不同程度的弊端與不足。
為解決上列的技術(shù)問題與不足，用藻菌及中草藥內(nèi)的多種有效成份(含天然色素)代替化學(xué)合成(含染料)物，應(yīng)用到化妝品生產(chǎn)中，生產(chǎn)藻類和中草藥天然提取物系列化妝品(含口紅，胭脂，眼影膏，指甲油)，對(duì)防皺、消炎(座瘡)等有顯效。
1988年法國(guó)著名的施藍(lán)化妝品公司，首先制成螺旋藻化妝品(五個(gè)系列產(chǎn)品，霜，眼影膏，洗發(fā)香波等)，為當(dāng)時(shí)市場(chǎng)上最昂貴的高級(jí)化妝品之一。以后日本、美國(guó)等也先后制成多種螺旋藻化妝品，所有這些產(chǎn)品中都是直接將螺旋藻作為原料之一，參與配伍。
本發(fā)明的特點(diǎn)之一，是將藻類和中草藥內(nèi)的有效營(yíng)養(yǎng)成份卒取出來，用入化妝品中，既提高了純度和成份，更提高了使用效果，達(dá)到營(yíng)養(yǎng)保健，美化肌膚的雙重作用。

發(fā)明內(nèi)容
人到老年，必然元?dú)獠蛔悖迮K之氣衰憊。從“氣行則血行”的理論出發(fā)，氣虛血運(yùn)行無力可致瘀，因此老年病患者的氣虛與血瘀?；ハ嚓P(guān)聯(lián)，互為因果。氣虛血瘀是一種本虛標(biāo)實(shí)證，本虛導(dǎo)致標(biāo)實(shí)，標(biāo)實(shí)使本更虛，往復(fù)循環(huán)，造成全身性功能減退，以至衰竭。因此，采用藻菌和中草藥同時(shí)應(yīng)用，其效果較佳。
1986年本發(fā)明人與蘇州市中醫(yī)院、解放軍100等七家醫(yī)院合作藻類治療＂急再障＂臨床試驗(yàn)的同時(shí)，美國(guó)哈佛醫(yī)學(xué)院的Schwartz和SHKlar研究發(fā)現(xiàn)，從顫藻科螺旋藻屬Spirulian Turpin的一個(gè)未知種名的藻類提取的藻蛋白混合物，對(duì)一些癌細(xì)胞有抑制作用，并有抗疲勞等功能。亦可用于抗衰老和治療AIDS病方面。
次年(1987)本發(fā)明人即著手藻類抗衰老的應(yīng)用研究，在完成節(jié)(螺)旋藻保健食品組合物及其制法(專利公開號(hào)CN1113716A)和鈍頂節(jié)(螺)旋藻Artlirospira(Spirulina)、Platensis藻藍(lán)蛋白及其應(yīng)用(專利號(hào)ZL9410925·X國(guó)際專利分類號(hào)C07K14/405)都獲得成功的基礎(chǔ)上，又經(jīng)七年多的臨床試驗(yàn)、驗(yàn)證，藻類物質(zhì)具有明顯的抗衰老效果。此項(xiàng)成果，在99年(北京)國(guó)際研討會(huì)上引起德、美等國(guó)的廣泛興趣。
本發(fā)明應(yīng)用本發(fā)明人自行選育的節(jié)(螺)旋藻和蛹蟲草配合川芎、枸杞分解，提取物經(jīng)臨床應(yīng)用后，表明這些物質(zhì)對(duì)人體的某些衰老癥狀，具有較明顯的改善效果。
本發(fā)明還通過對(duì)我國(guó)古代養(yǎng)生理倫基礎(chǔ)的研究，結(jié)合現(xiàn)代應(yīng)用藻類的抗衰老試驗(yàn)研究成果，運(yùn)用中醫(yī)衰老機(jī)制學(xué)說“益氣活血”法抗衰老的臨床試驗(yàn)(觀察抗衰老作用)。
本發(fā)明的提取物由多糖類、糖苷、黃酮類等物質(zhì)組成，既可內(nèi)服又可外搽涂，可改善免疫功能，血液流變，能提高前列腺素(PGE2)含量，使血栓素(TXB2)下降，和PGE2/TXB2的比值變化；明顯減少血清過氧化脂質(zhì)(LPO)水平，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，膠原蛋白中游離膚或結(jié)合膚的烴脯氨酸(HO-PRO)含量增加。
本發(fā)明的提取物用作外搽(涂)皮膚表面，可促進(jìn)表皮代謝，延緩角質(zhì)化的發(fā)生(進(jìn)程)。
本發(fā)明的原料藥物的選擇1、藻類節(jié)(螺)旋藻1980年2月，本發(fā)明人將美國(guó)贈(zèng)送的“螺旋藻”進(jìn)行室內(nèi)養(yǎng)，完成一系列生理、生化試驗(yàn)后，置于蘇州東山建池進(jìn)行自然條件下工業(yè)化生產(chǎn)研究成功(1984年10月通過中科院鑒定)后，同年移放張家港市進(jìn)一步擴(kuò)大生產(chǎn)成功(獲1986年蘇州市科技4等獎(jiǎng))，用其制成啤酒(1986年國(guó)際雅典藻類會(huì)議)被公認(rèn)為首創(chuàng)。1990年10月在全國(guó)家科委主持召開(昆明)首屆螺旋藻應(yīng)用研討會(huì)上，予以介紹，向全國(guó)推廣。多年來，“螺旋藻”被國(guó)際間廣泛流傳應(yīng)用誤稱為螺旋藻Spirulina，此項(xiàng)研究經(jīng)南京大學(xué)曾昭琪教授和德國(guó)Tsnang-Pi CHANG研究員合作，應(yīng)用生化、電鏡等檢驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)為節(jié)旋藻Arthrospira(參見《藻類》1990年60期)。經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生部90年3月批準(zhǔn)為我國(guó)新食品資源。本發(fā)明人選育符合《中國(guó)藥典》90年版，《中國(guó)藥用孢子植物》等典藉標(biāo)準(zhǔn)。
2、菌類北冬蟲夏草(蛹蟲草)1987年7月～1990年7月間，本發(fā)明人先后在山東泰安、甘肅武威，多次采得形態(tài)相似、顏色相同，桔黃色含菌的僵硬蟲蛹(子實(shí)體)，經(jīng)分離、培養(yǎng)、馴育，鑒定為蛹蟲草(Ordyceps militaris)將其接種蠶蛹上，置一定的溫、濕、光照條件下人工培養(yǎng)70天左右，獲得與(野生)自然環(huán)境中生長(zhǎng)的蛹蟲草菌(絲)、形態(tài)、顏色均一致的子實(shí)體。
成分分析結(jié)果表明，該子實(shí)體含18種氨基酸，其中蘇氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、酪氨酸、SOD、蟲草素、蟲草多糖、腺嘌呤等含量均高于冬蟲夏草。
3、藥用植物川芎、枸杞。
4、本發(fā)明的藥物組合物中有效成分的功效(1)節(jié)旋藻(螺旋藻)含有極豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，和多種活性物質(zhì)，及人體必需的氨基酸，多種維生素(Vitamin)尤以β-胡羅卜素和藻藍(lán)素(leucocyan)的含量是其它植物無法與其相比的，其脂類的主要成份為不飽和脂肪酸，同時(shí)還含有膽堿脂酶，多糖(Polysaccharids)和鋅(Zn)及微量元素硒(Se)等等。具有增強(qiáng)核酸內(nèi)切酶活性的作用，有明顯的抗幅射，抑制癌細(xì)胞，促進(jìn)新陳代謝和提高免疫功能等多種功效。
氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的主要成份，而細(xì)胞又由蛋白質(zhì)等物質(zhì)組成，所以它對(duì)人體生理機(jī)能有著極重要的作用不僅是提供營(yíng)養(yǎng)而且參與細(xì)胞內(nèi)酶的代謝，亦可增加皮膚光澤等作用。
(2)維生素是維持生命的必需物質(zhì)，人體中如果缺少它們就會(huì)出現(xiàn)各種病癥，皮膚亦不例外，如“糙皮病”就是因?yàn)槿鄙倬S生素A所致，β-胡羅卜素為弱堿性脂溶性化合物，進(jìn)入人體后能轉(zhuǎn)化為維生素A；它還是一種良好的抗氧化劑，能通過清除自由基發(fā)揮防衰老作用。
(3)α-亞麻酸(又稱維生素F)是人體不能合成而又必需的不飽和脂肪酸，是毛發(fā)和皮膚新陳代謝，防止皮膚老化不可缺少的物質(zhì)。
(4)維生素E有明顯的抗衰老作用，同時(shí)又具有防治白發(fā)的作用(800國(guó)際單位/日)。
(5)鋅與人體健康休戚相關(guān)，它可調(diào)節(jié)皮膚、粘膜的知覺，分泌排泄等功能，維護(hù)皮膚的韌性和彈性，缺鋅會(huì)便體內(nèi)激素失調(diào)，皮脂外溢形成皮疹發(fā)生痤瘡。
(6)硒是谷胱甘肽過氧化酶的組成成分，這種酶存在于心、肝、肺、胰臟等重要的臟器中，它可以破壞機(jī)體正常代謝過程中形成的有害的過氧化物，保護(hù)細(xì)胞膜，因而有抗衰老作用。硒還可以某種方式與有毒物質(zhì)砷、鎘、汞等結(jié)合以降低它們的危害，并可抑制苯并芘類、黃曲霉毒素、硝胺等致癌物的誘癌作用。
(7)SOD檢測(cè)得知，藻類和北冬蟲夏草內(nèi)都含有豐富的SOD，其含量分別為1400單位和58單位。我國(guó)藥科大學(xué)徐敞木教授研究發(fā)現(xiàn)“由于自由基(如O2-)的作用，便胞膜不飽和脂肪酸形成過氧化脂肪酸，然后經(jīng)過氧化物分介成丙二醛和磷脂酚乙醇胺，前者是極活潑的交聯(lián)劑，可立即與后者交聯(lián)成螢光色素，然后再與蛋白質(zhì)核酸或脂類結(jié)合成難溶性大分子并沉著在細(xì)胞內(nèi)成自發(fā)螢光的色素、斑點(diǎn)(即脂褐素，俗稱老年斑)。另外，占人體總蛋白量30％的膠原蛋白，是構(gòu)成結(jié)締組織基質(zhì)的成份，由于自由基(O2-)的作用，可使膠原蛋白變性導(dǎo)致結(jié)締組織功能退化，使皮膚失去彈性，出現(xiàn)皺紋。人體在其新陳代謝過程中不斷產(chǎn)生(O2-)，尤其是在疾病狀態(tài)和進(jìn)入中老年期，其體內(nèi)SOD水平不斷減少，消除(O2-)能力不斷下降，因此漸進(jìn)性的產(chǎn)生上述生理性變化。
美國(guó)，巴爾的摩老人研究中心，研究發(fā)現(xiàn)，人體衰老現(xiàn)象(含皮膚老化)與機(jī)體本身自由基產(chǎn)生的濃度及人體自身清除這些自由基的能力(抗氧化能力)密切相關(guān)。德、西班牙等國(guó)研究發(fā)現(xiàn)，在炎癥情況下，由于吞噬細(xì)胞對(duì)外來異物的吞噬而必然產(chǎn)生大量(O2-)，當(dāng)(O2-)水平超過細(xì)胞內(nèi)部SOD含量，則(O2-)將導(dǎo)致炎癥進(jìn)一步發(fā)展。Bcrcl(Arch·Biochcm·Biophtys，179；8，1977)，描述了吞噬細(xì)胞產(chǎn)生(O2-)的過程，也即在吞噬對(duì)外來異物吞噬后形成吞噬泡，在吞噬泡中產(chǎn)生大量有毒的(O2-)。日本廣島大學(xué)研究發(fā)現(xiàn)(O2-)在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。因此使用外源性SOD(在皮膚上常抹)既可以增進(jìn)皮膚抗氧化能力，使皮膚變得光澤有彈性，消除細(xì)皺紋，延緩皮膚老化，又可切斷皮膚炎癥發(fā)展中的中間環(huán)節(jié)，使炎癥自然消退。
(8)蛹蟲草內(nèi)含草素，經(jīng)鑒定是3-脫氧腺嘌呤核苷，(3-dexoxyadenosine)，這種活性物質(zhì)，分子式為C10H13N5O3，它有抑制病毒和細(xì)菌及抗輻射的作用。所含多糖(CS-I)對(duì)小鼠艾氏腹水癌，有抑制作用，對(duì)鱗狀上皮增生有抑制其癌變的作用。尚含有環(huán)狀肽類和SOD(超氧化歧化酶)這些物質(zhì)，被用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、紅斑狼瘡、活動(dòng)性肝炎等自身免疫性疾病。中醫(yī)用它治療“遺精”、“陽(yáng)痿”等癥。
(9)枸杞內(nèi)含維生素A、B1、B2、C、β-胡羅卜素、蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物，礦物質(zhì)、鈣、磷、鐵、鉀等和微量元素，鋰、鍺等，尚含甜菜堿和β-谷甾醇等物質(zhì)。
《本草綱目》載，枸杞主治五內(nèi)邪氣，熱中消渴，周痹風(fēng)濕，久服堅(jiān)筋骨，輕身不老，耐寒暑。下胸氣，客熱頭痛補(bǔ)內(nèi)傷，大勞虛吸，強(qiáng)陰，利大小腸，補(bǔ)精氣諸不足，易顏色變白，明目定神，令人長(zhǎng)壽。
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，枸杞能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高人體抗病能力，促進(jìn)造血功能，使白細(xì)胞增多，保肝降血糖，降血壓，滋陰壯陰，刺激生長(zhǎng)的作用。由于所含的甜菜堿等。
(10)川芎對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有鎮(zhèn)靜作用，對(duì)周圍血管有直接擴(kuò)張作用，有某些抗維生素E缺乏癥和抑制大腸、痢疾、傷寒、霍亂菌等皮膚真菌的作用。
本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案(一)本發(fā)明產(chǎn)品的粗提液的制備本發(fā)明節(jié)旋藻、蛹蟲草、川芎和枸杞各原料藥物的總重量比例為1-4∶1-5∶1-3∶1-2。
(1)節(jié)旋藻與蛹蟲草(1-2∶1-12)磨細(xì)成(80-100目)粉，加10倍量去離子水浸泡24小后煮沸45分鐘，過濾。濾渣再加8倍量的去離子水煮沸，過濾，合并2次濾液，加等量酒精，加熱至40℃半小時(shí)，靜置過夜，過濾，沉淀物加5倍量水與等量酒精，過濾。合并2次濾液，為提取液(a)。
(2)節(jié)旋藻、川芎、枸杞(1-4∶1-3∶1-2)加2倍量的磷酸緩沖液(PH7.3)加入中性蛋白酶1.5(3000單位/g)置35℃水浴中30分鐘后，磁力攪拌30分鐘后，置-20℃速凍，待結(jié)成冰塊后，取出置35℃水浴解凍，再磁力攪拌30分鐘，再速凍，解凍，如此循環(huán)三次，解凍液置4℃，5000r/15分鐘離心，收集上清液，得到提取液(b)。
將提取液(a)與提取液(b)混合攪拌勻，即為本發(fā)明產(chǎn)品的粗提液。
(二)本發(fā)明粗提液的分離純化纖維素層析純化粗提液用蒸餾水稀釋一倍，上DEAE52纖維素柱(3×18cm)，該柱頂預(yù)先己用10MM，PH7.3磷酸緩沖液平衡280mm檢測(cè)，待抽提液全部進(jìn)入纖維素柱后用同一個(gè)緩沖液洗柱至基線，再改用10MM，PH8.0的磷酸液緩沖并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脫和收集。取0.3N Nacl的洗脫峰，加固體硫酸銨至80％飽和度，4℃靜置4小時(shí)后，2500r/15分鐘離心，收集沉淀加水10ml溶介，并對(duì)水透析，更換透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸緩沖液中透析平衡過液。透析后的樣品液，250Or/15分鐘離心去沉淀，上清液以Seohade XG75凝膠柱過濾(15×85cm)凝膠柱預(yù)先用10mm，PH7.3的磷酸液緩沖平衡，一次上樣，以同一緩沖洗脫，分部收集并作CFU-E及電泳分析，冷凍干燥得成品。
(二)SOD提取節(jié)旋藻液和蛹蟲液加酶，反復(fù)凍溶三次后，溶液(藍(lán)色具螢光)，劇烈攪拌30分鐘后，0-4℃靜置過液，緩緩加入0.25倍體積預(yù)冷(-15℃)95％乙醇后，攪拌5-10分鐘，再加入0.15倍體積的預(yù)冷氯仿，攪拌15分鐘靜置之20分鐘，抽濾去掉沉淀，得藍(lán)色清徹透明，粗酶液。加入預(yù)冷(-15℃)丙酮，生成大量白色沉淀。3000r/15分鐘離心，收集沉淀。用約為沉淀量50倍體積的磷酸鉀緩沖液稀釋水各加熱至65℃，15分鐘內(nèi)迅速冷卻至室溫，離心得上清液，加入預(yù)冷丙酮，生成沉淀，沉淀經(jīng)丙酮脫水，溶于去離子水，得20％溶液真空干燥即成品(淡藍(lán)色凍干品)。
本發(fā)明藥物組合物的抗衰老實(shí)驗(yàn)1、材料a、本實(shí)驗(yàn)所用昆明種小鼠(體重25-30g)老年小鼠(20-21同齡)均由蘇州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供。
b、粗提液由本發(fā)明人制造。
c、烴脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，BDH公司產(chǎn)品。
d、硫代巴比妥酸(TBA)，四乙氧基丙烷(TEP)均為AR級(jí)，購(gòu)自上?；瘜W(xué)試劑商店。721分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠。
2、方法取老年小鼠30只，隨機(jī)分成3組，每組10只，分別灌服粗提液60ml/kg，30ml/kg，生理鹽水0.5ml/只，同等條件下，喂養(yǎng)連續(xù)30天，給予本發(fā)明的藥物組合物后2小時(shí)眼眶采血，用于測(cè)定SOD和LPO，處死小鼠后取尾睫測(cè)定羥脯酸含量，并分別進(jìn)行耐力測(cè)定。(依小鼠體重的15％負(fù)重，于水深60cm，水溫22℃的水中游泳，以小鼠沉入水底不再上浮為指標(biāo)，測(cè)定它們的游泳時(shí)間。)粗提液能提高老年小鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD活力，同時(shí)降低血清中LPO含量，大(60ml)、小(30ml)劑量組與生理鹽水組相比較，都有明顯的差異結(jié)果如下表1表1本發(fā)明的藥物組合物對(duì)老年小鼠SOD、LPO、HO-PRO的影響(X±30)


注與生理鹽水組比，**P＜0.001*P＜0.05灌服本發(fā)明的藥物組合物小鼠的游泳時(shí)間比較，如表2粗提液對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響


注與生理鹽水組比，P＜0.05。
SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶，可以清除自由基對(duì)機(jī)體的毒害作用。粗提液可明顯的減少老年小鼠血清中LPO水平，提高老年小鼠紅細(xì)胞內(nèi)SOD活性，因此，提高粗提液可能通過增強(qiáng)SOD活性來減少體內(nèi)LPO的生成，清除體內(nèi)自由基所造成的損害，從而減少疾病的發(fā)生和延緩衰老。
膠原蛋白是構(gòu)成結(jié)締組織細(xì)胞間質(zhì)膠原纖維的主要成分，老年人和老年動(dòng)物膠原蛋白溶解度隨年齡增長(zhǎng)而逐漸降低，膠原蛋白申游離肽或結(jié)合肽的HO-PRO含量降低。HO-PRO和動(dòng)物衰老存在著相關(guān)性，通過測(cè)定HO-PRO可以檢測(cè)動(dòng)物的衰老狀況(田清淶等1991.11)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的藥物粗提液(60ml/kg)可以增加小鼠尾睫HO-PRO含量。
試驗(yàn)再次表明，粗提液有明顯的抑制丙二醛的生成作用，可降低小鼠心肌脂褐素的形成；有抑制單胺氧化酶A的作用。
在動(dòng)物試驗(yàn)取得明顯效果的前題下，經(jīng)76位自愿受試者(年齡在55-74歲之間)，其中以60-70歲居多，占全部受試者58％，以隨機(jī)法將他們分為試驗(yàn)組和對(duì)照組。每組38名。試驗(yàn)組，每人每次口服20ml粗提液，每天早晚各一次；對(duì)照組每人每次口服黃芪液20ml(江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)公司)，每組均口服90天。
臨床觀察項(xiàng)目本發(fā)明人認(rèn)為氣虛血瘀是衰老的病理原因之一，氣虛時(shí)機(jī)體抗病能力，免疫功能均低，尤其是細(xì)胞免疫功能的變化是重要指標(biāo)；同時(shí)觀察血瘀機(jī)制的客觀反映，以血小板聚集與血管壁舒縮變化的情況為依據(jù)，再將一些衰老的體(癥)狀面部皺紋，皮膚松弛，老年斑，記憶力，觸痛，溫感反應(yīng)以及舌苔，舌質(zhì)，脈象等綜合起來，以累積記分法，觀察二組服液前后的積分值的變化，(積分標(biāo)準(zhǔn)明顯4分，不明顯1分，輕度2分，中度3分)，相互參考、印證。
通過臨床癥狀累記積分法比較兩組的情況


NK細(xì)胞活性的變化服用粗提液后，NK細(xì)胞活性明顯提高(P＜0.05)而對(duì)照組服用黃芪液后的NK細(xì)胞活性無顯著差異(P＞0.05)結(jié)果如表3表3服用粗提液后外周血NK細(xì)胞活性的變化


T淋巴細(xì)胞亞群百分比的變化服粗提液后，T淋巴細(xì)胞亞群OKT3、OKT4細(xì)胞的百分比都有明顯增高(P＜0.001＝，OKT4/OKT8比值，雖有所提高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而服黃芪液前后的OKT3，細(xì)胞百分比無顯著提高(P＞0.05)，結(jié)果如下表4表4試驗(yàn)后T細(xì)胞亞群的變化(X±SE)


血漿PGE2、TXB2、TXB2/PGE的變化服用粗提液后，PGE2顯著增高(P＜0.01，TXB2則顯著下降，(P＜0.01，而服黃芪液的對(duì)照組服用前后的PGE2、TXB2都無顯著差異(P＞0.05)，結(jié)果如表5表5試驗(yàn)后外周血PGE2、TXB2、TXB2/PGE2的變化(X±SE)


由于老年人的衰老可以從多種途徑來檢測(cè)，目前一般認(rèn)為TXB、PGE的平衡變化能比較客觀的反映出血小板的聚集情況與血管的舒縮功能，本研究結(jié)果再次表明，粗提液能顯著提高PGE2的含量，使TXB2下降，且TXB2/PGE2的變化有顯著意義。
典型病例1吳XX，男，55歲，高血脂癥20年，曾服月見草，多烯康，脂必妥等。服粗提液前檢查血脂水平，TC286mg/dl，S-TGl16.4mg/dl，HDL-C49.7mg/dl。服用粗提液60天后，血脂水平TC240mg/dl，S-TG90.8mg/dl，HDL-C46.6mg/dl。
病例2黃XX，女，63歲，勞累性心膠痛，每逢勞累時(shí)，即發(fā)作2～3次，心電圖示III、aVFS-T段壓低0.5mmT波倒置，Tv4-6曳倒，服用粗提液60天后，心電圖S-T段上升至等電位線，TIII、aVF、V4-6波直立，心電圖恢復(fù)正常。
病例3張XX，女69歲，TCD提示“腦動(dòng)脈硬化”，血流不對(duì)稱，服粗提液90天后，自覺癥狀頭暈、頭痛等消失或緩解。TCD示血流對(duì)稱，腦動(dòng)脈硬化癥狀減輕。
病例4沈XX，男，70歲，末服粗提液時(shí)，血液中含SOD26.4單位/ml，服粗提液90天，血液中SOD上升至38.5單位。
粗提液的外搽--防皺試驗(yàn)1989年初，對(duì)螺旋藻化妝品的劑型膏、霜或乳劑的配比和其最佳用量，形成條件進(jìn)行了反復(fù)的研究，成功制成各種劑型的樣品。
在動(dòng)物試驗(yàn)后證實(shí)其無毒無害，無任何刺激，對(duì)皮膚具有優(yōu)良的護(hù)膚、美膚作用的基礎(chǔ)上，開始在人體上進(jìn)行涂抹試驗(yàn)。方法是受試者每天搽用一次，用前冷水或溫水(以冷水為佳)洗凈，然后用消毒棉球?qū)pirulina霜或乳搽在受試者一只手背皮膚上，另一只手背皮膚不搽任何物品及處理。經(jīng)10天搽抹后，2只手背皮膚發(fā)生明顯不同，搽抹Spirulina的手背皮膚白嫩、細(xì)膩、有光澤，在用螺旋藻化妝品初步見成效的基礎(chǔ)上，本發(fā)明人改用粗提液搽的方法進(jìn)一步擴(kuò)大試驗(yàn)范圍，先從內(nèi)部進(jìn)行試驗(yàn)，受試人數(shù)為230人次，經(jīng)連續(xù)6個(gè)月試用，其結(jié)果令人滿意后，再擴(kuò)大到450人次的臨床觀察，通過連續(xù)三年的觀察試用，進(jìn)一步證實(shí)粗提液具有較強(qiáng)的滲透作用，可促進(jìn)皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)皮膚細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)，對(duì)延緩皺紋，延緩衰老都有積極的作用。對(duì)皮脂溢出座瘡、消退雀斑、色素沉著、黃褐斑，表皮細(xì)胞脫落(頭皮屑)，魚鱗癬等都有各種程度的治療效果，其有效率分別在85％～95％之間。
其機(jī)理國(guó)際衛(wèi)生組織等都一致公認(rèn)Vc、VE，B族及微量元素等物質(zhì)，可將氧化型黑色素轉(zhuǎn)化為還原型，使多巴醌還原成多巴，抑制黑色素形成。同時(shí)，可減弱紫外線對(duì)皮膚的損害。黃褐斑，大都由于內(nèi)分泌障礙引起，色素沉著于皮膚所致。由此表明，粗提液對(duì)皮膚的衰老同樣具有抗衰老、延緩作用。
病例1謝XX，女，37歲，臉上患有黃褐斑，曾試用多種化妝品，均末有效，甚至有些化妝品引起皮膚灼痛或紅斑，使用粗提液90天后，臉部黃褐斑明顯減少。
病例2王XX，女，45歲，小學(xué)教師，臉部黃褐斑，使用粗提液三個(gè)月后，黃褐斑基本消退。
病例3周XX，女，48歲，營(yíng)業(yè)員，眼部(魚尾紋)及口角處皺紋明顯，口服，外搽粗提液90天后，眼及口部的皺紋明顯緩減。
病例4陳XX，女，30歲，農(nóng)村婦女，常年手、腳部干燥開裂，痛疼，影響勞動(dòng)、行走，外搽粗提液后，2天即不大疼痛，4～5天后裂口即愈合，連續(xù)使用30天后，手部的粗糙狀明顯的減輕。
本發(fā)明系列化妝品之制作的用料1、口紅、唇膏、防唇裂膏等石臘，蜂臘，凡士林，蓖麻油，藻紅蛋白(SOD)，Ve，香精，粗提液等。
2、胭脂(膏、餅、液)滑石粉，高嶺土，蜂臘，液體石臘，白凡士林，甘油，粘合劑，粗提液，藻紅蛋，SOD，Ve，香精等。
3、眼影膏(液)蜂臘，羊毛脂，滑石粉，粗提液，高嶺土，凡士林；丙二醇，藻藍(lán)蛋白，SOD，VE，香精等。
4、指甲油乙酸乙脂，乙酸丁脂，磷酸三甲酚酷，鄰苯二甲酸丁二脂，硝化纖維素，藻紅蛋白，VE，滲透劑等。
5、防曬膏硅酮(D-C-225)營(yíng)養(yǎng)液，羊毛脂，硬脂酸水核酸二丙二醇脂，對(duì)烴基苯甲酸甲脂，甘油，藻藍(lán)蛋白和藻紅蛋白，SOD，VE，香精，粗提液等。
6、去(防)皺膏核桃仁，杏仁，甘油，羊毛脂營(yíng)養(yǎng)液，藻藍(lán)藻紅蛋SOD，VE，香精，粗提液等。
7、防皺液絲瓜汁(濾)，乙醇營(yíng)養(yǎng)液，蜂蜜，藻紅和藻藍(lán)蛋白，SOD，VE，香精，粗提液等。
8、除雀斑液黃瓜汁，檸檬汁，乙醇營(yíng)養(yǎng)液，蜂蜜，藻紅藍(lán)蛋，SOD，VE，香精，粗提液等。
9、去斑霜桃花，冬瓜籽，蜂蜜營(yíng)養(yǎng)液，藻藍(lán)蛋白 SOD，VE，香精，粗提液等。
10、洗發(fā)香波AEs、6501、B5-12營(yíng)養(yǎng)液，珠光劑，雙酯，K12，E.D.T.A，藻藍(lán)紅蛋白--SOD，檸檬酸，香精，粗提液等。
人體由于免疫力下降，特別對(duì)老年人而論，就更容易受到外界的干擾，導(dǎo)致全身生理調(diào)節(jié)能力的失衡，本實(shí)驗(yàn)，應(yīng)用癥狀變化累積記分法，對(duì)服用粗提液前后及對(duì)照結(jié)果予以比較，表明粗提液能夠改善老年人的臨床癥狀，對(duì)平衡失調(diào)有較好的修復(fù)效果。同時(shí)，通過細(xì)胞免疫功能的變化，NK細(xì)胞活性變化及T淋巴細(xì)胞亞群的百分率變化，均表明了口服粗提液能提高老年人的NK細(xì)胞活性及增高OKT3、OKT4細(xì)胞的百分率，OKT4/OKT8的比值也有所提高，因此，表明粗提液確實(shí)能改善老年人的細(xì)胞免疫功能，顯示了提高老年人的抗病能力，即維護(hù)機(jī)體的防御系統(tǒng)能力。
十多年的試驗(yàn)、研究，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，臨床試用先后都表明粗提液有較明確的抗衰老作用，能改善老年人健康水平，對(duì)延緩衰老有一定的效果。
本發(fā)明的組合物和使用的方法已經(jīng)一般地被公開了，并且通過特定的病例參考，病例并非限制本領(lǐng)域普通技術(shù)人員發(fā)生的無需花費(fèi)創(chuàng)造性能力和變動(dòng)，除非指明。
實(shí)施例11、制備粗提液菌類北冬蟲夏草(又稱蛹蟲草)3.78 節(jié)旋藻0.64。實(shí)例北冬蟲夏草(蛹蟲草)37.8g，節(jié)旋藻6.4g混合后磨細(xì)，加2倍量磷酸緩沖液(PH7.3)加中性蛋白酶(3000單位/克)1.5％，置35℃水浴中30分鐘后，磁力攪拌30分鐘，置-20℃速凍，待結(jié)成冰塊后，取出置35℃水浴解凍，再磁力攪拌30分鐘，再速凍，如此循環(huán)三次后，解凍液置40℃，5000r/分鐘離心，收集上清液，即成“b”液。
藻類與中草藥混合物，其比例為節(jié)旋藻2.46 川芎1.84 枸杞1.28實(shí)例節(jié)旋藻24.6g，川芎18.4g，枸杞12.89g，共55.89g。磨細(xì)(過80目篩后)加560ml去離子水，浸泡24小時(shí)后煮沸45分鐘，過濾取上清液。
濾渣加8倍量的去離子水，煮沸，過濾取上清液。
合并2次濾液加等量酒精，加熱至40℃半小時(shí)后，靜置過夜，過濾取上清液。
沉淀物加5倍量水和等量的酒精，過濾，合并2次濾液，即成“粗提液”a。
將粗提液“a”和“b”液混合拌勻，即成粗提液。該粗提液以藥學(xué)上常規(guī)的制藥技術(shù)，加入各種藥學(xué)上可接受的常規(guī)助劑即可制備成口服液、顆粒劑、膠囊劑、片劑等各種劑型。
實(shí)施例2本發(fā)明粗提液的分離純化纖維素層析純化粗提液用蒸餾水稀釋一倍，上DEAE52纖維素柱(3×18cm)，該柱頂預(yù)先己用10MM，PH7.3磷酸緩沖液平衡280mm檢測(cè)，待抽提液全部進(jìn)入纖維素柱后用同一個(gè)緩沖液洗柱至基線，再改用10MM，PH8.0的磷酸液緩沖并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脫和收集。取0.3N Nacl的洗脫峰，加固體硫酸銨至80％飽和度，4℃靜置4小時(shí)后，2500r/15分鐘離心，收集沉淀加水10ml溶介，并對(duì)水透析，更換透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸緩沖液中透析平衡過液。透析后的樣品液，250Or/15分鐘離心去沉淀，上清液以Seohade XG75凝膠柱過濾(15×85cm)凝膠柱預(yù)先用10mm，PH7.3的磷酸液緩沖平衡，一次上樣，以同一緩沖洗脫，分部收集并作CFU-E及電泳分析，冷凍干燥得成品。
本發(fā)明的藥物組合物，其中的節(jié)旋藻、蛹蟲草、川芎和枸杞的重量比例為31∶37.8∶18.4∶12.89。本發(fā)明的藥物組合物，其特征在于它可以采用藥學(xué)上常規(guī)的技術(shù)和可接受的助劑制備成任一臨床上可接受的劑型。
實(shí)施例3SOD提取提取液a加酶，反復(fù)凍溶三次后，藻液(藍(lán)色具螢光)，劇烈攪拌30分鐘后，0-4℃靜置過液，緩緩加入0.25倍體積預(yù)冷(-15℃)95％乙醇后，攪拌5-10分鐘，再加入0.15倍體積的預(yù)冷氯仿，攪拌15分鐘靜置之20分鐘，抽濾去掉沉淀，得藍(lán)色清徹透明，粗酶液。加入預(yù)冷(-15℃)丙酮，生成大量白色沉淀。3000r/15分鐘離心，收集沉淀。用約為沉淀量50倍體積的磷酸鉀緩沖液稀釋水各加熱至65℃，15分鐘內(nèi)迅速冷卻至室溫，離心得上清液，加入預(yù)冷丙酮，生成沉淀，沉淀經(jīng)丙酮脫水，溶于去離子水，得20％溶液真空干燥即成品(淡藍(lán)色凍干品)。
權(quán)利要求
1.一種抗衰老的藥物組合物，它是由以下步驟制備而成的(1)節(jié)旋藻與蛹蟲草1-2∶1-12磨細(xì)成80-100目的粉，加10倍量去離子水浸泡24小后煮沸45分鐘，過濾。濾渣再加8倍量的去離子水煮沸，過濾，合并2次濾液，加等量酒精，加熱至40℃半小時(shí)，靜置過夜，過濾，沉淀物加5倍量水與等量酒精，過濾。合并2次濾液，為提取液a；(2)節(jié)旋藻、川芎、枸杞1-4∶1-3∶1-2加2倍量的磷酸緩沖液PH7.3加入中性蛋白酶1.5置35℃水浴中30分鐘后，磁力攪拌30分鐘后，置-20℃速凍，待結(jié)成冰塊后，取出置35℃水浴解凍，再磁力攪拌30分鐘，再速凍，解凍，如此循環(huán)三次，解凍液置4℃，5000r/15分鐘離心，收集上清液，得到提取液b；將提取液a與提取液b混合攪拌勻，即為本發(fā)明產(chǎn)品的粗提液。
2.權(quán)利要求
1的藥物組合物，其中的節(jié)旋藻、蛹蟲草、川芎和枸杞的重量比例為31∶37.8∶18.4∶12.89。
3.權(quán)利要求
1的藥物組合物，其特征在于它可以采用藥學(xué)上常規(guī)的技術(shù)和可接受的助劑制備成任一臨床上可接受的劑型。
4.權(quán)利要求
1的藥物組合物的制備方法，其特征在于它包括以下步驟(1)節(jié)旋藻與蛹蟲草1-2∶1-12磨細(xì)成80-100目的粉，加10倍量去離子水浸泡24小后煮沸45分鐘，過濾。濾渣再加8倍量的去離子水煮沸，過濾，合并2次濾液，加等量酒精，加熱至40℃半小時(shí)，靜置過夜，過濾，沉淀物加5倍量水與等量酒精，過濾。合并2次濾液，為提取液a；節(jié)旋藻、川芎、枸杞1-4∶1-3∶1-2加2倍量的磷酸緩沖液PH7.3加入中性蛋白酶1.5置35℃水浴中30分鐘后，磁力攪拌30分鐘后，置-20℃速凍，待結(jié)成冰塊后，取出置35℃水浴解凍，再磁力攪拌30分鐘，再速凍，解凍，如此循環(huán)三次，解凍液置4℃，5000r/15分鐘離心，收集上清液，得到提取液b；將提取液a與提取液b混合攪拌勻，即為本發(fā)明產(chǎn)品的粗提液(2)粗提液用蒸餾水稀釋一倍，上3×18cm DEAE52纖維素柱，該柱頂預(yù)先已用10MM，PH7.3磷酸緩沖液平衡280mm檢測(cè)，待抽提液全部進(jìn)入纖維素柱后用同一個(gè)緩沖液洗柱至基線，再改用10MM，PH8.0的磷酸液緩沖并加0.3N，和0.6N的Nacl部分洗脫和收集。取0.3N Nacl的洗脫峰，加固體硫酸銨至80％飽和度，4℃靜置4小時(shí)后，2500r/15分鐘離心，收集沉淀加水10ml溶介，并對(duì)水透析，更換透析液二次，最后置500ml，10mm，PH7.3的磷酸緩沖液中透析平衡過液。透析后的樣品液，250Or/15分鐘離心去沉淀，上清液以15×85cmSeohade XG75凝膠柱過濾，凝膠柱預(yù)先用10mm，PH7.3的磷酸液緩沖平衡，一次上樣，以同一緩沖洗脫，分部收集，冷凍干燥得成品。
5.權(quán)利要求
1的藥物組合物在化妝品中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種抗衰老的藥物組合物及其制備方法，含節(jié)(螺)旋藻、蛹蟲草等原料藥物，本發(fā)明又公開了這種藥物組合物還可用于化妝品領(lǐng)域，本發(fā)明還公開了一種SOD的提取方法。
文檔編號(hào)A61K38/43GKCN1176697SQ02121396
公開日2004年11月24日 申請(qǐng)日期2002年6月19日
發(fā)明者李祥麟, 黃檀溪 申請(qǐng)人:李祥麟導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan