一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物及其制備方法與流程

本發明屬于中藥組合物
技術領域：
，具體涉及一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物及其制備方法。
背景技術：
：阿霉素是蒽環類抗生素，自20世紀60年代發現并應用于多種癌癥的治療，現在仍然是最有效的抗癌藥物之一。適用于惡性淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、骨及軟組織肉瘤等多種腫瘤。但由于嚴重的心臟毒性，其臨床應用受到一定影響。近年來，對阿霉素心臟毒性的研究較多，阿霉素中毒分為急性毒性、亞急性毒性和慢性毒性。急性中毒發生于單次使用或一個療程后，常見癥狀有低血壓、心律失常、心臟功能不全等，偶爾可發生心肌梗死。因此，尋找可以有效解除阿霉素心臟毒性的物質已經成為目前亟待解決的問題，但目前尚缺乏有效預防和治療方法。植物化學研究表明，附子生物堿是附子中的有效組分、干姜揮發油和姜辣素類化合物是干姜中的有效組分、甘草黃酮和總皂苷是甘草中的有效組分。四逆湯通過用附子生物堿、干姜揮發油、姜辣素類化合物、甘草黃酮、甘草皂苷五大類組分、多途經、整合調節機制發揮抑制阿霉素心臟毒性的作用，具有高度復雜性和整體性。但傳統的四逆湯中藥方劑配伍目前尚停留在中藥飲片的配伍，成分龐雜繁復，藥效物質基礎不明確，難于質量控制。四逆湯抑制阿霉素心臟毒性的各組方藥材有效部位的功效各有不同和側重，用有效部位的配伍代替全方，既具備中藥整體的作用特點，同時降低了其復雜性，便于藥物的質量控制。因此，提供更加方便有效的抑制阿霉素心臟毒性的有效部位復方組合物具有重要的臨床意義。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題在于針對上述現有技術的不足，提供了一種用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。該中藥組合物能有效的抑制阿霉素心臟毒性，對患者治療腫瘤的同時能夠減輕阿霉素對心臟產生的副作用，解決了目前患者服用阿霉素的同時帶來的低血壓、心律失常、心臟功能不全，甚至心肌梗死等副作用。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物，其特征在于，由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物30％～42％、干姜揮發油提取物1％～3％、干姜姜辣素類化合物提取物24％～28％、甘草黃酮提取物15％～22％和甘草皂苷提取物15％～22％。上述的一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物，其特征在于，由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物32％～40％、干姜揮發油提取物2％、干姜姜辣素類化合物提取物24％～26％、甘草黃酮提取物16％～20％和甘草皂苷提取物16％～20％。上述的一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物，其特征在于，由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物36％、干姜揮發油提取物2％、干姜姜辣素類化合物提取物26％、甘草黃酮提取物18％和甘草皂苷提取物18％。上述的一種抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物，其特征在于，所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％，所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為90％～99％，所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為60％～80％，所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為30％～60％，所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為40％～60％。另外，本發明還提供了一種制備如上述抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物的方法，該方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2～3次，每次提取3h，合并前后2～3次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的7～9倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5～2倍；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的滲漉速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積的純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。上述的方法，其特征在于，步驟101中每次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍。上述的方法，其特征在于，步驟二中所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍。本發明與現有技術相比具有以下優點：1、本發明的中藥組合物中附子生物堿、干姜揮發油、姜辣素類化合物、甘草黃酮、甘草皂苷五大類組分、多途經、整合調節機制發揮抑制阿霉素心臟毒性的作用，具有高度復雜性和整體性，并且對機體的心肌組織代謝正常。2、本發明制備的中藥組合物抑制阿霉素心臟毒性的藥效不僅優于傳統中藥的湯劑，且服用方便，質量穩定可控，可長期保存。3、本發明制備附子生物堿提取物、干姜揮發油提取物、干姜姜辣素類化合物提取物、甘草黃酮提取物和甘草皂苷提取物的方法簡單，得到的有效成分的純度較高，并且方法易于操作。下面通過附圖和實施例對本發明的技術方案作進一步的詳細說明。附圖說明圖1是本發明實施例1步驟一中制備的附子生物堿有效組分的高效液相色譜分析譜圖。圖2是本發明實施例1步驟二中干姜揮發油提取物的氣相色譜-質譜分析譜圖。圖3是本發明實施例1步驟三中制備的干姜姜辣素類化合物提取物的高效液相色譜分析譜圖。圖4是本發明實施例1步驟四中制備的甘草黃酮提取物的高效液相色譜分析譜圖。圖5是本發明實施例1步驟五中制備的甘草皂苷提取物的高效液相色譜分析譜圖。圖6是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中正常對照組SD大鼠在400倍光鏡下觀察組織形態學照片。圖7是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中阿霉素模型組SD大鼠在400倍光鏡下觀察組織形態學照片。圖8是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中阿霉素+傳統中藥水煎組SD大鼠在400倍光鏡下觀察組織形態學照片。圖9是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中阿霉素+中藥組合物組SD大鼠在400倍光鏡下觀察組織形態學照片。圖10是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中心肌組織代謝物氣相色譜質譜的指紋圖譜。圖11是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中正常對照組和阿霉素模型組經過主成分分析的得分圖。圖12是本發明實施例1制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗中正常對照組與阿霉素模型組之間的S-plot圖。具體實施方式實施例1本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物36％、干姜揮發油提取物2％、干姜姜辣素類化合物提取物26％、甘草黃酮提取物18％和甘草皂苷提取物18％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為30％～60％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。一、對本實施例中步驟一制備的附子生物堿提取物的成分進行分析：(1)附子生物堿提取物中附子生物堿含量測定：稱取步驟一中制備的附子生物堿提取物的固體粉末0.1003g，加乙醇5ml溶解，調PH至10～11，氯仿萃取2次，每次10ml，取氯仿層揮干，殘渣加5mL乙醇使其溶解，精密加入15mL硫酸滴定液(硫酸滴定液的摩爾濃度為0.01mol·L-1)、15mL水與3滴甲基紅指示液，用氫氧化鈉滴定液(氫氧化鈉滴定液的摩爾濃度為0.02mol·L-1)滴定至黃色。以1mL硫酸滴定液(硫酸滴定液的摩爾濃度為0.01mol·L-1)相當于12.9mg的烏頭(烏頭按化學式C34H47NO11計)計算，0.1g附子生物堿提取物中總生物堿的含量為48.096mg。(2)附子生物堿提取物中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的含量分析：樣品制備：精密稱取自制的生物堿有效組分0.1005g，溶于10mL甲醇，超聲30min，離心，取上清液，加甲醇定容至10mL，過0.22μm的有機膜，得供試品溶液備用。高效液相色譜(HPLC)條件：色譜柱為WatersTerraC18柱(3.0mm×100mm，3.5μm)，流動相：乙腈：5mM醋酸銨水溶液，梯度見表1，流速0.5ml/min；檢測波長235nm，柱溫25℃，進樣量5μL。表1附子生物堿組分的洗脫條件時間乙腈5mM醋酸銨水溶液015％85％10min26％74％20min30％70％25min30％70％圖1為本實施例步驟一中制備的附子生物堿有效組分的高效液相色譜分析譜圖(HPLC圖譜)，經HPLC測定生物堿組分中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿含量分別為48.15mg·g-1，26.71mg·g-1，8.87mg·g-1，并且沒有檢測到毒性非常強的單酯型的新烏頭堿、烏頭堿和次烏頭堿。二、對本實施例步驟二中制備的干姜揮發油提取物的分析：樣品制備：吸稱取本實施例步驟二中制備的干姜揮發油提取液10μL，用乙醚定容至10mL備用，得供試品溶液備用。氣相色譜－質譜(GC-MS)分析條件：色譜柱為TR-35MS石英毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；進樣口溫度：250℃。程序升溫：起始溫度60℃，3℃/min升至80℃，保持10min，3℃/min升至140℃，保持15min，6℃/min升至270℃，保持10min；載氣：高純氦氣，流速1.0mL/min。質譜電子轟擊源(EI)；離子源溫度：250℃；接口溫度：280℃；電子能量：70eV；質量掃描方式：全部掃描范圍：10～400amu。進樣量1μL。圖2是本實施例步驟二中制備的干姜揮發油提取物的氣相色譜-質譜分析譜圖，從譜圖上分析可知，其中相對含量最高的3種成分分別為α-姜烯、α-金合歡烯和β-倍半菲蘭烯，分別占揮發油提取物質量的32.24％、14.98％和13.39％。三、對本實施例步驟三中制備的干姜姜辣素類化合物提取物的分析：(1)姜辣素類化合物含量測定：稱取本實施例步驟三中制備的干姜姜辣素類化合物提取物粉末0.1029g，用乙醇溶解，定容至1000ml，作為供試品溶液。以香草醛作對照標準，以2.001作為香草醛質量換算姜辣素類化合物質量的換算系數(姜辣素類化合物中6，8，10-姜酚的混合平均分子量為304.46，香草醛分子量為152.15，即304.46/152.15＝2.001)，在278nm波長處，采用紫外分光光度法測定姜辣素類化合物類的化合物含量為787.54mg·g-1。(2)干姜姜辣素類化合物提取物中6-姜酚的含量測定：樣品制備：精密稱取自制的干姜姜辣素類化合物提取0.1012g，溶于10mL甲醇，超聲30min，離心，取上清液，加甲醇定容至100mL，過0.22μm的有機膜，得供試品溶液備用；HPLC條件：色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：甲醇－水(60：40)，流速：1.0mL/min；檢測波長：282nm，柱溫：30℃；進樣量：10μL。圖3是本實施例步驟三中制備的干姜姜辣素類化合物提取物的高效液相色譜分析譜圖(HPLC譜圖)，由HPLC譜圖測定干姜姜辣素類化合物提取物中6-姜酚的含量為152.28mg·g-1。四、對本實施例步驟四中制備的甘草酮提取物進行分析：(1)甘草黃酮的含量測定：稱取自制甘草黃酮粉末0.2012g,用甲醇溶解，定容至100mL，作為供試品溶液。精確吸取提取液0.5ml，加3ml蒸餾水，5％亞硝酸鈉溶液0.5mL放置6min，加10％硝酸鋁溶液0.5mL混勻后放置6min，加5％氫氧化鈉2.5mL混勻，放置15min后蒸餾水定容至10mL。以相應溶劑為空白,以蘆丁為對照品，在波長510nm處，采用紫外分光光度法測定甘草黃酮含量為550.67mg·g-1。(2)甘草黃酮提取物中甘草苷的含量測定：樣品制備：精密稱取自制的甘草黃酮提取物0.1024g，溶于10mL甲醇，超聲30min，離心，取上清液，加甲醇定容至100mL，過0.22μm的有機膜，得供試品溶液備用。HPLC條件：色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：乙腈-0.5％醋酸水(20：80)，流速：1.0mL/min；檢測波長：276nm，柱溫：30℃；進樣量：10μL。圖4是本實施例步驟四中制備的甘草黃酮提取物的高效液相色譜分析譜圖(HPLC譜圖)，由HPLC測定甘草黃酮提取物中甘草苷的含量為320.33mg·g-1，甘草苷是甘草黃酮中的一種有效成分，說明甘草黃酮提取物中甘草黃酮中的有效成分含量較高。五、對本實施例步驟五中制備的甘草皂苷提取物進行分析：(1)甘草皂苷含量測定：稱取本實施例步驟五中制備的甘草皂苷提取物粉末0.5002g，置于100mL圓底燒瓶中，精密加入質量濃度為1％的氨水50mL，回流提取60min，過濾，除去濾液，殘渣用1％氨水溶解并轉移至25mL量瓶，加水稀釋至刻度，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液0.2mL，置于10mL具塞試管中，70℃水浴揮發溶劑，加入5％的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，再加入高氯酸0.8mL，搖勻，于55℃水浴中加熱20min，立即取出用流水冷卻至室溫，加入冰醋酸5ml稀釋，搖均。以甘草酸為對照品，在560nm波長處，采用紫外分光光度法測定甘草皂苷物含量為535.33mg·g-1。甘草皂苷提取物中甘草酸的含量測定：樣品制備：精密稱取自制的甘草皂苷有效組分0.1102g，溶于10mL甲醇，超聲30min，離心，取上清液，加甲醇定容至100mL，過0.22μm的有機膜，得供試品溶液備用。HPLC條件：色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動相：乙腈－2％醋酸溶液(37：63)，流速：1.0mL/min；檢測波長：254nm，柱溫：30℃；進樣量：10μL。圖5是本實施例步驟五中制備的甘草皂苷提取物的高效液相色譜分析譜圖，HPLC測定甘草皂苷提取物中甘草酸的含量為318.92mg·g-1，甘草酸為甘草皂苷中的一種成分，對于阿霉素心臟毒性具有很好的療效，說明甘草皂苷提取物中甘草皂苷中的有效成分含量較高。六、本實施例制備的中藥組合物對阿霉素心臟毒性的藥效試驗1.實驗方法SD大鼠48只(中國人民解放軍第二軍醫大學動物中心)，重量80～220g。大鼠被隨機分為四組：正常對照組(標記為A組)、阿霉素模型組(標記為B組)、阿霉素+傳統中藥水煎組(標記為C組)、阿霉素+中藥組合物組(標記為D組)，每組12只。阿霉素模型組、阿霉素+傳統中藥水煎組、阿霉素+中藥組合物組的大鼠，在兩周內腹腔注射6次鹽酸阿霉素(每kg體重給2.5mg鹽酸阿霉素)，其累積給藥量達到15mg/kg/B.W.。阿霉素+傳統中藥水煎組和阿霉素+中藥組合物組，在第一次注射鹽酸阿霉素后的連續14天內，分別灌服給四逆湯水提物和中藥組合物，阿霉素+傳統中藥水煎組給藥劑量為5g/kg四逆湯水提物，阿霉素+中藥組合物組給藥劑量為50mg/kg中藥組合物。對于健康對照組和阿霉素模型組，每次灌服等量蒸餾水。在第15天，眼眶取血進行生物化學指標的測定，采血后進行血流動力學評估，血流動力學評估之后，處死大鼠，立即取心臟，每組中4只大鼠心臟分離左心室，立即置于4％多聚甲醛中固定用于HE染色的分析。每組其余8只大鼠心臟，立即置于液氮中，凍存用于藥效的代謝組學評價。阿霉素+中藥組合物組中的重要有效組分組合物是由本發明實施例1制備得到的中藥組合物，阿霉素+傳統中藥水煎組中傳統中藥水煎組的藥物是由附子、干姜和甘草加水煎煮制得。2.觀測指標(1)血清肌酸激酶(CK)，肌酸激酶－MB同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)的含量測定將采集實驗各組大鼠的血樣，置于干燥試管內，經高速離心分離血清，-20℃冰箱保存。用本酶聯免疫法測定血清肌酸激酶(CK)，肌酸激酶－MB同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)的濃度。結果見表2。表2各組大鼠血清肌酸激酶(CK)，肌酸激酶－MB同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)含量的比較分組CK(U/L)CK-MB(U/L)LDH(U/L)A組984.8±187.51012.6±484.1722.7±190.4B組2487.1±390.3**3179.8±780.3**1723.2±490.7**C組1538.3±392.5#2493.4±414.9#1308.9±318.2#D組1128.4±422.7#1767.5±523.7#1045.6±434.5#注：與正常對照組比較**p<0.01，與阿霉素模型組比較#p<0.05如表2所示，與正常對照組比，阿霉素模型組的血清肌酸激酶(CK)，肌酸激酶-MB同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)顯著升高(P<0.01)，提示阿霉素引起心肌損壞。C組、D組可顯著降低阿霉素引起的大鼠血清中血清肌酸激酶(CK)，肌酸激酶-MB同工酶(CK-MB)和乳酸脫氫酶(LDH)(P<0.05)，表明傳統中藥水煎液和中藥組合物可以減輕阿霉素引起的心肌壞死，并且實驗數據表明中藥組合物對這些指標的降低效果明顯優于傳統中藥水煎液。(2)血流動力學評估兩周后，當完成最后一次給藥，各組的動物都用戊巴比妥鈉(50mg/kg/B.W.，i.p.)麻醉，右側頸總動脈插入一根微量血壓探頭連接一臺血壓檢測儀(SPR407，MillarInstrumentsInc.,美國)記錄動脈壓。然后，探頭通過右側頸總動脈插入左心室中，記錄左心室收縮壓(LVSP)，左心室舒張壓末期(LVEDP)，最大升壓速率(+dP/dtmax)和最大減壓速率(-dP/dtmax)表3各組大鼠的血流動力學參數測定值注：與正常對照組比較**p<0.01，與阿霉素模型組比較#p<0.05如表2所示，與正常對照組比，阿霉素模型組的左心室收縮壓(LVSP)、壓力增加的最大速率(+dp/dt的最大值)和最大減壓速率(-dp/dt的最大值)顯著下降(P<0.01)，左心室舒張壓末期(LVEDP)顯著升高(P<0.01)，提示阿霉素引起嚴重的心臟毒性作用。C組、D組可顯著升高阿霉素引起的大鼠左心室收縮壓(LVSP)、壓力增加的最大速率(+dp/dt的最大值)和最大減壓速率(-dp/dt的最大值)(P<0.05)，降低左心室舒張壓末期(LVEDP)(P<0.05)，表明傳統中藥水煎液和中藥組合物可以減輕阿霉素引起的心臟毒性，并且實驗數據表明中藥組合物組對這些指標的回調作用優于傳統中藥水煎組。(3)HE染色心肌病理形態學評價完成血流動力學評估，將大鼠開胸留取心臟標本，每組中的4只大鼠心臟，分離左心室，于4℃的4％多聚甲醛中固定。24h后取心肌標本，常規取材、脫水、石蠟包埋，沿左室長軸線每隔1mm橫斷面切取數張5μm厚的組織切片，常規HE染色。400倍光鏡下觀察組織形態學變化結果見圖6、圖7、圖8和圖9。左心室HE染色的病理切片顯示，與正常對照組(A組)相比，阿霉素造模后，心肌束的排列紊亂，心肌細胞受損明顯，包括出血和壞死。給予四逆湯水煎液、中藥組合物組治療后，心肌細胞的損傷明顯得到改善。(4)心肌組織代謝組學評價中藥組合物對阿霉素心臟毒性作用完成血流動力學評估，將大鼠開胸留取心臟標本，每組中的8只大鼠心臟，立即置于液氮中凍存，采用代謝組學方法對其藥效進行進一步的評價。①心肌組織樣品處理：50mg的心臟組織加入200μL生理鹽水勻漿，然后4℃下13000rpm離心15min，100μL上清加入5μL1mg/mL核糖醇作內標，加入4倍體積(400μL)的冰提取液(甲醇:乙腈:丙酮＝1:1:1)，渦旋30s，4℃超聲抽提10min，4℃13000rpm離心15min，取上清300μL轉移到玻璃管，氮氣吹干，衍生化前50℃烘干15min。衍生化：75μL15μg/μL的甲氧胺吡啶溶液，渦旋5min，70℃烘箱放置1h；75μLMSTFA(內含質量百分含量為1％的三甲基氯硅烷)，渦旋5min，室溫1h；加入200μL正庚烷渦旋30s，4000rpm離心10min，取上清200μL至樣品瓶，進樣1.0μL。②心肌組織樣品的氣相色譜-質譜(GC-MS)分析：采用Thermo-FinniganTraceDSQ氣質聯用儀(ThermoElectronCorporation)。進樣量1.0μL，TR-5MS毛細管柱(30m×250μm×0.25μm)、載氣為氦氣，柱流速為1mL/min，進樣口溫度為260℃；接口溫度為260℃；離子源溫度為200℃；四級桿溫度150℃，EI離子源70eV；采用全掃描模式，m/z:60-600；程序升溫條件：70℃保持4min，以4℃/min升至220℃，然后8℃/min升至310℃后保持10min。圖10展示了某一心肌組織樣本1次進樣分析后得到的心肌組織代謝物氣相色譜質譜的指紋圖譜，橫向坐標表示出峰時間，縱向坐標表示峰的強度。③阿霉素心臟毒性生物標志物的篩選與鑒定：原始數據經ThermoXconvert軟件轉換為通用的NetCDF格式，轉換后的數據進一步通過XCMS數據處理軟件，對各組大鼠心肌組織樣本代謝指紋圖譜數據進行去噪音、質譜峰提取、反卷積處理、峰排列、對齊、合并、峰合并后開始列表去噪音、縫隙填補處理，得到各個峰的峰面積以及質量數和保留時間等數據。根據A組和B組譜圖的差異性比較，應用SIMCA-P統計軟件(Version11.0)進行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA)，并選擇變量重要性因子對分類貢獻最大的檢測離子，這些檢測離子對應的代謝物可被認為是阿霉素心臟毒性的生物標志物。圖11為正常對照組和阿霉素模型組經過主成分分析(PCA)的得分圖，圖中每個點代表一個樣本，表明了阿霉素模型組和正常對照組之間差異明顯。進一步使用SMICA-P統計軟件(Version11.0)中偏最小二乘法-判別分析(PLS-DA)將阿霉素模型組和正常對照組分成兩組進行分析，得到S-Plot圖(圖12)，S-Plot圖能夠鮮明的突顯出兩組間差異最大的化合物，即右上角和左上角的點(灰框內的變量點)是置信度和貢獻度雙高的化合物，這些檢測離子貢獻度最大，可被認為阿霉素引起心臟毒性的生物標志物，可用于評價四逆湯的藥效；對篩選出的標志物，使用NISTdatabase匹配進行化合物結構的鑒定，再結合標準品比對進行進一步鑒別的確證，最終對篩選出的標志物進行結構鑒定。表4給出了鑒定的10種標示物。表4阿霉素模型組和正常對照組的關系研究中涉及的重要化合物及其在不同組中變化情況注：與正常對照組比較**p<0.01，與阿霉素模型組比較#p<0.05阿霉素造模后，心肌組織中丙氨酸、甘氨酸、蘋果酸、脯氨酸、谷氨酰胺、苯丙氨酸、硬脂酸和膽固醇的水平明顯高于正常對照組(P<0.01)，而纈氨酸、異亮氨酸的水平明顯低于正常對照組。④基于阿霉素心臟毒性生物標志物的藥效學評價：由于10種阿霉素心肌病的生物標志物已經通過上述代謝組學技術研究得到，可見，利用這些標志物作為監測指標進一步研究中藥組合物的治療作用是合理的。我們對標志物在不同組的相對峰面積進行了方差分析。結果如表4所示，與阿霉素模型組相比，除硬脂酸和膽固醇兩種代謝物以外，四逆湯水煎液和中藥組合物組對10種標志物中的8種具有明顯的回調作用(P<0.05)，并且中藥組合物組回調作用更顯著。實施例2本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物32％、干姜揮發油提取物1％、干姜姜辣素類化合物提取物28％、甘草黃酮提取物20％和甘草皂苷提取物19％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30.4％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍；所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為97％；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為75.3％；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、取甘草粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為42.5％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為47.36％；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。經測試，本實施例制備的中藥組合物能有效地抑制阿霉素心臟毒性，并且心肌組織代謝正常。實施例3本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物42％、干姜揮發油提取物3％、干姜姜辣素類化合物提取物24％、甘草黃酮提取物15％和甘草皂苷提取物16％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為38.7％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍；所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為95％；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為72.3％；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為59.6％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為59.8％；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。經測試，本實施例制備的中藥組合物能有效地抑制阿霉素心臟毒性，并且心肌組織代謝正常。實施例4本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物40％、干姜揮發油提取物2％、干姜姜辣素類化合物提取物26％、甘草黃酮提取物17％和甘草皂苷提取物15％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為41.7％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍；所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為95％；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為60.23％；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為50.13％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為55.13％；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。經測試，本實施例制備的中藥組合物能有效地抑制阿霉素心臟毒性，并且心肌組織代謝正常。實施例5本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物37％、干姜揮發油提取物1％、干姜姜辣素類化合物提取物25％、甘草黃酮提取物22％和甘草皂苷提取物15％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為49.8％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.5倍；所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為99％；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為62.3％；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為30.2％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為59.8％；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。經測試，本實施例制備的中藥組合物能有效地抑制阿霉素心臟毒性，并且心肌組織代謝正常。實施例6本實施例中抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物由以下質量百分數的有效成分制成：附子生物堿提取物35％、干姜揮發油提取物2％、干姜姜辣素類化合物提取物25％、甘草黃酮提取物16％和甘草皂苷提取物22％；該制備方法包括以下步驟：步驟一、附子生物堿提取物的制備：步驟101、取1000g附子炮制品，粉碎后加入體積百分含量為50％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取，每次提取3h，合并前后2次的提取液，得到混合液；2次提取過程中所述乙醇溶液的用量為所述附子炮制品質量的8倍；步驟102、向步驟101中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克附子炮制品；步驟103、離心除去步驟102中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱上端，靜置吸附1h后，采用去離子水洗脫，棄去洗脫液，再采用5倍柱體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮后，采用真空干燥后得到附子生物堿提取物；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為30％～50％；所述乙醇溶液中乙醇的體積百分含量為70％；所述附子生物堿提取物中附子生物堿的質量百分含量為45.6％；步驟二、干姜揮發油提取物的制備：采用CO2超臨界萃取制備干姜揮發油，取干姜粗粉，以體積百分含量為95％的乙醇溶液為夾帶劑，在溫度為40℃，壓力為30MPa的條件下萃取1h，得棕黃色乙醇溶液，減壓回收乙醇后，經無水硫酸鈉干燥，得具有特殊濃郁香味的棕黃色干姜揮發油；所述夾帶劑的質量為干姜粗粉質量的1.8倍；所述干姜揮發油提取物中干姜揮發油的質量百分含量為90％；步驟三、干姜姜辣素類化合物提取物制備：采用乙醇滲漉法制備干姜姜辣素類化合物提取物，取干姜粗粉，裝入滲滾筒中，裝完后先向筒內加入4倍干姜粗粉質量的乙醇冷浸2h后，再加入8倍干姜粗粉質量的體積百分含量為85％的乙醇溶液，然后以5mL/(kg·min)的速度滲漉，收集滲漉液，減壓液濃縮至干，即得干姜姜辣素類化合物提取物；所述干姜姜辣素類化合物提取物中姜辣素類化合物的質量百分含量為78.9％；步驟四、甘草黃酮提取物制備：步驟401、稱取甘草，粉碎后加入乙醇中，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次提取2h，得提取液，然后合并前后2次的提取液，得到混合液，每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的6倍；步驟402、將步驟401中所述混合液離心后，減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟403、將步驟402中所述濃縮液加至過D101大孔樹脂柱上端，先用6倍體積純水洗脫除雜，再用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，將洗脫液減壓濃縮，再加至HZ915聚酰胺樹脂柱，用5倍體積的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后干燥，得到甘草黃酮提取物；所述甘草黃酮提取物中甘草黃酮的質量百分含量為55.67％；步驟五、甘草皂苷提取物制備：步驟501、稱取甘草，然后粉碎后加入體積百分含量為70％的乙醇溶液，在溫度為100℃的水浴中回流提取2次，每次2h，合并前后2次的提取液，得到混合液；每次提取過程中所述乙醇溶液的體積為粉碎后甘草體積的8倍；步驟502、向步驟501中所述混合液中加入乙醇，使混合液中乙醇的體積百分含量達到90％，然后靜置至固液分離，將下層的固體雜質除去，并將上層液體減壓濃縮，得到濃縮液，其中每毫升濃縮液中含有1克甘草；步驟503、離心除去步驟502中所述濃縮液中含有的不溶物質后，再加至D-101大孔樹脂柱的上端，用6倍體積的百分數為30％的乙醇溶液除雜，再用5倍體積的體積百分含量為50％的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮后，得到甘草皂苷提取物；所述甘草皂苷提取物中甘草皂苷的質量百分含量為40.5％；步驟六、將步驟一中制備得到的附子生物堿提取物、步驟二中制備得到的干姜揮發油提取物、步驟三中制備得到的干姜姜辣素類化合物提取物、步驟四中制備的甘草黃酮提取物和步驟五中制備的甘草皂苷提取物混合，得到用于抑制阿霉素心臟毒性的中藥組合物。經測試，本實施例制備的中藥組合物能有效地抑制阿霉素心臟毒性，并且心肌組織代謝正常。以上所述，僅是本發明的較佳實施例，并非對本發明作任何限制。凡是根據發明技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、變更以及等效變化，均仍屬于本發明技術方案的保護范圍內。當前第1頁1 2 3