本發明屬于健康產品領域，涉及一種蓯蓉提取物的制備方法，及其在抗疲勞方面的應用。本發明的提取物可以作為食品、保健食品、或藥品使用。
背景技術：
：疲勞是機體經過復雜的生理生化變化過程所導致的結果。從中樞神經系統到骨骼肌細胞再到細胞內的物質代謝過程，中間任何一個環節或者過程的綜合變化都可造成疲勞。疲勞不但降低了機體原有的工作能力，而且提示著機體發展到一定程度的傷病狀態。人體產生疲勞狀態后，假如得不到及時的治療和消除，將會逐漸積累，最終導致過勞，出現慢性疲勞綜合征。現代社會許多人因為過度疲勞處于亞健康狀態，嚴重影響了工作效率和生活質量。因此，尋找有效的抗疲勞藥物是近年來衛生保健人員和科學工作者關注的熱點。由于化學合成藥品干擾人體的生理生化代謝，引起嚴重的毒副反應且研究代價昂貴，世界各國正把重點轉向天然藥物。在“人類回歸大自然”的國際潮流中，我國悠久的傳統藥物學理論基礎和實踐經驗以及豐富的中草藥資源更是為世界矚目，從中草藥中尋找毒副作用小、安全有效的抗疲勞藥物己成為藥學界的研究熱點。本發明旨在尋找一種具有較好抗疲勞功效的植物提取物，是以肉蓯蓉為原料，肉蓯蓉CistancheHerba又名金筍、地精、蓯蓉、大蕓，為列當科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight的干燥帶鱗葉的肉質莖，主產于內蒙古、甘肅、新疆、青海等地。始載于《神農本草經》，列為上品，其后古典《本草經疏》、《本草匯言》、《月華子本草》等多有記載。李時珍曰：“此物補而不峻，故有從容之兮”。肉蓯蓉味甘、咸，性溫，具有補腎陽、益精血、潤腸通便的功能，在我國已有兩千多年的使用歷史。現代藥理學表明，肉蓯蓉除作為傳統的補腎壯陽中藥外，更兼具有抗衰老、增強記憶、提高免疫力等多種功能。本發明使用特殊工藝制備得到蓯蓉提取物，經體內生物活性實驗證實其具有顯著的抗疲勞功效。技術實現要素：本發明公開了一種蓯蓉提取物的制備方法及其用途，將肉蓯蓉肉質莖晾干粉碎后，使用酶提取法獲得具有生物活性的蓯蓉提取物，該提取物可以用作食品、保健食品以及藥品。本發明種的制備工藝是經過長期的科學研究而總結出來的，其特點在于工藝簡單、經濟，綠色環保，同時用于大規模生產。為達到上述目的，本發明是通過下述方法實現的：一種肉蓯蓉提取物，其通過下述方法制備得到：將肉蓯蓉鮮品或干品與水混合，進行酶提取，提取液濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經干燥得到提取物。肉蓯蓉選用地上或地下部分，其中地上部分優選自葉、花、莖或種子。優選地，肉蓯蓉肉質莖部分晾干后，粉碎、過篩，加水攪拌，調節溫度和pH，加入生物蛋白酶進行酶解提取，提取完成后，煮沸，離心、過濾，上清液經濃縮干燥，得到土黃色蓯蓉提取物。優選地，(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網從而獲得蓯蓉藥粉。(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調節pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h；(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用；(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經干燥得到土黃色蓯蓉提取物；所述蓯蓉提取物的收率不低于40％。優選步驟(3)中的濾液濃縮前為50～60℃優選地，所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物；優選地，所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮；優選地，所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。本發明還提供了一種肉蓯蓉提取物的提取方法，其包括下述步驟：將肉蓯蓉鮮品或干品與水混合，進行酶提取，提取液濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經干燥得到提取物。優選地，所述提取方法包括下述步驟：(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網從而獲得蓯蓉藥粉；(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調節pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h；(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用；(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經干燥得到土黃色蓯蓉提取物；所述蓯蓉提取物的收率不低于40％。優選地，所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物；優選地，所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮；優選地，所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。本發明還提供了一種組合物，其含有上述提取物，和可藥用或食用輔料；可為任意劑型，優選其是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、微丸劑、滴丸劑、糖漿劑、散劑、浸膏劑、煎膏劑、口服液體制劑及其他藥學上可以接受的劑型。所述提取物和組合物可提高生物體體內乳酸代謝從而起到抗疲勞的作用。所述的組合物可用于制備預防、治療或者減輕因疲勞引起的相關疾病的藥物、食品或保健品。優選地，本發明的蓯蓉提取物的制備方法，其包括下述步驟：肉蓯蓉肉質莖部分晾干后，粉碎、過篩，加水攪拌，將溫度和pH調至生物蛋白酶酶提取的最佳條件后，加入一定量的生物蛋白酶進行酶解提取，提取完成后，煮沸滅活，離心、過濾，上清液經濃縮干燥，得到土黃色蓯蓉提取物，具體制備方法如下：(1)將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分晾干并粉碎，過40目以上篩網從而獲得蓯蓉藥粉。(2)將一定量的蓯蓉藥粉與純化水按質量比為1∶10～1∶20混合，加入藥粉質量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，調節pH至5～9，恒溫40～55℃攪拌3～6h。(3)提取完成后，將步驟(2)中的藥材提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。(4)將步驟(3)中的濾液在溫度為50～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05～1.10g/mL，經干燥得到土黃色蓯蓉提取物。所述的生物蛋白酶選自食品級的中性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40萬u/g)、菠蘿蛋白酶(酶活力≥30萬u/g)、堿性蛋白酶(酶活力≥20萬u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一種或者它們的混合物，優選地使用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一種或者它們的混合物。所述的濃縮方法可以為膜濃縮、減壓濃縮、常壓濃縮。所述的干燥方法可以為噴霧干燥、真空干燥、加熱干燥、冷凍干燥。所述蓯蓉提取物的收率在40～60％。本發明還提供了一種組合物，其含有所述蓯蓉提取物，藥物或食品上可接受的助劑。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可以與常規預防或治療疲勞疾病的藥物如黃精、枸杞等復配組合。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可以與藥用輔料組合，其是片劑、分散片、膠囊劑、軟膠囊劑、微囊劑、顆粒劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、微丸劑、滴丸劑、糖漿劑、散劑、浸膏劑、煎膏劑、口服液體制劑及其他藥學上可以接受的劑型。所述該專利中制備所得蓯蓉提取物可提高體內乳酸代謝從而起到抗疲勞的作用，用于制備預防、治療或者減輕因疲勞引起的相關疾病的藥物、食品或保健品方面的用途。經研究表明，本發明的蓯蓉提取物能促進斑馬魚體內乳酸代謝，改善其運動能力，因此，可以預期本發明的蓯蓉提取物或含有它的藥物組合物可以用于預防、治療或者減輕因疲勞引起的相關疾病的藥物、食品或保健品方面的用途。實施例下面通過實施例對本發明作進一步說明。應該理解的是，本發明實施例所述方法僅僅是用于說明本發明，而不是對本發明的限制，在本發明的構思前提下對本發明制備方法的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。如無特別說明，實施例中用到的所有原料和溶劑均購自SigmaBiochemicalandOrganicCompoundsforResearchandDiagnosticClinicalReagents公司。實施例1：將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分(和田天力沙生藥物開發有限責任公司，其它商購產品亦可)晾干并粉碎，過60目篩網備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質量比為1∶10混合，加入200g中性蛋白酶(酶活力為30萬u/g)，調節pH至7～8，保持溫度為45～50℃。攪拌提取3h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.05g/mL，經噴霧干燥機進行干燥，進風溫度為160～170℃，出風溫度為70～80℃，干燥完成后，得到49kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-1)。實施例2：將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分(和田天力沙生藥物開發有限責任公司，其它商購產品亦可)晾干并粉碎，過40目篩網備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質量比為1∶15混合，加入100g堿性蛋白酶(酶活力為40萬u/g)，調節pH至8～9，保持溫度為40～45℃。攪拌提取4h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.10g/mL，經真空干燥箱進行干燥，溫度為60～65℃，負壓為0.08～0.1MPa，干燥12h后，得到56kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-2)。實施例3：將肉蓯蓉藥材中的肉質莖部分(和田天力沙生藥物開發有限責任公司，其它商購產品亦可)晾干并粉碎，過40目篩網備用。稱取100kg蓯蓉藥粉，與純化水按質量比為1∶20混合，加入150g木瓜蛋白酶(酶活力為50萬u/g)，調節pH至7.5～8.5，保持溫度為50～55℃。攪拌提取4h后，將提取液煮沸5～10min，待冷卻至室溫，離心過濾，濾液待用。將濾液在溫度為55～60℃濃縮至約30℃時的相對密度為1.08g/mL，經噴霧干燥機進行干燥，進風溫度為160～170℃，出風溫度為70～80℃，干燥完成后，得到42kg土黃色蓯蓉提取物(批號為C-3)。實施例4：組合物對斑馬魚運動的影響評價實驗動物為野生型AB品系，每個實驗組為均30尾斑馬魚，在28℃培養箱中孵育。正常對照組為養魚水處理正常斑馬魚；用亞硫酸鈉誘導斑馬魚，以此作為斑馬魚缺氧疲勞模型；取濃度為2mg/mL蓯蓉提取物(批號為C-1)進行評價，是以水溶給樣方式處理模型組斑馬魚，并以中華跌打丸為陽性對照組。處理結束后，每個實驗組隨機選擇的10尾斑馬魚，測定斑馬魚的運動總距離(S)(實驗結果如表1)，對運動能力影響評價的計算公式如下：運動改善率(％)＝[(S提取物-S模型)/(S正常-S模型)]×100％表1組合物對斑馬魚運動改善作用定量結果組別濃度(mg/mL)總運動距離(mm，Mean±SE)運動改善作用(％)正常對照組/7635±703/模型對照組/2950±202/中華跌打丸19088±447131.0提取物C-128647±417121.6注：與模型對照組比較：p＜0.001。模型對照組斑馬魚總運動距離(2950mm)與正常對照組(7635mm)比較p＜0.001，提示模型構建成功；陽性藥中華跌打丸組(1mg/mL)，斑馬魚總運動距離為9088mm，與模型對照組比較p＜0.001，運動改善作用為131.0％，提示中華跌打丸對亞硫酸鈉誘發的斑馬魚缺氧疲勞具有極顯著的抗疲勞作用。蓯蓉提取物在2mg/mL濃度下，斑馬魚總運動距離分別為：8647mm，其運動改善作用為121.6％，與模型對照組比較p＜0.001，提示蓯蓉提取物明顯改善亞硫酸鈉誘發的斑馬魚缺氧疲勞的運動能力，因而具有顯著的抗疲勞作用。實施例4：組合物對斑馬魚乳酸代謝的影響評價實驗動物為野生型AB品系，每個實驗組為均80尾斑馬魚，在28℃培養箱中孵育。正常對照組為養魚水處理正常斑馬魚；用亞硫酸鈉誘導斑馬魚，以此作為斑馬魚缺氧疲勞模型；取濃度為2mg/mL蓯蓉提取物(C-1)進行評價，是以水溶給樣方式處理模型組斑馬魚，并以中華跌打丸為陽性對照組。處理結束后，測定每個實驗組斑馬魚體內的乳酸含量(C)(實驗結果如表2)，對乳酸代謝改善作用計算公式如下：乳酸代謝促進率(％)＝[(C模型-C提取物)/(C模型-C正常)]×100％表2組合物對斑馬魚乳酸代謝促進作用定量結果組別濃度(mg/mL)乳酸含量(mmol/gprot，Mean±SE)乳酸促進作用(％)正常對照組/0.196±0.0007模型對照組/0.377±0.0017中華跌打丸10.301±0.000441.9提取物C-120.335±0.000723.3注：與模型對照組比較：p＜0.001。模型對照組斑馬魚體內乳酸含量(0.377mmol/gprot)與正常對照組(0.196mmol/gprot)比較p＜0.001，提示模型構建成功；陽性藥中華跌打丸組(1mg/mL)，斑馬魚體內乳酸含量為0.301mmol/gprot，與模型對照組比較p＜0.001，其乳酸代謝促進作用為41.9％，提示中華跌打丸顯著促進亞硫酸鈉誘發的斑馬魚缺氧疲勞斑馬魚體內的乳酸代謝。蓯蓉提取物在2mg/mL濃度下，斑馬魚體內乳酸含量為0.335mmol/gprot，乳酸代謝促進作用為23.3％，與模型對照組比較p＜0.001，提示蓯蓉提取物可顯著促進亞硫酸鈉誘發的斑馬魚缺氧疲勞斑馬魚體內的乳酸代謝。當前第1頁1 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