一種藥物傳遞載體的制作方法【專利摘要】本發明屬于生物醫藥領域，公開了一種基于枯草菌脂肽的藥物傳遞載體。本發明以枯草菌脂肽為藥物傳遞載體，利用枯草菌脂肽為兩性分子的性質，使其分散于水溶液中分子自排形成膠束，荷載具有治療、診斷或預防意義的物質，從而形成枯草菌脂肽藥物傳遞載體。進一步，通過在枯草菌脂肽藥物傳遞載體表面修飾形成藥物靶向傳遞系統。本發明所述藥物傳遞載體制備容易、適用范圍廣、穩定性高、易于實現靶向傳遞。【專利說明】一種藥物傳遞載體【
技術領域：
】[0001]本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種藥物傳遞載體，尤其涉及一種基于枯草菌脂肽的藥物傳遞載體。【
背景技術：
】[0002]近年來，醫藥學有了顯著發展，使許多疾病能夠得到預防和控制，顯著地延長了人類平均壽命，提高了人們生活質量。然而，目前疾病仍是威脅人類健康與生存的首要因素。盡管人們已經研制出能夠克服各種疾病(如感染，腫瘤，基因缺陷等)的不同藥物，然而由于缺乏理想的傳遞方式而不能有效地應用于臨床。因此，發展藥物傳遞系統(drugdeliverysystem,DDS),實現有效的祀向藥物傳遞，已經是藥劑研究人員面臨的首要任務。[0003]藥物傳遞系統是指應用現代制劑技術(膜控釋、脂質體、毫微囊與微球制備、血細胞包封、單克隆抗體等生物工程技術等)和高分子材料或聚合物，將藥物分散在結構特殊、復雜而巧妙的體系中，以達到按預期方式、速率釋出藥物并輸送至期望部位或靶位為目的，不同給藥途徑的藥物制品。DDS(藥物傳遞系統)基本上擺脫了原始的、無反饋作用的制劑技術體制，屬于功能化體系，是在反饋生物藥劑學、藥物動力學、制劑理論等研究結果的基礎上設計，經過篩選輔料、系統構造及外形等并予以反饋，使設計逐步合理化而研制成功的，因而能夠比常規制劑更加合理的發揮藥物特性、系統中特殊設置的作用，成為“高”、“精”、“尖”藥物制品(高指療效高，精指質量好，尖指對病變部位的靶向性強)。DDS能為機體提供平穩、持久的血藥濃度的特點，是趨向“五最”(有效治療藥量最小、療效最高、毒副作用最小最少、服用用最方便、價格最合理)的理想藥物制品。如今，DDS已經成為制藥領域研究主流，一些DDS制劑已經應用于臨床，使一些活性強、難以采用傳統劑型應用的藥物能夠發揮優良的治療作用。這不但產生了很好的社會效益，也形成了可觀的經濟增長點，甚至使制藥發展為許多發達國家的支柱產業。[0004]然而，目前多數DDS存在著靶向性低、穩定性差、毒副作用大等明顯不足，尚需要進一步發展與完善。如DDS中，脂質體藥物傳遞系統具有良好的生物相容性、適于載各種藥物、能夠提高藥物穩定性、通過融合作用可將藥物傳入細胞等明顯優勢，應用較為廣泛，發展較為成熟。但是脂質體本質上具有熱力學不穩定(thermodynamicallyinstable)特征。首先，脂質體穩定性差，水溶液中容易凝聚、融合，對于許多藥物包封率低且容易泄漏；其次，缺乏有效的制備方法，難以實現工業化生產；另外，靶向性低也是脂質體無法用于臨床的重要因素之一。【
發明內容】[0005]有鑒于此，本發明的一個目的是提供枯草菌脂肽作為藥物傳遞載體的用途。[0006]本發明的另一個目的是提供一種藥物傳遞載體，包括枯草菌脂肽和至少一種藥物。[0007]其中所述枯草菌脂肽優選以膠束形式存在。[0008]作為優選，所述膠束粒徑小于200納米。[0009]作為優選，所述膠束為枯草菌脂肽分子自排形成具有疏水核、粒徑小于200納米的膠體粒子。[0010]本發明所述藥物傳遞載體中所述藥物為具有治療、診斷或預防意義的物質。[0011]作為優選，所述藥物為治療藥物、標記物、造影劑。[0012]更優選地，所述藥物為抗癌藥。[0013]進一步的，本發明所述藥物傳遞載體還至少包括一種修飾分子。[0014]作為優選，所述修飾分子為靶向分子、定位釋放分子、控釋分子、緩釋分子。[0015]進一步的，作為優選，所述修飾分子為細胞表面載體親和分子、聚乙二醇、葉酸、單克隆抗體。[0016]更優選地，所述靶向分子為聚乙二醇或葉酸。[0017]本發明的另一個目的是提供一種制備藥物傳遞載體的方法，將枯草菌脂肽分散于水溶液形成膠束，膠束包載藥物。[0018]其中所述膠束包括但不限于通過乳化-凍干、乳化-蒸發、薄膜分散、超聲分散、乙醇注入、逆向蒸發或調節pH溶解的方法形成。[0019]所述包載包括但不限于為通過疏水作用、親脂作用、靜電作用或與枯草菌脂肽特異結合，使藥物聚集于膠束疏水部位或結合于膠束表面。[0020]進一步的，所述制備藥物傳遞載體的方法還包括在膠束表面連接修飾分子的步驟。[0021]本發明還提供了所述制備方法制備得到的藥物傳遞載體。[0022]本發明的另一個目的是提供所述藥物傳遞載體在制備預防、診斷、治療藥物中的應用。[0023]本發明以枯草菌脂肽為藥物傳遞載體構建一種新型藥物傳遞載體。利用枯草菌脂肽為兩性分子的性質，使其分散于水溶液中分子自排形成膠束，荷載具有治療、診斷或預防意義的物質，從而形成枯草菌脂肽藥物傳遞載體。進一步，通過在枯草菌脂肽表面連接靶向分子、定位釋放分子、控釋分子或緩釋分子等具有特定功能的修飾分子，使枯草菌脂肽藥物傳遞載體形成具有靶向、定位釋放、控釋或緩釋等特定的功能的藥物傳遞載體。[0024]與傳統藥物傳遞載體相比，本發明所述藥物傳遞載體至少具有以下一種優勢:[0025]I)制備容易:枯草菌脂肽在水中分散制備膠束的工藝簡單，無需特殊設備，成本較低，易于工業化生產。[0026]2)適用范圍廣:枯草菌脂肽形成的膠束可用于包封各種具有治療、診斷或預防意義的物質，如化學藥物、基因、肽、影像物質以及診斷試劑等，適用于各種病灶部位(組織、細胞內環境)，如腫瘤組織、感染部位等，具有廣泛的適用范圍。[0027]3)穩定性高:枯草菌脂肽形成的膠束本身具有良好的熱力學穩定性；進一步的，枯草菌脂肽表面連接的修飾分子增加了所述藥物傳遞載體的穩定性。[0028]4)靶向性、定位釋放功能:枯草菌脂肽本身具有PH敏感性，即在不同酸性環境膠束解體或聚集，以枯草菌脂肽形成的膠束作為藥物傳遞載體具有定位釋藥功能。進一步，本發明藥物傳遞載體還可以通過枯草菌脂肽表面連接的修飾分子實現靶向性、如葉酸修飾，使得載體與腫瘤細胞表面葉酸載體結合，從而實現藥物通過主動靶向傳遞至腫瘤細胞。【專利附圖】【附圖說明】[0029]為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。[0030]圖1示本發明所述枯草菌脂肽的分子結構示意圖；[0031]圖2示本發明所述枯草菌脂肽包載藥物的結構示意圖；[0032]圖3示實施例3掃描電子顯微鏡結果圖。【具體實施方式】[0033]下面將結合本發明實施例，對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。[0034]膠束作為藥物傳遞載體受到廣泛重視。膠束為兩親性表面活性劑在水溶液中濃度超過臨界值(CMC)后，分子間的氫鍵、靜電相互作用和范德華力等推動下形成分子自排體系(aself-assemblysystem)。膠束核可以成為疏水性藥物的結合位置，即藥物在膠束中存在的微環境。膠束作為藥物載體的具有顯著特點。首先能夠增溶疏水性藥物，通過獨立的聚合物單元進行分子間絡合，在一定條件下可重新解離為獨立的聚合物鏈。其次利用其具有極小的粒徑能增強藥物對腫瘤組織血管壁的滲透，實現對腫瘤的被動靶向性釋藥；對聚合物膠束的粒徑和表面特征的設計可有助于避免網狀內皮系統的識別，延長體循環時間；一些帶有電荷的聚合物膠束可以保護基因、疫苗和蛋白質藥物的活性，可作為生物大分子藥物的口服給藥系統；可偶聯靶向配體，實現藥物定位傳遞，可通過口服、局部或注射等途徑給藥；一些聚合物膠束可作為運輸藥物透過血腦屏障的載體，還可以用于疾病診斷(如醫學造影和顯影)等領域，呈現出廣闊的應用前景。[0035]本申請人:經過潛心研究發現枯草菌脂肽分散于水溶液容易形成穩定的膠束，從而能夠有效構建疏水性藥物的膠束傳遞系統。因此本發明提供了枯草菌脂肽作為藥物傳遞載體的用途。[0036]枯草菌脂肽譯為Surfactin，是一種由枯草芽孢桿菌合成的環肽，多以鈉鹽形式應用，其分子結構如圖1所示。枯草菌脂肽分散于水溶液后枯草菌脂肽分子自排形成具有膠體粒子即穩定的膠束，進而荷載藥物實現藥物傳遞。[0037]本發明所述藥物傳遞載體，包括枯草菌脂肽和至少一種藥物。[0038]其中，所述枯草菌脂肽以膠束形式存在。[0039]作為優選，所述膠束粒徑小于200納米。[0040]在一些實施方案中，所述膠束為枯草菌脂肽分子自排形成具有疏水核、粒徑小于200納米的膠體粒子。例如小于190納米、小于180納米、小于170納米、小于160納米、小于150納米、小于140納米、小于130納米、小于120納米、小于110納米或小于100納米。[0041]本領域的技術人員將理解本發明不限于傳遞治療藥物或藥劑，可以按照本發明傳遞任何數量的天然存在或合成的物質，因此本發明所述藥物包括但不限于具有治療、診斷或預防意義的物質。例如治療藥物、標記物或造影劑。[0042]這些物質包括但不限于小分子化學藥物、光/熱感應物質、蛋白、肽類、基因或基因片段。[0043]在一些優選實施方案中，所述藥物為抗癌藥。[0044]在一些具體實施例中，所述藥物為紫杉醇、青霉素V鉀或醋氯酚酸。[0045]其中，所述紫杉醇與所述枯草菌脂肽的質量比優選為1:5?1:20。[0046]另外，本領域的技術人員將理解在本發明中使用的藥物或物質的量將取決于需要給藥的劑量和期望的治療。本領域的技術人員將理解“治療”指的是給藥藥物活性組分的任何期望目的，包括控制，治療，保持或改善健康等。[0047]本領域的技術人員還將理解本發明不限于傳遞單一的藥物。實際上，使用本發明藥物傳遞載體可同時傳送多種藥物。例如，在一個“劑量”中，接受者可以接受兩種或多種藥物的組合，至少一種治療藥物和一種標記物等[0048]進一步的，在一些實施方案中，本發明所述的藥物傳遞載體還至少包括一種修飾分子，以形成具有特定功能的藥物傳遞載體。[0049]本領域的技術人員將理解本發明可以按照本發明所要傳遞的藥物而在枯草菌脂肽分子表面連接任何修飾分子形成任何適合于藥物可以實現的功能的藥物傳遞載體。[0050]其中，所述修飾分子包括但不限于靶向分子、定位釋放分子、控釋分子或緩釋分子。[0051]所述靶向分子在本文中是指葉酸，其包括但不限于葉酸。[0052]所述定位釋放在本文中是指在酸性環境釋放，如腫瘤組織、炎癥部位，其包括但不限于此。[0053]在一些實施方案中，所述修飾分子為細胞表面載體親和分子、聚乙二醇、葉酸、腫瘤表面抗原特異性單克隆抗體。[0054]例如，在枯草菌脂肽分子表面連接聚乙二醇分子，可以實現體內避開網狀內皮系統清除的長循環作用，實現選擇性進入血管通透性較高的病變部位(如腫瘤組織、感染部位等)，而不進入正常組織。進而通過包載的藥物對病變部位進行診斷或治療。[0055]再如，在枯草菌脂肽分子表面連接腫瘤細胞特異性配體，可以實現腫瘤靶向藥物傳遞，進而通過包載的藥物對腫瘤細胞進行定位診斷或治療。[0056]在一些實施方案中，本發明所述的藥物傳遞載體所述枯草菌脂肽分子表面荷電數可以被調節。[0057]本領域技術人員可以通過調節本發明所述的藥物傳遞載體中枯草菌脂肽分子表面荷電數而實現對不同等電點組織的靶向傳遞。如利用腫瘤組織呈酸性(pH〈6.5)調節枯草菌脂肽分子表面荷電數，獲得酸敏感腫瘤祀向Surfactin藥物傳遞載體(pH_sensitivetumor-targetingSurfactinDDS,pTSurf-DDS)。[0058]本發明所述制備藥物傳遞載體的方法為將枯草菌脂肽分散于水溶液形成膠束，膠束包載藥物。[0059]本領域的技術人員可以理解本發明可以通過任何已知的方法使枯草菌脂肽分子形成膠束，所述形成膠束的方法但不限于乳化-凍干、乳化-蒸發、薄膜分散、超聲分散、乙醇注入、逆向蒸發或調節pH溶解的方法形成。[0060]本領域的技術人員可以理解本發明可以通過任何已知的方法將藥物包載于膠束中，以使藥物聚集于膠束疏水部位或結合于膠束表面。所述包載的方法包括但不限于通過疏水作用、親脂作用、靜電作用或與枯草菌脂肽特異結合。[0061]進一步的，在一些實施方案中，本發明所述制備藥物傳遞載體的方法還包括在膠束表面連接修飾分子。[0062]其中，所述修飾分子包括但不限于靶向分子、定位釋放分子、控釋分子或緩釋分子。[0063]在一些實施方案中，所述修飾分子為細胞表面載體親和分子、聚乙二醇、葉酸、單克隆抗體。[0064]例如，在枯草菌脂肽分子表面連接聚乙二醇分子，可以實現體內避開網狀內皮系統清除的長循環作用，實現選擇性進入血管通透性較高的病變部位(如腫瘤組織、感染部位等)，而不進入正常組織。進而通過包載的藥物對病變部位進行診斷或治療。[0065]本發明還提供了所述藥物傳遞載體在制備預防、診斷、治療藥物中的應用。[0066]本領域的技術人員可以理解本發明將所述藥物傳遞載體傳遞至動物或人的方法，其包含給藥所述藥物傳遞載體于所述動物或人。[0067]進一步的，將所述藥物傳遞載體傳遞至動物或人的方法中，所述給藥進一步包含通過多種途徑給藥所述藥物傳遞載體，所述途徑包括但不限于口服、口頰、舌下、鼻、局部、經皮、眼、陰道、直腸、膀胱內、肺、動脈內、靜脈內、皮內、肌內、皮下、腹膜內、鞘內和眼內。[0068]本發明還提供了診斷、預防或治療動物或人疾病的方法，其包含給藥所述藥物傳遞載體。其中所述藥物傳遞載體是以生物活性劑量提供。所述給藥進一步包含通過多種途徑給藥所述藥物傳遞載體，所述途徑包括但不限于口服、口頰、舌下、鼻、局部、經皮、眼、陰道、直腸、膀胱內、肺、動脈內、靜脈內、皮內、肌內、皮下、腹膜內、鞘內和眼內。[0069]本發明所述的枯草菌脂肽可以通過商業渠道購買得到，也可以按現有技術已知的方法制備得到。如由枯草芽孢桿菌經發酵得到。[0070]在一些實施例中，所述枯草菌脂肽為保藏編號為CGMCCN0.1107的枯草芽孢桿菌菌株ES接種于發酵培養基，發酵培養，純化得到。[0071]為了進一步理解本發明，下面結合實施例對本發明進行詳細說明。其中本發明中使用的所有原材料均可以通過商業渠道購得，所述粒徑的測定采用動態光散射法(DLS)，所述包封率的測定采用高速離心法(中國醫藥工業雜志ChineseJournalofPharmaceuticals2010,41(6),464-467)。[0072]實施例1:乳化-凍干法制備包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體[0073]以氯仿/環己烷(1:3，v/v)為油相(0)，以蔗糖(5W/W%)水溶液為水相(W)，將枯草菌脂肽、紫杉醇按質量比為20:1的比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超聲(40w,lmin)乳化得到油/水型乳劑，隨后凍干除去溶劑，得到凍干品，加水水化形成載有紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體，按照DLS檢測法檢測包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束粒徑為160納米。按照高速離心法測定包封率，制得的藥物傳遞載體的藥物包封率為91%。并且得到的凍干產物可以長期儲存。[0074]實施例2:藥物與枯草菌脂肽的質量比對包封率的影響(以乳化-凍干法制備PAC-SurfMice):[0075]以氯仿/環己烷(1:3，v/v)為油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液為水相(W)，分別將枯草菌脂肽、紫杉醇按質量比為20:1、10:1、5:1的比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超聲(40w，lmin)乳化得到油/水型乳劑，隨后凍干除去溶劑，得到凍干品，加水水化形成載有紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體。按照DLS檢測法檢測包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束粒徑為160納米。按照高速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率，當紫杉醇/枯草菌脂肽=1:20時，包封率82%;當紫杉醇/枯草菌脂肽=1:10時，包封率36%;當紫杉醇/枯草菌脂肽=1:5時，包封率21%。[0076]實施例3:包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體的制備(單相溶液凍干法)[0077]以叔丁醇為有機相(O)、蔗糖(Jmh%)水溶液為水相(W)，將枯草菌脂肽、紫杉醇按質量比為20:1的比例溶于有機相，再將有機相與水相按2:1的體積比混合，得到澄清溶液，隨后凍干除去溶劑，得到凍干品，加水水化形成載有紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體，按照DLS檢測法檢測包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束粒徑為40納米，按照超速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率為91%，并且得到的凍干產物可以長期儲存。[0078]實施例4:包載青霉素V鉀的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體的制備(薄膜分散法)[0079]以氯仿為油相(O),PBS(pH7.4，50mM)水溶液為水相(W)，將枯草菌脂肽溶于油相，將青霉素V鉀溶于水相，其中所述青霉素V鉀與枯草菌脂肽的質量比為1:20。取油相加入圓底燒瓶，旋轉蒸發除去油相，枯草菌脂肽于瓶壁形成薄膜，加入水相(使所述青霉素V鉀與枯草菌脂肽的質量比為1:20)，旋轉形成載有青霉素V鉀的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體青，按照DLS檢測法檢測包載青霉素V鉀的枯草菌脂肽膠束粒徑為160納米，按照高速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率10%，并且得到的凍干產物可以長期儲存。[0080]實施例5:包載醋氯酚酸的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體的制備(乳化-蒸發法)[0081]以氯仿為油相(O)，蔗糖(Jmh%)水溶液為水相(W)，將枯草菌脂肽、醋氯酚酸按質量比為1:20溶于油相，取I份油相加入3份水相，超聲乳化得到油/水型乳劑，隨后旋轉蒸發除去油相溶劑，形成載有醋氯酚酸的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體，按照DLS檢測法檢測包載醋氯酚酸的枯草菌脂肽膠束粒徑為110納米，按照高速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率11%，并且得到的凍干產物可以長期儲存。[0082]實施例6:枯草菌脂肽的PEG修飾的膠束(以乳化-凍干法制備PAC-SurfMice):[0083]以氯仿/環己烷(1:3，v/v)為油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液為水相(W)，分別將枯草菌脂肽/PEG2000-PE/紫杉醇按質量比為(20:5:1)比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超聲乳化得到油/水型乳劑，隨后凍干除去溶劑，得到凍干品，加水水化形成載有紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體。按照所述DLS檢測法檢測包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束粒徑為180納米。按照高速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率，約為85%。[0084]實施例7:葉酸修飾的枯草菌脂肽膠束(以乳化-凍干法制備PAC-SurfMice):[0085]以氯仿/環己烷(I:3,v/v)為油相(O)，以蔗糖(5W/W%)水溶液為水相(W)，分別將枯草菌脂肽/葉酸-PEG2000-PE/紫杉醇按質量比為(20:8:1)比例溶于油相，取I份油相加入3份水相，超聲乳化得到油/水型乳劑，隨后凍干除去溶劑，得到凍干品，加水水化形成載有紫杉醇的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體。按照所述DLS檢測法檢測包載紫杉醇的枯草菌脂肽膠束粒徑為190納米。按照高速離心法測定制得的藥物傳遞載體的藥物包封率，約為78%。[0086]實施例8:[0087]用掃描電子顯微鏡觀察實施例1制備得到的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體凍干品，結果見圖3。[0088]圖3結果顯示，實施例1制備得到的藥物傳遞載體凍干品均為近球形，大小與用粒度儀測定的結果相吻合。[0089]用掃描電子顯微鏡觀察實施例2-7制備得到的枯草菌脂肽膠束藥物傳遞載體凍干品。結果顯示，實施例2-7制備得到的藥物傳遞載體凍干品均為近球形，大小與用粒度儀測定的結果相吻合。【權利要求】1.枯草菌脂肽作為藥物傳遞載體的用途。2.—種藥物傳遞載體,包括枯草菌脂肽和至少一種藥物。3.根據權利要求2所述的藥物傳遞載體，其中所述枯草菌脂肽以膠束形式存在，膠束粒徑小于200納米。4.根據權利要求2或3所述的藥物傳遞載體，其中所述藥物為治療藥物、標記物、造影劑。5.根據權利要求2-4任意一項所述的藥物傳遞載體，其中所述藥物為抗癌藥。6.根據權利要求2-5任意一項所述的藥物傳遞載體，其中所述藥物傳遞載體還至少包括一種修飾分子。7.根據權利要求6所述的藥物傳遞載體，其中所述修飾分子為聚乙二醇或葉酸。8.一種制備藥物傳遞載體的方法，將枯草菌脂肽分散于水溶液形成膠束，膠束包載藥物。9.根據權利要求8所述的方法，其中所述膠束通過乳化-凍干、乳化-蒸發、薄膜分散、超聲分散、乙醇注入、逆向蒸發或調節邱溶解的方法形成。10.根據權利要求8或9所述的方法，其中所述包載為通過疏水作用、親脂作用、靜電作用或與枯草菌脂肽特異結合，使藥物聚集于膠束疏水部位或結合于膠束表面。11.根據權利要求8-10任意一項所述的方法，其還包括在膠束表面連接修飾分子的步驟。12.權利要求8-11任意一項所述的方法制備得到的藥物傳遞載體。13.權利要求2-7及12任意一項所述藥物傳遞載體在制備預防、診斷、治療藥物中的應用。【文檔編號】A61K47/42GK104436207SQ201410619931【公開日】2015年3月25日申請日期:2014年11月6日優先權日:2014年11月6日【發明者】孫文,王汀,丁仕奇,王元晨,王媚,劉山山,張繼曼申請人:安徽帝元生物科技有限公司