一種傷寒多糖疫苗的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種傷寒多糖疫苗的制備方法，包括將培養液離心去除菌體后收集上清液；向上清液中加入十二烷基硫酸鈉溶液至終濃度為0.1％～0.2％，混勻，形成沉淀；將沉淀物離心處理后溶解沉淀物，然后向解離液中加入95％乙醇至乙醇終濃度為20％，于2～8℃存放24小時，離心收集上清液，然后洗滌精制。本發明對沉淀劑進行了優化，選擇十二烷基硫酸鈉作為沉淀劑，提高了疫苗的回收率。
【專利說明】一種傷寒多糖疫苗的制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物制品【技術領域】，具體涉及到一種傷寒多糖疫苗的制備方法。
【背景技術】
[0002] 傷寒疫苗的制備包括了疫苗原液的制備以及將疫苗原液制備成疫苗廣品這兩 個大的過程。在制備疫苗原液的過程中，往往需要先將培養液中的多糖形成沉淀物，而 加入的沉淀劑常用的為十六烷基三甲基溴化銨。如已經公開的中國發明專利，專利號為 201110171746. 5,其中介紹了將培養液制備成原液的過程；且在該專利文件的【背景技術】中， 也記載了其他多糖純化工藝，這些文獻中記載的沉淀劑均為十六烷基三甲基溴化銨。
[0003] 經過本發明人的研宄，對上述文件中記載的方法進行了確認，發現按照這些方法 記載的步驟獲得的回收率均在50%?76%之間。經過研宄，影響回收率的條件可能存在于 沉淀劑的選擇、解離劑的選擇以及各種工藝步驟的具體參數；且其中沉淀劑的類型選擇對 回收率的影響最大，因此發明人著重對沉淀劑進行了研宄。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種可以克服現有生產傷寒VI多糖疫苗原液回收率低的缺 陷的制備方法。
[0005] 為達上述目的，本發明的一個實施例中提供了一種傷寒多糖疫苗的制備方法，包 括以下步驟：
[0006] A、將培養液離心去除菌體后收集上清液；
[0007] B、向上清液中加入十二烷基硫酸鈉溶液至終濃度為0. 1 %?0. 2%，混勻，于 2°C?8°C條件下存放24小時，使混合溶液形成沉淀；
[0008] C、將沉淀物離心處理，使用0. 7mol/L的氯化鈉溶液溶解沉淀物，攪拌后使多糖與 十>燒基硫酸納解尚；
[0009] D、向解離液中加入95%乙醇至乙醇終濃度為20%，于2?8°C存放24小時，離心 收集上清液；
[0010] E、將上清液過濾，并在濾液中加入95%的乙醇至乙醇終濃度為75%，離心收集的 沉淀物依次用無水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入滅菌注射 用水溶解，經除菌過濾即為精制多糖疫苗原液。
[0011] 作為上述實施例的優化，在步驟B中，十二烷基硫酸鈉溶液在總溶液中的質量分 數為0. 13% ;同時可以再多糖疫苗原液中加入穩定劑和凍干劑制成疫苗凍干粉。
[0012] 綜上所述，本發明具有以下優點：
[0013] 本發明對沉淀劑進行了優化，選擇十二烷基硫酸鈉作為沉淀劑，提高了疫苗的回 收率。
【具體實施方式】
[0014] 對比實驗方法：
[0015] 選用3批不同批次的傷寒菌培養液，批號分別為20130U201302和201303,每個批 號的培養液分成兩組，一組采用傳統的方法制備原液，另一組采用本發明的方法制備原液， 并比較兩者的回收率，并同時檢測本發明的疫苗的穩定性。
[0016] 實施例1 :
[0017] 將三個批號的培養液分別按照以下步驟制得三組疫苗原液。
[0018] 步驟一、將培養液離心去除菌體后收集上清液；
[0019] 步驟二、向上清液中加入十二烷基硫酸鈉溶液至終濃度為0. 1%?0. 2%，混勻， 于5°C條件下存放24小時，使混合溶液形成沉淀；
[0020] 步驟三、將沉淀物離心處理，使用0. 7mol/L的氯化鈉溶液溶解沉淀物，攪拌后使 多糖與十二烷基硫酸鈉解離；
[0021] 步驟四、向解離液中加入95%乙醇至乙醇終濃度為20%，于2?8°C存放24小時， 離心收集上清液；
[0022] 步驟五、將上清液過濾，并在濾液中加入95%的乙醇至乙醇終濃度為75%，離心 收集的沉淀物依次用無水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入滅 菌注射用水溶解，經除菌過濾即為精制多糖疫苗原液；得到三個批次的疫苗原液。
[0023] 對照組：
[0024] 將三個批號的培養液分別按照以下步驟制得三組疫苗原液。
[0025] 步驟一、將培養液離心去除菌體后收集上清液；
[0026] 步驟二、向上清液中加入十六烷基三甲基溴化銨溶液至終濃度為0. 1 %?0. 2%， 混勻，于5°C條件下存放24小時，使混合溶液形成沉淀；
[0027] 步驟三、將沉淀物離心處理，使用0. 7mol/L的氯化鈉溶液溶解沉淀物，攪拌后使 多糖與十二烷基硫酸鈉解離；
[0028] 步驟四、向解離液中加入95%乙醇至乙醇終濃度為20%，于2?8°C存放24小時， 離心收集上清液；
[0029] 步驟五、將上清液過濾，并在濾液中加入95%的乙醇至乙醇終濃度為75%，離心 收集的沉淀物依次用無水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入滅 菌注射用水溶解，經除菌過濾即為精制多糖疫苗原液；得到三個批次的疫苗原液。
[0030] 將實施例1和對照組的疫苗原液進行適當的稀釋，并對所有稀釋后的疫苗產品進 行檢測，檢測內容按照藥典中傷寒VI多糖原液中蛋白含量、核酸含量。
[0031] 表1 :對照組疫苗原液檢測結果
[0032]
【權利要求】
1. 一種傷寒多糖疫苗的制備方法，包括以下步驟： A、 將培養液離心去除菌體后收集上清液； B、 向上清液中加入十二烷基硫酸鈉溶液至終濃度為0. 1 %?0. 2%，混勻，于2°C?8°C 條件下存放24小時，使混合溶液形成沉淀； C、 將沉淀物離心處理，使用0. 7mol/L的氯化鈉溶液溶解沉淀物，攪拌后使多糖與十二 燒基硫酸納解尚； D、 向解離液中加入95%乙醇至乙醇終濃度為20%，于2?8°C存放24小時，離心收集 上清液； E、 將上清液過濾，并在濾液中加入95%的乙醇至乙醇終濃度為75%，離心收集的沉淀 物依次用無水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入滅菌注射用水 溶解，經除菌過濾即為精制多糖疫苗原液。
2. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：在步驟B中，十二烷基硫酸鈉溶液在總 溶液中的質量分數為〇. 13%。
3. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于：還包括將多糖疫苗原液中加入穩定劑 和凍干劑制成疫苗凍干粉的步驟。
【文檔編號】A61K39/112GK104436183SQ201410658686
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月18日 優先權日:2014年11月18日
【發明者】侯文禮, 周蓉 申請人:成都康華生物制品有限公司