Activin A在制備治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了ActivinA在制備治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物中的應用，通過研究焦慮行為的曠場實驗和高架十字迷宮實驗，以及研究抑郁行為的懸尾實驗和強迫游泳實驗，發現ActivinA對神經退行性疾病具有治療作用，可有效改善可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為，并且ActivinA對細胞基本無毒副作用，具有很好的開發前景，有望被開發為新型的用于治療神經退行性疾病的新藥物，尤其是用于治療可卡因成癮后戒斷癥狀的新藥物。
【專利說明】八4 I V 4八在制備治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及八八在制備治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]毒品成癮是一種長期持續的腦疾病，即使經過長時間的戒斷還是高度容易復發。主要表現為患者在生理和心理上對藥物產生依賴，這種依賴感會促使患者不擇手段、不計后果地強制獲取、使用毒品。長期吸食毒品會引起機體的功能失調和組織病理變化，從而產生精神障礙性疾病如焦慮和抑郁等。
[0003]大量的數據顯示毒品的重復暴露能夠導致大腦發生穩定的改變，并參與神經回路發生長期持續的變化過程，產生持久的神經改變，包括細胞內信號通路的改變、樹突形態結構的改變和行為學可塑性的變化。
[0004]毒品成癮是一種復雜的腦病，目前，還沒有藥物能夠有效的治療可卡因成癮及戒斷所引起的精神性改變。因此，尋找能夠有效抑制成癮相關癥狀的藥物是目前最緊要的目標。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供八八在制備治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物中的應用。
[0006]本發明所采取的技術方案是:
本發明通過研究焦慮行為的曠場實驗和高架十字迷宮實驗，以及研究抑郁行為的懸尾實驗和強迫游泳實驗，發現八八對神經退行性疾病具有治療作用，可有效改善可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為，并且八八對細胞基本無毒副作用，具有很好的開發前景，有望被開發為新型的用于治療神經退行性疾病的新藥物。
[0007]本發明的有益效果是:
本發明將八八用于治療可卡因戒斷后出現的焦慮和抑郁等神經退行性疾病中，證明了八八可有效改善可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為，且基本無毒副作用，是一種有開發前景的治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的藥物，尤其是治療可卡因成癮后戒斷疾病癥狀的藥物。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]圖1是曠場實驗檢測八4對可卡因戒斷誘導的焦慮行為的影響；￡1為小鼠在中央區活動的時間，6為小鼠進入中央區次數，0為中央區路程；義1—？83為第①義11116+983 組，000+^88 為第③ 0)(^1116+983 組，8^1+^01:為第② 3&11116+八八組，000十八。七為第④00081116+^01:1^111八組； 圖2是高架十字迷宮檢測八八對可卡因戒斷誘導的焦慮行為的影響^為小鼠的開臂滯留時間百分比，13為小鼠進入開放臂次數百分比；
圖3是懸尾實驗檢測八^14！！八對可卡因戒斷誘導的抑郁行為的影響；
圖4是強迫游泳實驗檢測八八對可卡因戒斷誘導的抑郁行為的影響。
【具體實施方式】
[0009]下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明，但并不局限于此。
[0010]活化素八(八⑶?丨]!八)是轉化生長因子6超家族(10中重要的成員之一，具有許多重要的作用。活化素八主要促進卵泡刺激素⑶別)的生物合成和分泌，同時還參與細胞增殖、分化、代謝、免疫反應、組織修復內分泌功能等。
[0011]實施例1 1.實驗動物
7-10周齡3？？級雄性昆明小鼠(體重20-250，所有小鼠自由飲水飲食，并維持在12匕:1211光:暗的恒溫環境中。
[0012]2.實驗分組和藥物處理
將小鼠隨機分為四組，每組15只:①3^111116+983組；②3311116+八八組；③03(^1116+983組丨④03(^1116+六01:1^111八組。③④組連續注射可卡因(03(^1116) 20^/1^.(1，①②組連續注射等量的生理鹽水($￡111116),四組連續注射14天。其中在注射可卡因第8天時在雙側小鼠大腦雙側海馬區安放留置導管，坐標點是前囪后2.0111111，左右徑±1 5臟，硬膜下1.8臟。注射14天，戒斷48小時后分別給①③組昆明小鼠大腦雙側海馬區立體定位注射1叱？83，給②④組昆明小鼠大腦雙側海馬區立體定位注射50呢加1的八1虬。然后分別進行以下的實驗。
[0013]3.曠場實驗(01^)
曠場實驗(01)6= ^161(1 160，0？”是檢測小鼠焦慮行為學指標。上述4組小鼠給予？83或八⑶&化八后放入行為學實驗室適應環境2卜左右。用75%的酒精擦拭實驗裝置，確認曠場實驗裝置是干凈、無味道，這樣排除前面小鼠的氣味和味道對實驗結果的干擾。實驗人員在操作軟件中記錄小鼠的編號、日期、狀態，做好實驗動物的排序，實驗過程中保持安靜，防止噪音干擾。等酒精揮發后，將小鼠從籠內取出(背向實驗者)，將小鼠放置在曠場中心區域實驗者迅速安靜離開；打開曠場實驗視頻分析系統，錄像記錄小鼠在曠場內的活動，記錄總時間是5111111，檢測的指標主要為:中央區活動時間1: 11116 )、進入中央次區數(06111:61-6111:1-6186)、中央區路程((30111:01-(110311(36 )等。
[0014]實驗結果如圖1所示，從圖和圖中可以看出各組小鼠進入中央次區數和中央區路程的結果沒有明顯的差異，可卡因和八對小鼠進入中央區次數(圖化)和中央區路程(圖化)沒有影響；從圖匕中可以看出，可卡因戒斷后，小鼠在中央區活動的時間明顯減少，而給予八八進行預處理的第④(￠0(^1116+八八)組的小鼠在中央區活動的時間明顯延長，為33.4^2.448,的活動時間22.4^1.838 (9^0.05),故曠場實驗結果顯示4(^1^111八治療組(第④組)比未治療的可卡因組(第③組)在中央區域停留時間顯著增加$(0.05),提示八八對可卡因戒斷誘導的小鼠焦慮行為有治療作用 4.高架十字迷宮(￡1?)
高架十字迷宮是檢測小鼠焦慮行為學指標。各組小鼠經曠場實驗之后，進行高架十字迷宮實驗。用75%的酒精擦拭實驗裝置，將小鼠從籠內取出(背向實驗者)，將小鼠放置在開臂與閉臂接合處，面朝開臂，實驗者迅速安靜離開錄像記錄小鼠在內的活動，總時間5 然后以75%酒精擦拭實驗裝置，待酒精干燥后將下一只放入實驗裝置進行實驗。實驗結束后，用75%的酒精擦拭實驗裝置，打掃干凈，之后關閉高架十字迷宮視頻分析系統。檢測的指標主要為開臂滯留時間百分比(％ 0？6！1和進入開放臂次數百分比(％ 0^)611
[0015]檢測結果如圖2所示，從中可以看出，可卡因戒斷后，小鼠的開臂滯留時間百分比(圖23)和進入開放臂次數百分比(圖2)3)明顯減少，第④組八)小鼠開臂滯留時間百分比為27.6^1.87、進入開放臂次數百分比為38.4^2.10，分別明顯高于第③組(￠0(^1116+983)的開臂滯留時間百分比15.7±1丨50和進入開放臂次數百分比為28.6^2.08 (9(0.05)0
[0016]高架十字迷宮實驗結果顯示八⑶&化八治療組比未治療的可卡因組開臂進入次數和滯留時間顯著增加㈧切.05),說明八對可卡因戒斷誘導的小鼠焦慮行為有治療作用。
[0017]5.懸尾實驗郎丁)
懸尾實驗(141 81181)61181011 168^, 131)是檢測小鼠抑郁行為學指標。高架十字迷宮(2?)之后，進行懸尾實驗。實驗過程中保持安靜，防止噪音干擾。將小鼠從籠內取出，用醫用膠布將其尾巴粘在一個鉤子下方的白線上，注意操作輕柔，然后將鉤子連小鼠一起鉤在懸尾的實驗裝置上，使小鼠呈倒掛狀態，開啟懸尾實驗錄像系統，記錄小鼠的活動狀態，總計6111111 ；實驗結束后將小鼠放回籠內，然后以75%酒精擦拭131實驗裝置及小鼠下方地板，并打掃小鼠下方地板的糞便，待酒精干燥后將下一只放入實驗裝置進行實驗。檢測指標為懸尾滯留時間百分比(% 1臟0131111:7 1^11116 0？ 181) 0
[0018]檢測結果如圖3所示，從中可以看出，在第④組(￠0(^1116+八八)小鼠懸尾不動時間百分比為53.3±4 17，顯著少于第③組(￠0(^1116+983)的71.6±4 92(9(0.05?0說明八八可以減緩可卡因戒斷后出現的抑郁狀態。
[0019]6.強迫游泳(…丁)
強迫游泳是檢測小鼠抑郁行為學指標。上述4組小鼠在給予？83或八⑶&化八之前1小時進行15-11的預適應。24小時之后準備正式實驗。圓柱中水深12(^1，水溫保持在25攝氏度。將小鼠輕輕的從面壁放入水中。開啟強迫游泳錄像系統，記錄小鼠的活動狀態，總計601！！。每次測量一只換一次水，以免前面強迫游泳小鼠的氣味對后面小鼠強迫游泳行為指標有干擾。檢測指標為強迫游泳不動時間百分比(％ 11111110131111:7〖加一0？ 丁)。
[0020]檢測結果如圖4所示，從中可以看出第④組(￠0(^1116+八八)小鼠強迫游泳不動時間百分比為31.7±2^ 31，顯著少于第③組(￠0(^1116+983)的42.6±2^ 80 (^^0.05?0說明八八可以減緩可卡因戒斷后出現的抑郁狀態。
[0021]上述結果說明，懸強迫游泳實驗結果顯示八⑶&化八治療組比未治療的可卡因組不動時間顯著減少(1^0.05〉。可見，八⑶&化八有抑制可卡因戒斷后抑郁行為的趨勢。
[0022]7.八治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀可能的作用機制本發明通過81'肋標記的免疫組化檢測和81'肋/00雙標免疫熒光檢測發現八⑶&化八能夠促進可卡因成癮后戒斷的小鼠海馬0(}區的神經再生。說明活化素八具有阻斷可卡因戒斷對小鼠海馬齒狀回神經再生的抑制作用，還能夠促進海馬齒狀回神經再生，從而降低可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁水平。說明八八治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的機制可能與促進海馬0(}區神經再生的作用有關。
[0023]本發明還通過1681:6111-13101:1:1118檢測發現八八可誘導￡1?的磷酸化，在給予￡1?抑制劑1327后，八對可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為無改善，并且八對IX；區海馬神經再生的影響也受到了抑制，提示，活化素八治療精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀的機制可能通過2腿磷酸化調控％區海馬神經再生的途徑有關，從而對可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為起到治療作用。
[0024]綜上所述，八⑶&化八可以用于治療神經退行性疾病，尤其是治療精神興奮類藥物成癮后戒斷的疾病癥狀，八八可有效改善可卡因戒斷誘導的焦慮和抑郁行為，且基本無毒副作用，是一種有開發前景的治療精神興奮類藥物成癮后戒斷的藥物，尤其是治療可卡因成癮后戒斷行為的藥物。
【權利要求】
1.Activin A在制備治療神經退行性疾病的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于:所述的神經退行性疾病為精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于:所述的神經退行性疾病為可卡因戒斷后誘導的焦慮和抑郁癥狀。
4.一種制備治療神經退行性疾病的藥劑，其特征在于:其活性成分為Activin A0
5.根據權利要求4所述一種制備治療神經退行性疾病的藥劑，其特征在于:含有活性成分Activin A和藥物上可接受的載體和/或稀釋劑。
6.根據權利要求4?5任一所述一種制備治療神經退行性疾病的藥劑，其特征在于:所述神經退行性疾病為精神興奮類藥物成癮后戒斷癥狀。
7.根據權利要求6所述一種制備治療神經退行性疾病的藥劑，其特征在于:所述的神經退行性疾病為可卡因戒斷后誘導的焦慮和抑郁癥狀。
【文檔編號】A61P25/00GK104353059SQ201410545662
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月15日 優先權日:2014年10月15日
【發明者】張璐, 張琳, 李娟 , 薛進華 申請人:南方醫科大學